CN108102965A

CN108102965A - 复合己酸菌液扩大培养方法

Info

Publication number: CN108102965A
Application number: CN201810011677.3A
Authority: CN
Inventors: 刘淼; 林锋; 张宿义; 秦辉; 杨艳; 邱川峰; 李德林; 罗杰; 康承霞; 徐琼; 王加彬
Original assignee: Luzhou Pinchuang Technology Co Ltd
Current assignee: Luzhou Pinchuang Technology Co Ltd
Priority date: 2018-01-05
Filing date: 2018-01-05
Publication date: 2018-06-01

Abstract

本发明属于酿酒技术领域，具体涉及一种复合己酸菌液扩大培养方法。针对现有己酸菌培养存在的培养周期冗长、菌群结构单一、己酸产量低、规模化和机械化程度低、易染杂菌、质量不稳定等问题，本发明提供了一种复合己酸菌液扩大培养方法，包括以下步骤：a、己酸菌种活化、增殖培养；b、己酸菌扩大培养；c、窖泥富集液扩大培养；d、混合发酵培养；e、混合扩大培养。本发明通过采用纯己酸菌种和优质窖泥富集液混合培养的方式，得到菌群丰富的复合己酸菌液，质量稳定，以己酸菌为优势菌种，具有很强的产己酸能力；并扩大了培养量，减少了培养步骤，简化了操作过程，缩短了培养周期，从而提高了生产效率、节约了生产成本。

Description

复合己酸菌液扩大培养方法

技术领域

本发明属于酿酒技术领域，具体涉及一种复合己酸菌液扩大培养方法。

背景技术

己酸菌是一种重要的窖泥功能菌，其代谢产生的己酸和酵母菌产生的乙醇发生酯化反应，生成的己酸乙酯是决定浓香型白酒质量的关键香味物质，故己酸菌液被广泛应用于窖池养护、酯化液生产和人工窖泥培养中。

传统生产己酸菌液的方法有纯种己酸菌液体培养和窖泥富集培养。纯种己酸菌液体培养具有接种量小、菌体生长繁殖快、己酸产量高的优点，但是培养时需在试管、三角瓶、卡氏罐、种子罐和发酵罐中逐级放大培养，培养周期冗长，且对无菌操作技术和专业培养设备要求较高，加之纯种己酸菌单独运用还存在菌群结构单一的问题，故己酸菌纯种培养常见于科研实验中，少有规模化生产；窖泥富集培养是一种粗放式生产复合己酸菌液的方法，其优点是培养液中菌群结构丰富，富含己酸菌、丁酸菌、醋酸菌和乳酸菌等，能最大化地保留窖泥微生物的多样性，而且对专业培养设备和无菌操作技术要求较低，是酒企生产复合己酸菌液的常用方法，但是窖泥富集培养存在着己酸菌的生长优势不突出，己酸产量较低的问题，加上传统培养大多采用陶坛或浅池作为培养容器，规模化和机械化程度低，易染杂菌，而且接种量大、培养周期长、质量不稳定。

发明内容

本发明要解决的技术问题为：现有己酸菌培养存在的培养周期冗长、菌群结构单一、己酸产量低、规模化和机械化程度低、易染杂菌、质量不稳定等问题。

本发明解决上述技术问题的技术方案为：提供一种复合己酸菌液扩大培养方法。该方法包括以下步骤：

a、己酸菌种活化、增殖培养

将纯己酸菌种于无菌条件下接种至试管斜面培养基A中，32～38℃恒温培养2～3d进行活化，再接种至茄子瓶斜面培养基A中，32～38℃恒温培养2～3d，用无菌水洗下茄子瓶斜面培养基上的己酸菌，制成己酸菌悬液；

b、己酸菌扩大培养

将步骤a得到的己酸菌悬液接种至培养基B的种子罐中，32～38℃恒温培养5～10d，制得己酸菌种子液；

c、窖泥富集液扩大培养

取窖泥富集液，80～85℃恒温水浴10～20min，冷却后接种至培养基B的种子罐中，32～38℃恒温培养5～10d，制得窖泥富集种子液；

d、混合发酵培养

将步骤b得到的己酸菌种子液以1～10％接种量和步骤c得到的窖泥富集种子液以1～10％接种量接种至盛有复合有机培养基C的发酵罐中，32～38℃恒温培养5～10d，制得复合己酸菌液。

其中，上述复合己酸菌液扩大培养方法中，步骤a中所述的纯己酸菌种为纺锤形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis)。进一步的，所述的纺锤形赖氨酸芽孢杆菌购至CGMCC编号为1.10176的纺锤形赖氨酸芽孢杆菌。

