CN114292845B - 一种强活性的水稻启动子序列及验证方法 - Google Patents
一种强活性的水稻启动子序列及验证方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114292845B CN114292845B CN202111628276.0A CN202111628276A CN114292845B CN 114292845 B CN114292845 B CN 114292845B CN 202111628276 A CN202111628276 A CN 202111628276A CN 114292845 B CN114292845 B CN 114292845B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- promoter
- promoter sequence
- rice
- osubq
- sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 title claims abstract description 22
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 title claims abstract description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 title abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 13
- 238000012795 verification Methods 0.000 title abstract description 7
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 title description 2
- 241000209094 Oryza Species 0.000 claims abstract description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 12
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 abstract description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 7
- 230000009466 transformation Effects 0.000 abstract description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 abstract description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 abstract description 4
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 abstract description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 abstract description 3
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 22
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 11
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 8
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 7
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- 240000008467 Oryza sativa Japonica Group Species 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 101150066002 GFP gene Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108010068086 Polyubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102100037935 Polyubiquitin-C Human genes 0.000 description 1
- 244000184734 Pyrus japonica Species 0.000 description 1
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 1
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009418 agronomic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000007622 bioinformatic analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种强活性的水稻启动子序列及验证方法，基因序列如SEQ ID NO.1。方法包括：(1)OsUBQ启动子序列扩增，构建OsUBQ驱动GFP的表达载体；(2)Ubi1启动子序列扩增，构建由Ubi1驱动的GFP表达载体；(3)使用CaMV35S启动子为正对照；(4)水稻原生质体制备与转化；(5)在瞬时表达系统通过荧光强度评估三个启动子CaMV35S、OsUBQ和Ubi1活性。本发明的水稻启动子序列，本质是DNA分子，1405bp，能够启动基因的表达并且活性更强。
Description
技术领域
本发明涉及启动子及验证方法，特别涉及一种强活性的水稻启动子序列及验证方法。
背景技术
植物启动子在转录水平上对基因的表达调控起着非常重要的作用。大多数启动子位于基因5’端转录起始位点上游。启动子序列包含基因转录所需的RNA聚合酶复合物的结合位点及转录因子结合位点，当基因被调控表达时，这些位点能够被转录因子特异性识别和结合，进而招募RNA聚合酶组装成复合体，启动子决定起始位置和转录的方向。研究表明，大多数启动子位于染色体上的开放染色质区域。在基因工程研究中，启动子是影响外源转基因表达效率的重要因素之一。实践上需要高效的启动子用于驱动外源基因表达，以便在转基因植株中获得较好的农艺性状。因此，组成型表达的强启动子具有较广的应用前景。
