CN114343214A - 一种硫酸软骨素-壳聚糖多层修饰的甜菜红素脂质体及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于功能性食品包埋技术领域，提供了一种硫酸软骨素‑壳聚糖多层修饰的甜菜红素脂质体及其制备方法。本发明通过乙醇注入法‑超声探针‑过膜技术制备甜菜红素脂质体，首次以硫酸软骨素分子链上大量硫酸基(‑SO3 ‑)为负电基，壳聚糖分子链上大量氨基(‑NH3 +)为正电基，通过静电作用构建一种结构稳定、生物利用度高的多层脂质体。本发明制备的多重脂质体具有典型的核壳结构，与未经修饰和单层修饰的脂质体相比，对甜菜红素起到定向缓释的作用，提高了甜菜红素生物利用度，并且不易被胃肠道酶快速水解氧化，具有更好的消化稳定性。
Description
技术领域
本发明属于功能性食品包埋技术领域，特别涉及层层静电组装技术，进一步涉及一种硫酸软骨素-壳聚糖多层修饰的甜菜红素脂质体及其制备方法。
背景技术
食物中的天然色素具有安全无害且有一定的生物活性的优点备受人们喜爱和关注，但其低稳定性、易降解性和低生物利用度的缺陷却极大限制了它们在食品加工中的应用，因此，采用包埋技术构建运载体系来克服这些缺陷成为目前的研究热点。
脂质体是目前应用广泛的包埋载体之一，其结构为囊泡状，由磷脂双分子层构成，磷脂头、尾部的亲水性和疏水性使得脂质体具有独特的双亲性，即可以负载亲水性物质，又可以负载疏水性物质。通过脂质体包埋技术，可以对被包埋物起到保护、缓释、提高其稳定性的作用，因此广受研究者关注。但在外界环境影响下，磷脂本身不饱和双键的易氧化、酯键的水解会造成脂质体结构破坏，长期存放会出现包埋物泄露现象，磷脂易被胃肠道酶降解的性质也会导致被包埋物过早释放的问题。为了解决这些难点，我们需要对脂质体进行表面修饰。
层层组装技术是指通过先后顺序的静电吸附从而形成多层膜的的过程，该方法制备操作简便、条件温和且安全高效，目前通过生物聚合物来对脂质体表面修饰可以降低脂质体由于磷脂氧化水解而造成的降解，同时提高其稳定性。
硫酸软骨素、壳聚糖作为天然多糖，安全无毒的同时具有很好的生物活性，其中壳聚糖作为唯一的天然正电性多糖，常和阴离子脂质体复合来修饰脂质体。但壳聚糖是一种酸性多糖，其溶解性受pH影响很大，在pH大于5时壳聚糖几乎不溶，这也导致壳聚糖修饰的脂质体极易受到pH的影响而不稳定。硫酸软骨素作为水溶性多糖，很好的避免了这一问题，同时硫酸软骨素是一种非淀粉多糖，在胃消化道吸收很少，但能在肠道中发生糖酵解，从而可以为肠道靶向输送药物，提高运载药物的生物利用度。
甜菜红素是从食物中提取的天然色素物质的典型代表，广泛存在于火龙果、甜菜等食物中，其颜色鲜艳呈紫红到深红色不等，被广泛用作食用色素，并具有很好的抗氧化、抗肿瘤、抗炎等活性；但甜菜红素和其他天然色素一样，容易受到外部环境如高温、pH、离子强度影响等的影响而降解，人体对其吸收利用度也很低，这些因素都导致它在食品行业的应用受到限制。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的是提高天然色素的稳定性和其在胃肠道的生物利用度，提供一种由硫酸软骨素、壳聚糖层层静电组装修饰的多重脂质体(SCNPS)的制备方法，具体涉及提供一种硫酸软骨素-壳聚糖多层修饰的甜菜红素脂质体及其制备方法。
本发明以甜菜红素为天然色素的代表，在采用乙醇注入法-超声探针-过膜技术制备脂质体的基础上，将脂质体作为负载甜菜红素的载体，首次以硫酸软骨素分子链上大量硫酸基(-SO3 -)为负电基，壳聚糖分子链上大量氨基(-NH3 +)为正电基，通过静电作用在脂质体表面交联成静电桥，构建一种结构稳定、生物利用度高的多层脂质体，为脂质体不稳定问题提供一种解决办法，并扩大天然色素的应用范围。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
