CN114317281A - 一种高产灵芝菌株及其分子标记方法和人工栽培方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于灵芝菌种选育技术领域，公开了一种高产灵芝菌株及其分子标记方法和人工栽培方法。所述高产灵芝菌株为灵芝HMGIM‑Z150381，保藏编号为GDMCCNo:61603。所述分子标记方法为：采用特异性引物对VoF11/VoR4对灵芝菌株DNA进行PCR扩增，可得到长度为775～800bp的特异性条带。人工栽培方法为：将HMGIM‑Z150381菌种依次接种至二级种培养基和栽培培养基培养，得到人工栽培的子实体。本发明菌株的生长速度和产量高，子实体多糖含量高，栽培周期较短，耐低氧，可以缩短生产周期，减少通风增氧带来的温、湿度损失，大大节省生产成本，具有重要的应用前景。

Description

一种高产灵芝菌株及其分子标记方法和人工栽培方法

技术领域

本发明属于灵芝菌种选育技术领域，具体涉及一种高产灵芝菌株及其分子标记方法和人工栽培方法。

背景技术

灵芝[Ganoderma lucidum(Curtis)P.Karst.]是伞菌纲[Agaricomycetes]、多孔菌科[Polyporaceae]、灵芝属[Ganoderma P.Karst.]真菌。自《神农本草经》记载以来，关于其民间传说和不断被证实的药用价值，灵芝在我国已有两千多年的记载和应用历史，是最重要的药用真菌之一。近些年来，特别是自2000年版《中华人民共和国药典》收录灵芝为法定中药材后，科研人员对其开展了广泛和深入的研究，灵芝的药理基础及作用得到更进一步的明确。目前已经确定灵芝子实体中含有9类300余种化合物，具有生理活性的成分有灵芝多糖、三萜类化合物、蛋白质、多肽、核苷类、呋喃类、甾醇、生物碱和氨基酸等，其中以灵芝多糖、三萜化合物为主要活性成分。灵芝具有调节免疫力、抗肿瘤、保护肝脏及心血管、降血压、镇静安眠、延缓衰老、降血糖、抗氧化等生理保健功能。鉴于灵芝具有的显著功效，规模化人工栽培得到广泛重视，并已形成一个重要的产业，目前其栽培及加工产业的年产值超过1000亿元。加工的基础是子实体，而子实体的基础是菌种，优质的菌种是获得高产最重要的基础。我国灵芝经认定的品种有19个，其中1个品种是国外引进，3个品种是通过原生质体融合获得的。但灵芝的主产区(山东、浙江、吉林、安徽、福建、陕西等)栽培中使用的菌种，基本上广泛使用韩芝系列品种。根据我们前期的菌种调查，在全国的主产区正在使用的主产菌种中，韩芝7个，美国灵芝2个，龙芝2个，沪农2个，日本灵芝1个，不明确品种1个，本土选育的沪农、龙芝等系列品种有一定的推广，引进品种的产地自然气候和环境与栽培地区差异大，引起菌种活性退化、名称混淆、产量低、品质差、抗病虫害及杂菌能力差等情况，缺乏适宜我国各产地栽培的优良品种。研究过程中我们也发现以上灵芝菌种在长时间、多频次的转接使用过程中，质量不稳定，实际生产中需要从栽培子实体中挑选优质材料不断地分离和复壮菌株，操作程序繁琐，且仍存在较大风险。

发明内容

为解决灵芝栽培过程中菌种老化和退化的问题，本发明的首要目的在于提供一种高产灵芝菌株。该菌株能够显著并稳定提高灵芝的产量，具有商业化应用的潜力。

本发明的另一目的在于提供上述高产灵芝菌株的人工栽培方法。

本发明目的通过以下技术方案实现：

一种高产灵芝菌株，所述高产灵芝菌株为灵芝(Ganoderma lucidum)HMGIM-Z150381，于2021年4月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏编号为：GDMCCNo:61603。

本菌株采自安徽省金寨县，经组织分离和纯化获得纯菌株，经形态学和分子生物学鉴定为灵芝(G.lucidum)。将该菌株制作麦粒种后接种至栽培菌包，当年10月移至西藏林芝地区温室大棚内，至第二年5月份菌丝长满后置于西藏林芝柏树王(地点名)林地中，覆盖少量腐殖土，于自然条件下出菇，待出菇后选取生长健壮的子实体，经组织分离并纯化获得备选灵芝菌株，编号为HMGIM-Z150381(保藏编号为GDMCC No:61603)。通过将菌株置于野外自然条件，特别是在西藏低温、低压、低氧、高海拔、高辐射的特殊条件下，使其能够最大程度发掘自身适应自然的能力，从而达到复壮和改良菌株的目的，该方法具有目的明确、成本经济、可操作性强的优势，且选育出来的灵芝菌株农艺性状在短时间内(3～5年)更优异，因此对促进灵芝稳产和丰收具有重要的意义。将该菌株与其他灵芝相比较，表现出长势快，产量高的特点，具有规模化推广应用的潜质。

上述高产灵芝菌株Ganoderma lucidum HMGIM-Z150381的分子标记方法，包括如下步骤：采用特异性引物对VoF11：CATGAAGCTCTCCACTGCCA/VoR4：TACTGAGAGCAGGGTACGCT对灵芝菌株DNA进行PCR扩增，可得到长度为775～800bp的特异性条带。

上述高产灵芝菌株Ganoderma lucidum HMGIM-Z150381的人工栽培方法，包括如下步骤：

将HMGIM-Z150381菌种接种至二级种培养基培养，得到二级种；然后将培养好的二级种接种至栽培培养基培养，得到高产灵芝菌株HMGIM-Z150381人工栽培的子实体。

进一步地，所述二级种培养基通过如下方法制备：将高粱粒用冷水浸泡过夜后，水煮倒掉余水，加入CaCO₃搅拌均匀后分装至玻璃试管中，高温灭菌备用。

进一步地，所述二级种培养基中组分的质量百分含量为：高粱粒99％，CaCO₃1％。

进一步地，所述二级种培养基制备中，水煮的时间为1h，玻璃试管的大小为18*180mm，高温灭菌采用121℃灭菌30min。

进一步地，所述二级种培养基培养的条件为：温度为20～25℃、湿度为50％～60％条件下避光培养8～12d。

进一步地，所述栽培培养基通过如下方法制备：将木屑、棉籽壳、麦麸与CaCO₃混匀，添加水分至含水量为60％～65％，堆置过夜后再次翻堆拌匀，再次调节含水量至60～65％，分装至栽培袋，封口，高温灭菌备用。

进一步地，所述栽培培养基中组分的质量百分含量为：木屑58％，棉籽壳31％，麦麸10％，CaCO₃1％。

进一步地，所述栽培培养基制备中，栽培袋采用大小为17cm×35cm的聚丙烯栽培袋，封口采用含透气口的密封圈封口，高温灭菌采用121℃灭菌1h。

进一步地，所述栽培培养基培养的条件为：先置于25℃，湿度60％～65％条件下避光养菌，养菌结束后打开栽培袋催蕾，提高温度至28℃，增加空气湿度至90％～95％，开始散射光照射8h/d，形成菌盖后每天换新风，早晚各1次，每次1h，调节空气湿度至85％～90％，子实体基本成熟开始喷粉前调节空气湿度至80％，温度调节至25～28℃培养。

进一步地，所述栽培培养基培养可以在二氧化碳浓度为2000～4000ppm的低氧环境下培养。一般菌株开伞期需要调节二氧化碳浓度为700～1000ppm，此菌株较一般菌株更耐低氧，在低氧(二氧化碳浓度为2000～4000ppm)的环境下即可开伞，而一般菌株在此低氧环境下不易开伞、易形成鹿角状子实体。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

(1)本发明菌株Ganoderma lucidum HMGIM-Z150381的生长速度和产量高，子实体多糖含量高，栽培周期较短，可以大大节省生产成本，具有重要的应用前景。

(2)本发明菌株Ganoderma lucidum HMGIM-Z150381较一般菌株更耐低氧，在低氧(二氧化碳浓度为2000～4000ppm)的环境下即可开伞，而一般菌株在低氧环境下不易开伞、易形成鹿角状子实体。

附图说明

图1为实施例中HMGIM-Z150381菌株经复壮后栽培子实体图；

图2为实施例中复壮菌株菌丝体的总DNA序列比对结果图；

图3为基于ITS序列构建HMGIM-Z150381与灵芝属其他物种的系统发育树结果图；

图4为分别采用特异性引物对VoF11/VoR4(A)和ITS1/ITS4引物对(B)对HMGIM-Z150381菌株及市场上流通使用的灵芝菌株扩增结果图；

图5为实施例中HMGIM-Z150381菌株室内人工栽培子实体图；

图6为实施例中HMGIM-Z150381菌株与其他野生菌株(A150、M150、W141)相比，在高二氧化碳/低氧环境下培养的菌株出菇开伞结果图；

图7为为实施例中HMGIM-Z150381菌株与应用广泛的商品菌种韩芝203相比，在高二氧化碳/低氧环境下培养的菌株出菇开伞结果图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

(1)菌株获得：本菌株采自安徽省金寨县，经组织分离和纯化获得纯菌株。具体为将该野外菌株制作麦粒菌种后接种至栽培菌包，当年10月移至西藏林芝地区温室大棚内，至第二年5月份菌丝长满后置于西藏林芝柏树王(地点名)林地中，覆盖少量腐殖土，于自然条件下出菇，待出菇后选取生长健壮的子实体，经组织分离并纯化获得纯菌株。

(2)菌株复壮方法：将纯菌株接种到培养基2(99％的高粱粒，冷水浸泡过夜后，水煮1h后倒掉余水，加入1％的CaCO₃，搅拌均匀后分装至18*180mm的玻璃试管中，置于121℃高压灭菌30min备用)中制备高粱种，25℃避光培养，至菌丝将高粱粒覆盖完全后再转接至培养基3(按照58％木屑(阔叶树)，31％棉籽壳，10％麦麸，1％CaCO₃的比例混匀，添加水分至含水量为60-65％，堆置过夜后再次翻堆拌匀，调节水分至60-65％，分装至17cm×35cm聚丙烯栽培袋，使用含透气口的密封圈封口，置于121℃灭菌1h备用)，20～25℃养菌，待菌丝长满吃透整个栽培袋料后，移栽至阔叶林内有些许坡度的树下，使用刀片在菌袋侧面划破2～3个裂缝，正立放置，使用腐殖土覆盖2～3cm后自然条件下出菇(见图1)。出菇后经组织分离获得复壮菌株。

(3)复壮菌株的分子生物学鉴定：分离获得的复壮菌株转接至表面盖有塞洛芬薄膜的平板培养基(配方为培养基1，每1000ml，含20g去皮马铃薯水提取液，20g葡萄糖，1.5g蛋白胨，3g磷酸二氢钾，1.5g硫酸镁，0.01gV_b1,18g卡拉胶，pH自然，充分溶解、分装至15*100mm玻璃试管，然后置于121℃高压灭菌20min，摆斜面至培养基凝固备用)，置于25℃恒温避光培养，待菌丝长满平板后，无菌条件下收集菌丝体，置于1.5ml研磨管，利用全自动核酸提取仪配套使用磁珠法基因组DNA提取试剂盒(广州迈宝生物科技有限公司，货号DNF628-05B)提取菌丝体的总DNA。然后以ITS1/ITS4(ITS1:TCCGTAGGTGAACCTGCGG(SEQ ID NO:1)/ITS4:TCCTCCGCTTATTGATATGC(SEQ ID NO:2))为引物进行ITS-PCR实验，使用PCR仪器为Bio-Rad T100 PCR仪，反应体系为25μL，包含DNA模板1μL(含量不超过100ng)，引物各2.5μL(终浓度0.2μM)，PCR mix(TaKaRa PrimeSTAR Max Premix(2×))12.5μL，然后添加无菌蒸馏水6.5μL。PCR循环条件为94℃预变性4min，然后开始30个循环，包括94℃处理45s，55℃退火45s，72℃延伸1min，然后终止循环，72℃15min，结束PCR并降至4℃，取出产物，送至六合华大检测和测序，测序结果经NC BI数据库比对(见图2)(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)和构建系统发育树(见图3)完成鉴定。系统发育树构建方法：将该菌株的ITS测序结果上传至NCBI，登记号是MZ031282，然后从NCBI网站的Nucleotide数据库下载灵芝属常见物种的ITS序列，基于MEGA7软件使用最大似然法(Maximum Likelihood method)构建系统发育树，结果表明HMGIM-Z150381与G.lingzhi聚为一类，经检索，该序列号登记样本为产自中国的灵芝，提交者认为中国大范围分布及栽培的灵芝为G.lingzhi，而不是分布于欧洲的G.lucidum，在分类学上属于同物异名，考虑到药典收录的灵芝拉丁学名尚未修订，因此我们仍然使用G.lucidum这个学名，鉴定HMGIM-Z150381菌株为G.lucidum(Ganoderma lucidum)。

(4)菌株分子标记实验：提取HMGIM-Z150381菌株及市场上流通使用的灵芝菌株(日芝、鹿芝、灵芝1号、龙芝1号、赤芝9号、泉芝9号、韩芝1号、韩芝、沪农1号(3株))总DNA，使用特异性引物对(VoF11：CATGAAGCTCTCCACTGCCA(SEQ ID NO:3)/Vo R4：TACTGAGAGCAGGGTACGCT(SEQ ID NO:4))对各灵芝菌株DNA进行PCR。PC R反应体系：25μL，上海生工，TaqPCRMix预混液(2X,含蓝染料)，12.5μL，引物VoF11(10μmol/L)1μL，引物VoR4(10μmol/L)1μL，ddH₂O9.5μL，DNA模板1μl；程序：95℃预变性5min，95℃变性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸1min，GOTO step2，执行35X，72℃10min，12℃保存结束程序。同时以ITS1/ITS4(ITS1:TCCGTAGGTGAACCTGCGG(SEQ ID NO:1)/ITS4:TCCTCCGCTTATTGATATGC(SEQ IDNO:2))为引物进行ITS-PCR实验以验证各灵芝菌株的DNA，将PCR产物置于1％琼脂糖凝胶上电泳(电压80V)30min，置于凝胶成像系统中拍照，结果如图4所示，图中A为特异性引物对VoF11/VoR4扩增结果(箭头所指)，B为ITS1/ITS4引物对扩增结果，表明各灵芝菌株DNA质量可靠，且仅有HMGIM-Z150381菌株可以扩增出特异性条带(条带大小在775～800bp)，将该特异性条带完成克隆测序，得到10条序列(分别为381-1.seq(SEQ ID NO:5)，381-2.seq(SEQID NO:6)，381-3.seq(SEQ ID NO:7)，381-4.seq(SEQ ID NO:8)，381-5.seq(SEQ ID NO:9)，381-6.seq(SEQ ID NO:10)，381-7.seq(SEQ ID NO:11)，381-8.seq(SEQ ID NO:12)，381-9.seq(SEQ ID NO:13)，381-10.seq(SEQ ID NO:14))。另将HMGIM-Z150381菌株的ITS-PCR产物送检测序，得到的序列(381-ITS.seq(SEQ ID NO:15))与NCBI登记的灵芝基因组(登记号为ASM1942609v1)比对，相似率为99.174～100％，表明菌株准确。

(5)菌株人工栽培：将HMGIM-Z150381菌株与本研究组筛选获得的其他部分性状较为优良的野生菌株(A150、M150、W141)在相同条件下(即：试管菌种接种至培养基2制成二级种，培养条件为温度20～25℃、湿度50％～60％条件下避光培养10d。待二级种长好后接种至培养基3，置于25℃，湿度60％～65％条件下避光养菌，养菌结束后打开栽培袋催蕾，提高温度至28℃，增加空气湿度至90％～95％，开始散射光照射8h/d，形成菌盖后每天换新风，早晚各1次，每次1h，调节空气湿度至85％～90％，子实体基本成熟开始喷粉前调节空气湿度至80％，温度调节至25～28℃)进行菌丝体生物学和栽培农艺性状比较。其中HMGIM-Z150381菌株室内人工栽培子实体如图5所示。发现该菌株的生长速度和产量最高(见表1)，子实体多糖含量较常规品种也略高，栽培周期较短(见表2)。此外，将HMGIM-Z150381菌株与应用广泛的商品菌种韩芝203进行比较，发现HMGIM-Z150381的生长周期、转化率及有效成分含量均有优势(表3)，不仅可以大大节省生产成本，而且了提升品质，具有重要的应用前景。

表1 HMGIM-Z150381菌株与性状优良的其他野生灵芝生物学特性及农艺性状的比较

编号	HMGIM-Z150381	A150	M150	W141
					生长速度mm/d	3.36	1.87	2.07	1.18
漆酶活性nmol/min/L	229606	367141.67	93071.33	193054.33
					产量/g	73.54	71.54	60.34	34.91
生物学转化率	29.28％	28.92％	25.09％	29.1％
					菌盖直径/cm	14.55	15.3	12.77	10.73
产孢情况	√	√(少)	√	×
					菌丝体多糖含量％	6.73	3.6	3.62	4.83
子实体多糖含量％	1.35	0.92	1.4	2.4
					菌丝体总三萜含量％(紫外法)	0.42	0.92	0.87	0.92
子实体总三萜含量％(紫外法)	1.72	1.06	1.2	1.05
					灵芝酸A含量％(HPLC)	0.53	0.59	0.48	0.89

表2 HMGIM-Z150381菌株与性状优良的其他野生灵芝栽培性状的比较

表3 HMGIM-Z150381菌株与应用广泛的商品菌种韩芝203比较

(6)将高产灵芝菌株Ganoderma lucidum HMGIM-Z150381菌株与其他野生菌株(A150、M150、W141)和应用广泛的商品菌种韩芝203相比，在高二氧化碳/低氧环境下人工栽培，具体培养条件为在步骤(4)的人工栽培条件下，调节出菇阶段二氧化碳浓度为2000～4000ppm。菌株出菇开伞的结果分别如图6和图7所示。由图6和图7结果可见，高产灵芝菌株Ganoderma lucidum HMGIM-Z150381较一般菌株更耐低氧，在低氧的环境下即可开伞，而其他菌株在低氧环境下不易开伞、易形成鹿角状子实体。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 广东省科学院微生物研究所（广东省微生物分析检测中心）、广东粤微生物技术有限公司

<120> 一种高产灵芝菌株及其分子标记方法和人工栽培方法

<130> 2021-12-18

<160> 15

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 1

tccgtaggtg aacctgcgg 19

<210> 2

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<212> DNA

<213> 人工合成()

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tcctccgctt attgatatgc 20

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<212> DNA

<213> 人工合成()

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catgaagctc tccactgcca 20

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<211> 20

<212> DNA

<213> 人工合成()

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tactgagagc agggtacgct 20

<210> 5

<211> 802

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 5

tcatgaagct ctccactgcc atcctcgccg cgcccgccac cgccgcctcc gtgtactgct 60

cgtcccccct tgcccgccgc gacatcgatc cgtcgctcgt acccgccttc ggcgtccaag 120

cgggtgtaga ccccggacgg tgccgggtgt gcaccccttc actccctccg gtggctagaa 180

tggcgaatgg ctcaccttcg atccgcgagg taaactgcga cggtcccccc ctcgccccgc 240

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ccgcgcgacc agttcatcgc tgtgcgttcc ctcccccccc cttccctcac aagtattcga 360

acccaaccaa gcggtgtgct cacctcgttc cccaggcgct gaacgcgaag tcatgtcgaa 420

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ctcgctgctc gaaggccgag cagcaggcga ccctgctctc gacgctccag aacttgagct 540

tgaacgggcc tggggtcggg tgcccgcgcc ggctgccatg tgtcgacggt gtatgggaga 600

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aagcgtaccc tgctctcagt aa 802

<210> 6

<211> 779

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 6

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gccaaaggac tcggagtcgc tgtcgaagaa acttgaaaag cgtaccctgc tctcagtaa 779

<210> 7

<211> 801

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 7

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<210> 8

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<212> DNA

<213> 人工合成()

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tggcagtgga gagcttcatg a 801

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<212> DNA

<213> 人工合成()

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<210> 10

<211> 779

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<213> 人工合成()

<400> 10

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<213> 人工合成()

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<213> 人工合成()

<400> 13

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cacccgaccc caggcccgtt caagctcaag ttctggagcg tcgagagcag ggtcgcctgc 300

tgctcggcct tcgagcagcg agctgcccgc cgggaacggg aacggcgcgg cgatgggcgg 360

gctgtggacc atgtggcccc ccttcgacat gacttcgcgt tcagcgcctg gggaacgagg 420

tgagcacact gcttggttgg gttcgaatag tcgtgaggga gggggaggga acgcacagcg 480

atgaactggt cgcgcggggg cgggcacgag cacgagcacg gaatcattaa ccaggatcgg 540

cttgccgttg gggcggggcg gggcgagggg cagtttactt cgcggatcga aggtgagcca 600

ttcgccattc tagccaccgg taggagtgaa ggggcgcaca cccgataccg tccggggtct 660

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gtgcacggag gcggcgatgg cggcggccgt ggcgaggatg gcagtggaga gcttcatga 779

<210> 14

<211> 779

<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 14

ttactgagag cagggtacgc ttttcaagtt tcttcgacag cgactccgag tcctttggca 60

ttcacgaacc tatttccttc ttttccgaca ggtctaggac ggatgatccc tactatgcgt 120

ccactctcca agctcgacat aatggtgtaa actcaatact cagtactcag ttcgggaggt 180

cgtcactgat ctcccgctgc aatctcccat acaccgtcga cacatggcag ccggcgcggg 240

cacccgaccc caggcccgtt caagctcaag ttctggagcg tcgagagcag ggtcgcctgc 300

tgctcggcct tcgagcagcg agctgcccgc cgggaacggg aacggcgcgg cgatgggcgg 360

gctgtggacc atgtggcccc ccttcgacat gacttcgcgt tcagcgcctg gggaacgagg 420

tgagcacact gcttggttgg gttcgaatag tcgtgaggga gggggaggga acgcacagcg 480

atgaactggt cgcgcggggg cgggcacgag cacgagcacg gaatcattaa ccaggatcgg 540

cttgccgttg gggcggggcg gggcgagggg cagtttactt cgcggatcga aggtgagcca 600

ttcgccattc tagccaccgg taggagtgaa ggggcgcaca cccgataccg tccggggtct 660

acacccgctt ggacgccgaa ggcgggtacg agcgagacgg atcgacgtcg cggacgagta 720

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<212> DNA

<213> 人工合成()

<400> 15

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gcata 605

Claims (10)

1.一种高产灵芝菌株，其特征在于：所述高产灵芝菌株为灵芝(Ganoderma lucidum)HMGIM-Z150381，于2021年4月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为：GDMCCNo:61603。

2.权利要求1所述的一种高产灵芝菌株Ganoderma lucidum HMGIM-Z150381的分子标记方法，其特征在于，包括如下步骤：采用特异性引物对VoF11：CATGAAGCTCTCCACT GCCA/VoR4：TACTGAGAGCAGGGTACGCT对灵芝菌株DNA进行PCR扩增，可得到长度为775～800bp的特异性条带。

3.权利要求1所述的一种高产灵芝菌株Ganoderma lucidum HMGIM-Z150381的人工栽培方法，其特征在于包括如下步骤：

将HMGIM-Z150381菌种接种至二级种培养基培养，得到二级种；然后将培养好的二级种接种至栽培培养基培养，得到高产灵芝菌株HMGIM-Z150381人工栽培的子实体。

4.根据权利要求3所述的一种高产灵芝菌株Ganoderma lucidum HMGIM-Z150381的人工栽培方法，其特征在于所述二级种培养基通过如下方法制备：将高粱粒用冷水浸泡过夜后，水煮倒掉余水，加入CaCO₃搅拌均匀后分装至玻璃试管中，高温灭菌备用；二级种培养基中组分的质量百分含量为：高粱粒99％，CaCO₃1％。

5.根据权利要求4所述的一种高产灵芝菌株Ganoderma lucidum HMGIM-Z150381的人工栽培方法，其特征在于：所述二级种培养基制备中，水煮的时间为1h，玻璃试管的大小为18*180mm，高温灭菌采用121℃灭菌30min。

6.根据权利要求4所述的一种高产灵芝菌株Ganoderma lucidum HMGIM-Z150381的人工栽培方法，其特征在于所述二级种培养基培养的条件为：温度为20～25℃、湿度为50％～60％条件下避光培养8～12d。

7.根据权利要求3所述的一种高产灵芝菌株Ganoderma lucidum HMGIM-Z150381的人工栽培方法，其特征在于所述栽培培养基通过如下方法制备：将木屑、棉籽壳、麦麸与CaCO₃混匀，添加水分至含水量为60％～65％，堆置过夜后再次翻堆拌匀，再次调节含水量至60～65％，分装至栽培袋，封口，高温灭菌备用。

8.根据权利要求7所述的一种高产灵芝菌株Ganoderma lucidum HMGIM-Z150381的人工栽培方法，其特征在于所述栽培培养基中组分的质量百分含量为：木屑58％，棉籽壳31％，麦麸10％，CaCO₃1％；所述栽培培养基制备中，栽培袋采用大小为17cm×35cm的聚丙烯栽培袋，封口采用含透气口的密封圈封口，高温灭菌采用121℃灭菌1h。

9.根据权利要求7所述的一种高产灵芝菌株Ganoderma lucidum HMGIM-Z150381的人工栽培方法，其特征在于所述栽培培养基培养的条件为：先置于25℃，湿度60％～65％条件下避光养菌，养菌结束后打开栽培袋催蕾，提高温度至28℃，增加空气湿度至90％～95％，开始散射光照射8h/d，形成菌盖后每天换新风，早晚各1次，每次1h，调节空气湿度至85％～90％，子实体基本成熟开始喷粉前调节空气湿度至80％，温度调节至25～28℃培养。

10.根据权利要求9所述的一种高产灵芝菌株Ganoderma lucidum HMGIM-Z150381的人工栽培方法，其特征在于：所述栽培培养基培养是指在二氧化碳浓度为2000～4000ppm的低氧环境下培养。

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