发明内容
发明目的：本发明目的是提供一种强活性的水稻启动子序列。
本发明另一目是提供所述强活性的水稻启动子序列的验证方法。
技术方案：本发明提供一种强活性的水稻启动子序列，基因序列如SEQ ID NO.1。
进一步地，用引物以粳稻日本晴(Oryza sativa L.spp.Japonicavar.Nipponbare)的基因组DNA为模板，扩增得到1405bp的扩增产物，即SEQ ID NO.1。
进一步地，所述引物序列如下：
正向F：5’-CTGCAAATACTGCAAAGAAT-3’；
反向R：5’-AAGAGGCGAGGAGGGGGTGG-3’。
进一步地，
所述的水稻启动子活性检测的具体方法，如下：
1)LOC_Os06g46770基因在各个组织中表达量较高，为组成型表达。在它的转录起始位点上游的1405bp序列，定义为启动子序列OsUBQ(SEQ ID NO.1)。
2)为验证OsUBQ启动子活性，构建OsUBQ驱动GFP的表达载体。
3)已发表的该基因Ubil启动子序列与本实验中预测的启动子之间的序列分析。
4)Ubi1启动子序列扩增，构建由Ubi1驱动的GFP表达载体。
5)使用CaMV35S启动子为正对照。
6)水稻原生质体制备与转化。
7)在瞬时表达系统评估三个启动子CaMV35S、OsUBQ和Ubi1活性。
鉴定原理：
研究发现大多数启动子位于染色体上的开放染色质区域。通常启动子位于基因转录起始位点上游。利用启动子的位置特征和开放染色质图谱可以有效预测基因的启动子区。本发明中发现LOC_Os06g46770基因的启动子OsUBQ，在瞬时表达体系中其活性较强，强于与已发表的Ubi1启动子。
有益效果：本发明的水稻启动子序列，本质是DNA分子，1405bp，能够启动基因的表达并且活性更强。
附图说明
图1 LOC_Os06g46770基因结构示意图；
图2瞬时表达系统检测三个启动子CaMV35S、OsUBQ和Ubil活性。
具体实施方式
本实施例的启动子获取及鉴定方法如下：
1.LOC_Os06g46770启动子介绍
LOC_Os06g46770基因编码泛素蛋白，该基因在茎、叶、花序、根等组织中表达较强，呈现组成型表达特点。从植物PlantDHS(http：//plantdhs.org/)数据库中获得水稻开放染色质(DNase-seq)数据，依据开放染色质特征预测该基因的启动子序列。在该基因的转录起始位点上游，约1.4kb的区间内存在2个开放染色质位点，图1所示。因此克隆这段DNA序列(1405bp，SEQ ID NO.1)并命名为OsUBQ启动子作为后续实验分析。
设计序列特异性引物，制备如下引物：
正向F：5’-CTGCAAATACTGCAAAGAAT-3’；
反向R：5’-AAGAGGCGAGGAGGGGGTGG-3’。
用以上引物以粳稻日本晴的基因组DNA为模板，扩增得到1405bp的扩增产物。经测序，扩增产物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1的自5’端第一位至1045位所示。
2.载体构建
查阅文献得知，已有研究报道过LOC_Os06g46770基因的启动子并命名为Ubi1启动子，文献如下：Bhattacharyya，J.，Chowdhury，A.H.，Ray，S.et al.Native polyubiquitinpromoter of rice provides increased constitutive expression in stabletransgenic rice plants.Plant Cell Rep 31，271-279(2012).
经过生物信息学分析，发现本实验中使用的OsUBQ启动子与已发表的Ubi1启动子在序列上不同，OsUBQ启动子序列为基因转录起始位点上游1405bp，包含两个开放染色质位点。Ubi1启动子长度为1537bp，包括基因转录起始位点上游683bp序列(此区域仅有一个开放染色质位点)和转录起始位点下游的854bp序列(这段序列有5’UTR和内含子)。在本实验中分别构建上述两个启动子的检测载体，具体操作如下：
2.1骨架载体的准备
GFP报告基因载体由电子科技大学张勇课题组提供。用Xba I和Asc I限制性内切酶切除掉原有的启动子序列得到线性化的骨架载体。
2.2启动子序列的扩增
本实验中预测的OsUBQ启动子序列用如下引物扩增：
正向F：5’-CTGCAAATACTGCAAAGAAT-3’；
反向R：5’-AAGAGGCGAGGAGGGGGTGG-3’。
Ubi1启动子序列用如下引物扩增：
正向F：5’-CACATCAGTCTCTGCACAAA-3’；
反向R：5’-CTGCACACACAATTACCGAA-3’。
本实验用CaMV35S启动子为正对照，其序列为公开发表序列。
2.3载体构建
使用无缝克隆重组酶(诺维赞，C112)将载体与片段连接起来，即将目标启动子序列放置于GFP基因序列的5’端，将连接产物转化感受态细胞DH5α，选取阳性克隆，测序验证并保菌待用。
3.水稻原生质体制备与转化
3.1水稻原生质体制备：
(1)叶片准备。取无菌培养14天左右生长良好的新鲜水稻植株40-60株，去掉根部，备用。
(2)酶解。将水稻叶片和茎段用锋利刀片切成宽度为0.5mm的条状，速度要快，防止叶片脱水，将切好的叶片放入盛有10ml酶解液的培养皿中，置于密闭容器中用真空泵抽真空30min，用封口膜封口，置于60rpm转速的摇床上25℃黑暗条件下过夜酶解。
(3)过滤。将过夜酶解的粗酶液通过预先用2ml W5 washing Buffer润洗过的孔径40μm的细胞筛进行过滤，去除酶解不充分的杂质。
(4)提纯。将过滤过的细胞酶解液转移到两个15ml离心管中，每管6ml细胞酶解液，用装有长针头的注射器吸取16ml 0.55M蔗糖，每管细胞酶解液底部加入8ml 0.55M蔗糖，注意：加蔗糖时，针头伸入底部，推动注射器，随着液面升高，缓慢上移注射器，动作要轻柔，防止对原生质体细胞造成破坏。1000g离心5min。
(5)清洗。取50ml离心管一个，加入10ml Washing buffer，置于试管架上。用装有长针头的注射器吸取8ml Washing buffer，再将针头伸到上步离心后的中间细胞层，慢慢吸取该层的所有原生质体，然后小心转移至盛有10ml Washing buffer的50ml离心管中。轻弹混匀，100g室温离心5min。
(6)重复清洗一次。移除上清，沿壁慢慢加入10ml Washing buffer，轻弹混匀，100g离心2min。
(7)重悬。去掉上清，加入5ml Washing buffer，注意沿壁缓慢加入，轻弹混匀，使细胞保持悬浮。
(8)计数。吸取100μl细胞用于计数，取6-7μl细胞置于细胞计数板进行计数，如果细胞数目太多可采用MGG稀释后再进行计数。
(9)细胞稀释。根据计数结果取适量细胞悬浮液进行离心，然后用MGG Buffer重悬细胞，最终将细胞稀释至1×106个/ml，用于原生质体转化。
3.2水稻原生质体的转化：
(1)质粒的准备。采用质粒小提试剂盒(TIANGEN，Cat#DP-106)提取以下质粒：CaMV35S：：GFP，OsUBQ：：GFP和Ubi1：：GFP。确保其浓度尽量在500ng/μl以上，整个过程最好为无菌操作。质粒置于-20℃冰箱冻存。使用前以离心机最高转速进行离心10min处理，使杂质沉淀于离心管底部，避免因杂质影响原生质体转化的效率。处理好的质粒用MGG Buffer稀释到实验所需质粒浓度，稀释后充分混匀备用。
(2)PEG介导的转化。将上述准备好的等量的10ug质粒(CaMV35S：：GFP，OsUBQ：：GFP和Ubi1：：GFP)中加入200μl按照2.2.6制备过程制备的原生质体细胞，轻弹混匀。然后，每管加入210-230μl 40％PEG(PEG加入量与质粒体积相关，确保等体积加入)，轻弹混匀，直至细胞均匀悬浮于PEG当中，从第一管加入PEG开始计时，计时20min。从第一管加入到最后一管加入的时间尽量控制在5min以内。
(3)清洗。加入PEG反应20min后，每管加入1ml W5 Washing Buffer，终止反应，轻轻颠倒混匀，250g离心5min。
(4)重复清洗一次。用枪轻轻吸掉上清，重新加入800μl Washing Buffer，轻轻颠倒混匀，150g离心5min，轻轻吸掉上清。
(5)细胞重悬与培养。取40mm培养皿加入2ml W5 Buffer，再取培养皿中的W5Buffer重悬离心管中的细胞，并全部转移至培养皿中，25℃黑暗培养，两天后在显微镜下观察荧光。
4.荧光显微镜观察
使用高内涵细胞成像系统进行观察。GFP使用的激发波长为488nm，吸收波长为490-540nm。所有的荧光实验至少重复三次。在转化后的细胞中观察，三个启动子CaMV35S、OsUBQ和Ubi1均能启动GFP的表达，但是荧光强度存在差异。本实验预测的OsUBQ启动子调控的GFP表达，其荧光信号最强，强于Ubi1启动子活性。由于OsUBQ启动子序列中存在两个开放染色质位点，而Ubi1启动子序列只包含一个开放染色质位点，推测开放染色质位点对基因表达有增强的作用。
序列表
<110> 扬州大学
<120> 一种强活性的水稻启动子序列及验证方法
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1405
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ctgcaaatac tgcaaagaat ctctacaaac aaacagtcat ctgaagatga gagataggaa 60
tctctctcaa tctctctctt ctctgcaatg cctgtctatt gcaaagtcac tgtgattctc 120
aaacgaggaa gacgacgacg agggaaaacc aaaaaccagc ggataagaag gaaaaccgcc 180
tttgcgaaaa ccacagcctc tctccctcag gctcagcctc agcctctcga tttttctttg 240
atttttttat taaagcaaga atggtccttg gctcttgctg gtactaccag cgtgtggcca 300
aatcatgcag ctttgatgat ggaaaaaagg aaagaaaatt caggagagag agaaagagac 360
gtggggtgtg gttggaccgc aaggcacggc gccgtagccg ttggcagatg cgcgtctccc 420
tccgtctccg ttatcacgtc ggcacgccga cgtcgctgcg cctgcgcgtg ggaggccagg 480
gcagatgcta cgtgccatca ggaatgtcga cctgatgatt attttgttga tcatgatttt 540
cttttggcta tttgattttt tgaaagatat ttttttccct gggaagacac ctatgggacg 600
aagatattat gtttcttata tagcaccaaa caaatttaat atatatatat atatatatat 660
atatatatat atatatatat atatatatat atatatatat atatatatat atatatatat 720
atcacatcag tctctgcaca aagtgcatcc tgggctgctt caattataaa gccccattca 780
ccacatttgc tagatagtcg aaaagcacca tcaatattga gcttcaggta tttttggttg 840
tgttgtggtt ggattgattc taatatatac caaatcaata taattcacta ccaaaatata 900
ccatagccat cacaacttta ttaattttgg tagcttaaga tggtatatat aataaccaat 960
taacaactga ttctaatttt actacggccc agtatgtacc aatacaaaac aacgagtatg 1020
ttttcttcca tcgtaatcgt acacagtaca aaaaaacctg gccagccttt cttgggctgg 1080
ggctctcttt cgaaaggtca caaaacgtac acggcagtaa cgccgcttcg ctgcgtgtta 1140
acggccacca accccgccgt gagcaaacgg catcagcttt ccacctcctc gatatctccg 1200
cggcgccgtc tggacccgcc ccctttccgt tcctttcttt ccttctcgcg tttgcgtggt 1260
ggggacggac tccccaaacc gcctctccct ctctcctttc tttatttgtc tatattctca 1320
ctgggcccca cccaccgcac ccctgggccc actcacgagt ccccccctcc ccacctataa 1380
ataccccacc ccctcctcgc ctctt 1405
Claims (1)
1.一种水稻启动子，其特征在于：所述水稻启动子的基因序列如SEQ ID NO.1所示。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111628276.0A CN114292845B (zh) | 2021-12-28 | 2021-12-28 | 一种强活性的水稻启动子序列及验证方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111628276.0A CN114292845B (zh) | 2021-12-28 | 2021-12-28 | 一种强活性的水稻启动子序列及验证方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114292845A CN114292845A (zh) | 2022-04-08 |
| CN114292845B true CN114292845B (zh) | 2024-02-23 |
Family
ID=80971080
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111628276.0A Active CN114292845B (zh) | 2021-12-28 | 2021-12-28 | 一种强活性的水稻启动子序列及验证方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114292845B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106754925A (zh) * | 2016-12-21 | 2017-05-31 | 复旦大学 | 一种脱落酸快速诱导启动子及其应用 |
| CN112522291A (zh) * | 2020-12-23 | 2021-03-19 | 福建省农业科学院水稻研究所 | 水稻OsSH3P2基因及其应用 |
-
2021
- 2021-12-28 CN CN202111628276.0A patent/CN114292845B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106754925A (zh) * | 2016-12-21 | 2017-05-31 | 复旦大学 | 一种脱落酸快速诱导启动子及其应用 |
| CN112522291A (zh) * | 2020-12-23 | 2021-03-19 | 福建省农业科学院水稻研究所 | 水稻OsSH3P2基因及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114292845A (zh) | 2022-04-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101230348B (zh) | 水稻非胚乳组织表达启动子(OsTSPⅠ)及其应用 | |
| US20010047525A1 (en) | Novel root-preferred promoter elements and methods of use | |
| CN106011141B (zh) | 岷江百合诱导型启动子及其应用 | |
| Mei et al. | Virus-induced gene silencing in maize with a foxtail mosaic virus vector | |
| CN113322257A (zh) | 一种三七诱导型启动子ppo1及其应用 | |
| CN112481260B (zh) | 一种具有启动子功能的落叶松dna分子、获取及鉴定方法 | |
| CN102220325A (zh) | 甘蓝型油菜BnPABP3启动子的制备方法及其应用 | |
| CN114292845B (zh) | 一种强活性的水稻启动子序列及验证方法 | |
| Dutt et al. | Comparative expression analysis of five caulimovirus promoters in citrus | |
| JP5804601B2 (ja) | 藻類を形質転換するために用いられる新規プロモーター | |
| CN112553197B (zh) | 一种有活性的落叶松启动子、获取及鉴定方法 | |
| CN102226180B (zh) | 甘蓝型油菜BnPABP5-3启动子的制备方法及其应用 | |
| CN109182337B (zh) | 大豆盐诱导型人工合成启动子ap2及其应用 | |
| CN114774420B (zh) | 一种水稻增强子及基于CRISPR/Cas9技术评估水稻增强子活性的方法 | |
| CN106399312B (zh) | 一种诱导启动子NtPCS1P及其应用 | |
| CN107099531B (zh) | 一种花药特异表达启动子pv4及其应用 | |
| WO2011059538A1 (en) | Viral promoter, truncations thereof, and methods of use | |
| CN114540354B (zh) | 含有榨菜ifl1启动子融合gus基因的表达载体及其应用 | |
| CN110029108B (zh) | 一种海藻内源全生活史组成型启动子及其应用 | |
| CN106893723B (zh) | 植物双向启动子及其应用 | |
| CN117511943A (zh) | 一种内含子dna及在增强基因表达能力中应用 | |
| CN112522265B (zh) | 一种具有增强子功能的落叶松dna分子、获取及鉴定方法 | |
| CN102146385B (zh) | 一种启动子BgIosP576、制备方法及应用 | |
| CN113736781A (zh) | 一种水稻内含子及其活性鉴定方法 | |
| CN116515889A (zh) | 一种植物叶组织特异性表达dna调控元件及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |