CN112245409B - 一种植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊及其制备方法 - Google Patents

一种植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种植物蛋白‑熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊及其制备方法，是首先通过反溶剂沉淀法，将植物蛋白和熊去氧胆酸自组装成纳米粒，然后利用生物材料对纳米粒进行包覆，从而获得植物蛋白‑熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊。本发明制备的复合微囊形态圆润、大小均一，药物分散均匀，且具有显著的缓释给药特性。

Description

一种植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊及其制备 方法
技术领域
本发明涉及一种植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊及其制备方法，属于制药及医药应用技术领域。
背景技术
熊去氧胆酸(Ursodeoxycholic Acid，简称UDCA)为无毒、无臭、味苦的胆汁酸，具有抗炎、抗凋亡、细胞保护等作用，医学上用于增加胆汁酸分泌，并促进胆汁成分改变，降低胆汁中胆固醇及胆固醇脂，有利于胆结石中的胆固醇逐渐溶解。熊去氧胆酸呈弱碱性，口服后通过被动扩散而迅速吸收，吸收的最有效部位是中等碱性环境的回肠。然而，熊去氧胆酸通过肝脏时会被摄取5％～60％，仅少量药物进入体循环，血药浓度很低。因而，有效提高熊去氧胆酸在肠道内的生物利用度意义重大。
口服型缓释药物制剂可以在特定部位的介质中给药，并缓慢地释放出目标药物，与普通制剂相比，其能显著降低给药频率以增加患者的依从性，能有效避免肝脏的“首过效应”以降低药物产生的副作用，从而提高药物的生物利用率。在口服缓释药物制剂构建及制备过程中，合适材料的选择至为关键。
植物蛋白是植物种子储存蛋白的组分之一，是一种植物源性的天然高分子材料，其来源广泛、易于提取，安全无毒，具有良好的生物相容性。同时，植物蛋白具有良好的耐水性、耐热性和耐脂性，及生物可降解性，在体内较为稳定。特定的植物蛋白可溶于一定浓度的醇溶液中，通过对植物蛋白醇溶液进行反溶剂沉淀，植物蛋白可以自组装成纳米粒，并具有良好的成膜特性，作为一种生物可降解型药物载体材料有着广阔的应用前景。
基于熊去氧胆酸的口服型缓释药物制剂具有重要的研究开发价值。
发明内容
基于上述现有技术所存在的问题，本发明提供一种植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊及其制备方法，旨在使其具有良好的缓释给药特性。
本发明为实现上述目的，采用如下技术方案：
一种植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊的制备方法，其特点在于：首先通过反溶剂沉淀法，将植物蛋白和熊去氧胆酸自组装成纳米粒，然后利用生物材料对纳米粒进行包覆，从而获得植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊。具体包括如下步骤：
(1)将2g植物蛋白溶解于100mL体积浓度为65-85％的乙醇溶液中，搅拌至透明均匀，得植物蛋白醇溶液；按照植物蛋白与熊去氧胆酸的质量比为1-5:1，将熊去氧胆酸加入到所述植物蛋白醇溶液中，以500-800rpm的速度连续搅拌30min，得到植物蛋白和熊去氧胆酸的混合溶液；
(2)将20mL所述混合溶液以100-300μL/min的速度加入到80mL去离子水中，然后以200-1000rpm的速度在室温下连续搅拌10-120min进行水合；旋转蒸发去除乙醇，再向其中补加去离子水至100mL；
(3)将步骤(2)所得溶液以1000-3000rpm的速度离心3-8min，除去沉淀，留取上清液，即为植物蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液；
(4)对步骤(3)所得植物蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液进行干燥，获得植物蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末；
(5)将步骤(4)所得植物蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末加入到质量浓度为2-4％的生物材料A的溶液中，搅拌均匀，得到混悬液A；
(6)将步骤(5)所得混悬液A以550-850μL/min的速度滴加到含交联剂和生物材料B质量浓度皆为1-3％的混合溶液中，搅拌均匀，即得到植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊，蒸馏水洗涤后，干燥保存。
进一步地，所述的植物蛋白为玉米醇溶蛋白和小麦醇溶蛋白中的至少一种。
进一步地，步骤(4)和步骤(6)中，所述干燥的方法为冷冻干燥或真空干燥。