其中，上述复合己酸菌液扩大培养方法中，步骤a中所述的培养基A为梭菌增殖培养基，其组成为：按重量百分比计，酵母膏0.1～1.0％，牛肉浸膏0.5～2.0％，胰蛋白胨0.5～2.0％、葡萄糖0.1～2.0％，可溶性淀粉0.1～1.0％，氯化钠0.2～1.0％，无水醋酸钠0.1～1.0％，半胱氨酸盐酸盐0.01～0.1％，琼脂粉1～2.0％，余量为水。

优选的，上述复合己酸菌液扩大培养方法中，步骤a中所述的培养基A的pH值为7.0～7.2。其配制方法为：按重量百分比称取原料，调整pH值为7.0～7.2，于121℃，0.1MPa下灭菌20min制备而成。

其中，上述复合己酸菌液扩大培养方法中，步骤b所述接种己酸菌悬液的量满足种子罐培养液中己酸菌初始浓度≥2.0×10⁶个/mL。

其中，上述复合己酸菌液扩大培养方法中，步骤c中所述的窖泥富集液为从连续使用400余年的老窖池窖泥中，经过3次以上富集培养制得的窖泥富集液。

所述的富集培养条件为80～85℃恒温水浴10～20min，冷却后以1～10％的接种量接种至培养基B中，32～38℃恒温培养5～10d。

进一步的，所述的窖泥富集液己酸菌数量≥10⁸个/mL，富集液己酸含量≥3g/L。除富含己酸菌外，还含有多种窖泥功能菌。

其中，上述复合己酸菌液扩大培养方法中，步骤b、c中所述的培养基B为含有乙醇醋酸钠的培养基。其组成为：按重量百分比计，酵母膏0.1～1.0％、无水醋酸钠0.5～2.0％、硫酸铵0.01～0.1％、磷酸氢二钾0.01～0.1％、七水硫酸镁0.01～0.1％、碳酸钙0～2.0％，95％(V/V)食用酒精2％，余量为水。

进一步的，上述复合己酸菌液扩大培养方法中，所述的培养基B的配制方法为：按重量比称取原料，热水充分溶解混匀，打开种子罐进料阀和人孔盖，并用热水泵将培养基泵入种子罐中，关闭进料阀和人孔盖，开启种子罐表面冷却水循环，使种子罐内培养基快速降温至35℃，打开进料阀，泵入2份95％(V/V)食用酒精，关闭进料阀并开启搅拌装置和保温装置。

其中，上述复合己酸菌液扩大培养方法中，步骤d中所述的复合有机培养基C的组成为：按重量百分比计，酒糟发酵液20％、酵母膏0.2％、无水醋酸钠0.5％，95％(V/V)食用酒精2％，余量为水。

进一步的，上述复合有机培养基C的配制方法为：按重量比称取原料，加热水溶解，混匀，打开发酵罐进料阀和人孔盖，并用热水泵将培养基泵入发酵罐中，补充经加热至沸腾的热水，关闭进料阀和人孔盖，开启发酵罐表面冷却水循环和搅拌装置，使发酵罐内复合有机培养基混合均匀并降温至35℃，打开进料阀，泵入2份95％(V/V)食用酒精，关闭进料阀，开启保温装置。

进一步的，上述复合己酸菌液扩大培养方法中，所述酒糟发酵液制备方法为：按质量比称取10～30％酒糟、5～20％黄水、1～5％大曲粉、1～5％豆粕粉、余量为冷却热水；将上述原料置于不锈钢罐中，密封发酵3～10d后过滤，用氢氧化钠溶液调节pH至6.0～7.5，即得酒糟发酵液。

其中，上述复合己酸菌液扩大培养方法中，步骤a中所述的培养时间为3d，培养温度为35℃。

其中，上述复合己酸菌液扩大培养方法中，步骤b、c、d中所述的培养时间为5d，培养温度为35℃。

其中，上述复合己酸菌液扩大培养方法中，步骤c中所述窖泥富集液接种量为10％，恒温水浴温度为85℃，水浴时间为10min。

其中，上述复合己酸菌液扩大培养方法中，步骤d中所述的己酸菌种子液接种量为2％、窖泥富集液接种量为2％。

其中，上述复合己酸菌液扩大培养方法中，还包括步骤e：将步骤d的复合己酸菌液以1～20％的接种量转接至盛有复合有机培养基的发酵罐中，32～38℃恒温培养5～10d，得到扩大培养的复合己酸菌液。

进一步的，上述复合己酸菌液扩大培养方法中，步骤e中所述的复合己酸菌液接种量为10％。

本发明的有益效果为：

(1)本发明通过采用茄子瓶、种子罐和发酵罐生产复合己酸菌液，突出了茄子瓶高密度培养、种子罐放量培养和发酵罐规模化培养，从而极大地减小了菌种接种量、减少了扩培次数、缩短了培养周期并扩大了培养量，是提高生产效率、节约时间成本、人力成本和减少设备投入的有效途径。

(2)本发明以酒糟、黄水、大曲粉为原料配制培养基，充分利用酿酒过程中产生的副产物，减少了废水、废渣的排放，是实现清洁生产和节能减排的有效途径。

(3)通过本发明方法培养的复合己酸菌液，质量稳定，以己酸菌为优势菌种，具有很强的产己酸能力，同时又具有丰富的菌群结构，并且大幅度的扩大了培养量，有针对性的减少了培养步骤，简化了操作过程，缩短了培养周期，从而提高了生产效率、节约了生产成本。制备完成后的复合己酸菌液应用于浓香型白酒酯化液生产，提高了酯化液风味物质的含量；应用于人工窖泥培养，加速了窖泥的老熟，提高了新窖的出酒率和优质率。

具体实施方式

本发明提供了一种复合己酸菌液扩大培养方法，包括以下步骤：

a、己酸菌种活化：将保藏的己酸菌种于无菌条件下接种至试管斜面培养基中，32～38℃恒温培养2～3d；

b、己酸菌增殖培养：将活化后的己酸菌种接种至茄子瓶斜面培养基中，32～38℃恒温培养2～3d。用无菌水洗下茄子瓶斜面培养基上的己酸菌，制成己酸菌悬液；

c、己酸菌扩大培养：将己酸菌悬液接种至盛有乙醇醋酸钠培养基的种子罐中，32～38℃恒温培养5～10d，制得己酸菌种子液；

d、窖泥富集液扩大培养：取保藏的窖泥富集液，80～85℃恒温水浴10～20min，冷却后接种至盛有乙醇醋酸钠培养基的种子罐中，32～38℃恒温培养5～10d，制得窖泥富集种子液。

其中，上述复合己酸菌液扩大培养方法中，还包括步骤e，将复合己酸菌液以1～20％的接种量转接至盛有复合有机培养基的发酵罐中，32～38℃恒温培养5～10d，得到扩大培养的复合己酸菌液。

本发明是一种采用茄子瓶斜面和种子罐快速增殖、放量培养纯种己酸菌并混合窖泥富集液，采用自动化和专业化程度高的不锈钢发酵罐混合发酵的复合己酸菌液扩大培养方法，本发明方法采用茄子瓶固体斜面进行己酸菌增殖培养和种子罐放量培养，精简了培养步骤，极大地缩短了培养周期，解决了纯种己酸菌培养传代次数多、周期冗长、操作繁琐、易染杂菌等问题；采用管道连接的不锈钢发酵罐作为培养容器，实现了复合己酸菌液的规模化、机械化生产，既降低了劳动强度又保证了培养条件的稳定，解决了目前生产的复合己酸菌液规模化和机械化程度低，培养设备简陋导致产品质量不稳定的问题；采用纯种己酸菌和窖泥富集液混合发酵，既突出了己酸菌的生长优势，又最大化地保留了窖泥微生物的多样性，解决了目前生产的复合己酸菌液接种量大、生产周期长、己酸菌生长优势不突出、菌种菌群结构单一的问题。

下面将通过实施例对本发明的具体实施方式做进一步的解释说明，但不表示将本发明的保护范围限制在实施例所述范围内。实施例中所用的己酸菌为纺锤形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis)，所述的纺锤形赖氨酸芽孢杆菌购至CGMCC编号为1.10176的纺锤形赖氨酸芽孢杆菌。其余原料均为普通市购产品。

实施例1用本发明方法对复合己酸菌液扩大培养

将经过活化、增殖、扩大培养的己酸菌以2％的接种量和2％经种子罐扩大培养的窖泥富集液进行混合发酵培养，制得复合己酸菌液。己酸菌活化、增殖采用梭状菌增殖培养基，己酸菌和窖泥功能菌种子罐培养采用乙醇醋酸钠培养基，混合发酵采用复合有机培养基。

己酸菌种活化方法为：取5支规格为15mm×150mm的试管，用梭状菌增殖培养基制成试管斜面，于无菌条件下用接种环挑取保藏的试管菌种，“Z”字型划线接种后置于35℃恒温培养箱中培养3d。培养结束后每支试管用10mL无菌水将斜面上的菌体洗下，得到己酸菌活化菌液50mL。

己酸菌增殖培养方法为：取20个总容量为1000mL的茄子瓶，用梭状菌增殖培养基制成茄子瓶斜面，无菌条件下用无菌移液管接种2mL己酸菌活化菌液，并置于35℃恒温培养箱中培养3d。培养结束后每个茄子瓶用50mL无菌水洗菌，得到己酸菌悬液1000mL。

所述己酸菌种子罐培养量为600kg，培养方法为：A、检查种子罐，保证种子罐无漏水、漏电、漏气问题，并用热水将种子罐清洗干净。B、以总量600kg按比例称取乙醇醋酸钠培养基除食用酒精外的其余组分并加入到配料槽中，用加热至沸腾的热水溶解后泵入种子罐中，开启冷水循环系统，使种子罐中培养基降温至35℃，再泵入12kg95％(V/V)食用酒精。C、将1000mL己酸菌悬液加入种子罐中，关闭进料阀和人孔盖，开启搅拌装置和保温装置，于35℃恒温培养5d。

所述窖泥富集液种子罐培养量为700kg，培养方法为：A、检查种子罐，保证种子罐无漏水、漏电、漏气问题，并用热水将种子罐清洗干净。B、以总量630kg按比例称取乙醇醋酸钠培养基除食用酒精外的其余组分并加入到配料槽中，用加热至沸腾的热水溶解后泵入种子罐中，开启冷水循环系统，使种子罐中培养基降温至35℃，再泵入12.6kg95％(V/V)食用酒精。C、取70kg保藏于不锈钢密封容器中的窖泥富集液，于85℃恒温水浴槽中进行热处理10min。D、将热处理后的窖泥富集液泵入种子罐中，关闭进料阀和人孔盖，开启搅拌装置和保温装置，于35℃恒温培养5d。

所述窖泥富集液种子罐培养液共700kg，其中600kg用于混合培养，100kg保藏于不锈钢密封容器中。

所述混合发酵总培养量为30t，采用3个10t不锈钢发酵罐培养。培养方法为：A、检查发酵罐，保证发酵罐无漏水、漏电、漏气问题，并用热水将发酵罐清洗干净。B、每个发酵罐分别以总量9.6t按比例称取复合有机培养基除食用酒精外的各组分并加入到配料槽中，用适量加热至沸腾的热水溶解后泵入发酵罐中，补充加热至沸腾的热水至培养基总量为9.6t，开启冷水循环系统，使发酵罐中培养基降温至35℃后泵入192kg95％(V/V)食用酒精。C、每个发酵罐分别泵入200kg己酸菌种子液和200kg窖泥富集液，关闭进料阀和人孔盖，开启搅拌装置和保温装置，于35℃恒温培养5d。

发酵期结束，检测所制得的复合己酸菌液各指标为：颜色：浅黄色，气味：浓郁的复合己酸香味，芽孢杆菌数量：1.67×10⁸个/mL，菌体形态：以短杆菌和中杆菌为主，菌体健壮，活跃度高，总酸：2.8g/L(以己酸计)，pH：5.1，己酸产量：336mg/100mL，丁酸产量：225mg/100mL。

实施例2用本发明方法对复合己酸菌液扩大培养

将经过活化、增殖、扩大培养的己酸菌以2％的接种量和2％经种子罐扩大培养的窖泥富集液进行混合发酵培养，发酵结束将发酵液以10％接种量接种至复合有机培养基中进行连续培养。己酸菌活化、增殖采用梭状菌增殖培养基，己酸菌和窖泥功能菌种子罐培养采用乙醇醋酸钠培养基，混合发酵和连续培养采用复合有机培养基。

在本实施例中，所述己酸菌种活化方法为：取5支规格为15mm×150mm的试管，用梭状菌增殖培养基制成试管斜面，于无菌条件下用接种环挑取保藏的试管菌种，“Z”字型划线接种后置于35℃恒温培养箱中培养3d。培养结束后每支试管用10mL无菌水将斜面上的菌体洗下，得到己酸菌活化菌液50mL。

在本实施例中，所述己酸菌增殖培养方法为：取20个总容量为1000mL的茄子瓶，用梭状菌增殖培养基制成茄子瓶斜面，无菌条件下用无菌移液管接种2mL己酸菌活化菌液，并置于35℃恒温培养箱中培养3d。培养结束后每个茄子瓶用50mL无菌水洗菌，得到己酸菌悬液1000mL。

在本实施例中，所述己酸菌种子罐培养量为600kg，培养方法为：A、检查种子罐，保证种子罐无漏水、漏电、漏气问题，并用热水将种子罐清洗干净。B、以总量600kg按比例称取乙醇醋酸钠培养基除食用酒精外的其余组分并加入到配料槽中，用加热至沸腾的热水溶解后泵入种子罐中，开启冷水循环系统，使种子罐中培养基降温至35℃，再泵入12kg95％(V/V)食用酒精。C、将1000mL己酸菌悬液加入种子罐中，关闭进料阀和人孔盖，开启搅拌装置和保温装置，于35℃恒温培养5d。

在本实施例中，所述窖泥富集液种子罐培养量为700kg，培养方法为：A、检查种子罐，保证种子罐无漏水、漏电、漏气问题，并用热水将种子罐清洗干净。B、以总量630kg按比例称取乙醇醋酸钠培养基除食用酒精外的其余组分并加入到配料槽中，用加热至沸腾的热水溶解后泵入种子罐中，开启冷水循环系统，使种子罐中培养基降温至35℃，再泵入12.6kg95％(V/V)食用酒精。C、取70kg保藏于不锈钢密封容器中的窖泥富集液，于85℃恒温水浴槽中进行热处理10min。D、将热处理后的窖泥富集液泵入种子罐中，关闭进料阀和人孔盖，开启搅拌装置和保温装置，于35℃恒温培养5d。

在本实施例中，所述窖泥富集液种子罐培养液共700kg，其中600kg用于混合培养，100kg保藏于不锈钢密封容器中。

在本实施例中，所述混合发酵总培养量为30t，采用3个10t不锈钢发酵罐培养。培养方法为：A、检查发酵罐，保证发酵罐无漏水、漏电、漏气问题，并用热水将发酵罐清洗干净。B、每个发酵罐分别以总量9.6t按比例称取复合有机培养基除食用酒精外的各组分并加入到配料槽中，用适量加热至沸腾的热水溶解后泵入发酵罐中，补充加热至沸腾的热水至培养基总量为9.6t，开启冷水循环系统，使发酵罐中培养基降温至35℃后泵入192kg95％(V/V)食用酒精。C、每个发酵罐分别泵入200kg己酸菌种子液和200kg窖泥富集液，关闭进料阀和人孔盖，开启搅拌装置和保温装置，于35℃恒温培养5d。

在本实施例中，所述连续培养总培养量为30t，采用3个10t不锈钢发酵罐培养。培养方法为：A、检查发酵罐，保证发酵罐无漏水、漏电、漏气问题，并用热水将发酵罐清洗干净。B、每个发酵罐分别以总量9.0t按比例称取复合有机培养基除食用酒精外的各组分并加入到配料槽中，用适量85℃热水溶解后泵入发酵罐中，补充热水至培养基总量为9.0t，开启冷水循环系统，使发酵罐中培养基降温至35℃后泵入180kg95％(V/V)食用酒精。C、每个发酵罐分别泵入1.0t混合发酵液，关闭进料阀和人孔盖，开启搅拌装置和保温装置，于35℃恒温培养5d。

发酵期结束，检测所制得的复合己酸菌液各指标为：颜色：浅黄色，气味：浓郁的复合己酸香味，芽孢杆菌数量：1.83×10⁸个/mL，菌体形态：以短杆菌和中杆菌为主，菌体健壮，活跃度高，总酸：3.3g/L(以己酸计)，pH：4.9，己酸产量：387mg/100mL，丁酸产量：268mg/100mL。

效果验证

将实施例2生产的复合己酸菌液用于人工窖泥培养，并和单独使用窖泥富集液培养的人工窖泥进行对比试验，试验结果见表1～表2。

表1复合己酸菌液和窖泥富集液用于人工窖泥培养的实验结果

注：上表中，1#为以复合己酸菌液为种子液培养的人工窖泥，2#为以窖泥富集液为种子液培养的人工窖泥。两种人工窖泥除菌种不同外，其余培养条件均一致。

从表1可知，发酵两个月后，采用复合己酸菌液培养的人工窖泥细菌总量和芽孢杆菌数量均高于采用窖泥富集液培养的人工窖泥，且人工窖泥颜色和气味表明1#窖泥发酵更彻底。

表2复合己酸菌液和窖泥富集液培养的人工窖泥用于酿酒生产的实验结果

	1#	2#	3#
				出酒率	38.1％	35.4％	37.3％
优质酒率	36.6％	17.4％	44.2％

注：上表中，1#为以复合己酸菌液为种子液培养的人工窖泥建筑的新窖池，2#为以窖泥富集液为种子液培养的人工窖泥建筑的新窖池，3#为窖龄30年的老窖池。本次酿酒生产实验糟源和生产工艺保持一致，且统计数据均为3口窖池连续生产一年所测数据的平均值。

从表2可知，采用复合己酸菌液培养的人工窖泥应用于生产中，能够有效提高新窖的出酒率，并且能大幅度提升优质酒率，使新窖池优质酒率接近窖龄30年的老窖池。

由实验结果可知：采用本发明的方法，以纯种己酸菌和窖泥富集液为菌种，采用茄子瓶、种子罐和发酵罐为培养容器，充分利用己酸菌兼性厌氧的生理特性，应用细菌固体斜面培养和混合培养技术，有针对性的减少了复合己酸菌液的培养步骤，简化了操作过程，缩短了培养周期，从而提高了产品质量和生产效率、节约了生产成本。

Claims

1.复合己酸菌液扩大培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、己酸菌种活化、增殖培养

b、己酸菌扩大培养

c、窖泥富集液扩大培养

d、混合发酵培养

2.根据权利要求1所述的复合己酸菌液扩大培养方法，其特征在于：步骤a中所述的培养基A为梭菌增殖培养基，其组成为：按重量百分比计，酵母膏0.1～1.0％，牛肉浸膏0.5～2.0％，胰蛋白胨0.5～2.0％，葡萄糖0.1～2.0％，可溶性淀粉0.1～1.0％，氯化钠0.2～1.0％，无水醋酸钠0.1～1.0％，半胱氨酸盐酸盐0.01～0.1％，琼脂粉1～2.0％，余量为水。

3.根据权利要求1所述的复合己酸菌液扩大培养方法，其特征在于：步骤a中所述的培养基A的pH值为7.0～7.2。

4.根据权利要求1所述的复合己酸菌液扩大培养方法，其特征在于：步骤b所述接种己酸菌悬液的量满足种子罐培养液中己酸菌初始浓度≥2.0×10⁶个/mL。

5.根据权利要求1所述的复合己酸菌液扩大培养方法，其特征在于：步骤c中所述的窖泥富集液为从连续使用400余年的老窖池窖泥中，经过3次以上富集培养制得的窖泥富集液。

6.根据权利要求5所述的复合己酸菌液扩大培养方法，其特征在于：所述的窖泥富集液己酸菌数量≥10⁸个/mL，富集液己酸含量≥3g/L。

7.根据权利要求1所述的复合己酸菌液扩大培养方法，其特征在于：步骤b、c中所述的培养基B组成为：按重量百分比计，酵母膏0.1～1.0％，无水醋酸钠0.5～2.0％，硫酸铵0.01～0.1％，磷酸氢二钾0.01～0.1％，七水硫酸镁0.01～0.1％，碳酸钙0～2.0％，95％(V/V)食用酒精2％，余量为水。

8.根据权利要求1所述的复合己酸菌液扩大培养方法，其特征在于：步骤d中所述的复合有机培养基C的组成为：按重量百分比计，酒糟发酵液20％，酵母膏0.2％，无水醋酸钠0.5％，95％(V/V)食用酒精2％，余量为水。

9.根据权利要求8所述的复合己酸菌液扩大培养方法，其特征在于：所述复合有机培养基C的制备方法为：按重量份数称取原料，加热水溶解，混匀，打开发酵罐进料阀和人孔盖，并用热水泵将培养基泵入发酵罐中，补充经加热至沸腾的热水，关闭进料阀和人孔盖，开启发酵罐表面冷却水循环和搅拌装置，使发酵罐内复合有机培养基混合均匀并降温至35℃，打开进料阀，泵入2份95％(V/V)食用酒精，关闭进料阀，开启保温装置。

10.根据权利要求8所述的复合己酸菌液扩大培养方法，其特征在于：所述酒糟发酵液制备方法为：按质量比称取10～30％酒糟，5～20％黄水，1～5％大曲粉，1～5％豆粕粉，余量为冷却热水；将上述原料置于不锈钢罐中，密封发酵3～10d后过滤，用氢氧化钠溶液调节pH至6.0～7.5，即得酒糟发酵液。