CN112210593B - 一种冻干保护剂、可冻干的pcr试剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种冻干保护剂。该冻干保护剂的成分为沙鲁胺，可用于PCR试剂。PCR试剂中添加冻干保护剂后试剂本身性能不受影响，且冻干不损失活性。冻干后的试剂可在常温下保存，有利于PCR试剂的保存和运输。

Description

一种冻干保护剂、可冻干的PCR试剂及其应用
技术领域
本发明属于分子生物学领域，涉及一种冻干保护剂、可冻干的PCR试剂及其应用。
背景技术
分子诊断是应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平而做出诊断的技术，常见的分子诊断方法有PCR、等温扩增、测序等，其中PCR是当前应用范围最广的分子诊断方法。
与其他诊断方法相比，PCR具有检测灵敏度高、准确性高、特异性强的优点。但由于PCR反应依赖Taq DNA聚合酶活性，故PCR试剂需要在低温环境下(如-20℃)储存和运输，为PCR试剂的使用造成了诸多不便。而由于试剂保存不当失活更是可能导致临床上假阴性的检测结果。
真空冷冻干燥(简称冻干)是一种能有效提升生物制品保存稳定性的方法，为防止有效成分在冻干过程中丢失生物学活性，冻干试剂往往需要添加冻干保护剂，如甘露醇、蔗糖、PEG、白蛋白等。但这些常用的冻干保护剂均对PCR反应本身有较大程度的抑制，故不能作为PCR试剂的冻干保护剂。
发明内容
本发明要解决的技术问题是为了克服现有技术中的上述缺陷，提供一种冻干保护剂、可冻干的PCR试剂及其应用。
本发明是通过下述技术方案来解决上述技术问题：
本发明提供了一种冻干保护剂，所述冻干保护剂的成分为沙鲁胺(Salubrinal)。
在本方案中，PCR试剂中添加所述冻干保护剂后试剂本身性能不受影响，且冻干不损失活性。冻干后的试剂可以在常温保存，有利于PCR试剂的保存和运输。
较佳地，所述冻干保护剂中沙鲁胺(Salubrinal)的工作浓度为1％～10％。
本发明还提供了一种冻干保护剂在PCR试剂冻干中的应用。
本发明还提供了一种可冻干的PCR试剂，所述PCR试剂中包括如前所述的冻干保护剂。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明的积极进步效果在于：本发明通过在PCR试剂中添加工作浓度为1％～10％的沙鲁胺(Salubrinal)，既不影响PCR试剂本身的性能，又使得试剂可以冻干而不影响活性。冻干后的试剂可以在常温保存，为PCR试剂的保存和运输提供了极大的便利。
附图说明
图1为实施例1中PCR试剂中加入常规冻干保护剂(甘露醇)和加入沙鲁胺(Salubrinal)后，PCR试剂的性能示意图。
图2为实施例1中PCR试剂中加入沙鲁胺(Salubrinal)后，冻干前后PCR试剂的性能性能对比图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：配制不同保护剂的PCR试剂
1)配制使用甘露醇作为冻干保护剂的PCR试剂(甘露醇+)
量取20μL 1M Tris-HCL(pH＝8.0)、50μL 3M KCl、80μL 0.5M MgCl2、10μL 10mMdNTP、10μL结核分枝杆菌特异性引物探针、5μL Taq DNA聚合酶和250μL 20％甘露醇，混合均匀后用超纯水补足1mL得到使用甘露醇作为保护剂的PCR试剂(甘露醇+)。
2)配制使用沙鲁胺作为冻干保护剂的PCR试剂(沙鲁胺+)
量取20μL 1M Tris-HCL(pH＝8.0)、50μL 3M KCl、80μL 0.5M MgCl2、10μL 10mMdNTP、10μL结核分枝杆菌特异性引物探针、5μL Taq DNA聚合酶和500μL 10％沙鲁胺，混合均匀后用超纯水补足1mL得到使用沙鲁胺作为保护剂的PCR试剂(沙鲁胺+)。
实施例2：比较冻干保护剂对PCR试剂性能的影响
取提取的结核分枝杆菌DNA产物，用实施例1中配制的两种PCR试剂进行检测，并用不添加冻干保护剂的PCR试剂检测作为对照。
检测结果如图1所示，从结果可以看出，使用甘露醇作为冻干保护剂，对PCR试剂的性能有较大程度的抑制，而使用沙鲁胺作为冻干保护剂，几乎对PCR试剂的性能没有影响。
实施例3：比较使用沙鲁胺作为冻干保护剂，PCR试剂冻干前后性能的影响。
取实施例1中配制PCR试剂(沙鲁胺+)，按照下表冻干条件进行冻干。
步骤 预冻 一次升华 解析干燥
温度 -45℃ -25℃ 30℃
时间 3h 8h 5h
真空度 / 1Pa 1Pa
取提取的结核分枝杆菌DNA产物，用冻干后的试剂进行检测，并用冻干前的试剂作为对照。
检测结果如图2所示，从结果可以看出，使用沙鲁胺作为冻干保护剂，PCR试剂冻干前后的性能几乎没有变化。

Claims (3)

1.一种冻干保护剂在PCR试剂冻干中的应用；
所述冻干保护剂的成分为沙鲁胺。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述冻干保护剂的工作浓度为1%~10%。
3.一种可冻干的PCR试剂，其特征在于，所述可冻干的PCR试剂中包括冻干保护剂，所述冻干保护剂如权利要求1或2所述；
所述可冻干的PCR试剂中还包括引物、探针、dNTP和Taq DNA聚合酶的组分。
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