进一步地，步骤(5)中，所述的生物材料A为壳聚糖或氯化壳聚糖。
进一步地，步骤(6)中，所述的交联剂为三聚磷酸钠、焦磷酸钠或六偏磷酸钠；所述的生物材料B为海藻酸钠或纤维素硫酸钠。
进一步地，步骤(6)中，所述交联剂和所述生物材料B的质量相等。
本发明还公开了含所述植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊的用途，其特点在于：用于作为缓释药物给药于结肠部位。
本发明在通过反溶剂沉淀法自组装植物蛋白纳米粒的过程中，将疏水性药物分子熊去氧胆酸与植物蛋白共混，以疏水作用等为驱动力，可将药物分子有效负载于植物蛋白纳米粒中。该技术可以有效克服熊去氧胆酸溶解度低、半衰期短、生物利用率低等问题。在此基础上，以静电力为驱动力，以电性相反的多糖类生物大分子为材料，对形成的植物蛋白-熊去氧胆酸纳米粒进行包覆，可形成典型的内囊外壳状结构，该结构可以有效保护药物分子，避免人体内环境因素的干扰。同时，采用特殊生物材料制备的微囊可使熊去氧胆酸在身体的特定部位缓慢释放，以进一步提高药物的吸收利用率。采用该技术可以构建并制备口服型缓释药物制剂，解决疏水性药物分子的有效给药问题。
本发明的有益效果体现在：
1、本发明制备的植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊具有显著的缓释给药特性。
2、本发明制备的植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊形态圆润、大小均一，药物分散均匀，可以对内载药物活性起到良好的保护效应。
3、本发明制备的植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊具有良好的pH响应性，可作为治疗相关疾病的药物制剂，在结肠部位特定的pH刺激下缓慢释放出药物，以提高生物利用率，具有重要的研究和开发利用前景
4、本发明的制备工艺简单、易操作，且采用生物质材料，制剂安全性高。
附图说明
图1为实施例1所得玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒的扫描电子显微镜图。从图中可以看出，纳米粒形态圆润、饱满规则，呈良好的纳米微球结构。
图2为实施例1所得玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒的粒径分布图。从图中可以看出，粒径分布在100nm左右，平均粒径为161±0.9504nm，分散性良好，PDI为0.151。
图3为实施例1所得冻干后复合微囊的表面扫描电镜图，图4(A)和(B)为复合微囊在不同放大倍数下的内部横切扫描电镜图。从图3可以看出，整个微囊表面圆整。从图4(A)可以看出，内囊呈规则的网状结构，放大后，从图4(B)可以看到在网状结构上均匀附着包裹大量纳米粒。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
本实施例按如下步骤制备玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊：
(1)将2g玉米醇溶蛋白溶解于100mL体积浓度为75％的乙醇溶液中，搅拌至透明均匀，得玉米醇溶蛋白溶液；按照玉米醇溶蛋白与熊去氧胆酸的质量比为4:1，将熊去氧胆酸加入到玉米醇溶蛋白溶液中，以600rpm的速度连续搅拌30min，得到玉米醇溶蛋白和熊去氧胆酸的混合溶液；
(2)将20mL步骤(1)所得混合溶液以300μL/min的速度加入到80mL去离子水中，然后以600rpm的速度在室温下连续搅拌60min进行水合；旋转蒸发去除乙醇，再向其中补加去离子水至100mL；
(3)将步骤(2)所得溶液以3000rpm的速度离心3min，除去沉淀，留取上清液，即为玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液；
(4)对步骤(3)所得玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液进行冷冻干燥，获得玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末；
(5)将步骤(4)所得玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末加入到质量浓度为4％的氯化壳聚糖溶液中，搅拌均匀，得到混悬液；
(6)将步骤(5)所得混悬液以650μL/min的速度滴加到含交联剂三聚磷酸钠和纤维素硫酸钠质量浓度皆为2％的混合溶液中，搅拌均匀，即得到玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊，蒸馏水洗涤后，干燥保存。
