CN114369616A

CN114369616A - 番茄sisps基因在提高植物耐高温性中的应用

Info

Publication number: CN114369616A
Application number: CN202210097857.4A
Authority: CN
Inventors: 张迎迎; 刘雅慧; 朱为民; 杨学东; 张辉; 万延慧; 卢盼玲
Original assignee: Shanghai Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Shanghai Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2022-01-27
Filing date: 2022-01-27
Publication date: 2022-04-19
Anticipated expiration: 2042-01-27
Also published as: CN114369616B

Abstract

本发明提供了番茄SISPS基因在提高植物耐高温性中的应用，涉及植物基因工程技术领域。在本发明中，高温下SlSPS过表达可以促进植物蔗糖和可溶性糖的积累，脯氨酸含量也更高，同时与抗氧化防御清除系统相关的清除酶如SOD、CAT和POD的酶活性也高于敲除突变体和野生型材料，过表达SlSPS的番茄材料更耐高温。本发明为培育耐高温番茄新品种提供了基因资源，具有较好的潜在应用价值，为研究番茄植物应答逆境信号的机制和耐受不利环境的分子机理奠定理论基础。

Description

番茄SISPS基因在提高植物耐高温性中的应用

技术领域

本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及番茄SISPS基因在提高植物耐高温性中的应用。

背景技术

温度是影响植物生长发育的最重要的环境因子之一。近年来，全球气温的不断升高使得温室、大棚蔬菜越夏栽培难度增大，同时常伴随着各种病害的发生，引起植株抗性降低、生长势减弱，从而导致蔬菜的产量下降和品质劣化。因此，设施园艺相关蔬菜耐热性的研究受到了越来越多的重视。鉴定高温胁迫应答基因和培育耐热蔬菜品种是解决这一问题的有效途径。

番茄(Solanum lycopersicum)是一种世界范围广泛种植的蔬菜作物，也是我国最主要的消费蔬菜之一。番茄属于喜温性园艺作物，但高温耐性不佳。高温胁迫会导致番茄品质的下降和产量的降低。在高温胁迫下，番茄植株的光合作用下降，自由基清除能力减弱，花粉活力和花粉数目都受到严重影响，导致番茄结实率降低。目前，番茄耐高温胁迫方面的研究大多集中在番茄经济性状指标或生理生化代谢变化方面，而番茄响应高温胁迫的分子机制相关研究还比较少，大多数高温响应基因的生物学功能尚不清楚。因此，解析番茄的抗高温调控机制，克隆抗热相关基因，系统深入地研究抗热相关基因在高温胁迫条件下的表达与调控，可为培育番茄抗热新品种提供分子基础，为通过基因工程手段提高番茄的抗热性开辟一条新途径，同时也为其它农作物的抗高温分子育种和品种改良提供基因资源。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供番茄SISPS基因在提高植物耐高温性中的应用。本发明所述应用对提升农作物耐高温性以及筛选种质材料和定向育种等均具有重要的生产意义。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了番茄SISPS基因或蛋白或含所述基因的重组载体、表达盒或重组菌在提高植物耐高温性中的应用，所述番茄SISPS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

优选的，所述植物包括双子叶植物。

优选的，所述植物耐高温性的生理指标，包括：蔗糖磷酸合成酶、过氧化氢酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶的酶活性，以及蔗糖、可溶性糖、脯氨酸、丙二醛、超氧阴离子和过氧化氢的含量。

本发明还提供了过表达番茄SISPS基因在提高植物耐高温性中的应用，所述番茄SISPS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了一种培育耐高温番茄的方法，包括使番茄基因中过表达番茄SISPS基因，所述番茄SISPS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

有益效果：本发明提供了番茄SISPS基因或蛋白或含所述基因的重组载体、表达盒或重组菌在提高植物耐高温性中的应用，实施例中通过基因手段构建番茄SlSPS过表达植株(SISPS-OE)或基因敲除植株(SISPS-CR)，调控所述基因SlSPS的表达水平来研究其对番茄高温抗性的调控机制，结果发现，高温下SlSPS过表达可以促进植物蔗糖和可溶性糖的积累，脯氨酸含量也更高，同时与抗氧化防御清除系统相关的清除酶如SOD、CAT和POD的酶活性也高于敲除突变体和野生型材料，过表达SlSPS的番茄材料更耐高温。并且在6个野生番茄材料中发现，SlSPS基因的表达量和高温逆境胁迫下苗的成活率呈正相关趋势。本发明为培育耐高温番茄新品种提供了基因资源，具有较好的潜在应用价值，为研究番茄植物应答逆境信号的机制和耐受不利环境的分子机理奠定理论基础。

