CN114276948B - 产己酸的赖氨酸芽孢杆菌及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于酿酒技术领域，具体涉及产己酸的赖氨酸芽孢杆菌及其用途。针对退化窖泥己酸菌数量少、产酸能力低，基础酒质量差的问题，本发明提供了产己酸的赖氨酸芽孢杆菌GJ‑1，保藏编号为：CCTCC NO：M 2020935。通过本发明方法培养的赖氨酸芽孢杆菌GJ‑1菌液，质量稳定，用于窖池养护，能有效提高窖泥中细菌数量和芽孢杆菌数量，使养护后的窖泥柔熟、泡气，且具有浓郁的窖泥复合香味；养护后的窖池所产基础酒，己酸乙酯、乙酸乙酯、总酯、己酸、丁酸含量显著增加，乳酸乙酯含量显著降低，酒体窖香浓郁、香味协调，酒质更佳。

Description

产己酸的赖氨酸芽孢杆菌及其用途

技术领域

本发明属于酿酒技术领域，具体涉及产己酸的赖氨酸芽孢杆菌及其用途。

背景技术

己酸菌是产己酸微生物的总称，由它代谢产生的己酸与发酵产生的乙醇生成己酸乙酯，是浓香型白酒主体香味成分，从而形成浓香型白酒的独特风味。己酸菌培养液可应用于浓香型白酒的人工窖泥培养、窖池养护、酯化液制作等，以改善和提高白酒质量。在浓香型白酒的生产中，要提高白酒的整体质量以及优质酒的产量，需适当提高白酒中己酸乙酯的含量，也就意味着要保证泥窖中己酸菌等功能菌的数量。但在实际生产中，窖泥使用一段时间后会老化，己酸菌等功能菌数量大量减少，严重影响着白酒的质量及优级品率。也有些新厂的窖池较新，与老窖相比，新窖窖泥中己酸菌等功能菌数量严重不足，很难生产出优质白酒。长期以来，如何提高以己酸菌为目标的有益窖泥功能微生物的数量，增强己酸菌代谢产生己酸的能力，一直是酒厂及科研单位探索和研究的方向。

发明内容

针对退化窖泥己酸菌数量少、产酸能力低，基础酒质量差的问题。本发明提供了产己酸的赖氨酸芽孢杆菌GJ-1。该赖氨酸芽孢杆菌GJ-1保藏编号为：CCTCC NO：M 2020935。保藏时间为：2020年12月21日，保藏中心为：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学保藏中心，邮编430072。

其中，上述产己酸的赖氨酸芽孢杆菌基于26S rRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

SEQ ID NO:1产己酸的赖氨酸芽孢杆菌基于26S rRNA的核苷酸序列。

GGCGGGGGGAGTAACAGGGGGGCACCTTCCCTTTTAGTTTGGGTTAATTCCGGGAACCCGGGGTTAATCCGGATTATTTTTTTTTGTTTCATGCCAAAAGATTAAAAGCCGCTTTTGGCTGTCGCTATAGGATGGGCCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGGCGAAAGCCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTAAGGGAAGAACAAGTACAGTAGTAACTGGCTGTACCTTGACGGTACCTTATTAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGTCCTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGGACTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGTGGAATTCCAAGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATTTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTTTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCGTTGACCACTGTAGAGATATAGTTTCCCCTTCGGGGGCAACGGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCATCATTTAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGATACAAACGGTTGCCAACTCGCGAGAGGGAGCTAATCCGATAAAGTCGTTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGCCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTGGAGCCAGCCGCCGAAGGTGGGATAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAAC。

