CN114317654A - 一种海洋生物抗氧化活性肽的制备方法 - Google Patents
一种海洋生物抗氧化活性肽的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114317654A CN114317654A CN202111596290.7A CN202111596290A CN114317654A CN 114317654 A CN114317654 A CN 114317654A CN 202111596290 A CN202111596290 A CN 202111596290A CN 114317654 A CN114317654 A CN 114317654A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- enzymolysis
- cuttlefish
- solution
- tissue
- collagen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 46
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 title claims abstract description 38
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 title claims abstract description 33
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 241000238371 Sepiidae Species 0.000 claims abstract description 56
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims abstract description 29
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims abstract description 29
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 24
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 23
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims abstract description 23
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims abstract description 22
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims abstract description 22
- 108010007119 flavourzyme Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 16
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000005185 salting out Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 41
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 32
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 32
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 32
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims description 11
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims description 11
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 claims description 10
- 239000000049 pigment Substances 0.000 claims description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 5
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 claims 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 claims 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 9
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 6
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 5
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 25
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 20
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 6
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 101800000068 Antioxidant peptide Proteins 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000004332 deodorization Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 102000040350 B family Human genes 0.000 description 1
- 108091072128 B family Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QRYRORQUOLYVBU-VBKZILBWSA-N Carnosic acid Natural products CC([C@@H]1CC2)(C)CCC[C@]1(C(O)=O)C1=C2C=C(C(C)C)C(O)=C1O QRYRORQUOLYVBU-VBKZILBWSA-N 0.000 description 1
- 108010087806 Carnosine Proteins 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 1
- 229920000832 Cutin Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000237858 Gastropoda Species 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 102000003820 Lipoxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108090000128 Lipoxygenases Proteins 0.000 description 1
- 241000237852 Mollusca Species 0.000 description 1
- CQOVPNPJLQNMDC-UHFFFAOYSA-N N-beta-alanyl-L-histidine Natural products NCCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CN=CN1 CQOVPNPJLQNMDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000237509 Patinopecten sp. Species 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- CQOVPNPJLQNMDC-ZETCQYMHSA-N carnosine Chemical compound [NH3+]CCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CNC=N1 CQOVPNPJLQNMDC-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 229940044199 carnosine Drugs 0.000 description 1
- 108010079058 casein hydrolysate Proteins 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 108091008690 chemoreceptors Proteins 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- GOMNOOKGLZYEJT-UHFFFAOYSA-N isoflavone Chemical compound C=1OC2=CC=CC=C2C(=O)C=1C1=CC=CC=C1 GOMNOOKGLZYEJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CJWQYWQDLBZGPD-UHFFFAOYSA-N isoflavone Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC(OC)=C1C1=COC2=C(C=CC(C)(C)O3)C3=C(OC)C=C2C1=O CJWQYWQDLBZGPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008696 isoflavones Nutrition 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- 235000004213 low-fat Nutrition 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 230000003387 muscular Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000005502 peroxidation Methods 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 235000020637 scallop Nutrition 0.000 description 1