附图说明

图1为短期高温逆境下SlSPS响应高温逆境，其中A：短期高温胁迫Micro-Tom的苗期SlSPS基因的表达量和酶活结果；B：红熟期果实短期高温处理SlSPS表达量和酶活分析结果；

图2为SlSPS基因过表达的植株(SISPS-OE)与敲除突变体材料(SISPS-CR)在高温逆境96小时的表型分析，其中A：SlSPS过表达(上)和敲除材料(下)高温处理96h的表型；B：SlSPS过表达(上)和敲除材料(下)高温处理96h叶片的DAB染色；

图3为SlSPS过表达和敲除材料高温处理96h的SPS酶活(A)、蔗糖含量(B)和可溶性糖含量(C)；

图4为高温处理96h的SlSPS过表达和敲除材料SOD(A)、POD(B)和CAT(C)的测定结果；

图5为高温处理96的SlSPS过表达和敲除材料中Pro(A)、MDA(B)、O^2-(C)和H₂O₂(D)的测定结果；

图6为SlSPS过表达(A)和敲除材料(B)高温处理一周表型；

图7为不同番茄品种苗期SlSPS表达量与苗期高温处理后成活率之间的分析结果。

具体实施方式

本发明所述SEQ ID NO.1所示的序列为CDS序列，源自Solgenomics中公布的序列(Solyc07g007790)，并且SEQ ID NO.1所编码的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.2所示。

本发明实施例中，所述番茄SISPS基因优选通过PCR扩增得到，克隆所用的引物对优选包括SlSPS-ORF-F和SlSPS-ORF-R，SlSPS-ORF-F的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.3所示：GGAAACGATTGGATTAACAGTT，SlSPS-ORF-R的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.4所示：TTATCCTTTGAGTACCGCTAGT。本发明所述PCR扩增的体系以50μl计，优选包括模板DNA(2μl)、2×KOD FX buffer(25μl)、dNTP(5μl)、Primer-F(2μl)、Primer-R(2μl)、KOD FX(1μl)和去离子水(13μl)；扩增程序优选包括：95℃预变性3min；94℃变性30S，55～60℃退火30S，68℃延伸(1kb/min)，35个循环；68℃延伸10min；16℃保存。

本发明所述植物优选包括双子叶植物，更优选包括番茄、茄子或拟南芥，并且所述植物耐高温性的生理指标，优选包括：蔗糖磷酸合成酶、过氧化氢酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶的酶活性，以及蔗糖、可溶性糖、脯氨酸、丙二醛、超氧阴离子和过氧化氢的含量。

在本发明中，优选通过构建过表达转基因植株和基因敲除植株，来验证番茄SISPS基因响应高温的机制。本发明在构建过表达转基因植株时，优选将所述番茄SISPS基因构建到植物过表达载体pC1300-35S-4X Myc上，用获得的过表达载体转化农杆菌，而后再侵染番茄子叶并进行植物组织培养，筛选阳性转基因番茄植株，获得耐高温的转基因番茄。本发明在构建基因敲除植株时，利用基因编辑敲除载体pCAMBIA1300-pYAO-cas9进行。本发明对所述植物过表达载体pC1300-35S-4X-Myc(Liu J；Feng L；Gu x；et al.,An H3K27me3demethylase-HSFA2 regulatory loop orchestrates transgenerational thermomemoryin Arabidopsis.Cell Res,2019.,29(5):379-390)和基因编辑敲除载体pCAMBIA1300-pYAO-cas9的来源并没有特殊限定，利用本领域的常规市售载体即可。

本发明所述重组菌的宿主菌优选包括大肠杆菌细胞或农杆菌细胞，更优选为农杆菌细胞，最优选为农杆菌GV3101。

利用本发明所述过表达转基因植株和基因敲除植株，进行同样的高温验证，高温下SlSPS过表达可以促进植物蔗糖和可溶性糖的积累，脯氨酸含量也更高，同时与抗氧化防御清除系统相关的清除酶如SOD、CAT和POD的酶活性也高于敲除突变体和野生型材料，因此过表达SlSPS的番茄材料更耐高温。