精确称量一定量的步骤(6)所得玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊(含熊去氧胆酸50mg)，加入到事先溶胀完全的透析袋(8000-14000Da)，扎紧透析袋。用50mL模拟结肠液(pH7.4)作为溶出介质，转速调节为100rpm，水浴温度为37±0.5℃。并于预定的时间间隔(0.5、1、2、3、4、6、8、12、24和36h)分别吸取缓释溶液各1mL，取完后补充等量等温的溶出介质。取出的溶液过0.45μm的滤膜后，在紫外分光光度计中测定吸收值，并计算不同时间点收集液中药物的浓度，推算得累计释药百分数(Cumulative release percentage,Q)。其中，模拟结肠液(pH7.4)的配制方法为：K2HPO4 6.8g加水500mL至溶解，取胰酶10g加水适量使其溶解，将两液混合后，加水稀释到1000mL，加0.1mol/L NaOH调节pH至7.4。
为进行对比，本实施例还按相同的方法检测了步骤(4)所得玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒的累计释药百分数。
检测结果表明：本实施例所得复合微囊经干燥后，包封率为67.02±1.09％，载药量为18.89±0.86％。体外模拟药物释放表明，在模拟结肠液中，UDCA可以从复合微囊中缓慢释放，累积释放时间可以维持在1440min以上，UDCA的累积释放量达到93％。由此可见，在该复合微囊结构对UDCA可以在结肠液中的缓慢释放，以提高生物利用率。而步骤(4)所得纳米粒中，UDCA在720min之前释放量达到94％以上。
实施例2
本实施例按如下步骤制备小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊：
(1)将2g小麦醇溶蛋白溶解于100mL体积浓度为75％的乙醇溶液中，搅拌至透明均匀，得小麦醇溶蛋白溶液；按照小麦醇溶蛋白与熊去氧胆酸的质量比为2:1，将熊去氧胆酸加入到小麦醇溶蛋白溶液中，以600rpm的速度连续搅拌30min，得到小麦醇溶蛋白和熊去氧胆酸的混合溶液；
(2)将20mL步骤(1)所得混合溶液以200μL/min的速度加入到80mL去离子水中，然后以400rpm的速度在室温下连续搅拌30min进行水合；旋转蒸发去除乙醇，再向其中补加去离子水至100mL；
(3)将步骤(2)所得溶液以2000rpm的速度离心4min，除去沉淀，留取上清液，即为小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液；
(4)对步骤(3)所得小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液进行冷冻干燥，获得小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末；
(5)将步骤(4)所得小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末加入到质量浓度为3％的壳聚糖溶液中，搅拌均匀，得到混悬液；
(6)将步骤(5)所得混悬液以650μL/min的速度滴加到含交联剂焦磷酸钠和纤维素硫酸钠质量浓度皆为3％的混合溶液中，搅拌均匀，即得到小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊，蒸馏水洗涤后，干燥保存。
按实施例1相同的方式检测本实施例步骤(6)所得复合微囊与步骤(4)所得纳米粒的累计释药百分数。检测结果表明：本实施例所得复合微囊经干燥后，包封率为64.88±0.79％，载药量为15.09±1.76％。体外模拟药物释放表明，在模拟结肠液中，UDCA可以从复合微囊中缓慢释放，累积释放时间可以维持在960min以上，UDCA的累积释放量达到94％。由此可见，该复合微囊结构对UDCA可以在结肠液中的缓慢释放，以提高生物利用率。而步骤(4)所得纳米粒中，UDCA在720min之前释放量达到94％以上。
实施例3
本实施例按如下步骤制备玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊：
(1)将2g玉米醇溶蛋白溶解于100mL体积浓度为65％的乙醇溶液中，搅拌至透明均匀，得玉米醇溶蛋白溶液；按照玉米醇溶蛋白与熊去氧胆酸的质量比为1:1，将熊去氧胆酸加入到玉米醇溶蛋白溶液中，以500rpm的速度连续搅拌30min，得到玉米醇溶蛋白和熊去氧胆酸的混合溶液；
(2)将20mL步骤(1)所得混合溶液以100μL/min的速度加入到80mL去离子水中，然后以200rpm的速度在室温下连续搅拌10min进行水合；旋转蒸发去除乙醇，再向其中补加去离子水至100mL；
(3)将步骤(2)所得溶液以1000rpm的速度离心3min，除去沉淀，留取上清液，即为玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液；
(4)对步骤(3)所得玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液进行冷冻干燥，获得玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末；
(5)将步骤(4)所得玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末加入到质量浓度为2％的氯化壳聚糖的溶液中，搅拌均匀，得到混悬液；
