CN114316036B

CN114316036B - 一种o型口蹄疫病毒结构蛋白vp1广谱中和抗体、制备方法及其应用

Info

Publication number: CN114316036B
Application number: CN202210011206.9A
Authority: CN
Inventors: 郑海学; 杨洋; 茹毅; 秦晓东; 张伟; 杨帆; 曹伟军; 朱紫祥; 卢炳州; 赵东梅; 任蕊芳; 吴秀萍; 郝荣增; 刘华南; 李亚军; 吴国华; 李丹; �田宏; 张克山; 毛箬青
Original assignee: Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS
Current assignee: Lanzhou Veterinary Research Institute of CAAS
Priority date: 2022-01-05
Filing date: 2022-01-05
Publication date: 2023-03-28
Anticipated expiration: 2042-01-05
Also published as: CN114316036A

Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种O型口蹄疫病毒广谱中和抗体、制备方法及应用。本发明以O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1为免疫原，免疫Balb/c小鼠，经细胞融合，筛选获得一株高效分泌单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞系，并获得了一种鼠单克隆抗体9H6‑VP1，所述单克隆抗体9H6‑VP1为IgG1型单克隆抗体。免疫印迹试验表明所述单克隆抗体9H6‑VP1对O型不同谱系病毒(O/ZK/93、O/Mya/98和O/HK/93)具有广谱反应性，而不和A型毒株进行反应；而且病毒中和实验表明所述单克隆抗体对O/ZK/93、O/Mya/98和O/HK/93均具有中和活性，可阻止病毒入侵，保护机体免受感染。

Description

一种O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1广谱中和抗体、制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1广谱中和抗体、制备方法及应用。

背景技术

口蹄疫是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus，FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的传染病。FMDV目前有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3(即南非口蹄疫病毒1、2、3型)和Asia1(亚洲1型)7个血清型。各型之间几乎没有免疫保护力，感染了一型口蹄疫的动物仍可感染另一型口蹄疫病毒而发病。FMDV属于微核糖核酸病毒科(picornaviridae)口蹄疫病毒属(aphthavirus)的成员。O型口蹄疫为全世界流行最广的一个血清型，包含多种毒株：O/GX/09-7、O/Mya98/XJ/2010、O/Mya98/BY/2010、O/JMS/2000、OZK/93等。

我国目前存在3个谱系的O型FMDV，分别为东南亚拓扑型(O/Mya98)，中东南亚拓扑型(O/PanAsia)和中国拓扑型(O/Cathay)，三个谱系病毒的抗原结构存在较大差异，交叉免疫保护效果较弱。O/Cathay的经典毒株相对具有较好的免疫原性与抗原谱，但其新分离变异株的免疫原性趋弱，具有逃逸免疫的倾向。即使是免疫原性好的毒株，在疫苗抗原含量低时，对与其遗传关系较远的新流行毒也不能提供很好的免疫保护；需要研制多组份抗原苗，以提高疫苗的抗原谱，抗原谱广的疫苗毒株的筛选难度增大，需要借助基因工程手段来构建优良疫苗毒株。

中和抗体，尤其是广谱中和抗体，是FMD保护性免疫的重要组成部分，但是目前常用的O型口蹄疫病毒中和抗体的种类较少，且特异性较差，对于O型口蹄疫病毒的抑制效果较弱。因此，对于特异、广谱且具有病毒抑制效果的O型口蹄疫病毒中和抗体的研究至关重要。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的目的在于提供一种对O型口蹄疫病毒不同谱系毒株结构蛋白VP1具有广谱中和作用的中和抗体、制备方法及应用，具体包括以下内容：

第一方面，本发明提供了一种O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1广谱中和抗体9H6-VP1，其特征在于，所述中和抗体9H6-VP1重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

