CN114181116A - D-氨基酸衍生物类氨肽酶n抑制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

D-氨基酸衍生物类氨肽酶n抑制剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种D‑氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂及其制备方法和应用。本发明抑制剂具有如下通式I或II所示的结构。本发明还提供了D‑氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂在制备预防或治疗与氨肽酶活性异常相关的疾病的药物中的应用。本发明部分D‑氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂相比以脲基为连接基团的L构型化合物等现有抑制剂，对氨肽酶N的抑制具有更优异的活性。

Description

D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂及其制备方法和应用，属于有机化合物合成与医药应用技术领域。
背景技术
氨肽酶N(APN，CD13，EC 3.4.11.2)是一锌离子依赖型的膜结合的金属蛋白酶，以同源二聚体的形式锚定于细胞膜表面，呈“海马”形。其催化结构域位于细胞外，通过水解底物N端的氨基酸参与底物降解过程。研究证明，氨肽酶N在肿瘤发生、发展、侵袭转移、凋亡及肿瘤血管生成中发挥重要的作用。
氨肽酶N具有以下作用：(1)氨肽酶N促进肿瘤转移。起屏障作用的细胞外基质主要成分为胶原蛋白、纤维黏连蛋白、层黏连蛋白等，这些成分交联成网状结构，支撑组织结构，对细胞间的稳定性和信号传导起着重要作用。属于胶原蛋白家族的IV型胶原蛋白，可以被肿瘤细胞表面的氨肽酶N水解，肿瘤细胞突破基底膜屏障，进入血管或者淋巴管，发生转移。(2)氨肽酶N促进肿瘤新生血管生成。肿瘤组织中的血管与正常组织相比，更加丰富和不规则。氨肽酶N不影响内皮细胞增殖，但可以抑制管状结构形成，在内皮细胞形态发生过程中起作用。(3)氨肽酶N(CD13)是肿瘤干细胞的表面标志物之一，与肝癌干细胞的生存有着重大关系(J Clin Invest 2010，120(9)，3326-3339)。肿瘤干细胞是耐受抗肿瘤药物治疗，肿瘤复发和转移的重要原因。通过抑制氨肽酶N而靶向肝癌干细胞，有望可以解决肝癌耐药、复发和转移的问题。
乌苯美司是20世纪八十年代上市药物，是类肽类氨肽酶N抑制剂，具有类二肽结构，作为免疫增强剂用于白血病的辅助治疗。此外，报道的天然类肽类氨肽酶N抑制剂还有amastatin、probestin、phebestin等。这些类肽类氨肽酶N抑制剂中氨基酸构型均为L构型，对氨肽酶N的抑制活性有待进一步提高。
中国专利文献CN102382014A公开了一种氨肽酶N抑制剂及制备方法和在抗肿瘤方面的用途。所涉及的氨肽酶N抑制剂，化学名为：(S)-4-甲基-2-(3-萘基-1-基甲基-脲基)-戊酰基羟胺。该发明氨肽酶N抑制剂对种植于小鼠体内的小鼠黑色素瘤高转移株具有显著的抗转移和抗肿瘤诱导血管生成的作用。但该发明中化合物结构相对单一，氨基酸侧链只有L-亮氨酸，其它类型的氨基酸衍生物是否有抑制活性并未报道；该发明中化合物对氨肽酶N显示了中等抑制活性，IC50＝53nM；L-亮氨酸侧链和芳环通过脲基连接，脲基的成药性相比酰胺键欠佳。
中国专利文献CN108218800A公开了一种1，2，3-三氮唑类氨肽酶N抑制剂及其制备方法和应用。该发明还提供该1，2，3-三氮唑类化合物的制备方法以及在制备预防或治疗与氨肽酶活性异常相关的疾病的药物中的应用。但该发明也有与CN102382014A类似的不足，该发明中化合物结构相对单一，氨基酸侧链只有L-亮氨酸，其它类型的氨基酸衍生物是否有抑制活性并未报道；其中活性最好的化合物11ff对氨肽酶N的抑制活性为IC50＝32nM，为中等抑制水平；L-亮氨酸侧链和芳环通过脲基连接，脲基的成药性相比酰胺键欠佳。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供一种D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂及其制备方法，本发明还提供该抑制剂的制药用途。本发明部分D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂相比以脲基为连接基团的L构型化合物等现有抑制剂，对氨肽酶N的抑制具有更优异的活性。
本发明的技术方案为：
一、D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂
D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂，以及其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，所述抑制剂具有如下通式I或II所示的结构：
Figure BDA0003368077180000021
其中，式I或II化合物中：
R1是芳基，杂芳基，芳基烷基，芳乙烯基、杂芳基烷基、取代芳基，取代杂芳基，取代芳基烷基，取代芳乙烯基或取代杂芳基烷基；所述的取代芳基，取代杂芳基，取代芳基烷基，取代芳乙烯基或取代杂芳基烷基分别是芳基，杂芳基，芳基烷基，芳乙烯基或杂芳基烷基中的基团任选被一个或多个如下基团取代：烷基、C3-8环烷基、烷氧基、烷氨基、卤代C1-8烷基、卤代C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氨基、烯基、羟基、炔基、硝基、三氟甲基、氰基、卤素、C1-6烷基磺酰胺基、C1-6烷基甲酰氧基、C1-6烷基甲酰胺基、芳氧基、芳胺基、芳磺酰胺基、芳甲酰胺基、C1-6烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、卤代C1-6烷基羰基、卤代C1-6烷氧基羰基、C1-6烷氨基羰基或卤代C1-6烷氨基羰基；
R2是甲基，乙基，丙基，异丙基，苯基，苄基或吡啶基。
根据本发明优选的，R1是吡啶基，吡咯基，呋喃基，噻吩基，吡唑基，噻唑基，噁唑基，嘧啶基，吡嗪基，哒嗪基，喹啉基，异喹啉基，吲哚基，嘌呤基，
Figure BDA0003368077180000031
之一；
R2是甲基。
优选的，所述D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂的结构为下列之一：
Figure BDA0003368077180000032
Figure BDA0003368077180000041
Figure BDA0003368077180000051
二、D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂的制备方法
(1)本发明的D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂I的制备方法，包括步骤：