(6)将步骤(5)所得混悬液以550μL/min的速度滴加到含交联剂六偏磷酸钠和海藻酸钠质量浓度皆为1％的混合溶液中，搅拌均匀，即得到玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊，蒸馏水洗涤后，干燥保存。
按实施例1相同的方式检测本实施例步骤(6)所得复合微囊与步骤(4)所得纳米粒的累计释药百分数。检测结果表明：本实施例所得复合微囊经干燥后，包封率为48.53±2.20％，载药量为20.87±0.72％。体外模拟药物释放表明，在模拟结肠液中，UDCA可以从复合微囊中缓慢释放，累积释放时间可以维持在1200min以上，UDCA的累积释放量达到94％。由此可见，在该复合微囊结构对UDCA可以在结肠液中的缓慢释放，以提高生物利用率。而步骤(4)所得纳米粒中，UDCA在720min之前释放量达到94％以上。
实施例4
本实施例按如下步骤制备小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊：
(1)将2g小麦醇溶蛋白溶解于100mL体积浓度为85％的乙醇溶液中，搅拌至透明均匀，得小麦醇溶蛋白溶液；按照小麦醇溶蛋白与熊去氧胆酸的质量比为3:1，将熊去氧胆酸加入到小麦醇溶蛋白溶液中，以700rpm的速度连续搅拌30min，得到小麦醇溶蛋白和熊去氧胆酸的混合溶液；
(2)将20mL步骤(1)所得混合溶液以200μL/min的速度加入到80mL去离子水中，然后以400rpm的速度在室温下连续搅拌30min进行水合；旋转蒸发去除乙醇，再向其中补加去离子水至100mL；
(3)将步骤(2)所得溶液以1000rpm的速度离心4min，除去沉淀，留取上清液，即为小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液；
(4)对步骤(3)所得小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液进行冷冻干燥，获得小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末；
(5)将步骤(4)所得小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末加入到质量浓度为4％的氯化壳聚糖溶液中，搅拌均匀，得到混悬液；
(6)将步骤(5)所得混悬液以650μL/min的速度滴加到含交联剂三聚磷酸钠和海藻酸钠质量浓度皆为2％的混合溶液中，搅拌均匀，即得到小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊，蒸馏水洗涤后，干燥保存。
按实施例1相同的方式检测本实施例步骤(6)所得复合微囊与步骤(4)所得纳米粒的累计释药百分数。检测结果表明：本实施例所得复合微囊经干燥后，包封率为72.37±1.52％，载药量为18.66±0.90％。体外模拟药物释放表明，在模拟结肠液中，UDCA可以从复合微囊中缓慢释放，累积释放时间可以维持在1200min以上，UDCA的累积释放量达到93％。由此可见，在该复合微囊结构对UDCA可以在结肠液中的缓慢释放，以提高生物利用率。而步骤(4)所得纳米粒中，UDCA在720min之前释放量达到94％以上。
实施例5
本实施例按如下步骤制备小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊：
(1)将2g小麦醇溶蛋白溶解于100mL体积浓度为65％的乙醇溶液中，搅拌至透明均匀，得小麦醇溶蛋白溶液；按照小麦醇溶蛋白与熊去氧胆酸的质量比为5:1，将熊去氧胆酸加入到小麦醇溶蛋白溶液中，以700rpm的速度连续搅拌30min，得到小麦醇溶蛋白和熊去氧胆酸的混合溶液；
(2)将20mL步骤(1)所得混合溶液以100μL/min的速度加入到80mL去离子水中，然后以800rpm的速度在室温下连续搅拌60min进行水合；旋转蒸发去除乙醇，再向其中补加去离子水至100mL；
(3)将步骤(2)所得溶液以3000rpm的速度离心2min，除去沉淀，留取上清液，即为小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液；
(4)对步骤(3)所得小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液进行冷冻干燥，获得小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末；
(5)将步骤(4)所得小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末加入到质量浓度为3％的氯化壳聚糖溶液中，搅拌均匀，得到混悬液；
(6)将步骤(5)所得混悬液以750μL/min的速度滴加到含交联剂六偏磷酸钠和海藻酸钠质量浓度皆为2％的混合溶液中，搅拌均匀，即得到小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊，蒸馏水洗涤后，干燥保存。
按实施例1相同的方式检测本实施例步骤(6)所得复合微囊与步骤(4)所得纳米粒的累计释药百分数。检测结果表明：本实施例所得复合微囊经干燥后，包封率为78.33±2.67％，载药量为23.08±1.95％。体外模拟药物释放表明，在模拟结肠液中，UDCA可以从复合微囊中缓慢释放，累积释放时间可以维持在1200min以上，UDCA的累积释放量达到94％。由此可见，在该复合微囊结构对UDCA可以在结肠液中的缓慢释放，以提高生物利用率。而步骤(4)所得纳米粒中，UDCA在720min之前释放量达到94％以上。
实施例6
本实施例按如下步骤制备玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊：
(1)将2g玉米醇溶蛋白溶解于100mL体积浓度为85％的乙醇溶液中，搅拌至透明均匀，得玉米醇溶蛋白溶液；按照玉米醇溶蛋白与熊去氧胆酸的质量比为5:1，将熊去氧胆酸加入到玉米醇溶蛋白溶液中，以700rpm的速度连续搅拌30min，得到玉米醇溶蛋白和熊去氧胆酸的混合溶液；
(2)将20mL步骤(1)所得混合溶液以200μL/min的速度加入到80mL去离子水中，然后以400rpm的速度在室温下连续搅拌80min进行水合；旋转蒸发去除乙醇，再向其中补加去离子水至100mL；
(3)将步骤(2)所得溶液以2000rpm的速度离心4min，除去沉淀，留取上清液，即为玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液；
(4)对步骤(3)所得玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液进行真空干燥，获得玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末；
(5)将步骤(4)所得玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末加入到质量浓度为4％的壳聚糖溶液中，搅拌均匀，得到混悬液；
(6)将步骤(5)所得混悬液以650μL/min的速度滴加到含交联剂焦磷酸钠和纤维素硫酸钠质量浓度皆为1％的混合溶液中，搅拌均匀，即得到玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊，蒸馏水洗涤后，干燥保存。
按实施例1相同的方式检测本实施例步骤(6)所得复合微囊与步骤(4)所得纳米粒的累计释药百分数。检测结果表明：本实施例所得复合微囊经干燥后，包封率为67.72±2.72％，载药量为17.16±1.46％。体外模拟药物释放表明，在模拟结肠液中，UDCA可以从复合微囊中缓慢释放，累积释放时间可以维持在960min以上，UDCA的累积释放量达到95％。由此可见，在该复合微囊结构对UDCA可以在结肠液中的缓慢释放，以提高生物利用率。而步骤(4)所得纳米粒中，UDCA在720min之前释放量达到94％以上。
实施例7
本实施例按如下步骤制备小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊：
(1)将2g小麦醇溶蛋白溶解于100mL体积浓度为85％的乙醇溶液中，搅拌至透明均匀，得小麦醇溶蛋白溶液；按照小麦醇溶蛋白与熊去氧胆酸的质量比为4:1，将熊去氧胆酸加入到小麦醇溶蛋白溶液中，以500rpm的速度连续搅拌30min，得到小麦醇溶蛋白和熊去氧胆酸的混合溶液；
(2)将20mL步骤(1)所得混合溶液以300μL/min的速度加入到80mL去离子水中，然后以600rpm的速度在室温下连续搅拌80min进行水合；旋转蒸发去除乙醇，再向其中补加去离子水至100mL；
(3)将步骤(2)所得溶液以1000rpm的速度离心5min，除去沉淀，留取上清液，即为小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液；
(4)对步骤(3)所得小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液进行冷冻干燥，获得小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末；
(5)将步骤(4)所得小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末加入到质量浓度为2％的壳聚糖溶液中，搅拌均匀，得到混悬液；
(6)将步骤(5)所得混悬液以650μL/min的速度滴加到含交联剂三聚磷酸钠和海藻酸钠质量浓度皆为1％的混合溶液中，搅拌均匀，即得到小麦醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊，蒸馏水洗涤后，干燥保存。
按实施例1相同的方式检测本实施例步骤(6)所得复合微囊与步骤(4)所得纳米粒的累计释药百分数。检测结果表明：本实施例所得复合微囊经干燥后，包封率为61.72±2.72％，载药量为16.16±1.46％。体外模拟药物释放表明，在模拟结肠液中，UDCA可以从复合微囊中缓慢释放，累积释放时间可以维持在960min以上，UDCA的累积释放量达到95％。由此可见，在该复合微囊结构对UDCA可以在结肠液中的缓慢释放，以提高生物利用率。而步骤(4)所得纳米粒中，UDCA在720min之前释放量达到94％以上。
实施例8
本实施例按如下步骤制备玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊：