本发明对所述过表达的方法并没有特殊限定，优选与上述过表达转基因植株的方法相同，在此不再赘述。

本发明所述方法优选与上述过表达的方法相同，在此不再赘述。

下面结合实施例对本发明提供的番茄SISPS基因在提高植物耐高温性中的应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

本发明中，所用的试剂和方法如无特殊说明，均为本领域的常规市售试剂、试剂盒和试剂盒配套方法，如在RNA提取过程中所有的耗材均采用RNAase-free产品，番茄果实的RNA提取参照博日科技的Biospin Plant Total RNA Extraction Kit(DNA-free)说明书；反转录时根据翊圣公司的

Ⅱ1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digesterplus)试剂盒进行反转录；实时荧光定量PCR时，反应液的配比及程序设定均参照宝日医生物技术公司的TB

Premix Ex Taq^TM II试剂说明书进行配置和设定，相对表达量的计算方法采用2^-ΔΔCT法。并且，在本发明实施例中植物生理指标的测定，如植物蔗糖磷酸合成酶、蔗糖、可溶性糖、脯氨酸、丙二醛、超氧阴离子、过氧化氢酶、过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢含量的测定原理及方法分别按照苏州科铭生物技术有限公司试剂盒说明书进行。

实施例1

SlSPS过表达和敲除载体的构建及转化

利用pCAMBIA1300-pYAO-cas9和pC1300-35S-4X Myc载体，对SlSPS基因进行不同的克隆构建，分别构建了敲除载体和过表达载体。测序正确后转到农杆菌GV3101，用农杆菌介导法转化番茄材料Micro-Tom，对获得的SlSPS1过表达和敲除株系，首先进行DNA水平的鉴定，先利用潮霉素抗性基因HYG引物进行阳性筛选，在此基础上，设计SlSPS1过表达和敲除引物进行再次鉴定。其中，对SlSPS1敲除突变体材料进行送样测序，并进行3代纯化得到纯合体植株后，利用qPCR检测过表达和敲除突变体材料SlSPS1基因的表达情况，筛选并获得了过表达和敲除突变体材料。

表1 SlSPS过表达和敲除载体构建过程中的引物

实施例2

番茄苗期高温处理

①短期高温处理的RNA水平检测：将生长4周的苗期材料(小番茄Micro-Tom，下同)于光照人工气候室中高温处理，于处理的0h、1h、2h、4h、8h、12h、24h进行取样。处理条件为：光照14h/黑暗8h、温度40℃、80％～90％的湿度。

②长期高温处理的生理指标检测：将生长4周的苗期材料于光照人工气候室中高温处理，处理时间分别为96小时和一周。处理循环条件为：光照14h/黑暗8h、处理温度40℃光照14h/28℃黑暗10h、80％～90％的湿度。

提取经①处理后的RNA后反转录成cDNA，配制qRT-PCR反应体系，进行实时荧光定量PCR，以eIF基因为内参基因，序列如表2所示：

表2实时荧光定量PCR所需引物

采用Eppendorf Mastercylcer ep realplex实时荧光定量PCR仪，配制20μl反应体系：10μl

Premix Ex Taq TM(2×)，0.4μl Forward Primer(10μM)，0.4μlReverse Primer(10μM)，2μl cDNA模板，去离子水7.2μl。

反应程序采用两步法扩增：95℃预变性30s；95℃变性5s，60℃退火及延伸30s，40个循环；溶解曲线分析。采用2^－△△CT法分析基因相对表达量。

结果如图1所示，在高温胁迫一小时后番茄叶片中的SlSPS的表达量就明显升高，到12小时出现下降的趋势，说明SlSPS基因响应高温逆境胁迫。SPS酶活性与野生型相比呈现持续升高的趋势。

对Micro-Tom的红熟期果实进行高温胁迫处理，结果如图1所示，高温胁迫下果实中SlSPS的表达量也在短时间中具有升高的趋势，果实中总的SPS酶活性与野生型相比呈现升高的趋势。由此说明SlSPS在番茄的不同时期对于外界的高温逆境都呈现正向响应的趋势。

实施例3

对实施例1得到的SlSPS过表达材料和敲除突变体材料的四周苗进行42℃高温胁迫处理(光照14h/黑暗8h、处理温度42℃光照14h/28℃黑暗10h、80％～90％的湿度)，处理到96小时表型可以明显看到差异性，利用DAB对不同材料相同部位的叶片染色检测活性氧迸发情况：①选取各处理时间下的叶片，保证取样部位一致，将叶片剪下后立即置于5mL的DAB溶液中(PH＝3.8，1mg/ml)；

