CN1141941C - 低聚寡糖混合物在抗应激脑损伤中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及式I低聚寡糖混合物在制备用于治疗应激脑损伤药物中的用途。

Description

低聚寡糖混合物在抗应激脑损伤中的用途

本发明涉及衍生自中药巴戟天的低聚寡糖混合物在抗应激脑损伤中的用途。

中药巴戟天(morinda officinalis How)具有补肾壮阳、强筋骨、抗风湿功效。中国专利申请No.94103414.3披露了一种活性成分为巴戟天的抗精神性疾病的药物。中国专利申请No.94103415.1披露了从巴戟天萃取得到的式(I)低聚寡糖及其作为抗精神病药物，其中n＝1-8。

但式I低聚寡糖在抗应激脑损伤方面的活性还未见报道。

发明目的：

本发明的目的是寻找式I低聚寡糖混合物的新用途。

发明简述

本发明人经研究现已出人意料发现，式I的低聚寡糖混合物具有优良的抗应激脑损伤作用。

因此，本发明第一方面涉及式I低聚寡糖混合物在制备用于治疗应激脑损伤药物中的用途。

本发明再一方面涉及的是治疗应激脑损伤的方法，其包括将上述定义的式I低聚寡糖混合物给予需治疗的应激脑损伤患者。

详细描述：

本发明涉及式I的低聚寡糖混合物在制备用于治疗应激脑损伤药物

中的用途，其中n＝1-8。

本发明还涉及治疗应激脑损伤的方法，其包括将式I低聚寡糖

混合物给予需治疗的应激脑损伤患者，n＝1-8。

根据本发明，本发明作用的式I低聚寡糖混合物是通过萃取植物巴戟天得到的。萃取中所用溶剂为有机溶剂，含水有机溶剂或水。有机溶剂为醇类如甲醇、乙醇、丙醇或丁醇等，卤代烷类如二氯甲烷或三氯甲烷等，酯类如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯等，或醚类如石油醚或乙醚等。

根据本发明，式I低聚寡糖混合物在用于治疗应激脑损伤中可以单独或以组合物形式使用。给药方式可以是口服或非肠道途径。给药剂型可以是口服剂型如片剂或胶囊等，非肠道给药剂型如无菌注射剂、滴注液等。

本发明将通过下面的实施例及生物活性试验做进一步说明，但这并不意味着对本发明的任何限制。

实施例1

式I低聚寡糖的制备

取巴戟天1KG粉碎过50目筛，筛过物用石油醚提取。每次用石油醚5升，提取三次。合并，减压蒸发干，得到石油醚提取物100g；药渣用乙醇提取。每次用乙醇8升，提三次，合并，减压蒸发干，得到乙醇提取物160g。提取物再用水溶解，过滤，滤过液在正丁醇和水中分配提取，得到可溶于正丁醇的提取物120g和水溶部分300g。将水溶部分100g用活性碳柱层析进行分离，展开剂是10％-70％的乙醇。得到式I低聚寡糖混合物，重26g(纯度几乎100％)。取其部分进行高压液相色谱(柱：Spherisorb C₁₈(4.5×250mm)，检测：RI Waters DifferentialRefractometer 410(US)，泵：Waters^TM600，洗脱：5％甲醇水，流速：1.0ml/分钟)，测得式I低聚寡糖的保留时间为：n                             保留时间(分钟)1                             2.392                             3.053                             3.434                             4.275                             4.536                             6.347                             7.488                             8.47

生物活性实验：

实施例2、式I低聚寡糖混合物对慢性应激大鼠血中皮质酮及睾酮水平的调节

1.方法与结果

Wistar雄性大鼠，体重160±20g，随机分为4组，每组8只，应激对照组动物每日给予电击、强迫游泳、高速振荡、固定、禁食(水)等不良刺激，时程14天，使动物处于慢性应激状态。给药组则在应激的同时腹腔注射(ip)式I低聚寡糖混合物，正常组则不接受任何应激刺激，第15天断头取血并分离血清，利用皮质酮、睾酮试剂盒进行测定。结果用单因素方差分析进行统计。

组别	剂量(mg/kg)	皮质酮(ng/ml)	睾酮(nmol/I)
				正常对照应激对照式I低聚寡糖混合物	--10025	55.96±41.22197.26±34.77###119.56±50.65**105.99±52.13***	18.72±11.693.34±3.32##8.41±7.149.92±2.38**

表1.式I低  聚寡糖混合物对慢性应激大鼠血中皮质酮及睾酮水平的影响。##P＜0.01，###P＜0.001vs正常对照，^**P＜0.01，^***P＜0.001，vs应激对照，n＝8。

2.讨论：

慢性应激的关键特征之一就是血中皮质酮水平显著升高、睾酮水平降低，而式I低聚寡糖混合物二个剂量组可以逆转这一结果，表示可以拮抗慢性应激。

实施例3、式I低聚寡糖混合物对皮质酮损伤的PC12细胞的保护作用

1.方法

用含5％胎牛血清及5％马血清的DMEM培养液(含青霉素钠200kU/L，链霉素100mg/L，pH7.4)将细胞稀释为约2×108/L接种于预先用多聚赖氨酸(0.1g/L)处理过的96孔培养板，每孔100μL，放入CO₂孵箱(美国Napco公司生产)37℃，5％CO₂条件下培养3～4天，待细胞长满孔底后即可用于实验，参照文献(刘景根等，药学学报1998，33(3)：165)方法，稍加改进，吸去细胞液，换上含有相应浓度药物及0.2mmol/L皮质酮(corticosterone，Cort)的无血清DMEM(对照组不含任何药品)，37℃5％CO₂培养48小时，吸去培养液，用D-Hanks液洗2遍，每孔加入含0.5g/L MTT的无血清DMEM培养4小时后吸去培养液，每孔加入10％十二烷基硫酸钠100μL，待蓝色颗粒完全溶解(约12～16小时)，利用多孔扫描分光光度计(型号：MCC/340)测定标本在570nm的吸光度(A)值，用于定量反映活细胞数并计算药物对皮质酮损伤的PC12细胞损伤的抑制率。

表2.式I低聚寡糖混合物对皮质酮损伤的PC12细胞的保护作用

药物(mg/ml)	吸光度(A)
		正常对照皮质酮皮质酮+式I低聚寡糖混合物    1.252.55.0	1.00±0.050.74±0.071.14±0.13***1.26±0.13***1.36±0.06***

^***P＜0.001vs皮质酮损伤对照。

2.结果

PC12细胞经0.2mmol/L皮质酮处理48小时后，对MTT摄取能力下降，A值显著低于正常对照组，表明细胞受到损伤或部分细胞已死亡，但当式I低聚寡糖混合物存在时，PC12细胞对MTT摄取能力明显增强，表明PC12细胞损伤明显减弱，活细胞明显增多，具有浓度依赖关系。此结果表明式I低聚寡糖混合物可以对抗应激导致的脑神经细胞的损伤。

Claims (3)

1.式I低聚寡糖混合物在制备用于治疗应激脑损伤药物中的用途，

其中n＝1-8。

2.根据权利要求1的用途，其中所述药物  以片剂或胶囊形式使用。

3.根据权利要求1的用途，其中所述药物  以无菌注射剂或滴注液形式使用。