一种硫酸软骨素-壳聚糖多层修饰的甜菜红素脂质体的制备方法，其特征在于，以乙醇注入法-超声探针-过膜方法制备甜菜红素脂质体(NPS)，将制得的甜菜红素脂质体加入壳聚糖水溶液中，静电组装反应，得到壳聚糖修饰的甜菜红素脂质体(CNPS)，再将其加入硫酸软骨素水溶液，静电组装反应，得到硫酸软骨素-壳聚糖多层修饰的甜菜红素脂质体(SCNPS)。
优选的，所述的制备方法具体包括如下步骤：
(1)大豆卵磷脂和胆固醇溶于无水乙醇得到有机相；将吐温、甜菜红素溶于PBS得到水相；将有机相快速注入水相中反应，除去乙醇，用超声探针-过膜方法处理，随后置于PBS中透析至无色得到的甜菜红素脂质体；
(2)将步骤(1)中的甜菜红素脂质体加入壳聚糖水溶液中，搅拌反应，除去多余的壳聚糖，得到壳聚糖修饰的甜菜红素脂质体；
(3)将步骤(2)得到的壳聚糖修饰的甜菜红素脂质体加入硫酸软骨素水溶液中，搅拌反应，得到硫酸软骨素-壳聚糖多层修饰的甜菜红素脂质体。
优选的，所述的壳聚糖质量浓度为0.1％-2％；所述的硫酸软骨素质量浓度为0.01-2％。
优选的，所述的壳聚糖质量浓度为0.5％-1％；所述的硫酸软骨素质量浓度为0.05-0.3％。
优选的，壳聚糖水溶液的pH值小于5。
优选的，所述的大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为1:1-4:1；所述的甜菜红素与大豆卵磷脂质量比为0.02-0.1:1；所述的甜菜红素脂质体与壳聚糖水溶液的体积比为1:1；壳聚糖修饰的甜菜红素脂质体与硫酸软骨素水溶液的体积比为1:1；所述的有机相与水相的体积比为2:1-6:1。
进一步优选的，所述的有机相与水相的体积比为3:1。
优选的，超声探针-过膜方法处理的条件为：超声时间为2-8min，超声功率为150-600W，超声处理方式为1s开1s关，滤膜直径为150-220nm。
优选的，所述的反应的条件为：温度为：0-80℃，搅拌反应时间为10min-120min。
优选的，所述的吐温的浓度为12-24mg/ml；PBS的离子强度为0.1-0.2M，pH为6.8-7.0。
优选的，所述的除去乙醇的方法为于真空旋蒸仪上旋蒸；步骤(1)所述的反应的条件为：温度为40℃，搅拌反应时间为30min；步骤(2)和(3)所述的搅拌反应的条件为：时间为1h，搅拌反应后静置30min；所述的加入为使用恒流泵以恒速滴入，其中速率为1-10rpm；所述的甜菜红素与大豆卵磷脂质量比为0.02-0.08:1；所述的壳聚糖质量浓度为0.6％；所述的硫酸软骨素质量浓度为0.2％。
一种由上述方法制得的硫酸软骨素-壳聚糖多层修饰的甜菜红素脂质体。
与现有技术相比，本发明具有如下优点及有益效果：
(1)相较目前常规的双重修饰，本发明所得的SCNPS具有更小的粒径，体系更加均匀，稳定性更高。
(2)本发明所得的SCNPS具有典型的核-壳结构，明显改善常规NPS易受胃肠道消化酶快速水解氧化破坏造成结构破损的现象，对负载甜菜红素具有更好的缓释性。
(3)本发明所得的SCNPS相比单层CNPS及表面裸露的NPS在胃肠道具有更好的稳定性。
附图说明
图1是实施例2，3，4，5，6的SCNPS、CNPS及NPS的平均粒径及多分散指数PDI(左图)和Zeta电位(右图)。
图2是实施例2中NPS(A1和A2)、CNPS(B1和B2)、SCNPS(C1和C2)透射电镜图。
图3是实施例2中NPS、CNPS、SCNPS体外消化结果图。
图4是实施例2中NPS、CNPS、SCNPS对甜菜红素在胃消化段体外释放率曲线图。
图5是实施例2中NPS、CNPS、SCNPS对甜菜红素在小肠消化段的体外释放率曲线图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行具体地描述，但本发明的实施方式和保护范围不限于以下实施例。
实施例1