D型亮氨酸甲酯盐酸盐1与R1COOH反应生成中间体2，然后在羟胺钾甲醇溶液中水解，将甲酯转化为异羟肟酸得到目标化合物D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂I；其中，R1与式I中的R1相同。
本领域技术人员可以对上述步骤进行变动以提高收率，他们可根据本领域的基本知识确定合成路线，如选择反应物，溶剂和温度，可以通过使用各种常规保护基以避免副反应的发生从而提高效率。这些常规的保护方法可参见例如：T.Greene，Protecting Groupsin OrganicSynthesis。
本发明优选方案如下：
根据本发明优选的，所述D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂I的制备方法包括步骤：
将R1COOH溶于二氯甲烷中，-5-5℃下，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑和4-二甲氨基吡啶，-5-5℃反应10-60分钟；然后加入D-亮氨酸甲酯盐酸盐1和三乙胺，20-30℃反应10-20h；反应结束后，浓缩掉二氯甲烷，残渣加入乙酸乙酯，然后经磷酸洗涤、饱和碳酸氢钠水溶液洗涤、饱和氯化钠水溶液洗涤、无水硫酸镁干燥、柱层析，得到中间体2；将中间体2加入到羟胺钾甲醇溶液中，20-30℃反应0.3-1h；将所得反应液倾入水中，调pH至6，生成白色固体，过滤，得到D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂I。
优选的，所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和D型亮氨酸甲酯盐酸盐1的摩尔比为0.8-1.5∶1；1-羟基苯并三唑和D型亮氨酸甲酯盐酸盐1的摩尔比为0.8-1.5∶1；4-二甲氨基吡啶和D型亮氨酸甲酯盐酸盐1的摩尔比为0.05-0.4∶1；三乙胺和D型亮氨酸甲酯盐酸盐1的摩尔比为1-1.5∶1；D型亮氨酸甲酯盐酸盐1的质量和二氯甲烷的体积比为0.01-0.1g/mL；R1COOH与D型亮氨酸甲酯盐酸盐1的摩尔比为0.8-1.5∶1；羟胺钾甲醇溶液中羟胺钾的浓度为1-2mol/L；羟胺钾和中间体2的摩尔比为3-20∶1。
优选的，羟胺钾甲醇溶液的制备包括步骤：将氢氧化钾甲醇溶液滴加到盐酸羟胺甲醇溶液中，-5-5℃下搅拌反应30-50分钟，过滤即得；所述氢氧化钾甲醇溶液的浓度为0.2-0.6g/mL，盐酸羟胺甲醇溶液的浓度为0.1-0.3g/mL，氢氧化钾和盐酸羟胺的摩尔比为1-2∶1。
根据本发明优选的，(R)-N-羟基-4-甲基-2-(2，2，2-三苯基乙酰胺基)戊酰胺(3h)的制备方法包括步骤：
1)甲基(2，2，2-三苯基乙酰基)D-亮氨酸(2h)的制备
0.5g 2，2，2-三苯基乙酸溶于10mL无水二氯甲烷中，0℃下，加入0.38g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、0.26g 1-羟基苯并三唑和0.04g 4-二甲氨基吡啶；0℃反应30分钟后，加入0.34g D-亮氨酸甲酯盐酸盐和0.22g三乙胺，25℃反应12小时；浓缩掉二氯甲烷，残渣加入20mL乙酸乙酯，20mL体积分数10％磷酸洗3次，20mL饱和碳酸氢钠水溶液洗涤1次，20mL饱和氯化钠水溶液洗涤1次，无水硫酸镁干燥，然后经过柱层析：石油醚、乙酸乙酯、四氢呋喃体积比为3∶1∶1，得到甲基(2，2，2-三苯基乙酰基)D-亮氨酸(2h)；
2)(R)-N-羟基-4-甲基-2-(2，2，2-三苯基乙酰胺基)戊酰胺(3h)的制备
羟胺钾甲醇溶液的制备：氢氧化钾28g和盐酸羟胺23.35g分别溶于70mL和120mL的重蒸甲醇中，获得溶液A和溶液B；溶液A滴加到溶液B中，冰水浴下搅拌40分钟；过滤，得到新制的羟胺钾甲醇溶液；0.5g化合物2h加入到5mL羟胺钾甲醇溶液中，25℃反应0.5小时，将反应液倾入水中，体积分数10％磷酸调pH至6，生成白色固体，过滤，得到(R)-N-羟基-4-甲基-2-(2，2，2-三苯基乙酰胺基)戊酰胺(3h)。
以3a-3i为例，反应路线如下反应式1所示。
Figure BDA0003368077180000071
反应式1
反应式1的目标化合物结构式如下：
Figure BDA0003368077180000072
Figure BDA0003368077180000073
Figure BDA0003368077180000081
(2)本发明的D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂II的制备方法，包括步骤：
D-型4-羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐4与Boc酸酐反应，生成化合物5；然后与硫酸酯反应，生成化合物6；经三氟乙酸脱去Boc，生成化合物7；然后化合物7与R1COOH反应生成中间体8；然后在羟胺钾甲醇溶液中水解，将甲酯转化为异羟肟酸得到D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂II；其中，R1与式II中的R1相同。
本领域技术人员可以对上述步骤进行变动以提高收率，他们可根据本领域的基本知识确定合成路线，如选择反应物，溶剂和温度，可以通过使用各种常规保护基以避免副反应的发生从而提高效率。这些常规的保护方法可参见例如：T.Greene，Protecting Groupsin OrganicSynthesis。
本发明优选以下技术方案：
根据本发明优选的，化合物5的制备包括步骤：将D-型4-羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐4溶于二氯甲烷中，-5-5℃下，加入三乙胺，然后滴加(Boc)2O的二氯甲烷溶液，滴加完毕后，20-30℃下反应20-30小时；浓缩掉二氯甲烷，残渣溶于乙酸乙酯，依次经磷酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤，然后柱层析得到化合物5。
优选的，D-型4-羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐4的质量和二氯甲烷的体积比为0.1-0.2g/mL；三乙胺和D-型4-羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐4的摩尔比为2-3∶1；(Boc)2O的二氯甲烷溶液中(Boc)2O的浓度为0.3-0.5g/mL；D-型4-羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐4和(Boc)2O的摩尔比为1∶1.1-1.3。