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 1
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 description 1
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 210000000707 wrist Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明提供了一种海洋生物抗氧化活性肽的制备方法，包括：S1)提取碎的乌贼组织中的胶原蛋白；S2)将提取的胶原蛋白、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶与风味蛋白酶在水中混合进行酶解，得到酶解液；S3)将所述酶解液经盐析沉淀、透析处理后，得到海洋生物抗氧化活性肽。与现有技术相比，本发明以乌贼为原料提取抗氧化活性肽，采取不同的酶解方式，能够对蛋白质进行有效、彻底地催化，从而获得品质好，氨基酸组成合理，功效稳定，质量可靠的活性多肽。
Description
技术领域
本发明属于抗氧化活性肽技术领域，尤其涉及一种海洋生物抗氧化活性肽的制备方法。
背景技术
自从Haman提出自由基理论以来，人们认识到人体内氧化产生的自由基与人的衰老和许多疾病有关。在基体内过多的自由基可损伤生物大分子，影响细胞的正常结构和功能。而在食品等复杂体系中，过多的自由基存在也会严重影响体系的稳定性。人体内有多种自由基，尤以氧自由基最多，它们是需氧生物呼吸的产物。许多研究证实，氧化与人类及其他动物的许多疾病诸如癌症、老化、动脉硬化等的发病机理有关。
人体通过适当摄入具有抗氧化活性的物质可以降低体内自由基水平，防治脂质过氧化，帮助机体抵御疾病。同时随着现代食品工业的发展，食品加工中的油脂氧化问题亟待解决，通过添加具有抗氧化活性物质的方法也可以增加食品体系的稳定性，而且抗氧化物质还可作为功能因子用于保健食品及化妆品等的开发。
天然抗氧化剂由于具有较强的抗氧化性与很高的安全性，因此引起了人们的广泛研究。天然抗氧化剂是从各种植物、动物组织中提取得到，如茶多酚、大豆异黄酮、肌肽、枸杞多糖、大豆肽以及慈姑、扇贝、六月霜的提取物等等。并且生物体内的许多具有抗氧化活性的物质属于蛋白质，由于蛋白质具有优良的乳化特性，能在油水界面起介导作用，因此起在清除生物体内过量自由基，抑制膜脂质过氧化方面具有重要意义。随着营养学和生物技术的发展，人们发现，介于蛋白质和氨基酸间的肽类，由于其特殊的结构特点，与氨基酸和大分子蛋白质等相比较，食用安全性更高，具有极强的活性和多样性，且其抗氧化性更为显著。
通常把这类具有抑制生物大分子过氧化或清除体内自由基功效的生物活性肽称为抗氧化活性肽。抗氧化活性肽的抗氧化能力不仅与肽的氨基酸序列有关，也与其空间构象关系密切。例如，酪蛋白水解肽可以抑制脂肪氧合酶活性，具有抗氧化作用，但游离的氨基酸则无抗氧化能力，这可能与肽链或肽的特殊构象有关；相反，肽的链接或肽分子的构象会削弱抗氧化能力。因此，与游离氨基酸相比，肽的构象特征在氧化能力方面可能是增效的，也可能是削弱作用。
但目前大多数对于抗氧化肽制备都是通过以贝类为原材料，材料单一，处理较为麻烦，并且在对酶解过程的处理检测简单，不能达到最优的酶解调节和质量更好的抗氧化肽。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种功效稳定、质量可靠的海洋生物抗氧化活性肽的制备方法。
本发明提供了一种(待审核完再补充)
本发明提供了一种海洋生物抗氧化活性肽的制备方法，包括：S1)提取碎的乌贼组织中的胶原蛋白；S2)将提取的胶原蛋白、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶与风味蛋白酶在水中混合进行酶解，得到酶解液；S3)将所述酶解液经盐析沉淀、透析处理后，得到海洋生物抗氧化活性肽。与现有技术相比，本发明以乌贼为原料提取抗氧化活性肽，采取不同的酶解方式，能够对蛋白质进行有效、彻底地催化，从而获得品质好，氨基酸组成合理，功效稳定，质量可靠的活性多肽。
附图说明
图1为本发明提供的护发产品的制备流程示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供了一种海洋生物抗氧化活性肽的制备方法，包括：S1)提取碎的乌贼组织中的胶原蛋白；S2)将提取的胶原蛋白、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶与风味蛋白酶在水中混合进行酶解，得到酶解液；S3)将所述酶解液经盐析沉淀、透析处理后，得到海洋生物抗氧化活性肽。
其中，本发明对所有原料的来源并没有特殊的限制，为市售即可。
乌贼是乌贼目乌贼科动物，主要生活在热带和温带沿岸浅水中，冬季常迁至较深海域。乌贼身体可区分为头、足和躯干三个部分，躯干相当于内脏团，外被肌肉性套膜，具石灰质内壳；头位体前端，呈球形，其顶端为口，四周围具口膜，外围有5对腕；头两侧具一对发达的眼，构造复杂；眼后下方有一椭圆形的小窝，称嗅觉陷，为嗅觉器官，相当腹足类的嗅检器，为化学感受器。它主要以甲壳类、小鱼或其他软体动物为食。本发明采用乌贼为原材料制备抗氧化活性肽，乌贼每百克肉含蛋白质十三克，脂肪仅0.7克，还含有碳水化合物和维生素A、B族维生素及钙、磷、铁等人体所必需的物质，是一种高蛋白低脂肪滋补食品，同时也是女性塑造体型和保养肌肤之理想的保健食品，乌贼壳含碳酸钙、壳角质、粘液质、及少量氯化钠、磷酸钙、镁盐等，同时乌贼的墨汁含有一种粘多糖，是制备抗氧化肽很好的材料，预处理简单。
在本发明中，优选先将乌贼进行处理，得到碎的乌贼组织；具体为：将乌贼处理清洗干净后，剪成小块，并粉碎，得到碎的乌贼组织。