称取0.6g大豆卵磷脂、0.15g胆固醇溶于12mL无水乙醇中为有机相；取适量吐温80超声溶于0.2M的PBS中，再称取适量甜菜红素溶解在含吐温80的PBS中，使甜菜红素浓度为3mg/mL，吐温浓度为12mg/ml，即得水相。将有机相快速注入水相中，其中有机相与水相的体积比为3：1，于40℃水浴搅拌30min；再将溶液置于圆底烧瓶中，在真空旋蒸仪上除去无水乙醇；用超声探针-过膜方法处理得到的脂质体，其中超声时间为6min，超声功率为300W，超声处理方式为1s开1s关，将超声后的脂质体过膜挤压处理，滤膜直径为220nm，随后将制的脂质体置于PBS中透析至无色，得到NPS；将其以1:1体积比通过恒流泵以恒速(4rpm)滴加至0.6％的壳聚糖水溶液(此时壳聚糖水溶液pH值约为3)中，在磁力搅拌器上搅拌1h后，静置30min，离心以除去多余壳聚糖，得到CNPS；再以1:1体积比通过恒流泵以恒速(4rpm)滴加至0.2％的硫酸软骨素水溶液中，搅拌1h后，静置30min，既得SCNPS。
实施例2
称取0.12g大豆卵磷脂、0.04g胆固醇溶于12mL无水乙醇中为有机相；取适量吐温80超声溶于0.2M的PBS中，再称取适量甜菜红素溶解在含吐温80的PBS中，使甜菜红素浓度为2mg/mL，吐温浓度为12mg/ml，即得水相。将有机相快速注入水相中，其中有机相与水相的体积比为3：1，于40℃水浴搅拌30min；再将溶液置于圆底烧瓶中，在真空旋蒸仪上除去无水乙醇；用超声探针-过膜方法处理得到的脂质体，其中超声时间为6min，超声功率为300W，超声处理方式为1s开1s关，将超声后的脂质体过膜挤压处理，滤膜直径为220nm，随后将制的脂质体置于PBS中透析至无色，得到NPS；将其以1:1体积比通过恒流泵以恒速(4rpm)滴加至0.6％的壳聚糖水溶液(此时壳聚糖水溶液pH值约为3)中，在磁力搅拌器上搅拌1h后，静置30min，离心以除去多余壳聚糖，得到CNPS；再以1:1体积比通过恒流泵以恒速(4rpm)滴加至0.2％的硫酸软骨素水溶液中，搅拌1h后，静置30min，既得SCNPS。
测得上述实施例1和2制备的脂质体NPS中甜菜红素的包埋率分别为74.5％、63％，SCNPS在室温下放置两个月仍未见任何分层现象，而未经修饰的NPS一周后底部出现沉淀，单层修饰的CNPS一个月后出现分层，说明上述修饰方法能显著提高脂质体的稳定性。
实施例3
调整硫酸软骨素水溶液浓度为0.05％，其他操作均与实施例2相同，制得SCNPS。
实施例4
调整硫酸软骨素水溶液浓度为0.1％，其他操作均与实施例2相同，制得SCNPS。
实施例5
调整硫酸软骨素水溶液浓度为0.15％，其他操作均与实施例2相同，制得SCNPS。
实施例6
调整硫酸软骨素水溶液浓度为0.3％，其他操作均与实施例2相同，制得SCNPS。
电位和粒径测定
在25℃下采用Zetasizer Nano ZS型纳米粒度仪测定实施例2，3，4，5，6的SCNPS、CNPS和NPS平均粒径，多分散指数(PDI)和Zeta电位。
数据结果如图1所示。NPS本身粒径为102.5nm，电位为-8.97mV，经过壳聚糖单层修饰后，CNPS的粒径增加到150.6nm，电位由负变正为10.5mV，表明壳聚糖成功对脂质体进行表面修饰；随后对其进行第二层修饰，可以看到随着硫酸软骨素浓度的增加，SCNPS的粒径逐渐增加，电位也由正变负并逐渐饱和，证实硫酸软骨素与CNPS的成功结合。
透射电子显微镜观察
采用磷钨酸负染法观察NPS、CNPS、SCNPS形态，取适量样品稀释，滴于铜网上自然风干，再用1％的磷钨酸溶液染色，待自然风干后，在透射电子显微镜下观察脂质体的形态结构，结果如图2所示。
从图2(A1和A2)中可以看到，未经修饰的NPS表面光滑，呈椭圆至圆形状，分布均匀；图2(B1和B2)中CNPS表面有一层明显的物质，显示出明显的修饰结构，粒径明显比CNPS大；图2(C1和C2)中则可以看到SCNPS呈典型的核壳结构，外层有聚合物覆盖，粒径明显大于NPS和CNPS。
体外消化
通过模拟口腔、胃肠道消化条件考察实施例2中的NPS、CNPS及SCNPS在三相中的消化情况，以粒径作为其在消化过程的评估指标。结果如图3所示。
从图3中可以看到由于磷脂会被胃蛋白酶和胰蛋白酶消化分解，NPS及CNPS在口腔、胃、肠消化阶段粒径逐渐减少，SCNPS在口腔和胃消化阶段都很稳定，粒径也比NPS、CNPS大，到小肠消化阶段时粒径明显减小，表明SCNPS的核壳结构在胃消化段对包埋物具有很好的保护性，到肠道则能被消化分解，发挥定向释放的功能。