②真空抽气至叶片下沉；

③置于28℃培养箱暗培养8～12h直到有暗红色物质析出；

④将染好色的叶片放入95％乙醇中，沸水浴10min，反复进行2次；⑤在不同浓度(85％、70％、50％)乙醇溶液中，进行梯度复水；

⑥叶片最终放置于50％甘油中保存拍照。

结果如图2所示，敲除突变体材料活性氧的累积最多，野生型次之，过表达材料最少。

实施例4

对实施例1得到的SlSPS1过表达材料和敲除突变体材料的苗期进行短期高温逆境胁迫处理。在高温逆境处理96小时的过表达材料和敲除材料取样，进行SPS酶活性、蔗糖和可溶性糖进行测定。

结果如图3所示，高温逆境胁迫处理下，SlSPS1过表达材料和敲除突变体材料中SPS酶活性均有所升高，但过表达材料中其SPS酶活性显著高于野生型，相反敲除突变体材料中SPS酶活性低于野生型。在高温处理后蔗糖和可溶性糖含量都下调，但在敲除突变体材料中二者含量低于对照，而在过表达系中蔗糖和可溶性糖含量高于对照。

实施例5

对高温胁迫的材料进行抗逆相关酶活进行测定测定

结果如图4所示，在常温对照中，野生型与过表达材料的SOD活性具有差异性，过表达材料的SOD活性高。在高温处理后虽然所有株系中SOD的含量都呈现下降趋势，但过表达材料中SOD的活性始终高于野生型的活性。敲除突变体材料中的SOD活性在未高温处理时就比野生型低，在高温处理后敲除突变体SOD的含量下降更显著且活性始终低于野生型的活性。在高温逆境处理后，过氧化氢酶(catalase，CAT)和过氧化物酶(peroxidase，POD)，酶活性与对照中的活性相比，呈现了活性降低的趋势。但在敲除突变体株系中，其酶活性比野生型还要低，因此可以推测其酶活性的降低也减弱了ROS的清除能力，从而影响植物的抗逆性。以上结果说明，植物体内SlSPS基因表达量的改变，引起了植物对高温环境的不同响应。

实施例6

高温处理96h的SlSPS过表达和敲除材料中Pro(A)、MDA(B)、O^2-(C)和H₂O₂的测定。

对实施例1得到的SlSPS过表达材料和敲除突变体材料的脯氨酸含量进行测定，结果如图5所示，过表达材料的脯氨酸本底水平比野生型要高。在高温处理后，野生型与过表达材料的脯氨酸含量均有升高的趋势，但过表达材料积累了更多的脯氨酸，脯氨酸含量的增加能使植物的抗逆性增强。在常温对照中野生型与敲除突变体材料脯氨酸含量相比，没有显著差异，在高温处理后脯氨酸含量均有升高的趋势，但野生型比敲除突变体积累了较多的脯氨酸。由此可能说明，SlSPS在番茄中表达水平的改变影响了番茄苗期高温耐受性可能是与脯氨酸含量的积累相关。

通过检测丙二醛(Malondialdehyde，MDA)就可检测脂质氧化的水平，经高温处理后植物内MDA含量的增加，可反应植株受害程度的严重性。在高温处理后MDA大量积累，并且在敲除突变体材料中其含量显著升高，由此可以说明敲除突变体材料受高温胁迫所导致的膜质伤害更严重。

对照中的O^2-含量没有显著差异，但在高温逆境处理后，敲除突变体材料中的O^2-含量显著升高，而在过表达材料中，其含量的增加并不明显。检测高温胁迫植物体内H₂O₂的含量，结果发现常温对照野生型和过表达株系中H₂O₂的含量没有显著差异，但在高温处理后，野生型与过表达材料的H₂O₂含量降低，由此可以发现，过表达材料增强了番茄苗期的抗逆性可能是由于细胞中没有积累大量的ROS，从而降低了细胞的损害程度。敲除突变体株系中H₂O₂的含量在高温处理后，H₂O₂的含量均呈现显著升高趋势，由此可以发现，敲除突变体株系降低了番茄苗期的抗逆性可能是由于ROS的大量积累从而导致植株细胞受到损害。