所述碎的乌贼组织优选先除色素与杂蛋白后，得到预处理的乌贼组织溶液，再提取胶原蛋白；在本发明中，所述去除色素与杂蛋白的步骤具体为：将碎的乌贼组织用碱性水溶液浸泡，然后通过氧化脱腥，得到预处理的乌贼组织溶液；所述碱性水溶液优选为氢氧化钠水溶液；所述碱性水溶液的浓度优选为0.1～0.5mol/L，更优选为0.2～0.3mol/L；所述浸泡的时间优选为10～30h，更优选为15～20h，再优选为18h；经过碱性水溶液浸泡可去除色素和杂蛋白，然后进行氧化脱腥；所述氧化脱腥优选以双氧水为氧化剂；所述双氧水的用量优选为碎的乌贼组织质量的2％～5％，更优选为3％～4％；所述氧化脱腥的温度优选为60℃～80℃，更优选为70℃；所述氧化脱腥的时间优选为5～15min，更优选为8～12min，再优选为10min；氧化脱腥后优选离心，得到预处理的乌贼组织溶液。
将预处理的乌贼组织溶液提取胶原蛋白；优选为将预处理的乌贼组织溶液与乙醇溶液混合，调节pH值至中性，离心，得到胶原蛋白；所述乙醇溶液中乙醇的质量浓度优选为90％～95％，更优选为93％～95％；预处理的乌贼组织溶液与乙醇溶液的质量比优选为(0.5～2)：(9.5～8)，更优选为(1～1.5)：(9～8.5)，再优选为1：9；所述离心的转速优选为6000～10000r/min，更优选为7000～9000r/min，再优选为8000r/min；所述离心的时间优选为5～15min，更优选为8～12min，再优选为10min。
将提取的胶原蛋白、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶与风味蛋白酶在水中混合进行酶解，得到酶解液；所述提取的胶原蛋白与水的体积比优选为1：(5～15)，更优选为1：(6～12)，再优选为1：(8～10)；所述胰蛋白酶、木瓜蛋白酶与风味蛋白酶的质量比优选为(4～6)：(2～4)：(1～3)，更优选为(4.5～5.5)：(2.5～3.5)：(1.5～2.5)；，再优选为5：3：2；混合后体系中胰蛋白酶、木瓜蛋白酶与风味蛋白酶的总质量浓度优选为0.5％～1.5％，更优选为0.8％～1.2％，再优选为1％；所述胰蛋白酶的酶活力优选为40000～60000U/g，更优选为50000U/g；所述木瓜蛋白酶的酶活力优选为100000～300000U/g，更优选为200000U/g；所述风味蛋白酶的活性优选为20000～40000U/g，更优选为30000U/g；在本发明中，此步骤优选具体为：将提取的胶原蛋白与水混合，调节pH值为7.5～8.5，然后加入胰蛋白酶、木瓜蛋白酶与风味蛋白酶进行酶解，得到酶解液；所述酶解的温度为45℃～55℃；所述酶解的时间为30～90min。胰蛋白酶最适酶解pH值7.8～8.5，木瓜蛋白最适酶解pH值为5～7，风味蛋白酶最适酶解pH值为5.0～9.0，本发明综合三者的最适pH值，在此条件下对提取的胶原蛋白进行酶解。本发明通过胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和复合风味蛋白酶的乌贼酶解物对OH·清除能力的强弱来筛选酶种，并以多肽得率为指标，OH·清除能力和水解度为参考指标优化其酶解条件，制备具有抗氧化活性的多肽，此种方式根据蛋白质的不同性质和分子结构，采取不同的酶解方式，能够对蛋白质进行有效、彻底地催化，从而获得品质好，氨基酸组成合理，功效稳定，质量可靠的活性多肽。
酶解后优选进行灭酶处理；所述灭酶处理优选在水浴中进行；所述灭酶处理的温度优选为90℃～100℃，更优选为95℃；所述灭酶处理的时间优选为10～20min，更优选为15min。
灭酶处理后，优选冷却、离心，得到酶解液；所述离心的温度优选为0℃～10℃，更优选为2℃～8℃，再优选为4℃～6℃；所述离心的转速优选为5000～1000r/min，更优选为6000～9000r/min，再优选为7000～8000r/min；所述离心的时间优选为5～15min，更优选为8～12min，再优选为10min。
将所述酶解液经盐析沉淀、透析处理后，得到海洋生物抗氧化活性肽；所述盐析优选加入氯化钠；盐析沉淀后优选进行低温离心；所述低温离心的转速优选为5000～1000r/min，更优选为6000～9000r/min，再优选为7000～8000r/min；所述低温离心的时间优选为20～40min，更优选为25～35min，再优选为30min；低温离心后，弃去上清液后，优选依次用冰醋酸溶液与蒸馏水透析；所述冰醋酸溶液的浓度优选为0.05～0.2mol/L，更优选为0.1mol/L；所述冰醋酸溶液透析的时间优选为12～30h，更优选为20～25h；所述蒸馏水透析的时间优选为30～50h，更优选为40～50h；透析后将溶液冷冻干燥，得到海洋生物抗氧化活性肽。
本发明以乌贼为原料提取抗氧化活性肽，采取不同的酶解方式，能够对蛋白质进行有效、彻底地催化，从而获得品质好，氨基酸组成合理，功效稳定，质量可靠的活性多肽。
本发明还提供了一种上述制备方法制备的海洋生物抗氧化活性肽。
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种海洋生物抗氧化活性肽的制备方法进行详细描述。
以下实施例中所用的试剂均为市售。
实施例1
Sp1：乌贼的预处理：将乌贼处理清洗后剪成小块，并通过绞肉机绞碎，再去除乌贼肉组织中的色素、杂蛋白，采用0.2m/L的氢氧化钠浸泡18h去除色素和杂蛋白，再通过氧化法脱腥，以双氧水作为氧化剂，双氧水用量为3％，反应温度为70℃，反应时间为10min，再将溶液离心处理，得到预处理的乌贼溶液。
Sp2：提取乌贼肉组织中的胶原蛋白：将经过预处理的乌贼溶液和95％乙醇溶液混合，再搅拌，使混合溶液浓度达到10％，将pH调至7.0，再通过离心取沉淀得到乌贼胶原蛋白，离心转速设置在8000r/min，离心10min，于-20℃冰箱中冷藏待用。
Sp3：酶解液的制备：将步骤Sp2中乌贼胶原蛋白用纯化水稀释，作为底物，调节底物溶液的pH值，再将胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶(胰蛋白酶的酶活力为50000U/g；木瓜蛋白酶的酶活力为200000U/g；风味蛋白酶的酶活力为30000U/g)三种酶同时或分别添加到底物溶液中，在酶解过程中每隔2个小时取样测定该酶解液对OH清除能力，按照正交实验得到最佳酶解条件并得出酶解液；
通过胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和复合风味蛋白酶的乌贼酶解物对OH·清除能力的强弱来筛选酶种，影响OH·清除能力的主要因素为料液比、酶添加量、pH、温度。
采用酶单因素试验，第一组先对胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和复合风味蛋白酶酶解的料液比设定1:5、1:10、1:15三组，酶添加量按照2％、3％、4％添加，pH分别设定7.5、8.0、8.5，温度分别选取45℃、50℃、55℃；第二组胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和复合风味蛋白酶采用料液比分别为1:5、1:10、1:15，酶添加量按照0.2％、0.5％、0.8％添加，pH分别设定6.0、6.5、7.0，温度设定45℃、50℃、55℃。并且第一组合第二组的酶解时间均为4h。
采用两种酶的分段酶解方式，按照各自酶的最适作用条件进行酶解，胰蛋白酶作用条件为料液比1:10，加酶量3％，pH8.0，温度50℃，酶解时间24h；木瓜蛋白酶作用条件为料液比1:10，加酶量3％，pH7.0，温度55℃，酶解22h。
OH·清除能力和水解度为参考指标优化其酶解条件，制备具有抗氧化活性的多肽，此种方式根据蛋白质的不同性质和分子结构，采取不同的酶解方式，能够对蛋白质进行有效、彻底地催化，从而获得品质好，氨基酸组成合理，功效稳定，质量可靠的活性多肽(请给出具体的结果，并说明哪种最好)。
将三种酶同时加入料液比1:8，酶添加量0.8％(胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶的质量比为5：3：2)，酶解温度50℃，酶解pH值8.0，酶解时间60min。
Sp4：灭酶：使在酶解结束后，酶解液立即置于95℃水浴中加热15min灭酶，再经过冷却，在4℃的温度、8000rpm离心10min得到乌贼胶原蛋白酶解液，然后取少量用于活性的测定，其余冷藏保存。
Sp5：乌贼胶原蛋白的分离纯化：将乌贼胶原蛋白溶液中加入NaCI以白色絮状沉淀析出，经过8000r/m低温离心30min，弃去上清液，用0.1mol/L冰醋酸溶液透析1天，再用蒸馏水透析2天得到的是纯度较高的胶原蛋白的溶液，最后通过冷冻干燥形成干粉，得到海洋生物抗氧化活性肽。
通过两种酶解方式(单酶酶解和分段酶解)分别对乌贼胶原蛋白进行酶解，并以乌贼蛋白酶解液的羟基清除能力和肽得率作为主要考察指标、水解度为参考指标，对三种酶解方式进行比较，确定制备乌贼蛋白抗氧化活性肽的最佳酶解方式，并对乌贼蛋白的酶解条件进行优化，获得制备乌贼蛋白抗氧化活性肽的最佳酶解工艺，将在此工艺条件下制备的乌贼蛋白酶解液进行分离纯化(超滤、分子筛层析及高效液相色谱)，从而得到较高纯度的抗氧化活性肽。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个引用结构”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
Claims (10)
1.一种海洋生物抗氧化活性肽的制备方法，其特征在于，包括：
S1)提取碎的乌贼组织中的胶原蛋白；
S2)将提取的胶原蛋白、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶与风味蛋白酶在水中混合进行酶解，得到酶解液；
S3)将所述酶解液经盐析沉淀、透析处理后，得到海洋生物抗氧化活性肽。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1)中碎的乌贼组织先去除色素与杂蛋白后，得到预处理的乌贼组织溶液，再提取胶原蛋白。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述去除色素与杂蛋白的步骤具体为：
将碎的乌贼组织用碱性水溶液浸泡，然后通过氧化脱腥，得到预处理的乌贼组织溶液。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述提取胶原蛋白具体为：
将预处理的乌贼组织溶液与乙醇溶液混合，调节pH值至中性，离心，得到胶原蛋白。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述乙醇溶液中乙醇的质量浓度为90％～95％；预处理的乌贼组织溶液与乙醇溶液的质量比为(0.5～2)：(9.5～8)；
所述离心的转速为6000～10000r/min；所述离心的时间为5～15min。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述提取的胶原蛋白与水的体积比为1：(5～15)；所述胰蛋白酶、木瓜蛋白酶与风味蛋白酶的质量比为(4～6)：(2～4)：(1～3)；混合后体系中胰蛋白酶、木瓜蛋白酶与风味蛋白酶的总质量浓度为0.5％～1.5％；所述胰蛋白酶的酶活力为40000～60000U/g；所述木瓜蛋白酶的酶活力为100000～300000U/g；所述风味蛋白酶的酶活力为20000～40000U/g。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2)具体为：