体外释放
体外释放模型可以反映包埋体系对包埋物的保留时间，将实施例2中NPS、CNPS、SCNPS装入截留分子量为7000的透析袋中，分别浸没在胃、小肠消化液中，定点测定甜菜红素的释放量，取样时间为30、60、90、120、150、180、240、360min。
从图4可以看到在前150min内，NPS、CNPS及SCNPS对甜菜红素的释放量随时间的增加逐渐增加；在360min时，SCNPS在胃、小肠消化段对甜菜红素的释放率分别为27.56％、43.09％，SCNPS在胃肠的释放量始终小于NPS、CNPS，对甜菜红素的释放速率也比NPS、CNPS缓慢，说明相较于NPS、CNPS，SCNPS对于包埋物具有更好的缓释性。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种硫酸软骨素-壳聚糖多层修饰的甜菜红素脂质体的制备方法，其特征在于，以乙醇注入法-超声探针-过膜方法制备甜菜红素脂质体，将制得的甜菜红素脂质体加入壳聚糖水溶液中，静电组装反应，得到壳聚糖修饰的甜菜红素脂质体，再将其加入硫酸软骨素水溶液，静电组装反应，得到硫酸软骨素-壳聚糖多层修饰的甜菜红素脂质体。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)大豆卵磷脂和胆固醇溶于无水乙醇得到有机相；将吐温、甜菜红素溶于PBS得到水相；将有机相快速注入水相中反应，除去乙醇，用超声探针-过膜方法处理，随后置于PBS中透析至无色得到的甜菜红素脂质体；
(2)将步骤(1)中的甜菜红素脂质体加入壳聚糖水溶液中，搅拌反应，除去多余的壳聚糖，得到壳聚糖修饰的甜菜红素脂质体；
(3)将步骤(2)得到的壳聚糖修饰的甜菜红素脂质体加入硫酸软骨素水溶液中，搅拌反应，得到硫酸软骨素-壳聚糖多层修饰的甜菜红素脂质体。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的壳聚糖质量浓度为0.1％-2％；所述的硫酸软骨素质量浓度为0.01-2％。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述的壳聚糖质量浓度为0.5％-1％；所述的硫酸软骨素质量浓度为0.05-0.3％。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的大豆卵磷脂与胆固醇的质量比为1:1-4:1；所述的甜菜红素与大豆卵磷脂质量比为0.02-0.1:1；所述的甜菜红素脂质体与壳聚糖水溶液的体积比为1:1；壳聚糖修饰的甜菜红素脂质体与硫酸软骨素水溶液的体积比为1:1；所述的有机相与水相的体积比为2:1-6:1。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，超声探针-过膜方法处理的条件为：超声时间为2-8min，超声功率为150-600W，超声处理方式为1s开1s关，滤膜直径为150-220nm。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述的反应的条件为：温度为：0-80℃，搅拌反应时间为10min-120min；所述的有机相与水相的体积比为3:1。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的吐温的浓度为12-24mg/ml；PBS的离子强度为0.1-0.2M，pH为6.8-7.0。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的除去乙醇的方法为于真空旋蒸仪上旋蒸；步骤(1)所述的反应的条件为：温度为40℃，搅拌反应时间为30min；步骤(2)和(3)所述的搅拌反应的条件为：时间为1h，搅拌反应后静置30min；所述的加入为使用恒流泵以恒速滴入，其中速率为1-10rpm；所述的甜菜红素与大豆卵磷脂质量比为0.02-0.08:1；所述的壳聚糖质量浓度为0.6％；所述的硫酸软骨素质量浓度为0.2％。
10.权利要求1-9任一项所述的方法制得的硫酸软骨素-壳聚糖多层修饰的甜菜红素脂质体。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116236417A (zh) * | 2023-03-07 | 2023-06-09 | 大连理工大学 | 一种聚合物多层皮肤防晒剂包覆载体材料及其制备方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102427740A (zh) * | 2009-03-26 | 2012-04-25 | 先进生物营养公司 | 生物活性物质的微囊化及其制造方法 |
| US20180271928A1 (en) * | 2017-03-23 | 2018-09-27 | Omar Augusto Estrada Ramirez | Dietary supplement derived from natural prodcuts by hot melt extrusion (hme) processing |
| CN111437354A (zh) * | 2020-04-02 | 2020-07-24 | 江西科技师范大学 | 一种果胶-壳聚糖多层修饰薏苡仁油脂质体及其制备方法 |
| CN113331398A (zh) * | 2021-06-09 | 2021-09-03 | 沈阳农业大学 | 一种β-胡萝卜素-淀粉-壳聚糖微胶囊及制备方法 |
| CN113368255A (zh) * | 2021-05-11 | 2021-09-10 | 华南理工大学 | 一种甜菜红素纳米脂质体及其制备方法与应用 |
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Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102427740A (zh) * | 2009-03-26 | 2012-04-25 | 先进生物营养公司 | 生物活性物质的微囊化及其制造方法 |
| US20180271928A1 (en) * | 2017-03-23 | 2018-09-27 | Omar Augusto Estrada Ramirez | Dietary supplement derived from natural prodcuts by hot melt extrusion (hme) processing |
| CN111437354A (zh) * | 2020-04-02 | 2020-07-24 | 江西科技师范大学 | 一种果胶-壳聚糖多层修饰薏苡仁油脂质体及其制备方法 |
| CN113368255A (zh) * | 2021-05-11 | 2021-09-10 | 华南理工大学 | 一种甜菜红素纳米脂质体及其制备方法与应用 |
| CN113331398A (zh) * | 2021-06-09 | 2021-09-03 | 沈阳农业大学 | 一种β-胡萝卜素-淀粉-壳聚糖微胶囊及制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 奚廷斐，周长忍: "《壳聚糖基海洋生物医用材料》", 31 March 2020 * |
| 陈悦; 王琨; 张凌琳: "壳聚糖及其衍生物包覆脂质体的应用", 《壳聚糖包覆脂质体递药系统的研究进展》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116236417A (zh) * | 2023-03-07 | 2023-06-09 | 大连理工大学 | 一种聚合物多层皮肤防晒剂包覆载体材料及其制备方法 |
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