实施例7

对实施例1得到的SlSPS过表达材料和敲除突变体材料生长四周的苗进行42℃高温胁迫处理一周后，进行表型观察。

结果如图6所示，SlSPS过表达材料同野生型相比较，植株的生长状态较好，呈现明显耐高温的现象。而敲除突变体材料同野生型相比，生长状态差，存活率大幅度降低，SlSPS基因敲除后植株呈现不耐高温的状态。这些结果显示SlSPS基因参与高温胁迫的耐受性。

实施例8

利用6份野生番茄(表3)进行种植同时进行高温处理，并测定SlSPS基因的表达量。处理条件：将生长4周的苗期材料于光照人工气候室中高温处理，处理时间为一周。处理循环条件为：处理温度40℃光照14h/28℃黑暗10h、80％～90％的湿度。同时在处理前取幼嫩叶片进行RNA，qRT-PCR进行SlSPS基因表达检测。

结果如图7所示，SlSPS基因在不同的品种中含量差异性很大，同时高温逆境幼苗的成活率有差异，进行相关性分析发现，结果发现SlSPS基因表达量和苗的成活率呈现正相关趋势。

表3不同番茄材料的SlSPS基因表达量和苗的成活率统计表

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 上海市农业科学院

<120> 番茄SISPS基因在提高植物耐高温性中的应用

<160> 18

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 3165

<212> DNA

<213> 番茄(Solanum lycopersicum)