优选地，所述中和抗体9H6-VP1为IgG1型单克隆抗体。

第二方面，本发明提供了一种编码上述第一方面所述中和抗体9H6-VP1的基因片段，其中，编码所述中和抗体9H6-VP1重链可变区的基因序列如SEQ ID NO.3所示，编码所述中和抗体9H6-VP1轻链可变区的基因序列如SEQ ID NO.4所示。

第三方面，本发明提供了一种含有上述第二方面所述的基因片段的表达载体。

第四方面，本发明提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞含有上述第三方面所述的表达载体，或其基因组中整合有上述第二方面所述的基因片段。

第五方面，本发明提供了一种免疫偶联物，所述免疫偶联物包括：

(i)上述第一方面所述的中和抗体9H6-VP1；

(ii)和选自下组的偶联部分：可检测标记物、药物、金纳米颗粒/纳米棒、纳米磁粒、病毒外壳蛋白或VLP、或其组合。

第六方面，本发明提供了一种上述第一方面所述的中和抗体9H6-VP1在制备O型口蹄疫病毒检测试剂或试剂盒中的应用。

第七方面，本发明提供了一种O型口蹄疫病毒检测试剂盒，所述检测试剂盒包括上述第一方面所述的中和抗体9H6-VP1。

优选地，所述检测试剂盒还包括酶标板、抗体稀释液、浓缩洗涤液、显色剂、终止液。

第八方面，本发明提供了一种上述第一方面所述的中和抗体9H6-VP1在制备预防或治疗O型口蹄疫病毒感染药物中的应用。

第九方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括：

(i)上述第一方面所述的中和抗体9H6-VP1，或上述第五方面所述的免疫偶联物；以及

(ii)药学上可接受的载体。

第十方面，本发明提供了一种上述第九方面所述的药物组合物在制备预防或治疗O型口蹄疫病毒感染药物中的应用。

本发明的有益效果是：本发明提供了一种O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1广谱中和抗体9H6-VP1，所述O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1广谱中和抗体9H6-VP1为IgG1型单克隆抗体；所述O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1广谱中和抗体9H6-VP1与A型口蹄疫病毒无交叉反应，能够特异性中和O型口蹄疫病毒不同谱系毒株，能够用于O型口蹄疫病毒的检测与诊断；而且所述O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1广谱中和抗体9H6-VP1能够对O型口蹄疫病毒不同谱系毒株均具有中和活性，可阻止O型口蹄疫病毒入侵，抑制O型口蹄疫病毒的感染，可用于制备预防或治疗O型口蹄疫病毒感染的药物。

附图说明

图1WB检测中和抗体9H6-VP1对O型FMDV不同谱系代表毒株的反应活性；

图2间接免疫荧光试验检测中和抗体9H6-VP1对O型FMDV和A型FMDV不同谱系代表毒株的反应活性；

图3使用RT-qPCR检测细胞表面的病毒粒子含量。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，需要说明的是下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。另外，如果没有明确说明，在下面的实施例中所采用的所有试剂均为市场上可以购得的，或者可以按照文本或已知的方法合成的，对于没有列出的反应条件，也均为本领域技术人员容易获得的。

实施例1中和抗体9H6-VP1的制备

1.杂交瘤细胞的制备

1.1小鼠免疫

以O型口蹄疫病毒(O/Mya98)结构蛋白VP1作为抗原，免疫5～6周龄Balb/c小鼠，免疫方式为背部皮下多点注射，每只注射量为100μg。首免使用弗式完全佐剂，之后加强免疫使用弗式不完全佐剂，每次免疫时间间隔为两周，三免后1周采集小鼠血清，检测抗体效价，当抗体效价不低于1:1440时，进行冲击免疫，即腹腔注射抗原，冲击免疫后三天，取小鼠脾脏与骨髓瘤细胞融合。

