CN114350650A - 无dna残留血液rna提取试剂盒及核酸提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明专利涉及RNA核酸提取技术领域，具体来说是一种无DNA残留血液RNA提取试剂盒及核酸提取方法，试剂盒包括裂解液、第一漂洗液、第二漂洗液、洗脱液、蛋白酶K缓冲液、无RNA酶的双蒸水，还包括红细胞裂解液：0.1M‑0.6M蔗糖溶液，1mM‑100mM Trizma Base缓冲液，1mM‑10mM氯化镁溶液，体积比为1%‑10%的聚乙二醇辛基苯基醚溶液；DNA酶缓冲液：1mM‑10mM的pH 6.0‑8.0的Tris‑HCl缓冲液，1mM‑10mM的氯化镁溶液，0.01mM‑1mM的氯化钙溶液；使用前，向DNA酶缓冲溶液内溶解DNA酶，浓度为10‑40mg/mL。通过先使用红细胞裂解液，去除红细胞的影响；再使用DNA酶缓冲液，去除DNA的干扰，使整个提取RNA的过程步骤简单，操作安全便捷，同时又能得到纯度较好的RNA。
Description
技术领域
本发明专利涉及RNA核酸提取技术领域，具体来说是一种无DNA残留血液RNA提取试剂盒及核酸提取方法。
背景技术
核酸是生物遗传的重要物质基础，可以分为两大类：脱氧核糖核苷酸(DNA)和核糖核苷酸(RNA)。RNA本身为单链，很不稳定，在血液中主要分布在白细胞内，含量不多，且血液中又含有大量RNA酶，就使得提取纯度较高的RNA变的更加不易。
RNA的提取与纯化是各种临床检测的一个基础工作，在RNA纯化的过程中，去除DNA是一个非常重要的环节，DNA去除不彻底很可能会影响下游实验的进行。提取血液样品中的RNA需要对样品进行处理，先去除红细胞，为后续实验去除多余的干扰。不然会大量消耗药品和消化酶等，导致实验时间延长、药品浪费以及提取RNA的品质降低等。
公开号为CN103160496B的发明专利公开了一种血液RNA提取和纯化方法，具体地说是利用一种大型实验动物血液为样本，用改良的红细胞裂解液裂解红细胞，通过异硫氰酸胍法提取RNA并运用改进oligo(dT)-纤维素层析法对总RNA进行纯化，最终获得大型实验动物血液poly(A)+RNA。其中改良后的红细胞裂解液的组分浓度155mmol/L NH4Cl、0.1mmol/L EDTA和12mmol/L KHCO3。该方法能够得到纯度较高的RNA，但是在提取RNA的过程中使用了氯仿、甲醛等毒性较大的化学品，污染多，操作复杂。
发明内容
本发明专利的目的在于解决现有技术的不足，通过去除红细胞和DNA的干扰，便捷污染少地获得纯度较好的RNA。
为了实现上述目的，本发明设计了一种无DNA残留血液RNA提取试剂盒，包括裂解液、第一漂洗液、第二漂洗液、洗脱液、蛋白酶K缓冲液、无RNA酶的双蒸水，还包括红细胞裂解液：0.1M-0.6M蔗糖溶液，1mM-100mM Trizma Base缓冲液，1mM-10mM氯化镁溶液，体积比为1％-10％的聚乙二醇辛基苯基醚；DNA酶缓冲液：1mM-10mM的pH 6.0-8.0的Tris-HCl缓冲液，1mM-10mM的氯化镁溶液，0.01mM-1mM的氯化钙溶液；使用前，向DNA酶缓冲溶液内溶解DNA酶，浓度为10-40mg/mL。
优选地，所述裂解液包括：1M-6M异硫氰酸胍溶液，0.1mM-1mM柠檬酸钠，质量浓度为10％-30％的十二烷基肌氨酸钠，体积比0.05％-2％的β-巯基乙醇，1M-4M的醋酸钠溶液。
优选地，所述第一漂洗液包括：1M-6M异硫氰酸胍溶液，10mM-1M pH 6.0-7.2的Tris-HCl缓冲液，1mM-100mM乙二胺四乙酸缓冲液，体积比为10％-30％的异丙醇溶液。
优选地，所述第二漂洗液包括：1mM-100mM的Trizma Base缓冲液；使用前，向所述第二漂洗液中添加1-10倍体积的无水乙醇。
优选地，所述洗脱液包括：0.01mM-10mM乙二胺四乙酸缓冲液，1mM-100mM的TrizmaBase缓冲液。
优选地，所述蛋白酶K缓冲液包括：1mM-10mM的氯化钙溶液，体积比为30％-60％的甘油，1mM-100mM的海藻糖溶液，1mM-100mM的Trizma Base缓冲液，体积比为0.01％-1％的Proclin-300；使用前，向所述溶液溶解蛋白酶K，浓度在10-40mg/mL。
优选地，所述无RNA酶的双蒸水为0.01％-1％焦碳酸二乙酯溶液。
还设计了一种RNA核酸提取方法，方法具体如下：
(1)采血管采集后室温放置2小时以上，取采好血的血液RNA真空采血管离心，移除采血管中上清；
(2)向采血管中加入无RNA酶的双蒸水，震荡混匀，沉淀完全溶解后离心，移除采血管中上清；
(3)向离心管中加入无RNA酶的双蒸水，震荡悬浮沉淀，把上述悬浮液全部吸入离心管中，加入裂解液和蛋白酶K缓冲液，混匀，55-65℃裂解10-15min；
(4)裂解完成后将上述溶液吸入过滤柱中，离心，将收集管中的溶液吸取到新的离心管中，加入无水乙醇，彻底混匀；
(5)将上述溶液吸入吸附柱中，离心1min，弃上清，向吸附柱中加入第一漂洗液，离心30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中；
(6)向吸附柱中央加DNA酶工作液，室温放置，然后加入第一漂洗液，离心，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中；