<400> 1

atggcgggaa acgattggat taacagttac ttagaggcga tactggatgt aggaccaggg 60

ctagatgata agaagtcatc gttgttattg agagaaagag ggaggtttag tccgacgagg 120

tattttgttg aggaagttat tactggattt gatgagactg atttgcatcg ttcgtggatc 180

cgagcacaag ctactcggag tccgcaggag aggaatacta ggctcgagaa tatgtgctgg 240

aggatttgga atttggctcg ccagaaaaag cagcttgagg gagagcaagc tcggtggatg 300

gcaaaacgcc gtcaagaacg tgagagaggt cgcagagaag cagttgctga tatgtcagag 360

gatctatctg agggagagaa aggagatata gtcactgaca tgtcatctca tggtgaaagt 420

accagaggcc gattgcctag aatcagttct gttgagacaa tggaagcatg ggtcagtcag 480

cagagaggaa agaagctcta tatcgtactt ataagtttac atggtttaat tcggggtgag 540

aatatggagc ttggacggga ttctgatact ggtggtcagg tgaagtatgt tgttgaactt 600

gcgagggcct taggatcgat gccaggtgta tatcgggttg acttgcttac tagacaagta 660

tcttcgccag aagtagattg gagctatggt gagccgacag agatgctgac gccaataagt 720

acagacggct tgatgagtga gatgggggag agtagtggtg cttatattat tcgcattcct 780

tttggaccaa gagagaaata tattccaaaa gaacagctat ggccctatat tcctgaattt 840

gttgatggtg cacttaacca tattattcaa atgtccaaag ttcttggtga gcaaattggt 900

aatggccatc ctgtgtggcc tgttgccata catggacatt atgctgatgc tggcgactca 960

gctgctctcc tgtcgggtgc tttaaatgta ccaatgcttt tcactggtca ctcacttggt 1020

agagataagt tggagcaact gttgcgacaa ggtcgtttgt caaaggatga aataaactca 1080

acctacaaga taatgaggag aatagaggct gaagaattaa ctcttgatgc ttccgaaatt 1140

gtcatcacta gtacaagaca ggagattgat gagcaatggc gtttgtatga tgggtttgat 1200

ccaatattag agcgcaagtt acgtgcaagg atcaagcgga atgtgagctg ttatggcagg 1260

tttatgcctc gtatggctgt aattcctcct gggatggagt tccaccatat tgtgccacat 1320

gaaggtgaca tggatggtga cacagaagga agtgaagatg gaaagatccc agatccacct 1380

atttgggcag agattatgcg cttcttttct aatccaagga agcctatgat actcgcactt 1440

gctaggcctg atcccaagaa gaacctcact actttagtga aagcatttgg tgaatgtcgt 1500

ccattgagag agcttgctaa tcttaccttg ataatgggta atcgagataa tatcgatgaa 1560

atgtctagca ccaattctgc acttcttctt tcaatcttga agatgataga taagtatgat 1620

ctttatggtc aagtagctta tcctaaacac cacaagcagt cagatgttcc tgatatctac 1680

cgtcttgctg caaagactaa gggtgttttt attaatccag cttttattga gccttttgga 1740

ctgactttga ttgaggcagc agcttatggt ctcccaatgg tagccacaaa aaatggagga 1800

cctgttgata tacatagggt tcttgacaat ggtctcttag tggatcccca tgatcagcag 1860

gcaattgctg atgctctttt gaagttggtt gctgataaac aactgtgggc gaaatgcagg 1920

gcaaatggat taaaaaatat ccaccttttc tcatggcccg agcactgtaa aacttatcta 1980

tcccggatag ctagctgcaa accaaggcaa ccacgctggc tgagacccga tgacgatgat 2040

gatgaaaatt cagaaacaga ttcacctagt gattccttga gagatattca tgacatatct 2100

ctgaatctga gattttcatt agatggggaa aagaatgata ataaagaaaa tgctgatagt 2160

acattagacc ccgaagttcg aaagagcaag ttagagaatg ctgttttgtc cttgtctaag 2220

ggtgcaccga agagcacatc aaaatcgtgg tcatcagaca aggcagacca aaatcctggt 2280

gctggtaaat tcccagcgat aaggaggagg cgacatattt ttgttattgc tgtggattgt 2340

gatgctagct caggactctc tggaagtgtg aaaaagatat ttgaggctgt agagaaggaa 2400

aggtcagagg gttccattgg atttatcctg gcttcatctt tcaatatatc agaagtacag 2460

tctttcctgg tttcagaggg catgagtcct actgattttg atgcgtacat atgcaatagt 2520

ggcggtgatc tttattattc gtccttccat tctgagcaaa atccttttgt agtcgacttg 2580

tactatcact cacatattga gtatcgttgg ggaggcgaag ggttgagaaa gactttggtg 2640

cggtgggccg cttctatcac tgataagaat ggtgaaaatg gagagcacat tgttgttgag 2700

gatgaagaca attcagctga ctactgctat actttcaaag tctgcaagcc tgggaaggtt 2760

ccgccagcta aagaacttag aaaagtaatg cgaattcagg cacttcgttg tcacgctgtt 2820

tattgtcaaa atgggagtag gattaatatg atccctgtac tggcatctcg gtcccaagca 2880

ctcaggtact tatatctgcg atggggaatg gacttgtcaa agttggtggt tttcgtcgga 2940

gaaagtggtg ataccgatta tgaagggttg atcggtggtc tacgcaaggc tgtcataatg 3000

aaaggactct gcactaatgc aagcagctta attcacggta ataggaatta ccctctatct 3060

gatgttttac cattcgacag ccctaatgtc atccaagcag acgaggaatg tagcagcacc 3120

gaaatccgtt ccttactgga gaaactagcg gtactcaaag gataa 3165

<210> 2

<211> 1054

<212> PRT

<213> 番茄(Solanum lycopersicum)