将提取的胶原蛋白与水混合，调节pH值为7.5～8.5，然后加入胰蛋白酶、木瓜蛋白酶与风味蛋白酶进行酶解，得到酶解液；所述酶解的温度为45℃～55℃；所述酶解的时间为30～90min。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2)中酶解后进行灭酶处理；所述灭酶处理的温度为90℃～100℃；所述灭酶处理的时间为10～20min；
灭酶处理后，离心，得到酶解液；所述离心的温度为0℃～10℃；所述离心的转速为5000～1000r/min；所述离心的时间为5～15min。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S3)具体为：
在所述酶解液中加入氯化钠，低温离心后，弃去上清液后，依次用冰醋酸溶液与蒸馏水透析，得到海洋生物抗氧化活性肽。
10.权利要求1～9任意一项所述制备方法制备的海洋生物抗氧化活性肽。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111596290.7A CN114317654A (zh) | 2021-12-24 | 2021-12-24 | 一种海洋生物抗氧化活性肽的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111596290.7A CN114317654A (zh) | 2021-12-24 | 2021-12-24 | 一种海洋生物抗氧化活性肽的制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114317654A true CN114317654A (zh) | 2022-04-12 |
Family
ID=81013070
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111596290.7A Pending CN114317654A (zh) | 2021-12-24 | 2021-12-24 | 一种海洋生物抗氧化活性肽的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114317654A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115211569A (zh) * | 2022-08-01 | 2022-10-21 | 兆鑫堂(山东)生物科技有限公司 | 一种具有抗氧化功能的胶原蛋白肽食品 |
| CN115976144A (zh) * | 2023-03-21 | 2023-04-18 | 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司 | 一种具有成骨活性的乌贼酶解产物的制备方法及应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007211183A (ja) * | 2006-02-10 | 2007-08-23 | Katakura Chikkarin Co Ltd | フグ由来コラーゲン、その誘導体及びその製造方法、並びに該コラーゲン及びその誘導体を配合する化粧料 |
| CN103451257A (zh) * | 2013-06-17 | 2013-12-18 | 浙江海洋学院 | 乌贼内脏酶解制备高抗氧化活性多肽的方法 |
| CN108642115A (zh) * | 2018-06-28 | 2018-10-12 | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 | 一种高质量可放大型鱼胶原蛋白提取纯化方法 |
| CN113774103A (zh) * | 2021-09-16 | 2021-12-10 | 海南三元星生物科技股份有限公司 | 海鲷鱼胶原蛋白肽的制备方法 |
| CN113789360A (zh) * | 2021-09-16 | 2021-12-14 | 海南三元星生物科技股份有限公司 | 胶原三肽的提取方法及制备的胶原三肽 |
-
2021
- 2021-12-24 CN CN202111596290.7A patent/CN114317654A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2007211183A (ja) * | 2006-02-10 | 2007-08-23 | Katakura Chikkarin Co Ltd | フグ由来コラーゲン、その誘導体及びその製造方法、並びに該コラーゲン及びその誘導体を配合する化粧料 |
| CN103451257A (zh) * | 2013-06-17 | 2013-12-18 | 浙江海洋学院 | 乌贼内脏酶解制备高抗氧化活性多肽的方法 |
| CN108642115A (zh) * | 2018-06-28 | 2018-10-12 | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 | 一种高质量可放大型鱼胶原蛋白提取纯化方法 |
| CN113774103A (zh) * | 2021-09-16 | 2021-12-10 | 海南三元星生物科技股份有限公司 | 海鲷鱼胶原蛋白肽的制备方法 |