其中，上述产己酸的赖氨酸芽孢杆菌的生物学特征为：菌落呈圆形、黄色、表面光滑，边缘齐整、湿润，革兰氏染色呈阴性，长杆状，兼性厌氧，菌体两端生有芽孢。

进一步的，上述产己酸的赖氨酸芽孢杆菌己酸产量达9.0g/L。

其中，上述产己酸的赖氨酸芽孢杆菌的生长条件为：发酵温度为30～35℃，发酵周期4～8d，接种量4～10％，装液量20～100％。

更进一步地，该赖氨酸芽孢杆菌发酵7d后，菌体数量达6.3×10⁸个/mL，己酸产量达9.0g/L，菌体活跃，长杆状，排列整齐。

本发明还提供了上述产己酸的赖氨酸芽孢杆菌的筛选鉴定方法，包括以下步骤：将窖泥依次富集培养、一级筛选、二级筛选后，即获得产己酸的赖氨酸芽孢杆菌。

其中，所述窖泥是从泸州老窖1573国宝窖池群0001号窖池中，采用五点法获得。

本发明还提供了上述产己酸的赖氨酸芽孢杆菌的培养方法，包括以下步骤：将赖氨酸芽孢杆菌依次经过活化、增殖培养、种子罐EAM液体培养基中培养、发酵罐EAM液体培养基中培养，即可。

本发明还提供了上述产己酸的赖氨酸芽孢杆菌在窖池养护中的用途。

有益效果：

1、本发明提供的经过富集培养、一级筛选、二级筛选的赖氨酸芽孢杆菌GJ-1保藏编号为：CCTCC NO：M 2020935，具有良好的产己酸性能，其在发酵温度为30～35℃，发酵周期4～8d，接种量4～10％，装液量20～100％时发酵性能良好，在最适条件下发酵7d后，菌体数量达6.3×10⁸个/mL，己酸产量达9.0g/L，菌体活跃，长杆状，排列整齐。

2、本发明提供的赖氨酸芽孢杆菌GJ-1通过采用茄子瓶、种子罐和发酵罐生产菌液，突出了茄子瓶高密度培养、种子罐放量培养和发酵罐规模化培养，从而极大地减小了菌种接种量、减少扩培次数，是提高生产效率、节约时间成本、人力成本和减少设备投入的有效途径。

3、通过本发明方法培养的赖氨酸芽孢杆菌GJ-1菌液，质量稳定，用于窖池养护，能有效提高窖泥中细菌数量和芽孢杆菌数量，使养护后的窖泥柔熟、泡气，且具有浓郁的窖泥复合香味；养护后的窖池所产基础酒，己酸乙酯、乙酸乙酯、总酯、己酸、丁酸含量显著增加，乳酸乙酯含量显著降低，酒体窖香浓郁、香味协调，酒质更佳。

本发明的产己酸的赖氨酸芽孢杆菌GJ-1的保藏编号为：CCTCC NO：M 2020935。于2020年12月21日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学保藏中心，邮编430072。分类命名为Lysinibacillussp.GJ-1。

附图说明

图1为本发明所述赖氨酸芽孢杆菌GJ-1基于26S rDNAD1/D2区序列扩增结果电泳图谱；其中M代表marker；1代表CCTCC NO：M 2020935；

图2为本发明所述赖氨酸芽孢杆菌GJ-1基于26S rDNA D1/D2区序列测序构建菌株系统发育树。

具体实施方式

针对退化窖泥己酸菌数量少、产酸能力低，基础酒质量差的问题。

A、本发明提供了产己酸的赖氨酸芽孢杆菌GJ-1。该赖氨酸芽孢杆菌GJ-1保藏编号为：CCTCC NO：M 2020935。保藏时间为：2020年12月21日，保藏中心为：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学保藏中心，邮编430072。

B、本发明还提供了上述产己酸的赖氨酸芽孢杆菌的筛选鉴定方法，包括以下步骤：将窖泥依次富集培养、一级筛选、二级筛选后，即获得产己酸的赖氨酸芽孢杆菌。

本发明提供的赖氨酸芽孢杆菌CCTCC NO：M 2020935经过富集培养、一级筛选、二级筛选，具有良好的产己酸性能。

其中，富集培养在乙醇醋酸钠培养基(Ethanol-acetate Medium，EAM)中进行，挑选出产气泡多、硫酸铜显色反应明显的试管进行二次富集培养。如此反复富集培养2～3次，挑选出己酸产量较高的富集培养液进行平板划线分离。