<400> 2

Met Ala Gly Asn Asp Trp Ile Asn Ser Tyr Leu Glu Ala Ile Leu Asp

1 5 10 15

Val Gly Pro Gly Leu Asp Asp Lys Lys Ser Ser Leu Leu Leu Arg Glu

20 25 30

Arg Gly Arg Phe Ser Pro Thr Arg Tyr Phe Val Glu Glu Val Ile Thr

35 40 45

Gly Phe Asp Glu Thr Asp Leu His Arg Ser Trp Ile Arg Ala Gln Ala

50 55 60

Thr Arg Ser Pro Gln Glu Arg Asn Thr Arg Leu Glu Asn Met Cys Trp

65 70 75 80

Arg Ile Trp Asn Leu Ala Arg Gln Lys Lys Gln Leu Glu Gly Glu Gln

85 90 95

Ala Arg Trp Met Ala Lys Arg Arg Gln Glu Arg Glu Arg Gly Arg Arg

100 105 110

Glu Ala Val Ala Asp Met Ser Glu Asp Leu Ser Glu Gly Glu Lys Gly

115 120 125

Asp Ile Val Thr Asp Met Ser Ser His Gly Glu Ser Thr Arg Gly Arg

130 135 140

Leu Pro Arg Ile Ser Ser Val Glu Thr Met Glu Ala Trp Val Ser Gln

145 150 155 160

Gln Arg Gly Lys Lys Leu Tyr Ile Val Leu Ile Ser Leu His Gly Leu

165 170 175

Ile Arg Gly Glu Asn Met Glu Leu Gly Arg Asp Ser Asp Thr Gly Gly

180 185 190

Gln Val Lys Tyr Val Val Glu Leu Ala Arg Ala Leu Gly Ser Met Pro

195 200 205

Gly Val Tyr Arg Val Asp Leu Leu Thr Arg Gln Val Ser Ser Pro Glu

210 215 220

Val Asp Trp Ser Tyr Gly Glu Pro Thr Glu Met Leu Thr Pro Ile Ser

225 230 235 240

Thr Asp Gly Leu Met Ser Glu Met Gly Glu Ser Ser Gly Ala Tyr Ile

245 250 255

Ile Arg Ile Pro Phe Gly Pro Arg Glu Lys Tyr Ile Pro Lys Glu Gln

260 265 270

Leu Trp Pro Tyr Ile Pro Glu Phe Val Asp Gly Ala Leu Asn His Ile

275 280 285

Ile Gln Met Ser Lys Val Leu Gly Glu Gln Ile Gly Asn Gly His Pro

290 295 300

Val Trp Pro Val Ala Ile His Gly His Tyr Ala Asp Ala Gly Asp Ser

305 310 315 320

Ala Ala Leu Leu Ser Gly Ala Leu Asn Val Pro Met Leu Phe Thr Gly

325 330 335

His Ser Leu Gly Arg Asp Lys Leu Glu Gln Leu Leu Arg Gln Gly Arg

340 345 350

Leu Ser Lys Asp Glu Ile Asn Ser Thr Tyr Lys Ile Met Arg Arg Ile

355 360 365

Glu Ala Glu Glu Leu Thr Leu Asp Ala Ser Glu Ile Val Ile Thr Ser

370 375 380

Thr Arg Gln Glu Ile Asp Glu Gln Trp Arg Leu Tyr Asp Gly Phe Asp

385 390 395 400

Pro Ile Leu Glu Arg Lys Leu Arg Ala Arg Ile Lys Arg Asn Val Ser

405 410 415

Cys Tyr Gly Arg Phe Met Pro Arg Met Ala Val Ile Pro Pro Gly Met

420 425 430

Glu Phe His His Ile Val Pro His Glu Gly Asp Met Asp Gly Asp Thr

435 440 445

Glu Gly Ser Glu Asp Gly Lys Ile Pro Asp Pro Pro Ile Trp Ala Glu

450 455 460

Ile Met Arg Phe Phe Ser Asn Pro Arg Lys Pro Met Ile Leu Ala Leu

465 470 475 480

Ala Arg Pro Asp Pro Lys Lys Asn Leu Thr Thr Leu Val Lys Ala Phe

485 490 495

Gly Glu Cys Arg Pro Leu Arg Glu Leu Ala Asn Leu Thr Leu Ile Met

500 505 510

Gly Asn Arg Asp Asn Ile Asp Glu Met Ser Ser Thr Asn Ser Ala Leu

515 520 525

Leu Leu Ser Ile Leu Lys Met Ile Asp Lys Tyr Asp Leu Tyr Gly Gln

530 535 540

Val Ala Tyr Pro Lys His His Lys Gln Ser Asp Val Pro Asp Ile Tyr

545 550 555 560

Arg Leu Ala Ala Lys Thr Lys Gly Val Phe Ile Asn Pro Ala Phe Ile

565 570 575

Glu Pro Phe Gly Leu Thr Leu Ile Glu Ala Ala Ala Tyr Gly Leu Pro

580 585 590

Met Val Ala Thr Lys Asn Gly Gly Pro Val Asp Ile His Arg Val Leu

595 600 605

Asp Asn Gly Leu Leu Val Asp Pro His Asp Gln Gln Ala Ile Ala Asp

610 615 620

Ala Leu Leu Lys Leu Val Ala Asp Lys Gln Leu Trp Ala Lys Cys Arg

625 630 635 640

Ala Asn Gly Leu Lys Asn Ile His Leu Phe Ser Trp Pro Glu His Cys

645 650 655

Lys Thr Tyr Leu Ser Arg Ile Ala Ser Cys Lys Pro Arg Gln Pro Arg

660 665 670

Trp Leu Arg Pro Asp Asp Asp Asp Asp Glu Asn Ser Glu Thr Asp Ser

675 680 685

Pro Ser Asp Ser Leu Arg Asp Ile His Asp Ile Ser Leu Asn Leu Arg

690 695 700

Phe Ser Leu Asp Gly Glu Lys Asn Asp Asn Lys Glu Asn Ala Asp Ser

705 710 715 720

Thr Leu Asp Pro Glu Val Arg Lys Ser Lys Leu Glu Asn Ala Val Leu

725 730 735

Ser Leu Ser Lys Gly Ala Pro Lys Ser Thr Ser Lys Ser Trp Ser Ser

740 745 750

Asp Lys Ala Asp Gln Asn Pro Gly Ala Gly Lys Phe Pro Ala Ile Arg

755 760 765

Arg Arg Arg His Ile Phe Val Ile Ala Val Asp Cys Asp Ala Ser Ser