根据本发明优选的，化合物6的制备包括步骤：化合物5溶解于N’N-二甲基甲酰胺中，加入碳酸钾和硫酸二酯，70-90℃反应3-8小时；反应液倾入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，经饱和氯化钠水溶液洗涤、柱层析纯化得到化合物6。
优选的，化合物5的质量和N’N-二甲基甲酰胺的体积比为0.1-0.2g/mL；碳酸钾和化合物5的摩尔比为1-1.8∶1；硫酸二酯和化合物5的摩尔比为1-1.8∶1。
优选的，所述硫酸二酯为硫酸二甲酯或硫酸二乙酯。
根据本发明优选的，中间体8的制备方法包括步骤：(1)化合物6溶于二氯甲烷中，加入三氟乙酸，20-30℃下反应1-5小时；浓缩掉溶剂，得到化合物7；(2)将R1COOH溶于二氯甲烷中，-5-5℃下，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑和4-二甲氨基吡啶，-5-5℃反应10-60分钟；加入化合物7的二氯甲烷溶液和三乙胺，20-30℃反应10-20小时；浓缩掉二氯甲烷，残渣加入乙酸乙酯，经磷酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤、无水硫酸镁干燥、柱层析得到中间体8。
优选的，步骤(1)中，化合物6的物质的量和二氯甲烷的体积比为0.1-1mmol/mL；化合物6的物质的量和三氟乙酸的体积比为0.1-1mmol/mL。
优选的，步骤(2)中，将R1COOH溶于二氯甲烷所得溶液中，R1COOH的质量和二氯甲烷的体积比为0.01-0.1g/mL；1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和R1COOH的摩尔比为0.8-1.5∶1；1-羟基苯并三唑和R1COOH的摩尔比为0.8-1.5∶1；4-二甲氨基吡啶和R1COOH的摩尔比为0.05-0.4∶1；化合物7的二氯甲烷溶液中，化合物7的物质的量浓度为0.1-1mmol/mL；R1COOH与化合物7的摩尔比为0.8-1.5∶1；三乙胺和R1COOH的摩尔比为7-15∶1。
根据本发明优选的，由中间体8制备D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂II的方法包括步骤：将中间体8加入到羟胺钾甲醇溶液中，20-30℃反应0.3-1h；将所得反应液倾入水中，调pH至6，生成白色固体，过滤，得到D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂II。
优选的，羟胺钾甲醇溶液中羟胺钾的浓度为1-2mol/L；羟胺钾和中间体8的摩尔比为3-20∶1。
优选的，羟胺钾甲醇溶液的制备包括步骤：将氢氧化钾甲醇溶液滴加到盐酸羟胺甲醇溶液中，-5-5℃下搅拌反应30-50分钟，过滤即得；所述氢氧化钾甲醇溶液的浓度为0.2-0.6g/mL，盐酸羟胺甲醇溶液的浓度为0.1-0.3g/mL，氢氧化钾和盐酸羟胺的摩尔比为1-2∶1。
根据本发明优选的，(R)-N-(2-(羟基胺基)-1-(4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)-2，2，2-三苯基乙酰胺(9i)的制备方法，包括步骤：
1)甲基(R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-2-(4-羟基苯基)乙酸酯(5)的制备
6.51g D-型4-羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐4溶于50mL二氯甲烷中，0℃下，加入7.58g三乙胺；0℃下，滴加7.84g(Boc)2O的二氯甲烷溶液20mL，滴加完毕后，25℃下反应24小时；浓缩掉二氯甲烷，残渣溶于100mL乙酸乙酯，50mL体积分数10％磷酸洗涤3次，50mL饱和碳酸氢钠水溶液洗涤1次，50mL饱和氯化钠水溶液洗涤1次，柱层析纯化：石油醚和乙酸乙酯体积比为5∶1；得到无色油状物；
2)甲基(R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-2-(4-甲氧基苯基)乙酸酯(6)的制备
2.81g化合物5溶解于20mL N’N-二甲基甲酰胺中，加入2.07g碳酸钾和1.89g硫酸二甲酯，80℃反应5小时；反应液倾入100mL水中，50mL乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，50mL饱和氯化钠水溶液洗涤1次，柱层析纯化：石油醚和乙酸乙酯的体积比为5∶1；得到无色油状物；
3)甲基(R)-2-(4-甲氧基苯基)-2-(2，2，2-三苯基乙酰氨基)乙酸酯(8i)的制备
0.59g化合物6溶于5mL二氯甲烷中，加入5mL三氟乙酸，25℃下反应3小时；浓缩掉溶剂，得到0.60g化合物7；加入5mL二氯甲烷，制得溶液A，备用；
0.5g 2，2，2-三苯基乙酸溶于10mL无水二氯甲烷中，0℃下，加入0.38g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、0.26g 1-羟基苯并三唑和0.04g4-二甲氨基吡啶，0℃反应30分钟；加入溶液A和2g三乙胺，25℃反应12小时；浓缩掉二氯甲烷，残渣加入20mL乙酸乙酯，20mL体积分数10％磷酸洗3次，20mL饱和碳酸氢钠水溶液洗涤1次，20mL饱和氯化钠水溶液洗涤1次，无水硫酸镁干燥，柱层析：石油醚、乙酸乙酯和四氢呋喃的体积比为3∶1∶1，得到白色固体；
4)(R)-N-(2-(羟基胺)-1-(4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)-2，2，2-三苯基乙酰胺(9i)
羟胺钾甲醇溶液的制备：氢氧化钾28g和盐酸羟胺23.35g分别溶于70mL和120mL的重蒸甲醇中，获得溶液A和溶液B；溶液A滴加到溶液B中，冰水浴下搅拌40分钟；滤过，得到羟胺钾甲醇溶液；0.3g化合物8i加入到5mL羟胺钾甲醇溶液中，25℃反应0.5小时；将反应液倾入水中，体积分数10％磷酸调pH至6，生成白色固体，滤过，即得。
以9a-9j为例，反应路线如下反应式2所示：
Figure BDA0003368077180000111
反应式2
反应式2的目标化合物结构式如下：
Figure BDA0003368077180000121
Figure BDA0003368077180000122
Figure BDA0003368077180000131
三、D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂的应用
本发明还提供了D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂在制备预防或治疗与氨肽酶活性异常相关的疾病的药物中的应用；所述的与氨肽酶活性异常相关的疾病包括：各种血液瘤或实体瘤，炎症，多发性硬化症，各种组织溃疡或组织溃疡性病症，牙周病，大疱性表皮松懈症或疟疾。