(1)将2g玉米醇溶蛋白溶解于100mL体积浓度为75％的乙醇溶液中，搅拌至透明均匀，得玉米醇溶蛋白溶液；按照玉米醇溶蛋白与熊去氧胆酸的质量比为3:1，将熊去氧胆酸加入到玉米醇溶蛋白溶液中，以600rpm的速度连续搅拌30min，得到玉米醇溶蛋白和熊去氧胆酸的混合溶液；
(2)将20mL步骤(1)所得混合溶液以200μL/min的速度加入到80mL去离子水中，然后以600rpm的速度在室温下连续搅拌60min进行水合；旋转蒸发去除乙醇，再向其中补加去离子水至100mL；
(3)将步骤(2)所得溶液以2000rpm的速度离心3min，除去沉淀，留取上清液，即为玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液；
(4)对步骤(3)所得玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液进行真空干燥，获得玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末；
(5)将步骤(4)所得玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末加入到质量浓度为4％的氯化壳聚糖溶液中，搅拌均匀，得到混悬液；
(6)将步骤(5)所得混悬液以650μL/min的速度滴加到含交联剂六偏磷酸钠和纤维素硫酸钠质量浓度皆为3％的混合溶液中，搅拌均匀，即得到玉米醇溶蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊，蒸馏水洗涤后，干燥保存。
按实施例1相同的方式检测本实施例步骤(6)所得复合微囊与步骤(4)所得纳米粒的累计释药百分数。检测结果表明：本实施例所得复合微囊经干燥后，包封率为53.47±1.82％，载药量为17.04±0.86％。体外模拟药物释放表明，在模拟结肠液中，UDCA可以从复合微囊中缓慢释放，累积释放时间可以维持在960min以上，UDCA的累积释放量达到94％。由此可见，在该复合微囊结构对UDCA可以在结肠液中的缓慢释放，以提高生物利用率。而步骤(4)所得纳米粒中，UDCA在720min之前释放量达到94％以上。

Claims (6)

1.一种植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊的制备方法，其特征在于：首先通过反溶剂沉淀法，将植物蛋白和熊去氧胆酸自组装成纳米粒，然后利用生物材料对纳米粒进行包覆，从而获得植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊，具体包括如下步骤：
(1)将2g植物蛋白溶解于100mL体积浓度为65-85％的乙醇溶液中，搅拌至透明均匀，得植物蛋白醇溶液；按照植物蛋白与熊去氧胆酸的质量比为1-5:1，将熊去氧胆酸加入到所述植物蛋白醇溶液中，以500-800rpm的速度连续搅拌30min，得到植物蛋白和熊去氧胆酸的混合溶液；
(2)将20mL所述混合溶液以100-300μL/min的速度加入到80mL去离子水中，然后以200-1000rpm的速度在室温下连续搅拌10-120min进行水合；旋转蒸发去除乙醇，再向其中补加去离子水至100mL；
(3)将步骤(2)所得溶液以1000-3000rpm的速度离心3-8min，除去沉淀，留取上清液，即为植物蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液；
(4)对步骤(3)所得植物蛋白-熊去氧胆酸纳米粒溶液进行干燥，获得植物蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末；
(5)将步骤(4)所得植物蛋白-熊去氧胆酸纳米粒粉末加入到质量浓度为2-4％的生物材料A的溶液中，搅拌均匀，得到混悬液；所述的生物材料A为壳聚糖或氯化壳聚糖；
(6)将步骤(5)所得混悬液以550-850μL/min的速度滴加到含交联剂和生物材料B质量浓度皆为1-3％的混合溶液中，搅拌均匀，即得到植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊，蒸馏水洗涤后，干燥保存；所述的生物材料B为海藻酸钠或纤维素硫酸钠。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的植物蛋白为玉米醇溶蛋白和小麦醇溶蛋白中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(4)和步骤(6)中，所述干燥的方法为冷冻干燥或真空干燥。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(6)中，所述的交联剂为三聚磷酸钠、焦磷酸钠或六偏磷酸钠。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(6)中，所述交联剂和所述生物材料B的质量相等。
6.一种权利要求1～5中任意一项所述制备方法所制得的植物蛋白-熊去氧胆酸缓释纳米粒复合微囊。
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