770 775 780

Gly Leu Ser Gly Ser Val Lys Lys Ile Phe Glu Ala Val Glu Lys Glu

785 790 795 800

Arg Ser Glu Gly Ser Ile Gly Phe Ile Leu Ala Ser Ser Phe Asn Ile

805 810 815

Ser Glu Val Gln Ser Phe Leu Val Ser Glu Gly Met Ser Pro Thr Asp

820 825 830

Phe Asp Ala Tyr Ile Cys Asn Ser Gly Gly Asp Leu Tyr Tyr Ser Ser

835 840 845

Phe His Ser Glu Gln Asn Pro Phe Val Val Asp Leu Tyr Tyr His Ser

850 855 860

His Ile Glu Tyr Arg Trp Gly Gly Glu Gly Leu Arg Lys Thr Leu Val

865 870 875 880

Arg Trp Ala Ala Ser Ile Thr Asp Lys Asn Gly Glu Asn Gly Glu His

885 890 895

Ile Val Val Glu Asp Glu Asp Asn Ser Ala Asp Tyr Cys Tyr Thr Phe

900 905 910

Lys Val Cys Lys Pro Gly Lys Val Pro Pro Ala Lys Glu Leu Arg Lys

915 920 925

Val Met Arg Ile Gln Ala Leu Arg Cys His Ala Val Tyr Cys Gln Asn

930 935 940

Gly Ser Arg Ile Asn Met Ile Pro Val Leu Ala Ser Arg Ser Gln Ala

945 950 955 960

Leu Arg Tyr Leu Tyr Leu Arg Trp Gly Met Asp Leu Ser Lys Leu Val

965 970 975

Val Phe Val Gly Glu Ser Gly Asp Thr Asp Tyr Glu Gly Leu Ile Gly

980 985 990

Gly Leu Arg Lys Ala Val Ile Met Lys Gly Leu Cys Thr Asn Ala Ser

995 1000 1005

Ser Leu Ile His Gly Asn Arg Asn Tyr Pro Leu Ser Asp Val Leu Pro

1010 1015 1020

Phe Asp Ser Pro Asn Val Ile Gln Ala Asp Glu Glu Cys Ser Ser Thr

1025 1030 1035 1040

Glu Ile Arg Ser Leu Leu Glu Lys Leu Ala Val Leu Lys Gly

1045 1050

<210> 3

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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ggaaacgatt ggattaacag tt 22

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ttatcctttg agtaccgcta gt 22

<210> 5

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

aagcttatcg ataccgtcga ctctctaaat tctctctcac tgtc 44

<210> 6

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

gccgccaccg cggtggagct ctcctttgag taccgctagt ttc 43

<210> 7

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

attgcagtta cttagaggcg atac 24

<210> 8

<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

aaacgtatcg cctctaagta actg 24

<210> 9

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

tcgttatgtt tatcggcact tt 22

<210> 10

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

gggcgtcggt ttccactat 19

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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agaatctctg tatttttagc 20

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<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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tacacaacgc atcaaaacaa 20

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<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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aacgccgtca agaacgtgag 20

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<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

ctggtggtca ggtgaagtat gtt 23

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<211> 24

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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tctagtaagc aagtcaaccc gata 24

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<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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atccttcaga gcggtgttca 20

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<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 18

atctcaagag cctctggtgg 20

Claims

1.番茄SISPS基因或蛋白或含所述基因的重组载体、表达盒或重组菌在提高植物耐高温性中的应用，所述番茄SISPS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述植物包括双子叶植物。

3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述植物耐高温性的生理指标，包括：蔗糖磷酸合成酶、过氧化氢酶、过氧化物酶和超氧化物歧化酶的酶活性，以及蔗糖、可溶性糖、脯氨酸、丙二醛、超氧阴离子和过氧化氢的含量。

4.过表达番茄SISPS基因在提高植物耐高温性中的应用，所述番茄SISPS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

5.一种培育耐高温番茄的方法，其特征在于，包括使番茄基因中过表达番茄SISPS基因，所述番茄SISPS基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。