此外，本发明还提供一种适于口服或胃肠外给药的药物组合物，包含通式I或II所示的D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂和一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明中所用的术语和定义含义如下：
“药学上可接受的盐”是指式式I或II化合物具有疗效且无毒的盐形式。本领域已知许多这样的盐。在任何酸性基团(如羧基)上形成的阳离子盐，或是在任何碱性基团(如氨基)上形成的阴离子盐。这些盐有许多是本领域已知的，如阳离子盐包括碱金属(如钠和钾)和碱土金属(如镁和钙)的盐以及有机盐(如胺盐)。还可通过使用相应的酸获得阴离子盐，这样的酸包括无机酸如硫酸、硝酸、磷酸、盐酸等；或者有机酸如乙酸、丙酸、羟基乙酸、2-羟基丙酸、2-氧代丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、2-羟基-1，2，3-丙三酸、甲磺酸、乙磺酸、苯甲磺酸、4-甲基苯磺酸、环己基亚磺酸、2-羟基苯甲酸、4-氨基-2-羟基苯甲酸等。这些盐是熟练技术人员熟知的，熟练的技术人员可制备本领域知识所提供的任何盐。此外，熟练技术人员可根据溶解度、稳定性、容易制剂等取某种盐而舍另一种盐。这些盐的测定和最优化在熟练技术人员的经验范围内。
“溶剂合物”是溶质(如氨肽酶N抑制剂)和溶剂(如水)组合形成的配合物。参见“J.Honig等，The Van Nostrand Chemist’s Dictionary，p.650(1953)”。本发明采用的药学上可接受的溶剂包括不干扰氨肽酶N抑制剂的生物活性的那些溶剂(例如水、乙醇、乙酸、N’N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜以及该领域技术人员所知的或容易确定的溶剂)。
式I或II化合物还可以其它被保护的形式或衍生物的形式存在，这些形式对本领域技术人员而言是显而易见的，均应该包含于本发明的范围内。
如上所述的取代基自身还可被一个或多个取代基取代。这样的取代基包括在“C.Hansch和A.Leo，Substituent Constants for Correlation Analysis in Chemistryand Biology(1979)”中列出的那些取代基。优选的取代基包括，例如烷基，烯基，烷氧基，羟基，氧基，硝基，氨基，氨基烷基(如氨甲基等)，氰基，卤，羧基，羰基烷氧基(如羰基乙氧基等)，硫基，芳基，环烷基，杂芳基，杂环烷基(如哌啶基，吗啉基，吡咯基等)，亚氨基，羟烷基，芳基氧基，芳基烷基，及其结合。
本发明的技术特点及有益效果如下：
1、本发明抑制剂为类肽类氨肽酶N抑制剂，与以往类肽类氨肽酶N抑制剂基于L-氨基酸骨架不同，本发明抑制剂基于D-氨基酸骨架。本发明中抑制剂，异羟肟酸基团螯合氨肽酶N催化活性中心的锌离子，氨基酸侧链和芳香结构结合氨肽酶N催化活性中心的疏水口袋。体外抑制氨肽酶N活性实验显示，本发明D-氨基酸衍生物对氨肽酶N的抑制活性明显好于L-氨基酸衍生物类，这可能与氨肽酶N催化活性中心的空间立体要求有关。本发明中抑制剂以酰胺键作为连接基团，部分抑制剂对氨肽酶N的抑制活性达到了纳摩尔级别，解决了以酰胺键作为连接基团的类肽类合成氨肽酶N抑制剂活性较差的问题，丰富了氨肽酶N抑制剂的结构多样性；同时，相比以脲基作为连接基团的抑制剂，本发明抑制剂具有更好的成药性以及氨肽酶N抑制活性。
2、本发明抑制剂制备路线简单，羧基和氨基在缩合剂存在下，生成酰胺；然后酯键被羟胺钾水解，变为异羟肟酸，得到目标化合物。用缩合剂1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐介导羧酸和氨基之间的缩合，与用酰氯法或者酸酐法相比，操作简单，环境更友好。制备异羟肟酸还可以采用羧基与盐酸羟胺经过缩合剂例如EDCI、DCC、TBTU等缩合的方法，但必须首先将酯键水解得到羧酸，此外缩合得到的产物需要经过柱层析纯化；本发明中酯键经过羟胺钾水解，得到异羟肟酸基团，步骤缩短，且分离纯化简单，不需要经过柱层析纯化。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明，但不限于此。
同时下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1.化合物3a-3i的制备，以3h为例。
(R)-N-羟基-4-甲基-2-(2，2，2-三苯基乙酰胺基)戊酰胺(3h)的制备方法，步骤如下：
1)甲基(2，2，2-三苯基乙酰基)-D-亮氨酸(2h)的制备
2，2，2-三苯基乙酸(0.5g，1.74mmol)溶于无水二氯甲烷(10mL)中，0℃下，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(0.38g，1.98mmol)、1-羟基苯并三唑(0.26g，1.93mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.04g，0.33mmol)。0℃反应30分钟后，加入D-亮氨酸甲酯盐酸盐(0.34g，1.87mmol)和三乙胺(0.22g，2.17mmol)；25℃反应12小时；浓缩掉二氯甲烷，残渣加入乙酸乙酯(20mL)，体积分数10％磷酸(20mL)洗3次，饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)洗涤1次，饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤1次，无水硫酸镁干燥。柱层析∶石油醚∶乙酸乙酯∶四氢呋喃体积比＝3∶1∶1，得到0.5g无色油状物，收率：63％；ESI-MS：m/z[M+H]+＝416.5；
2)(R)-N-羟基-4-甲基-2-(2，2，2-三苯基乙酰胺基)戊酰胺(3h)的制备
羟胺钾甲醇溶液的制备：氢氧化钾(28g，509mmol)和盐酸羟胺(23.35g，343mmol)分别溶于70mL和120mL的重蒸甲醇中，获得溶液A和溶液B；溶液A滴加到溶液B中，冰水浴下搅拌40分钟；滤过，得到新制的羟胺钾的甲醇溶液。化合物2h(0.5g，1.20mmol)加入到新制的羟胺钾的甲醇溶液(5mL)中，25℃反应0.5小时，将反应液倾入水中，体积分数10％磷酸调pH至6，生成白色固体，滤过，得到白色固体0.34g，收率：68％。
所得产物的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.71(s，1H)，8.95(s，1H)，7.34-7.18(m，15H)，6.64(d，J＝8.1Hz，1H)，4.34-4.28(m，1H)，1.42-1.35(m，1H)，1.29-1.23(m，2H)，0.78-0.72(m，6H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ172.00，168.79，143.80，130.56，128.26，127.19，67.69，50.05，41.80，24.60，23.21，22.17.
化合物3a-3g和3i的制备，如实施例1所述，只是所用R1COOH不同；其它反应条件(如反应物摩尔用量等)和步骤与实施例1一致。
所制备的(R)-2-溴-N-(1-(羟胺基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)苯甲酰胺(3a)的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.70(s，1H)，8.86(s，1H)，8.55(d，J＝8.1Hz，1H)，7.63(d，J＝7.8Hz，1H)，7.44-7.40(m，1H)，7.36-7.32(m，2H)，4.40-4.35(m，1H)，1.74-1.57(m，2H)，1.45-1.38(m，1H)，0.91-0.89(m，6H)；13C NMR(150MHz，DMSO-d6)δ168.88，167.36，139.22，133.06，131.27，129.42，127.84，119.40，49.66，41.28，24.68，23.38，22.13.
所制备的(R)-N-(1-(羟胺基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)-2-苯氧基苯甲酰胺(3b)的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.75(s，1H)，8.92(s，1H)，8.26(d，J＝8.3Hz，1H)，7.77(dd，J＝7.8Hz，J＝1.8Hz，1H)，7.47(td，J＝7.8Hz，J＝1.8Hz，1H)，7.42-7.38(m，2H)，7.24(t，J＝7.5Hz，1H)，7.16(t，J＝7.5Hz，1H)，7.04(d，J＝7.8Hz，2H)，6.92(d，J＝8.1Hz，1H)，4.44-4.39(m，1H)，1.52-1.35(m，3H)，0.83-0.75(m，6H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ168.83，164.73，156.62，154.29，132.61，130.94，130.46，127.12，127.10，124.23，124.12，119.55，119.01，49.69，42.00，24.59，23.27，22.22.
所制备的(R)-N-(1-(羟胺基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)-2-苯氨基苯甲酰胺(3c)的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.80(s，1H)，9.58(s，1H)，8.90(s，1H)，8.59(d，J＝8.0Hz，1H)，7.77(d，J＝7.8Hz，1H)，7.35-7.28(m，4H)，7.14(d，J＝7.8Hz，2H)，6.97(t，J＝7.3Hz，1H)，6.84(t，J＝7.3Hz，1H)，4.47-4.41(m，1H)，1.76-1.61(m，2H)，1.53-1.47(m，1H)，0.93-0.87(m，6H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ169.32，169.09，144.59，142.01，132.39，129.85，122.17，119.78，119.26，118.55，115.38，49.92，40.94，24.86，23.34，22.06.
所制备的(R)-N-(1-(羟胺基)-4-甲基-1-氧代戊烷-2-基)-3-苯氧基苯甲酰胺(3d)的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.80(s，1H)，8.90(s，1H)，8.58(d，J＝8.1Hz，1H)，7.73(dt，J＝7.8Hz，J＝1.2Hz，1H)，7.59(t，J＝2.0Hz，1H)，7.49(t，J＝7.8Hz，1H)，7.44-7.39(m，2H)，7.20-7.15(m，2H)，7.06-7.02(m，2H)，4.50-4.44(m，1H)，1.77-1.59(m，2H)，1.55-1.48(m，1H)，0.92-0.87(m，6H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ169.24，165.88，156.99，156.96，136.52，130.58，130.33，124.09，123.14，122.00，119.08，118.31，50.12，40.96，24.82，23.31，22.07.
所制备的(R)-2-(2，2-二苯基乙酰氨基)-N-羟基-4-甲基戊酰胺(3e)的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.73(s，1H)，8.84(s，1H)，8.48(d，J＝8.1Hz，1H)，7.31-7.19(m，10H)，5.08(s，1H)，4.29-4.21(m，1H)，1.57-1.36(m，3H)，0.85-0.77(m，6H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ171.07，168.87，141.03，140.81，129.05，128.81，128.61，128.57，126.99，56.35，49.15，41.83，24.64，23.11，22.35.
所制备的(R)-2-(2，2-二苯基丙酰氨基)-N-羟基-4-甲基戊酰胺(3f)的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.70(s，1H)，8.94(s，1H)，7.34-7.18(m，10H)，6.82(d，J＝8.1Hz，1H)，4.34-4.28(m，1H)，1.91(s，3H)，1.52-1.30(m，3H)，0.85-0.80(m，6H)；13CNMR(100MHz，DMSO-d6)δ174.08，168.99，145.63，145.44，128.47，128.42，128.36，126.98，56.57，49.80，41.60，27.05，24.69，23.23，22.22.
所制备的(R)-N-羟基-4-甲基-2-(3，3，3-三苯基丙酰胺基)戊酰胺(3i)的核磁数据如下
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.44(s，1H)，8.73(s，1H)，7.71(d，J＝8.1Hz，1H)，7.24-7.13(m，15H)，3.91-3.81(m，2H)，3.46(d，J＝15.3Hz，1H)，1.19-1.15(m，3H)，0.75(d，J＝5.3Hz，3H)，0.62(d，J＝5.3Hz，3H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ169.76，168.90，147.73，129.62，127.85，126.15，56.08，48.86，46.59，41.37，24.13，23.36，22.16.
实施例2.化合物9a-9j的制备，以9i为例；
(R)-N-(2-(羟基胺基)-1-(4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)-2，2，2-三苯基乙酰胺(9i)的制备方法，步骤如下：
1)甲基(R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-2-(4-羟基苯基)乙酸酯(5)的制备
(R)-4-羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐(6.51g，30mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，0℃下，加入三乙胺(7.58g，75mmol)。0℃下，滴加(Boc)2O(7.84g，36mmol)的二氯甲烷溶液(20mL)。滴加完毕后，25℃下反应24小时。浓缩掉二氯甲烷，残渣溶于乙酸乙酯(100mL)，体积分数10％磷酸(50mL)洗涤3次，饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)洗涤1次，饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤1次。柱层析纯化：石油醚∶乙酸乙酯体积比＝5∶1；得到无色油状物7.82g，收率：93％。
2)甲基(R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-2-(4-甲氧基苯基)乙酸酯(6)的制备
化合物5(2.81g，10mmol)溶解于N’N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入碳酸钾(2.07g，15mmol)和硫酸二甲酯(1.89g，15mmol)。80℃反应5小时。反应液倾入水(100mL)中。乙酸乙酯(50mL)萃取3次，合并有机相。饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤1次。柱层析纯化：石油醚∶乙酸乙酯体积比＝5∶1；得到无色油状物2.54g，收率：86％。
3)甲基(R)-2-(4-甲氧基苯基)-2-(2，2，2-三苯基乙酰氨基)乙酸酯(8i)的制备
化合物6(0.59g，2mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(5mL)。25℃下反应3小时。浓缩掉溶剂，得到0.60g化合物7；加入二氯甲烷(5mL)，制得溶液A，备用。
2，2，2-三苯基乙酸(0.5g，1.74mmol)溶于无水二氯甲烷(10mL)中，0℃下，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(0.38g，1.98mmol)、1-羟基苯并三唑(0.26g，1.93mmol)和4-二甲氨基吡啶(0.04g，0.33mmol)。0℃反应30分钟后，加入溶液A和三乙胺(2g)；25℃反应12小时；浓缩掉二氯甲烷，残渣加入乙酸乙酯(20mL)，体积分数10％磷酸(20mL)洗涤3次，饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)洗涤1次，饱和氯化钠水溶液(20mL)洗涤1次，无水硫酸镁干燥。柱层析：石油醚：乙酸乙酯：四氢呋喃的体积比＝3∶1∶1，得到0.42g白色固体；所得产物的核磁数据如下：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.34-7.25(m，10H)，7.20-7.18(m，5H)，7.13-7.11(m，2H)，5.44(d，J＝8.0Hz，1H)，3.72(s，3H)，3.61(s，3H)；
4)(R)-N-(2-(羟基胺)-1-(4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)-2，2，2-三苯基乙酰胺(9i)
羟胺钾甲醇溶液的制备：氢氧化钾(28g，509mmol)和盐酸羟胺(23.35g，343mmol)分别溶于70mL和120mL的重蒸甲醇中，获得溶液A和溶液B；溶液A滴加到溶液B中，冰水浴下搅拌40分钟；滤过，得到新制的羟胺钾的甲醇溶液。化合物8i(0.3g，0.65mmol)加入到新制的羟胺钾的甲醇溶液(5mL)中，25℃反应0.5小时，将反应液倾入水中，体积分数10％磷酸调pH至6，生成白色固体，滤过，得到0.19g白色固体，收率：64％。
所得产物的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.99(s，1H)，9.09(s，1H)，7.35-7.27(m，9H)，7.15-7.10(m，7H)，7.03-7.01(m，1H)，6.88-6.86(m，2H)，5.28(d，J＝4.0Hz，1H)，3.72(s，3H)；13CNMR(100MHz，DMSO-d6)δ171.62，166.78，159.36，143.53，131.02，130.61，130.49，128.43，128.36，128.28，128.18，127.47，127.41，114.26，67.50，55.60，54.32.
化合物9a-9h和9j的制备，如实施例2所述，只是所用R1COOH不同；其它反应条件(如反应物摩尔用量等)和步骤与实施例2一致。
所制备的(R)-N-(2-羟胺基)-1-(4-甲氧苯基)-2-氧代乙基)-2-苯氧基苯甲酰胺(9d)的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.02(s，1H)，9.06(s，1H)，8.93(d，J＝7.6Hz，1H)，7.87(dd，J＝7.8Hz，J＝1.8Hz，1H)，7.52-7.42(m，3H)，7.26-7.21(m，4H)，7.10(d，J＝8.1Hz，2H)，6.93(d，J＝8.2Hz，1H)，6.82(d，J＝8.7Hz，2H)，5.41(d，J＝7.5Hz，1H)，3.71(s，3H)；13CNMR(100MHz，DMSO-d6)δ166.98，163.70，159.20，156.12，155.00，133.28，131.50，131.40，130.66，128.28，125.25，124.74，124.15，119.49，119.28，114.15，55.59，54.16.
所制备的(R)-N-(2-羟胺基)-1-(4-甲氧苯基)-2-氧代乙基)-3-苯氧基苯甲酰胺(9f)的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.96(s，1H)，8.91(d，J＝8.0Hz，1H)，7.72(d，J＝7.7Hz，1H)，7.56-7.39(m，6H)，7.20-7.14(m，2H)，7.03(d，J＝8.0Hz，2H)，6.91(d，J＝8.3Hz，2H)，5.52(d，J＝7.9Hz，1H)，3.74(s，3H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ167.37，165.83，159.28，156.98，156.94，136.30，130.71，130.60，130.38，129.24，124.13，123.32，122.18，119.13，118.40，114.08，55.60，54.64.
所制备的(R)-2-(2，2-二苯基乙酰氨基)-N-羟基-2-(4-甲氧基苯基)乙酰胺(9g)的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.79(s，1H)，8.99(d，J＝8.1Hz，1H)，7.36-7.18(m，13H)，6.89(d，J＝8.3Hz，2H)，5.35(s，1H)，5.33(s，1H)，3.73(s，3H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ171.06，167.17，159.18，140.89，131.25，128.96，128.68，128.62，128.56，127.07，127.03，114.11，55.99，55.60，53.73.
所制备的(R)-N-(2-(羟胺基)-1-(4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)-2，2-二苯基丙酰胺(9h)的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.89(s，1H)，8.89(s，1H)，7.37-7.23(m，6H)，7.22-7.11(m，6H)，6.94(d，J＝7.3Hz，1H)，6.86(d，J＝8.4Hz，2H)，5.19(d，J＝7.3Hz，1H)，3.73(s，3H)，1.88(s，3H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ173.38，166.48，159.09，145.51，145.21，131.94，128.74，128.68，128.31，128.15，127.21，114.03，56.59，55.59，54.29，26.91.
所制备的(R)-N-(2-(羟胺基)-1-(4-甲氧基苯基)-2-氧代乙基)-3，3，3-三苯基丙酰胺(9j)的核磁数据如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.72(s，1H)，8.89(s，1H)，8.22(d，J＝7.8Hz，1H)，7.22-7.13(m，15H)，7.02(d，J＝7.8Hz，2H)，6.82(d，J＝7.8Hz，2H)，4.98(d，J＝7.3Hz，1H)，3.83-3.78(m，1H)，3.72-3.69(m，4H)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ169.67，167.16，158.98，147.70，131.17，129.61，128.51，127.86，126.16，113.86，56.10，55.60，53.50，46.26.
试验例：体外抑制氨肽酶N的活性实验
1)实验材料：
猪肾氨肽酶N购自Biocol公司，底物L-亮氨酰-p-硝基苯胺购自Sigma公司。
磷酸盐缓冲液的配制：12.89g Na2HPO4·12H2O和2.18gNaH2PO4·2H2O，溶解于1000mL去离子水中，得到pH为7.2的50mM磷酸盐缓冲溶液。
底物溶液配制：L-亮氨酰-p-硝基苯胺溶解于二甲基亚砜中，配成16mmol/L的溶液。
氨肽酶N溶液配制：氨肽酶N溶解于缓冲液中，配成0.15IU/mL的溶液。
抑制剂溶液配制：抑制剂溶于二甲基亚砜，制成100mmol/L的储备液，然后用磷酸盐缓冲液稀释，制成不同浓度梯度的溶液。相邻浓度梯度按照4倍稀释。
2)实验方法：
表1.各组实验中加入试剂组成
Figure BDA0003368077180000191
按照上表中的量将抑制剂溶液、磷酸盐缓冲液、底物溶液和酶溶液加入到96孔板中。在37℃孵育0.5小时。于405nm处测定吸光度，按照如下公式计算抑制率：
Figure BDA0003368077180000192
以抑制剂浓度为横坐标，抑制率为纵坐标，利用origin 9.0软件拟合曲线，得到IC50值。
3)实验结果：
本发明所述通式I和II结构中部分抑制剂和阳性药乌苯美司的氨肽酶N抑制活性如下表2所示：
表2.部分抑制剂的氨肽酶N抑制活性
化合物编号 IC<sub>50</sub>(nM)<sup>a</sup> 化合物编号 IC<sub>50</sub>(nM)<sup>a</sup>
3a 502±41 9b 373±28
3b 43±3 9c 726±68
3c 162±11 9d 35±3
3d 60±4 9e 170±15
3e 15±1 9f 25±2
3f 13±1 9g 21±2
3g 122±12 9h 15±1
3h 3.1±0.2 9i 3.6±0.2
3i 42±3 9j 28±2
9a 457±42 乌苯美司 7634±209
[a]实验结果表示为三次独立实验的平均值±标准差。
体外抑酶实验结果显示：大部分化合物在亚微摩尔或者纳摩尔水平表现了氨肽酶N的抑制活性。化合物3b、3d、3e、3f、3h、3i、9d、9f、9g、9h、9i和9j对氨肽酶N的抑制活性优于阳性药乌苯美司(Bestatin)二至三个数量级。其中3h和9i的抑制活性最好。

Claims (10)

1.D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂，以及其药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，所述抑制剂具有如下通式I或II所示的结构：
Figure FDA0003368077170000011
其中，式I或II化合物中：
R1是芳基，杂芳基，芳基烷基，芳乙烯基、杂芳基烷基、取代芳基，取代杂芳基，取代芳基烷基，取代芳乙烯基或取代杂芳基烷基；所述的取代芳基，取代杂芳基，取代芳基烷基，取代芳乙烯基或取代杂芳基烷基分别是芳基，杂芳基，芳基烷基，芳乙烯基或杂芳基烷基中的基团任选被一个或多个如下基团取代：烷基、C3-8环烷基、烷氧基、烷氨基、卤代C1-8烷基、卤代C1-8烷氧基、卤代C1-8烷氨基、烯基、羟基、炔基、硝基、三氟甲基、氰基、卤素、C1-6烷基磺酰胺基、C1-6烷基甲酰氧基、C1-6烷基甲酰胺基、芳氧基、芳胺基、芳磺酰胺基、芳甲酰胺基、C1-6烷基羰基、C1-6烷氧基羰基、卤代C1-6烷基羰基、卤代C1-6烷氧基羰基、C1-6烷氨基羰基或卤代C1-6烷氨基羰基；
R2是甲基，乙基，丙基，异丙基，苯基，苄基或吡啶基。
2.根据权利要求1所述D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂，其特征在于，R1是吡啶基，吡咯基，呋喃基，噻吩基，吡唑基，噻唑基，噁唑基，嘧啶基，吡嗪基，哒嗪基，喹啉基，异喹啉基，吲哚基，嘌呤基，
Figure FDA0003368077170000012
之一；
R2是甲基。
3.根据权利要求2所述D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂，其特征在于，所述D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂的结构为下列之一：
Figure FDA0003368077170000021
Figure FDA0003368077170000031
4.如权利要求1-3任意一项所述D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂的制备方法，其特征在于，所述D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂I的制备方法包括步骤：
D型亮氨酸甲酯盐酸盐1与R1COOH反应生成中间体2，然后在羟胺钾甲醇溶液中水解，将甲酯转化为异羟肟酸得到目标化合物D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂I；其中，R1与式I中的R1相同；
Figure FDA0003368077170000041
其中，结构式中，R1与式I中的R1相同。
5.根据权利要求4所述D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂的制备方法，其特征在于，所述D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂I的制备方法包括步骤：
将R1COOH溶于二氯甲烷中，-5-5℃下，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑和4-二甲氨基吡啶，-5-5℃反应10-60分钟；然后加入D-亮氨酸甲酯盐酸盐1和三乙胺，20-30℃反应10-20h；反应结束后，浓缩掉二氯甲烷，残渣加入乙酸乙酯，然后经磷酸洗涤、饱和碳酸氢钠水溶液洗涤、饱和氯化钠水溶液洗涤、无水硫酸镁干燥、柱层析，得到中间体2；将中间体2加入到羟胺钾甲醇溶液中，20-30℃反应0.3-1h；将所得反应液倾入水中，调pH至6，生成白色固体，过滤，得到D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂I；
优选的，所述1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和D型亮氨酸甲酯盐酸盐1的摩尔比为0.8-1.5:1；1-羟基苯并三唑和D型亮氨酸甲酯盐酸盐1的摩尔比为0.8-1.5:1；4-二甲氨基吡啶和D型亮氨酸甲酯盐酸盐1的摩尔比为0.05-0.4:1；三乙胺和D型亮氨酸甲酯盐酸盐1的摩尔比为1-1.5:1；D型亮氨酸甲酯盐酸盐1的质量和二氯甲烷的体积比为0.01-0.1g/mL；R1COOH与D型亮氨酸甲酯盐酸盐1的摩尔比为0.8-1.5:1；羟胺钾甲醇溶液中羟胺钾的浓度为1-2mol/L；羟胺钾和中间体2的摩尔比为3-20:1；
优选的，羟胺钾甲醇溶液的制备包括步骤：将氢氧化钾甲醇溶液滴加到盐酸羟胺甲醇溶液中，-5-5℃下搅拌反应30-50分钟，过滤即得；所述氢氧化钾甲醇溶液的浓度为0.2-0.6g/mL，盐酸羟胺甲醇溶液的浓度为0.1-0.3g/mL，氢氧化钾和盐酸羟胺的摩尔比为1-2:1。
6.如权利要求1-3任意一项所述D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂的制备方法，其特征在于，所述D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂II的制备方法包括步骤：
D-型4-羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐4与Boc酸酐反应，生成化合物5；然后与硫酸酯反应，生成化合物6；经三氟乙酸脱去Boc，生成化合物7；然后化合物7与R1COOH反应生成中间体8；然后在羟胺钾甲醇溶液中水解，将甲酯转化为异羟肟酸得到D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂II；其中，R1与式II中的R1相同；
Figure FDA0003368077170000051
其中，结构式中，R1、R2与式II中的R1、R2相同。
7.根据权利要求6所述D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂的制备方法，其特征在于，所述D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂II的制备方法包括以下条件中的一项或多项：
i、化合物5的制备包括步骤：将D-型4-羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐4溶于二氯甲烷中，-5-5℃下，加入三乙胺，然后滴加(Boc)2O的二氯甲烷溶液，滴加完毕后，20-30℃下反应20-30小时；浓缩掉二氯甲烷，残渣溶于乙酸乙酯，依次经磷酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤，然后柱层析得到化合物5；
优选的，D-型4-羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐4的质量和二氯甲烷的体积比为0.1-0.2g/mL；三乙胺和D-型4-羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐4的摩尔比为2-3:1；(Boc)2O的二氯甲烷溶液中(Boc)2O的浓度为0.3-0.5g/mL；D-型4-羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐4和(Boc)2O的摩尔比为1:1.1-1.3；
ii、化合物6的制备包括步骤：化合物5溶解于N’N-二甲基甲酰胺中，加入碳酸钾和硫酸二酯，70-90℃反应3-8小时；反应液倾入水中，乙酸乙酯萃取，合并有机相，经饱和氯化钠水溶液洗涤、柱层析纯化得到化合物6；
优选的，化合物5的质量和N’N-二甲基甲酰胺的体积比为0.1-0.2g/mL；碳酸钾和化合物5的摩尔比为1-1.8:1；硫酸二酯和化合物5的摩尔比为1-1.8:1；
优选的，所述硫酸二酯为硫酸二甲酯或硫酸二乙酯；
iii、中间体8的制备方法包括步骤：(1)化合物6溶于二氯甲烷中，加入三氟乙酸，20-30℃下反应1-5小时；浓缩掉溶剂，得到化合物7；(2)将R1COOH溶于二氯甲烷中，-5-5℃下，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑和4-二甲氨基吡啶，-5-5℃反应10-60分钟；加入化合物7的二氯甲烷溶液和三乙胺，20-30℃反应10-20小时；浓缩掉二氯甲烷，残渣加入乙酸乙酯，经磷酸、饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠水溶液洗涤、无水硫酸镁干燥、柱层析得到中间体8；
优选的，步骤(1)中，化合物6的物质的量和二氯甲烷的体积比为0.1-1mmol/mL；化合物6的物质的量和三氟乙酸的体积比为0.1-1mmol/mL；
优选的，步骤(2)中，将R1COOH溶于二氯甲烷所得溶液中，R1COOH的质量和二氯甲烷的体积比为0.01-0.1g/mL；1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐和R1COOH的摩尔比为0.8-1.5:1；1-羟基苯并三唑和R1COOH的摩尔比为0.8-1.5:1；4-二甲氨基吡啶和R1COOH的摩尔比为0.05-0.4:1；化合物7的二氯甲烷溶液中，化合物7的物质的量浓度为0.1-1mmol/mL；R1COOH与化合物7的摩尔比为0.8-1.5:1；三乙胺和R1COOH的摩尔比为7-15:1；
iv、由中间体8制备D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂II的方法包括步骤：将中间体8加入到羟胺钾甲醇溶液中，20-30℃反应0.3-1h；将所得反应液倾入水中，调pH至6，生成白色固体，过滤，得到D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂II；
优选的，羟胺钾甲醇溶液中羟胺钾的浓度为1-2mol/L；羟胺钾和中间体8的摩尔比为3-20:1；
优选的，羟胺钾甲醇溶液的制备包括步骤：将氢氧化钾甲醇溶液滴加到盐酸羟胺甲醇溶液中，-5-5℃下搅拌反应30-50分钟，过滤即得；所述氢氧化钾甲醇溶液的浓度为0.2-0.6g/mL，盐酸羟胺甲醇溶液的浓度为0.1-0.3g/mL，氢氧化钾和盐酸羟胺的摩尔比为1-2:1。
8.如权利要求1-3任意一项所述D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂在制备预防或治疗与氨肽酶活性异常相关的疾病的药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的与氨肽酶活性异常相关的疾病包括：各种血液瘤或实体瘤，炎症，多发性硬化症，各种组织溃疡或组织溃疡性病症，牙周病，大疱性表皮松懈症或疟疾。
10.一种适于口服或胃肠外给药的药物组合物，包含通式I或II所示的D-氨基酸衍生物类氨肽酶N抑制剂和一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
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