其中，一级筛选是将上述己酸产量较高的富集培养液依次稀释至10^-4、10^-5、10^-6，无菌条件下接种至盛有分离培养基的培养皿中，涂布均匀后倒置于35℃恒温培养箱中培养3d。选取菌落分散的平板，从中挑取边缘整齐、光滑微凸的圆点型菌落进行平板划线分离，反复分离3～5次得到纯菌种。将分离出的菌种进行革兰氏染色以观察菌体形态，选取呈梭状杆菌的菌落进行复筛。

其中，二级筛选是在乙醇醋酸钠培养基(Ethanol-acetate Medium，EAM)中进行。将初筛菌种活化后转接至EAM培养基中，35℃恒温培养7d，培养结束后用光学显微镜统计活菌数量并观察菌体状态，用气相色谱仪定量检测己酸产量。选取菌体生长旺盛，己酸产量高的菌种为优良己酸菌菌种。

进一步的，二级筛选镜检计数菌体数量在1.0×10⁸个/mL以上，己酸产量在8.0g/L以上。

进一步的，EAM基成分按重量百分比计包括：酵母膏0.1～1.0％、无水醋酸钠0.5～2.0％、硫酸铵0.01～0.1％、磷酸氢二钾0.01～0.1％、七水硫酸镁0.01～0.1％、碳酸钙0～2.0％，95％(V/V)食用酒精2％(灭菌后使用前加入)，余量为水。

其中，EAM基的pH6.8～7.0，121℃湿热灭菌20min。

其中，一级筛选培养基为梭菌增殖培养基，其成分按重量百分比计包括：酵母膏0.1～1.0％、牛肉浸膏0.5～2.0％、胰蛋白胨0.5～2.0％、葡萄糖0.1～2.0％、可溶性淀粉0.1～1.0％、氯化钠0.2～1.0％、无水醋酸钠0.1～1.0％、半胱氨酸盐酸盐0.01～0.1％、琼脂粉1～2.0％，余量为水。调节pH 7.1±0.1，121℃湿热灭菌20min。

本发明获得的赖氨酸芽孢杆菌CCTCC NO：M 2020935菌落呈圆形、黄色、表面光滑，边缘齐整、湿润，革兰氏染色呈阴性，长杆状，兼性厌氧，菌体两端生有芽孢。

本发明获得的赖氨酸芽孢杆菌CCTCC NO：M 2020935在35℃密封发酵7d后，菌体数量达2.4×10⁸个/mL，己酸产量达8.5g/L，菌体活跃，长杆状，排列整齐。

本发明获得的赖氨酸芽孢杆菌CCTCC NO：M 2020935在EAM培养基上进行单因素实验，结果表明：该菌株在发酵温度为30～35℃，发酵周期4～8d，接种量4～10％，装液量20～100％时发酵性能良好，在最适条件下发酵7d后，菌体数量达6.3×10⁸个/mL，己酸产量达9.0g/L，菌体活跃，长杆状，排列整齐。

菌种鉴定：将获得的赖氨酸芽孢杆菌菌株寄送生工生物(上海)股份有限公司进行测序，将测序结果在NCBI网站上进行BLAST序列对比，确定为赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)，命名为国窖1号(GJ-1)。

C、本发明还提供了上述产己酸的赖氨酸芽孢杆菌的培养方法，包括以下步骤：将赖氨酸芽孢杆菌依次经过活化、增殖培养、种子罐EAM液体培养基中培养、发酵罐EAM液体培养基中培养，保证最终菌液浓度在1.0×10⁸个/mL以上时用于窖池养护。

其中，上述产己酸的赖氨酸芽孢杆菌的培养方法，包括以下步骤：

a、赖氨酸芽孢杆菌GJ-1的活化、增殖培养：

将已筛选出的赖氨酸芽孢杆菌GJ-1菌种于无菌条件下接种至试管斜面梭菌增殖培养基中，32～38℃恒温培养2～3d进行活化，再接种至茄子瓶斜面梭菌增殖培养基中，32～38℃恒温培养2～3d，用无菌水洗下茄子瓶斜面培养基上的菌体，制成菌悬液，菌体数量初始浓度≥1.0×10¹⁰个/mL。

b、赖氨酸芽孢杆菌GJ-1种子罐培养：

将步骤a得到的菌悬液以1～10％接种量接种至EAM液体培养基的种子罐中，32～38℃恒温培养5～10d，制得种子罐赖氨酸芽孢杆菌GJ-1菌液，菌体浓度≥1.0×10⁸个/mL。

c、赖氨酸芽孢杆菌GJ-1发酵罐扩大培养：

将步骤b得到的菌液以1～10％接种量接种至EAM液体培养基的发酵罐中，32～38℃恒温培养5～10d，制得发酵罐赖氨酸芽孢杆菌GJ-1菌液，菌体浓度≥1.0×10⁸个/mL。

其中，菌体个数分析方法为血球计数板法。

进一步地，赖氨酸芽孢杆菌GJ-1菌液在使用前需满足色泽：淡黄色或浅黄色；气味：香气纯正，浓郁持久，具有己酸特有的气味；形态：淡黄色或浅黄色浊液。

D、本发明还提供了上述产己酸的赖氨酸芽孢杆菌在窖池养护中的用途。

所述赖氨酸芽孢杆菌GJ-1在窖池养护中的用途中的具体使用方法为：用直径1cm的钉子在窖壁上均匀打孔，角度30～45°，深2cm，间隔10～20cm，每口窖池喷洒10kg赖氨酸芽孢杆菌GJ-1和5kg尾水的混合溶液。将孔抹平，糟醅入窖发酵。

下面将通过具体实施例对本发明的具体实施方式做进一步的解释说明，但不表示将本发明的保护范围限制在实施例所述范围内。

若未特别指明，实施例中所用的化学试剂均为常规市售试剂，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

为了便于表述清楚，以下具体实施例中涉及的赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillussp.)命名为国窖1号GJ-1。

实施例1赖氨酸芽孢杆菌GJ-1的筛选及鉴定

取样：从泸州老窖1573国宝窖池群0001号窖池中，采用五点法取窖泥。

富集培养：将窖泥样品充分混匀，取30g窖泥溶解在50mL无菌水中，置于80～85℃恒温水浴锅中10～20min，冷却后加入450mL EAM培养基中，于30～35℃培养7～10d。挑选出产气泡多、硫酸铜显色反应明显的试管进行二次富集培养，如此反复富集培养3次，挑选出己酸产量较高的富集培养液进行一级筛选。

一级筛选：将富集好的菌悬液稀释6个梯度，取25微升涂布平板，倒置于35℃恒温培养箱中培养3d。选取菌落分散的平板，从中挑取边缘整齐、光滑微凸的圆点型菌落进行平板划线分离，反复分离5次得到纯菌种28株。将分离出的菌种进行革兰氏染色以观察菌体形态，选取呈梭状杆菌的菌落进行复筛。

二级筛选：将一级筛选菌种活化后转接至EAM培养基中，35℃恒温培养7d，培养结束后用光学显微镜统计活菌数量并观察菌体状态，用气相色谱仪定量检测己酸产量。选取菌体生长旺盛，己酸产量高的1株进行菌种鉴定和扩大培养。

EAM基成分按重量百分比计为酵母膏0.1～1.0％、无水醋酸钠0.5～2.0％、硫酸铵0.01～0.1％、磷酸氢二钾0.01～0.1％、七水硫酸镁0.01～0.1％、碳酸钙0～2.0％，95％(V/V)食用酒精2％(灭菌后使用前加入)，余量为水。pH为6.8～7.0，121℃湿热灭菌20min。

一级筛选培养基为梭菌增殖培养基，成分按重量百分比计，酵母膏0.1～1.0％，牛肉浸膏0.5～2.0％，胰蛋白胨0.5～2.0％、葡萄糖0.1～2.0％，可溶性淀粉0.1～1.0％，氯化钠0.2～1.0％，无水醋酸钠0.1～1.0％，半胱氨酸盐酸盐0.01～0.1％，琼脂粉1～2.0％，余量为水。调节pH7.1±0.1，121℃湿热灭菌20min。

菌种鉴定：将菌株寄送生工生物(上海)股份有限公司进行测序，将测序结果在NCBI网站上进行BLAST序列对比，确定为赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)，命名为国窖1号(GJ-1)，于2020年12月21日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址为湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学保藏中心，邮编430072。

实施例2赖氨酸芽孢杆菌GJ-1的扩大培养

a、赖氨酸芽孢杆菌GJ-1的活化、增殖培养

将已筛选出的赖氨酸芽孢杆菌GJ-1菌种于无菌条件下接种至试管斜面梭菌增殖培养基中，32～38℃恒温培养2～3d进行活化，再接种至茄子瓶斜面梭菌增殖培养基中，32～38℃恒温培养2～3d，用无菌水洗下茄子瓶斜面培养基上的菌体，制成菌悬液，使菌体数量初始浓度≥1.0×10¹⁰个/mL。

b、赖氨酸芽孢杆菌GJ-1种子罐培养

将步骤a得到的菌悬液以1～10％接种量接种至EAM液体培养基的种子罐中，32～38℃恒温培养5～10d，制得种子罐赖氨酸芽孢杆菌GJ-1菌液，菌体浓度≥1.0×10⁸个/mL。

c、赖氨酸芽孢杆菌GJ-1发酵罐扩大培养

将步骤b得到的菌液以1～10％接种量接种至EAM液体培养基的发酵罐中，32～38℃恒温培养5～10d，制得发酵罐赖氨酸芽孢杆菌GJ-1菌液，菌体浓度≥1.0×10⁸个/mL。

上述EAM基成分按重量百分比计，酵母膏0.1～1.0％、无水醋酸钠0.5～2.0％、硫酸铵0.01～0.1％、磷酸氢二钾0.01～0.1％、七水硫酸镁0.01～0.1％、碳酸钙0～2.0％，95％(V/V)食用酒精2％(灭菌后使用前加入)，余量为水。pH6.8～7.0，121℃湿热灭菌20min。

梭菌增殖培养基成分按重量百分比计，酵母膏0.1～1.0％，牛肉浸膏0.5～2.0％，胰蛋白胨0.5～2.0％、葡萄糖0.1～2.0％，可溶性淀粉0.1～1.0％，氯化钠0.2～1.0％，无水醋酸钠0.1～1.0％，半胱氨酸盐酸盐0.01～0.1％，琼脂粉1～2.0％，余量为水。调节pH7.1±0.1，121℃湿热灭菌20min。

赖氨酸芽孢杆菌GJ-1菌液培养后使用前需要满足的鉴定条件如表1所示：

表1赖氨酸芽孢杆菌GJ-1菌液培养后使用前需要满足的鉴定条件

菌体个数分析方法为血球计数板法。

实施例3赖氨酸芽孢杆菌GJ-1菌液应用于窖池养护

所述赖氨酸芽孢杆菌GJ-1养护窖池的方法，是用直径1cm的钉子在窖壁上均匀打孔，角度30～45°，深2cm，间隔10～20cm，每口窖池喷洒10kg赖氨酸芽孢杆菌GJ-1和5kg尾水的混合溶液。将孔抹平，糟醅入窖发酵60d。

表2赖氨酸芽孢杆菌GJ-1菌液应用于窖池养护的方式

窖池编号	1#～3#	4#～6#
			方式	用菌液养护	未养护

按照表2以上两种方案，1#～3#窖池采用赖氨酸芽孢杆菌菌液养护后发酵糟醅产酒，4#～6#未进行养护作对照，发酵60d后对比窖泥性质及基础酒产质量，表3数据为窖池连续开展3排养护后的数据。

表3窖泥性质对比

注：窖泥微生物计数方法为稀释平板法。

从表3可知，采用赖氨酸芽孢杆菌菌液连续养护窖池3排后，窖泥中细菌数量和芽孢杆菌数量显著大于未进行养护窖泥，养护后的窖泥柔熟、泡气，且具有浓郁的窖泥复合香味。

表4基础酒产质量对比

从表4可知，采用赖氨酸芽孢杆菌菌液连续养护窖池3排后，能够提高出酒率；显著增加浓香型白酒中己酸乙酯、乙酸乙酯、总酯、己酸、丁酸含量，降低乳酸乙酯含量；尝评结果表明，通过菌液养护，窖池产酒窖香浓郁、香味协调，酒质更佳。

序列表

<110> 泸州老窖股份有限公司

泸州品创科技有限公司

<120> 高产己酸的赖氨酸芽孢杆菌及其用途

<130> A210819K（序）

<141> 2021-11-05

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1407

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

ggcgggggga gtaacagggg ggcaccttcc cttttagttt gggttaattc cgggaacccg 60

gggttaatcc ggattatttt tttttgtttc atgccaaaag attaaaagcc gcttttggct 120

gtcgctatag gatgggcccg cggcgcatta gctagttggt gaggtaacgg ctcaccaagg 180

cgacgatgcg tagccgacct gagagggtga tcggccacac tgggactgag acacggccca 240

gactcctacg ggaggcagca gtagggaatc ttccacaatg ggcgaaagcc tgatggagca 300

acgccgcgtg agtgaagaag gttttcggat cgtaaaactc tgttgtaagg gaagaacaag 360

tacagtagta actggctgta ccttgacggt accttattag aaagccacgg ctaactacgt 420

gccagcagcc gcggtaatac gtaggtggca agcgttgtcc ggaattattg ggcgtaaagc 480

gcgcgcaggc ggtcctttaa gtctgatgtg aaagcccacg gctcaaccgt ggagggtcat 540

tggaaactgg gggacttgag tgcagaagag gaaagtggaa ttccaagtgt agcggtgaaa 600

tgcgtagaga tttggaggaa caccagtggc gaaggcgact ttctggtctg taactgacgc 660

tgaggcgcga aagcgtgggg agcaaacagg attagatacc ctggtagtcc acgccgtaaa 720

cgatgagtgc taagtgttag ggggtttccg ccccttagtg ctgcagctaa cgcattaagc 780

actccgcctg gggagtacgg tcgcaagact gaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca 840

caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc aggtcttgac 900

atcccgttga ccactgtaga gatatagttt ccccttcggg ggcaacggtg acaggtggtg 960

catggttgtc gtcagctcgt gtcgtgagat gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc 1020

cttgatctta gttgccatca tttagttggg cactctaagg tgactgccgg tgacaaaccg 1080

gaggaaggtg gggatgacgt caaatcatca tgccccttat gacctgggct acacacgtgc 1140

tacaatggac gatacaaacg gttgccaact cgcgagaggg agctaatccg ataaagtcgt 1200

tctcagttcg gattgtaggc tgcaactcgc ctacatgaag ccggaatcgc tagtaatcgc 1260

ggatcagcat gccgcggtga atacgttccc gggccttgta cacaccgccc gtcacaccac 1320

gagagtttgt aacacccgaa gtcggtgagg taaccttttg gagccagccg ccgaaggtgg 1380

gatagatgat tggggtgaag tcgtaac 1407

Claims (3)

1.产己酸的赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus sp.)GJ-1，其特征在于：保藏编号为：CCTCCNO：M 2020935。

2.权利要求1所述的产己酸的赖氨酸芽孢杆菌的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：将所述赖氨酸芽孢杆菌依次经过活化、增殖培养、种子罐EAM液体培养基中培养、发酵罐EAM液体培养基中培养，即可；

所述EAM基液体培养基成分按重量百分比计为：酵母膏0.1～1.0％、无水醋酸钠0.5～2.0％、硫酸铵0.01～0.1％、磷酸氢二钾0.01～0.1％、七水硫酸镁0.01～0.1％、碳酸钙0～2.0％，95％(V/V)食用酒精2％，余量为水；pH6.8～7.0，121℃湿热灭菌20min。

3.权利要求1所述产己酸的赖氨酸芽孢杆菌在窖池养护中的用途。

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