1.2细胞融合

无菌获取免疫后小鼠的脾细胞，与骨髓瘤细胞按照10:1的比例混合，在37℃条件下，1分钟内加入1mL PEG 1500，作用1分钟后，加入1mL 37℃预热的DMEM培养液终止反应，1分钟内加完，作用1分钟，如此共加5次(整个融合过程需晃动融合管)，补加预热的DMEM培养液至20mL，37℃作用15分钟后，800rpm离心7min；弃去上清，用胎牛血清培养液(加HAT选择培养基)重悬；将上述细胞加入96孔板中，每孔50μL；将培养板置于37℃5％CO₂培养箱中培养。第3天和第6天用20％胎牛血清培养液(加HAT选择培养基)进行半换液，观察杂交瘤细胞生长至孔底约1/5时，取上清检测特异性抗体。

1.3筛选杂交瘤细胞

使用ELISA试验将检测为阳性的杂交瘤细胞用20％胎牛血清培养液(加HT选择培养基，Sigma)，计数，调整细胞为3～5个细胞/mL，每孔滴加100μL稀释后的细胞，后每孔补加100μL HT选择培养基，置于37℃5％CO₂培养箱中；在第3天和第6天进行半换液20％胎牛血清培养液(加HT选择培养基，Sigma)，观察细胞克隆形成情况，及时检测抗体活性。亚克隆获得阳性单克隆细胞后，将其传代扩大培养，并以2×10⁶个细胞/支于液氮中保存。

2.中和抗体9H6-VP1的制备

2.1中和抗体9H6-VP1腹水的制备

用灭菌液体石蜡致敏7～8周龄Balb/c小鼠，0.5mL/只，10天～18天内向腹腔注入0.5mL(约3.0×10⁶个细胞/mL)的杂交瘤细胞。注射后每天轻揉小鼠腹部，至小鼠腹部明显横向涨大时抽取腹水。将腹水10000rpm离心10min，取上清，分装，-20℃保存。

2.2中和抗体9H6-VP1的纯化

采用亲和层析进行杂交瘤细胞小鼠腹水的纯化，具体操作如下：将冻存的腹水样品解冻，10000rpm 4℃离心10min，吸取澄清液体，用3倍柱体积的上样缓冲液(Bindingbuffer配方：20mM Na₂HPO₄，0.15M NaCl，pH8.0)稀释后，进行Protein A亲和层析柱纯化，柱层析洗脱液为pH2.5，0.1M的甘氨酸缓冲液，洗脱下来的抗体需立即用中和缓冲液(1MTris-HCl，pH8.5)调整pH值至中性，并进行SDS-PAGE胶分析和蛋白含量测定，

结果显示：纯化后的中和抗体9H6-VP1蛋白含量分别为5.5mg/mL，可满足临床应用的需求。

2.3中和抗体9H6-VP1的亚型鉴定和测序

亚型鉴定：按照鼠单克隆抗体亚型鉴定试剂盒(购自Sigma公司)说明书进行单克隆抗体Ig亚型的鉴定，测得其亚型为IgG1。

中和抗体9H6-VP1可变区序列测定：

(1)总RNA提取：取10⁶个细胞，Trizol裂解，加入氯仿分层获取RNA，异丙醇沉淀后用乙醇洗涤，干燥，用DEPC水溶解RNA；

(2)反转录和PCR扩增：取500ng RNA，加入Oligo(dT)，Random，dNTP及5×RTbuffer，反转录酶(Takara公司)，37℃25min，85℃5sec，4℃终止反应获得cDNA，之后进行PCR扩增；

(3)测序和分析：将扩增得到的重链和轻链可变区克隆至pMD18-T，送至公司测序，使用IMGT/V-QUEST数据库进行数据比对分析。

经测序，所述中和抗体9H6-VP1的重链可变区的编码DNA序列为：caggtgcagctgaagcagtcaggacctggcctggtggcgccctcacagagcctgtccatcacatgcaccgtctcagggttctcattaactagctatggtgtacactgggttcgccagcctccaggaaagggtctggagtggctggtagtgatatggagtgatggaagcacaacctataattcagctctcaaatccagactgagcatcagcaaggacaactccaagagccaagttttcttaaaaatgaacagtctccaaactgatgacacagccatgtactactgtgccagagagcctcccacgacgtacgtttgcttactggggccaagggactctggtcactgtctcgag(SEQ ID NO.3所示)；