(7)向吸附柱中加入第二漂洗液，室温静置，离心，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中；
(8)重复(7)，然后离心，倒掉废液，将吸附柱置于室温放置数分钟；
(9)将吸附柱转入一个新的无RNA酶离心管中，加入无RNA酶的双蒸水室温放置，离心，得到RNA溶液。
本发明与现有技术相比，具有如下优点：
1.使用了红细胞裂解液和DNA酶缓冲液，时间短，污染少，操作简单；
2.所提取核酸产量高，纯度好。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步地解释说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
实施例1的具体操作过程如下：
1.取出第二漂洗液，加入48mL无水乙醇。
2.取采好血的血液RNA真空采血管，8000rpm离心10-15min。
注：确保采血管采集后室温(15-25℃)放置2小时以上，红细胞充分裂解。
3.移除采血管中上清，加入4mL RNase-Free water，盖上管盖。
4.震荡混匀，使沉淀完全溶解，然后8000rpm离心10-15min，移除采血管中上清。
5.加入350μL RNase-Free water震荡悬浮沉淀。
6.把上述悬浮液全部吸入1.5mL离心管中，加入300μL裂解液和40μL蛋白酶K缓冲液，混匀5-10s，55-65℃裂解10-15min。
注：裂解液和蛋白酶K缓冲液请勿提前混匀。
7.裂解完成后将上述溶液吸入过滤柱中，12000rpm离心3-5min。
8.将收集管中的溶液吸取到新的1.5mL离心管中，加入300μL无水乙醇，彻底混匀。
9.将上述溶液吸入吸附柱中，12000rpm离心30-60s，弃上清。
注：吸附柱最大容量为700μL，如一次吸不完需重复步骤9。
10.向吸附柱中加入350μL第一漂洗液，12000rpm离心30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
11.DNase I工作液的配制：取10μL DNase I储存液放入新的RNase-Free离心管中，加入70mL DNA酶缓冲液，轻柔混匀。
12.向吸附柱中央加入80μL的DNase I工作液，室温放10-15min。
13.向吸附柱中加入350μL第一漂洗液，12000rpm离心30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
14.向吸附柱中加入500mL第二漂洗液(使用前请先检查是否已加入乙醇)，室温静置1-2min，12,000rpm(～13,400×g)离心30-60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
15.重复步骤14。
16.12000rpm离心2min，倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。
注：此步骤目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，离心后将吸附柱在室温放置片刻，以充分晾干。如果有漂洗液残留，可能会影响后续的实验。
17.将吸附柱转入一个新的RNase-Free离心管中，加入30-50mL无RNA双蒸水室温放置2min，12000rpm离心2min，得到RNA溶液。
注：洗脱缓冲液体积不应少于30μL，体积过小影响回收效率。RNA溶液请于-70℃保存。
从实施例的操作可知，在整个提取过程中，操作安全简单，未使用毒性较大溶剂，依然能得到纯度较好的RNA。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种无DNA残留血液RNA提取试剂盒，包括裂解液、第一漂洗液、第二漂洗液、洗脱液、蛋白酶K缓冲液、无RNA酶的双蒸水，其特征在于，还包括
红细胞裂解液：0.1M-0.6M蔗糖溶液，1mM-100mM Trizma Base缓冲液，1mM-10mM氯化镁溶液，体积比为1%-10%的聚乙二醇辛基苯基醚溶液；
DNA酶缓冲液：1mM-10mM的pH 6.0-8.0的Tris-HCl缓冲液，1mM-10mM的氯化镁溶液，0.01mM-1mM的氯化钙溶液；使用前，向DNA酶缓冲溶液内溶解DNA酶，浓度为10-40mg/mL。
2.根据权利要求1所述一种无DNA残留血液RNA提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液包括：1M-6M异硫氰酸胍溶液，0.1mM-1mM柠檬酸钠，质量浓度为10%-30%的十二烷基肌氨酸钠，体积比0.05%-2%的β-巯基乙醇，1M-4M的醋酸钠溶液。
3. 根据权利要求1所述一种无DNA残留血液RNA提取试剂盒，其特征在于，所述第一漂洗液包括：1M-6M异硫氰酸胍溶液，10mM-1M pH 6.0-7.2的Tris-HCl缓冲液，1mM-100mM乙二胺四乙酸缓冲液，体积比为10%-30%的异丙醇溶液。
4. 根据权利要求1所述一种无DNA残留血液RNA提取试剂盒，其特征在于，所述第二漂洗液包括：1mM-100mM的Trizma Base缓冲液；使用前，向所述第二漂洗液中添加1-10倍体积的无水乙醇。
5. 根据权利要求1所述一种无DNA残留血液RNA提取试剂盒，其特征在于，所述洗脱液包括：0.01mM-10mM乙二胺四乙酸缓冲液，1mM-100mM的Trizma Base缓冲液。
6. 根据权利要求1所述一种无DNA残留血液RNA提取试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K缓冲液包括：1mM-10mM的氯化钙溶液，体积比为30%-60%的甘油，1mM-100mM的海藻糖溶液，1mM-100mM的Trizma Base缓冲液，体积比为0.01%-1%的Proclin-300；使用前，向所述溶液溶解蛋白酶K，浓度在10-40mg/mL。
7.根据权利要求1所述一种无DNA残留血液RNA提取试剂盒，其特征在于，所述无RNA酶的双蒸水为0.01%-1%焦碳酸二乙酯溶液。
8.一种采用如权利要求1所述试剂盒的核酸提取方法，其特征在于，方法具体如下：
S1，采血管采集后室温放置2小时以上，取采好血的血液RNA真空采血管离心，移除采血管中上清；
S2，向采血管中加入无RNA酶的双蒸水，震荡混匀，沉淀完全溶解后离心，移除采血管中上清；
S3，向离心管中加入无RNA酶的双蒸水，震荡悬浮沉淀，把上述悬浮液全部吸入离心管中，加入裂解液和蛋白酶K缓冲液，混匀，55-65℃裂解10-15min；
S4，裂解完成后将上述溶液吸入过滤柱中，离心，将收集管中的溶液吸取到新的离心管中，加入无水乙醇，彻底混匀；
S5，将上述溶液吸入吸附柱中，离心1min，弃上清，向吸附柱中加入第一漂洗液，离心30-60sec， 倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中；
S6，向吸附柱中央加DNA酶工作液，室温放置，然后加入第一漂洗液，离心，倒掉收集管中的废液 将吸附柱放回收集管中；
S7，向吸附柱中加入第二漂洗液，室温静置，离心，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中；
S8，重复S7，然后离心，倒掉废液，将吸附柱置于室温放置数分钟；
S9，将吸附柱转入一个新的无RNA酶离心管中，加入无RNA酶的双蒸水室温放置，离心，得到RNA溶液。
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Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100136027A1 (en) * | 2006-04-06 | 2010-06-03 | The Johns Hopkins University | Methods and Compositions for Treating Bacterial Infection |
| CN101792757A (zh) * | 2010-03-30 | 2010-08-04 | 上海鼎国生物技术有限公司 | 一种用磁珠分离基因组dna试剂盒及其应用 |
| CN101935648A (zh) * | 2010-09-13 | 2011-01-05 | 原平皓(天津)生物技术有限公司 | 一种提取rna的方法和试剂盒 |
| CN103068979A (zh) * | 2010-08-18 | 2013-04-24 | 东丽株式会社 | Rna提取用溶液 |
| CN103571826A (zh) * | 2013-11-23 | 2014-02-12 | 河北联合大学 | 高效全血基因组dna提取方法 |
| CN103966205A (zh) * | 2014-05-28 | 2014-08-06 | 谭晓刚 | 从血液中提取核糖核酸的方法 |
-
2021
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Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100136027A1 (en) * | 2006-04-06 | 2010-06-03 | The Johns Hopkins University | Methods and Compositions for Treating Bacterial Infection |
| CN101792757A (zh) * | 2010-03-30 | 2010-08-04 | 上海鼎国生物技术有限公司 | 一种用磁珠分离基因组dna试剂盒及其应用 |
| CN103068979A (zh) * | 2010-08-18 | 2013-04-24 | 东丽株式会社 | Rna提取用溶液 |
| CN101935648A (zh) * | 2010-09-13 | 2011-01-05 | 原平皓(天津)生物技术有限公司 | 一种提取rna的方法和试剂盒 |
| CN103571826A (zh) * | 2013-11-23 | 2014-02-12 | 河北联合大学 | 高效全血基因组dna提取方法 |
| CN103966205A (zh) * | 2014-05-28 | 2014-08-06 | 谭晓刚 | 从血液中提取核糖核酸的方法 |
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