| CN113789360A (zh) * | 2021-09-16 | 2021-12-14 | 海南三元星生物科技股份有限公司 | 胶原三肽的提取方法及制备的胶原三肽 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| WENTAO LIU ET AL.: "Extraction and characterization of pepsin-solubilized collagen from snakehead (Channa argus) skin: Effects of hydrogen peroxide pretreatments and pepsin hydrolysis strategies", 《PROCESS BIOCHEMISTRY》, pages 194 - 202 * |
| 包卫洋 等: "《海洋生物活性肽的研究与产业化》", 31 December 2020, 海洋出版社, pages: 116 - 118 * |
| 奚廷斐，周长忍总主编: "《海洋生物医用材料监管与评价》", 31 January 2020, 上海科学技术出版社, pages: 161 - 162 * |
| 宋正规 等: "乌贼皮胶原蛋白特性与抗氧化能力研究", 《天然产物研究与开发》, vol. 30, pages 287 * |
| 崔春编: "《食物蛋白质控制酶解技术》", 30 June 2018, 中国轻工业出版社, pages: 365 - 366 * |
| 王燕: "鱿鱼皮胶原蛋白的制备及胶原海绵的初步研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》, pages 024 - 343 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115211569A (zh) * | 2022-08-01 | 2022-10-21 | 兆鑫堂(山东)生物科技有限公司 | 一种具有抗氧化功能的胶原蛋白肽食品 |
| CN115976144A (zh) * | 2023-03-21 | 2023-04-18 | 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司 | 一种具有成骨活性的乌贼酶解产物的制备方法及应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111670997B (zh) | 增强免疫复合蛋白肽酶解液的制备方法、增强免疫复合蛋白肽饮品及其制备方法 | |
| CN102718862B (zh) | 深海鱼类胶原肽的脱色脱腥方法 | |
| CN104004813B (zh) | 一种香菇生物活性肽的制备 | |
| CN114317654A (zh) | 一种海洋生物抗氧化活性肽的制备方法 | |
| CN107164447A (zh) | 一种利用鳕鱼加工副产物制备抗氧化肽的方法 | |
| CN107151686B (zh) | 一种高溶解性的鳕鱼蛋白 | |
| CN110713534A (zh) | 一种具有光老化改善作用的胶原蛋白肽及其制备方法 | |
| CN1683550A (zh) | 胶原蛋白及其制备工艺 | |
| KR20190136378A (ko) | 천연 단백질 분해효소액을 이용한 돈피 콜라겐의 제조방법 | |
| CN114041584A (zh) | 一种可以常温储运的鱼皮胶原蛋白肽冻的制作方法 | |
| CN112501229B (zh) | 一种牛骨胶原肽的生产工艺 | |
| CN113349356A (zh) | 一种冰岛红极参肠卵营养果冻及其制备方法 | |
| CN117581971A (zh) | 一种改良牡蛎酶解蛋白粉基料风味的工艺及应用 | |
| KR101762867B1 (ko) | 박대 어포의 제조방법 | |
| CN116987178A (zh) | 一种鱼骨胶原多肽螯合钙粉的制备方法 | |
| CN114350733B (zh) | 一种生蚝活性蛋白肽复合精准酶解工艺 | |
| KR101625580B1 (ko) | 아임계수를 이용한 고등어육으로부터 생물학적 기능성 가수분해물의 생산 | |
| RU2171066C1 (ru) | Продукт, обогащенный свободными аминокислотами, и способ его получения | |
| CN113425750B (zh) | 一种具有肝损伤保护作用的微生态制剂的制备和应用 | |
| CN113373196B (zh) | 一种金线鱼抗疲劳肽的加工方法 | |
| CN106942652A (zh) | 一种可提高免疫力、增强抗病能力的养生食品 | |
| CA2012278C (en) | Mutant of microbacterium, a strain 851r, and a process for producing 851r nutrient solution by application of the strain | |
| CN115363151A (zh) | 牡蛎糖原运动健身饮料 | |
| CN111905095B (zh) | 一种蚯蚓多肽及其制备方法和应用 | |
| Raghuraman | Extraction of sulfated glycosaminoglycans from mackerel and herring fish waste |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |