CN114231424A - 一种地顶孢霉培养物的制备方法及其改善母猪泌乳的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明请求保护的地顶孢霉培养物的制备方法,包括如下步骤:(1)称取黄连、黄岑、白芍、甘草、柚子皮和红薯藤;(2)将黄连、黄岑、白芍和水混合,经煎煮、提取后制得提取液A;(3)将甘草、柚子皮、红薯藤和水混合,经煎煮、提取后制得提取液B;(4)将提取液A进行浓缩处理制成浓缩液A;将提取液B进行浓缩处理制成浓缩液B;(5)将提取液A和提取液B混合搅拌制成中药提取物。本发明制成的中药提取物能够调理猪仔肠道菌落,改善消化吸收,提高猪仔免疫力,促进猪仔生长。
Description
技术领域
本发明涉及地顶孢霉培养物培养方法及应用的技术领域,尤其涉及一种地顶孢霉培养物的制备方法及其改善母猪泌乳的应用。
背景技术
在逐渐认识到抗生素饲料添加剂对肉类食品安全产生的潜在危害情况下,抗生素饲料添加剂被很多国家禁止使用,继而开始加紧研发安全、高效的绿色饲料添加剂。
研究发现,地顶孢霉培养物拥有草虫素、草虫酸、多糖、氨基酸等多种活性成分,能大大促进饲养动物的生长发育和提高免疫力等,且“地顶孢霉培养物”是我国农业部《饲料添加剂品种目录》所收录的一种绿色添加剂,已农业部认可和推广,地顶孢霉培养物的研究发展也越受重视。
然而,现有技术制备的地顶孢霉培养物中的主要活性成分的虫草素含量较低和成本较高,限制了地顶孢霉培养物的大规模使用。因此,需研发一种虫草素含量高的地顶孢霉培养物。
发明内容
针对现有技术制备的地顶孢霉培养物中虫草素含量较低的技术问题,本发明通过选用培养基成分,大大提高地顶孢霉培养物中虫草素含量。
为了实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种地顶孢霉培养物的制备方法,包括如下步骤:
(1)将地顶孢霉接种到斜面培养基中培养,制得斜面试管菌种;
(2)将斜面试管菌种进行摇瓶培养,之后,转移至种子罐中进行种子培养得种子培养液,种子培养基包括硝酸钠10-15g/L、葡萄糖35-40g/L、酵母粉10-15g/L、氯化钾1-2g/L和硫酸亚铁1-1.5g/L;其中,硝酸钠提供了氮源和钠离子,葡萄糖提供了碳源,酵母粉中含有多种营养物质,能提供氮源、微量元素和部分碳源等,氯化钾和硫酸亚铁提供了钾离子和亚铁离子,这些物质的合理组合,能加快菌种的生长。
(3)将种子培养液接种进行发酵得发酵液;
(4)将发酵液进行烘干处理和粉碎处理。
优选的,步骤(1)中的地顶孢霉是经过诱变筛选后变株。诱变可通过紫外线方式进行诱变。
优选的,步骤(1)中,培养温度25-30℃,培养时间5-7天。在这个温度范围内,地顶孢霉能良好生长。
优选的,步骤(1)中,斜面培养基包括淀粉175-190g/L、水600-800mL和琼脂粉30-40g/L,pH6-8。淀粉能提供碳源能量,琼脂粉具有凝固作用,还能提供部分碳源。
优选的,步骤(2)中,种子培养的条件是:培养温度20-25℃,200-250rpm,培养时间30-35h。
优选的,步骤(2)中,种子培养的pH为6-8。
优选的,步骤(3)中所用培养基包括葡萄糖30-50g/L,酵母粉15-35g/L,淀粉30-50g/L,硫酸亚铁1-1.5g/L、牛奶10-15mL/L和氯化钾1-3g/L。葡萄糖和淀粉能提供碳源,酵母粉中含有多种营养物质,能提供氮源、微量元素和部分碳源等,牛奶能提供氮源等,氯化钾和硫酸亚铁提供了钾离子和亚铁离子,使用这种培养基,菌种生长的更快。
优选的,步骤(3)中,培养条件为:pH6-8,培养温度25-30℃,发酵时间25-40h。
一种上述制备方法制备的地顶孢霉培养物在改善母猪泌乳的应用。
本发明通过将地顶孢霉经过斜面培养、种子罐培养和发酵培养三个阶段,大大促进了地顶孢霉的增殖。选择使用硝酸钠、葡萄糖、酵母粉、氯化钾和硫酸亚铁组成的种子培养基进行种子培养,充分考虑了碳源、氮源和无机盐的含量比例对斜面试管菌种增殖生长的影响,促进菌种增殖,从而使制备的地顶孢霉培养物中虫草素含量较高。
具体实施方式
下面通过具体的实施方式对地顶孢霉培养物的制备方法做详细说明。
实施例1
一种地顶孢霉培养物的制备方法,包括如下步骤:
(1)将地顶孢霉接种到斜面培养基中培养,制得斜面试管菌种;
(2)将斜面试管菌种进行摇瓶培养,之后,转移至种子罐中进行种子培养得种子培养液,种子培养基包括硝酸钠10g/L、葡萄糖35g/L、酵母粉10g/L、氯化钾1g/L和硫酸亚铁1g/L;
(3)将种子培养液接种进行发酵得发酵液;
(4)将发酵液进行烘干处理和粉碎处理。
实施例2
一种地顶孢霉培养物的制备方法,包括如下步骤:
(1)将地顶孢霉接种到含淀粉175g/L、水600mL和琼脂粉30g/L的斜面培养基中,在温度25℃、pH=6下培养5天,制得斜面试管菌种;
(2)将斜面试管菌种进行摇瓶培养,之后,转移至种子罐中,在温度20℃、pH为6、200rpm下培养时间30h得种子培养液,其中,种子培养基包括硝酸钠10g/L、葡萄糖35g/L、酵母粉10g/L、氯化钾1g/L和硫酸亚铁1g/L;
(3)将种子培养液接种在pH为6、温度25℃下进行发酵25h得发酵液,发酵的培养基包括葡萄糖30g/L、酵母粉15g/L、淀粉30g/L、硫酸亚铁1g/L、牛奶10mL/L和氯化钾1g/L;
(4)将发酵液进行烘干处理和粉碎处理。
实施例3
一种地顶孢霉培养物的制备方法,包括如下步骤:
(1)将地顶孢霉接种到含淀粉190g/L、水800mL和琼脂粉40g/L的斜面培养基中,在温度20℃、pH=8下培养7天,制得斜面试管菌种;
(2)将斜面试管菌种进行摇瓶培养,之后,转移至种子罐中,在温度25℃、pH为8、250rpm下培养时间35h得种子培养液,其中,种子培养基包括硝酸钠15g/L、葡萄糖40g/L、酵母粉15g/L、氯化钾2g/L和硫酸亚铁1.5g/L;
(3)将种子培养液接种在pH为8、温度30℃下进行发酵40h得发酵液,发酵的培养基包括葡萄糖50g/L、酵母粉35g/L、淀粉50g/L、硫酸亚铁1.5g/L、牛奶15mL/L和氯化钾3g/L;
(4)将发酵液进行烘干处理和粉碎处理。
实施例4
一种地顶孢霉培养物的制备方法,包括如下步骤:
(1)将地顶孢霉接种到含淀粉180g/L,水700mL,琼脂粉35g/L的斜面培养基中,在温度22℃、pH=7下培养6天,制得斜面试管菌种;
(2)将斜面试管菌种进行摇瓶培养,之后,转移至种子罐中,在温度22℃、pH为7、220rpm下培养时间32h得种子培养液,其中,种子培养基包括硝酸钠12g/L、葡萄糖38g/L、酵母粉12g/L、氯化钾1.5g/L和硫酸亚铁1.2g/L;
(3)将种子培养液接种在pH为7、温度27℃下进行发酵30h得发酵液,发酵的培养基包括葡萄糖40g/L、酵母粉30g/L、淀粉40g/L、硫酸亚铁1.2g/L、牛奶12mL/L和氯化钾2g/L;
(4)将发酵液进行烘干处理和粉碎处理。
实施例5
一种地顶孢霉培养物的制备方法,包括如下步骤:
(1)将地顶孢霉接种到含淀粉185g/L、水750mL和琼脂粉35g/L的斜面培养基中,在温度22℃、pH=7.5下培养6.5天,制得斜面试管菌种;
(2)将斜面试管菌种进行摇瓶培养,之后,转移至种子罐中,在温度22℃、pH为7.5、240rpm下培养时间33h得种子培养液,其中,种子培养基包括硝酸钠11g/L、葡萄糖36g/L、酵母粉14g/L、氯化钾1.8g/L和硫酸亚铁1.4g/L;
(3)将种子培养液接种在pH为7.5、温度28℃下进行发酵35h得发酵液,发酵的培养基包括葡萄糖45g/L、酵母粉20g/L、淀粉45g/L、硫酸亚铁1.4g/L、牛奶14mL/L和氯化钾1.5g/L;
(4)将发酵液进行烘干处理和粉碎处理。
对比例1
一种地顶孢霉培养物的制备方法,包括如下步骤:
(1)将地顶孢霉接种到含淀粉190g/L、水800mL和琼脂粉40g/L的斜面培养基中,在温度20℃、pH=8下培养7天,制得斜面试管菌种;
(2)将斜面试管菌种进行摇瓶培养,之后,转移至种子罐中,在温度25℃、pH为8、250rpm下培养时间35h得种子培养液,其中,种子培养基包括葡萄糖40g/L、酵母粉15g/L和硫酸亚铁1.5g/L;
(3)将种子培养液接种在pH为8、温度30℃下进行发酵40h得发酵液,发酵的培养基包括葡萄糖50g/L、酵母粉35g/L、淀粉50g/L、硫酸亚铁1.5g/L、牛奶15mL/L和氯化钾3g/L;
(4)将发酵液进行烘干处理和粉碎处理。
对比例2
一种地顶孢霉培养物的制备方法,包括如下步骤:
(1)将地顶孢霉接种到含淀粉190g/L,水800mL,琼脂粉40g/L的斜面培养基中,在温度20℃、pH=8下培养7天,制得斜面试管菌种;
(2)将斜面试管菌种进行摇瓶培养,之后,转移至种子罐中,在温度25℃、pH为8、250rpm下培养时间35h得种子培养液,其中,种子培养基包括硝酸钠15g/L、氯化钾2g/L和硫酸亚铁1.5g/L;
(3)将种子培养液接种在pH为8、温度30℃下进行发酵40h得发酵液,发酵的培养基包括葡萄糖50g/L、酵母粉35g/L、淀粉50g/L、硫酸亚铁1.5g/L、牛奶15mL/L和氯化钾3g/L;
(4)将发酵液进行烘干处理和粉碎处理。
对比例3
一种地顶孢霉培养物的制备方法,包括如下步骤:
(1)将地顶孢霉接种到含淀粉190g/L,水800mL,琼脂粉40g/L的斜面培养基中,在温度20℃、pH=8下培养7天,制得斜面试管菌种;
(2)将斜面试管菌种进行摇瓶培养,之后,转移至种子罐中,在温度25℃、pH为8、250rpm下培养时间35h得种子培养液,其中,种子培养基包括葡萄糖40g/L、酵母粉15g/L、氯化钾2g/L和硫酸亚铁1.5g/L;
(3)将种子培养液接种在pH为8、温度30℃下进行发酵40h得发酵液,发酵的培养基包括酵母粉35g/L、淀粉50g/L、牛奶15mL/L和氯化钾3g/L;
(4)将发酵液进行烘干处理和粉碎处理。
实施例1-5和对比例1-3制备的地顶孢霉培养物按照NY/T 2116-2012虫草制品中虫草素测定高效液相色谱法进行测定。虫草素含量如下表所示:
表1.实施例1-5和对比例1-3制备的地顶孢霉培养物中虫草素含量(%)
从表1可以看出,实施例1-5制备的地顶孢霉培养物中虫草素含量高于对比例1-3,这是因为实施例1-5使用了硝酸钠、葡萄糖、酵母粉、氯化钾和硫酸亚铁组成的种子培养基进行种子培养,充分考虑了碳源、氮源和无机盐的含量比例对斜面试管菌种增殖生长的影响,从而使制备的地顶孢霉培养物中虫草素含量较高。而对比例1-3中步骤(2)和/或步骤(3)所使用的培养基营养物质含量不是很科学,制备的地顶孢霉培养物中虫草素含量较低。
以上所述仅为本发明的优选实施例,并非因此限制本发明的专利范围,凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换,或直接或间接运用在其他相关的技术领域,均同理包括在本发明的专利保护范围。
Claims (9)
1.一种地顶孢霉培养物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)将地顶孢霉接种到斜面培养基中培养,制得斜面试管菌种;
(2)将斜面试管菌种进行摇瓶培养,之后,转移至种子罐中进行种子培养得种子培养液,种子培养基包括硝酸钠10-15g/L、葡萄糖35-40g/L、酵母粉10-15g/L、氯化钾1-2g/L和硫酸亚铁1-1.5g/L;
(3)将种子培养液接种进行发酵得发酵液;
(4)将发酵液进行烘干处理和粉碎处理。
2.根据权利要求1所述的地顶孢霉培养物的制备方法,其特征在于,步骤(1)中的地顶孢霉是经过诱变筛选后变株。
3.根据权利要求1所述的地顶孢霉培养物的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,培养温度25-30℃,培养时间5-7天。
4.根据权利要求1所述的地顶孢霉培养物的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,斜面培养基包括淀粉175-190g/L、水600-800mL和琼脂粉30-40g/L,pH6-8。
5.根据权利要求1所述的地顶孢霉培养物的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,种子培养的条件是:培养温度20-25℃,200-250rpm,培养时间30-35h。
6.根据权利要求1所述的地顶孢霉培养物的制备方法,其特征在于,步骤(2)中,种子培养的pH为6-8。
7.根据权利要求1所述的地顶孢霉培养物的制备方法,其特征在于,步骤(3)中所用培养基包括葡萄糖30-50g/L、酵母粉15-35g/L、淀粉30-50g/L、硫酸亚铁1-1.5g/L、牛奶10-15mL/L和氯化钾1-3g/L。
8.根据权利要求1所述的地顶孢霉培养物的制备方法,其特征在于,步骤(3)中,培养条件为:pH6-8,培养温度25-30℃,发酵时间25-40h。
9.根据权利要求1-8任一所述的地顶孢霉培养物的制备方法制备的地顶孢霉培养物在改善母猪泌乳的应用。
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PB01 | Publication | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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