所述轻链可变区的编码DNA序列为：gacattgtgatgacccagtctcctgcttccttagctgtatctctggggcagagggccaccatctcatacagggccagcaaaagtgtcagtacatctggctatagttatatgcactggaaccaacagaaaccaggacagccacccagactcctcatctatcttgtatccaacctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccatcctgtggaggaggaggatgctgcaacctattactgtcagcacattagggagcttacacgttcggaggggggccaagctggagctgaa(SEQ ID NO.4所示)；

根据密码子编码规则，所述重链可变区的氨基酸序列为：QVQLKQSGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTSYGVHWVRQPPGKGLEWLVVIWSDGSTTYNSALKSRLSISKDNSKSQVFLKMNSLQTDDTAMYYCAREPPTTYVCLLGPRDSGHCLE(SEQ ID NO.1所示)；

所述轻链可变区的氨基酸序列为：DIV MTQ SPA SLAVSLGQRATISYRASKSVSTSGYSYMHWNQQKPGQPPRLLIYLVSNLESGVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYCQHIRELTRSEGGQAGAE(SEQID NO.2所示)。

实施例2中和抗体9H6-VP1的广谱反应活性测定

1.免疫印迹试验

分别用A型口蹄疫病毒株A/AF72、A/GDMM/2013、A/WH/CHA/09、O型口蹄疫病毒株O/ZK/93、O/Mya/98和O/HK/93毒株(毒株均由口蹄疫国家参考实验室保存)感染BHK-21细胞，感染后6小时收取细胞，制备样品进行WB试验，用制备的抗体9H6-VP1作为一抗进行免疫印迹试验。

具体实验流程如下：

(1)电泳：取变性后的O型与A型FMDV抗原加入至12％预制胶孔中；

(2)按照10μL/孔上样，浓缩胶按照90V的恒压进行电泳，分离胶按照120V的恒压进行电泳；

(3)转膜：组装好转膜装置，并将其置于冰水混合物中，设置200mA恒定电流转膜2h，将电泳分离好的样品从凝胶中转印至PVDF膜上；

(4)封闭：用TBST溶液配制的5％脱脂奶粉作为封闭液，摇床室温封闭1小时；

(5)孵育一抗：用TBST溶液配制的5％脱脂奶粉将待检中和抗体9H6-VP1稀释至终浓度2μg/mL，摇床上4℃孵育过夜；

(6)洗膜：用TBST溶液振荡洗膜三次，每次洗十分钟；

(7)孵育二抗：用TBST溶液配制的5％脱脂奶粉稀释山羊抗小鼠抗体(1:5000)，摇床上室温孵育1小时；

(8)洗膜：用TBST溶液振荡洗膜三次，每次洗十分钟；

(9)显影：将ECL发光液中的A液与B液按照1:1比例轻轻混合均匀，均匀滴加到PVDF膜上，反应3min，之后在暗室内用X光胶片手动曝光。

检测结果如图1所示，本发明所述的中和抗体9H6-VP1与A型口蹄疫病毒株A/AF72、A/GDMM/2013、A/WH/CHA/09无反应活性，而与O型口蹄疫病毒株不同谱系代表毒株O/ZK/93、O/Mya/98和O/HK/93抗原广谱性反应。说明本发明所述的中和抗体9H6-VP1能够特异性的与O型口蹄疫病毒株反应，具有广谱性和特异性。

2.间接免疫荧光试验：

分别用A型口蹄疫病毒株A/AF72、A/GDMM/2013、A/WH/CHA/09、O型口蹄疫病毒株O/ZK/93、O/Mya/98和O/HK/93毒株(毒株均由口蹄疫国家参考实验室保存)感染BHK-21细胞，通过荧光显微镜下的荧光强度来判定制备的中和抗体9H6-VP1与FMDV抗原的反应情况，具体操作步骤如下：

(1)培养细胞：将BHK-21细胞均匀铺到12孔细胞培养板中，待细胞生长至70％左右进行接毒；

(2)接毒：按MOI＝1的比例将3个谱系的A型毒株与3个谱系的O型毒株分别接种于12孔板中，同时设立未接毒正常细胞作为阴性对照，将接毒细胞在37℃培养箱中孵育，待细胞病变至50％左右，将细胞上清进行灭活处理；

(3)固定：在每个孔中添加多聚甲醛进行固定15min，PBS清洗3次；

(4)通透：用PBS溶液配制含有0.5％Triton X-100的通透液，将细胞通透10min，PBS清洗3次；

(5)孵育一抗：PBS清洗3次，用PBS将待检中和抗体9H6-VP1稀释至终浓度10μg/mL，500μL/孔加入，同时使用已知阳性鼠源抗体作为阳性对照，37℃孵育1h；

(6)孵育二抗：PBS清洗3次，加入山羊抗小鼠IgG-FITC荧光抗体(1:1000稀释)，200μL/孔加入，37℃孵育1h；

(7)用PBS清洗5次，500μL/孔加入PBS以保证细胞表面湿润，放入荧光显微镜下进行荧光观察。

检测结果如图2所示，本发明所述的中和抗体9H6-VP1与3个谱系的A型毒株和3个谱系的O型毒株均不反应。说明本发明所述的抗体9H6-VP1特异性识别线性表位，而不能识别构象表位。

实施例3中和抗体9H6-VP1的广谱中和活性测定

为了测定抗体9H6-VP1的中和活性，针对O型口蹄疫病毒不同谱系代表毒株O/ZK/93毒株、O/Mya/98毒株和O/HK/93毒株进行了中和试验。具体操作步骤如下：

(1)在96孔细胞培养板内，以50μL/孔的量用细胞维持液倍比稀释中和抗体9H6-VP1，从1：4稀释至1：512。然后，每孔加入100μL含100TCID₅₀的FMDV，37℃作用1h。同时设置含有0.1、1、10、以及100个TCID₅₀的对照孔(不加抗体)；

(2)每孔加入100μL含5×10⁴个BHK-21细胞的完全培养基，放入37℃含5％CO₂的培养箱作用48h；

(3)弃去上清细胞液，加入预冷的固定液(甲醇:丙酮＝1:1)，-20℃固定20min；

(4)弃去固定液，每孔加入100μL结晶紫溶液进行染色，30min后，冲洗96孔板，观察50％细胞未病变的抗体浓度(IC₅₀)；使用50μg/mL的IC₅₀值作为中和作用的临界值，将>50μg/mL确定为非中和活性。

病毒中和试验结果显示，抗体9H6-VP1对O型口蹄疫病毒代表毒株O/ZK/93毒株、O/Mya/98毒株和O/HK/93毒株都有中和活性，其IC₅₀分别为0.4μg/mL、2.2μg/mL和3.5μg/mL；为O型口蹄疫病毒中和抗体9H6-VP1。

实施例4中和抗体9H6-VP1抑制病毒吸附

为测定中和抗体9H6-VP1抑制病毒的特性，使用该抗体在细胞上进行了病毒吸附抑制试验。具体操作步骤如下：

(1)培养细胞：将BHK-21细胞均匀铺到6孔细胞培养板中，待细胞生长至80％左右进行试验；

(2)病毒和抗体共孵育：将含TCID₅₀的O/ZK/93毒株与不同浓度(0g/L、0.125g/L、0.5g/L和2g/L)的中和抗体9H6-VP1在37℃温箱中共孵育1h；

(3)吸附试验：将共孵育的病毒和抗体加入BHK-21细胞中4度孵育1h，将细胞上清进行灭活处理；使用预冷的PBS洗细胞三次；

(4)RT-qPCR试验：弃去上清，在每孔细胞中加入1mL Trizol裂解液，使用Trizol法提取RNA，使用FMDV探针法RT-qPCR方法进行病毒含量的绝对定量，并比较加入不同浓度抗体组和对照组样品中病毒含量的比值。

结果如图3所示，表明中和抗体9H6-VP1能显著抑制O型口蹄疫病毒吸附，并且呈现剂量依赖性，当抗体浓度为2g/L时能基本上完全阻断病毒的吸附。即，本发明制备的中和抗体9H6-VP1能显著抑制O型口蹄疫病毒在易感细胞上的吸附，抑制O型口蹄疫病毒感染。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 中国农业科学院兰州兽医研究所

<120> 一种O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1广谱中和抗体、制备方法及其应用

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Val His Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Val Val Ile Trp Ser Asp Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu

65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Glu Pro Pro Thr Thr Tyr Val Cys Leu Leu Gly Pro Arg Asp Ser

100 105 110

Gly His Cys Leu Glu

115

<210> 2

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gln Arg Ala Thr Ile Ser Tyr Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser

20 25 30

Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro

35 40 45

Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala

50 55 60

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His

65 70 75 80

Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg

85 90 95

Glu Leu Thr Arg Ser Glu Gly Gly Gln Ala Gly Ala Glu

100 105

<210> 3

<211> 351

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

caggtgcagc tgaagcagtc aggacctggc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccatc 60

acatgcaccg tctcagggtt ctcattaact agctatggtg tacactgggt tcgccagcct 120

ccaggaaagg gtctggagtg gctggtagtg atatggagtg atggaagcac aacctataat 180

tcagctctca aatccagact gagcatcagc aaggacaact ccaagagcca agttttctta 240

aaaatgaaca gtctccaaac tgatgacaca gccatgtact actgtgccag agagcctccc 300

acgacgtacg tttgcttact ggggccaagg gactctggtc actgtctcga g 351

<210> 4

<211> 327

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

gacattgtga tgacccagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 60

atctcataca gggccagcaa aagtgtcagt acatctggct atagttatat gcactggaac 120

caacagaaac caggacagcc acccagactc ctcatctatc ttgtatccaa cctagaatct 180

ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240

cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acattaggga gcttacacgt 300

tcggaggggg gccaagctgg agctgaa 327

Claims

1.一种O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1广谱中和抗体9H6-VP1，其特征在于，所述中和抗体9H6-VP1重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。

2.一种编码权利要求1所述中和抗体9H6-VP1的基因片段，其特征在于，编码所述中和抗体9H6-VP1重链可变区的基因序列如SEQ ID NO.3所示，编码所述中和抗体9H6-VP1轻链可变区的基因序列如SEQ ID NO.4所示。

3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求2所述的基因片段。

4.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求3所述的表达载体，或其基因组中整合有权利要求2所述的基因片段。

5.一种免疫偶联物，其特征在于，所述免疫偶联物包括：

(i)如权利要求1所述的中和抗体9H6-VP1；

6.如权利要求1所述的中和抗体9H6-VP1在制备O型口蹄疫病毒检测试剂或试剂盒中的应用。

7.一种O型口蹄疫病毒检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括权利要求1所述的中和抗体9H6-VP1、酶标板、抗体稀释液、浓缩洗涤液、显色剂、终止液。

8.如权利要求1所述的中和抗体9H6-VP1在制备预防或治疗O型口蹄疫病毒感染药物中的应用。

9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括：

(i)如权利要求1所述的中和抗体9H6-VP1，或如权利要求5所述的免疫偶联物；以及

(ii)药学上可接受的载体。

10.如权利要求9所述的药物组合物在制备预防或治疗O型口蹄疫病毒感染药物中的应用。