CN114113404B - 一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法 - Google Patents

一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114113404B
CN114113404B CN202111491963.2A CN202111491963A CN114113404B CN 114113404 B CN114113404 B CN 114113404B CN 202111491963 A CN202111491963 A CN 202111491963A CN 114113404 B CN114113404 B CN 114113404B
Authority
CN
China
Prior art keywords
biliverdin
bile
solution
content
animal
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202111491963.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114113404A (zh
Inventor
娄良
张和平
郭然
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhongshan Baisheng Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Zhongshan Baisheng Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhongshan Baisheng Biotechnology Co ltd filed Critical Zhongshan Baisheng Biotechnology Co ltd
Priority to CN202111491963.2A priority Critical patent/CN114113404B/zh
Publication of CN114113404A publication Critical patent/CN114113404A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114113404B publication Critical patent/CN114113404B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/30—Control of physical parameters of the fluid carrier of temperature
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/32—Control of physical parameters of the fluid carrier of pressure or speed
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
    • G01N30/74—Optical detectors
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
    • G01N30/8679—Target compound analysis, i.e. whereby a limited number of peaks is analysed
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N2030/042—Standards
    • G01N2030/047—Standards external
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/30—Control of physical parameters of the fluid carrier of temperature
    • G01N2030/3007—Control of physical parameters of the fluid carrier of temperature same temperature for whole column
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/32—Control of physical parameters of the fluid carrier of pressure or speed
    • G01N2030/324—Control of physical parameters of the fluid carrier of pressure or speed speed, flow rate
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Library & Information Science (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法。该方法采用超高效液相色谱法应用紫外检测器来测定动物胆汁中胆绿素以及有关物质含量，其色谱条件如下：色谱柱为phenomenex kinetex‑XB C18，规格为100mm×2.1mm×1.7μm；其中流动相A为浓度0.05mol/L的三羟甲基氨基甲烷水溶液，用磷酸调节溶液pH为4.0，流动相B为乙腈和四氢呋喃按体积1:1的混合溶液；梯度洗脱条件为68％A，0min～68％A，12min～10％A，14min～10％A，19min～68％A，21min～68％A，35min；流速为0.35mL/min；柱温为40℃；检测波为376nm；进样量为2.0μL。区别于传统紫外分光光度计法，本方法能快速、准确地分离定量动物胆汁中胆绿素含量，大大缩短了分析时间，提高了检测效率，且该分析方法专属性强。

Description

一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法
技术领域
本发明涉及一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法。
背景技术
胆色素是动物胆汁的主要基本成分之一，由棕黄色的胆红素和青绿色的胆绿素组成，两者的含量比例和浓度的不同而使胆汁呈现各种颜色。人的胆汁几乎只含有前者，通常是黄褐至红褐色。一般地，肉食动物的胆液多含胆红素；草食动物的胆液多含胆绿素，多少带有绿色。
胆绿素是由血红蛋白分解产生的血红素被氧化、失去铁，使卟啉环打开而形成。胆绿素又名去氢胆红素，暗绿色片状或柱状晶体，约300℃变黑，分解而不熔化，无熔点。可溶于甲醇、乙醚、氯仿、二硫化碳、苯中，难溶于水，并广泛存在于动物胆汁中。
现有的关于胆绿素含量检测方法主要包括以下专利和文献。
1.Zl201810979793.4，公开了一种检测鸭蛋壳色素的方法；
2.Zl201610866121.3，公开了一种胆绿素制剂及其在防治猪繁殖与呼吸综合征中的应用和检测方法；
3.“胆绿素的溶出伏安法研究以及胆红素的间接测定”(鲁贤丹，曾百肇，张悟铭，周性尧；《分析化学》，1995，23(1)，39～41)；
4.“鸡蛋、鸭蛋与鹌鹑蛋壳色素含量的比较”(李笑，付强，张配颖，牛文晓，黄天成，李梦雨；《绿色科技》，2018年8月第16期)；
现有专利以及文献中关于胆绿素含量检测方法，主要以溶出伏安法以及光度法(紫外分光光度计定性或者定量)为主，因此对于工业化提取和生产胆绿素，存在非常大的不便，不能快速和准确的定量胆绿素含量。但未有专利和文献收载利用超高效液相色谱法(UPLC)同时分离和定量检测动物胆汁中胆绿素的含量。故此，现有胆绿素含量的检测方法有待于进一步完善。
发明内容
本发明的目的在于：克服现有技术中的不足之处，提供一种快速有效测定动物胆汁中胆绿素含量的检测方法，本发明采用超高效液相色谱法应用紫外检测器(UPLC-UV法)来测定动物胆汁中胆绿素以及有关物质含量。区别于传统紫外分光光度计法，本方法应用超高效液相色谱法能快速、准确地分离定量动物胆汁中胆绿素含量，大大缩短了分析时间，提高了检测效率，且该分析方法专属性强。
为了实现上述目的，本发明采取以下技术方案：
一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法，采用超高效液相色谱法应用紫外检测器来测定动物胆汁中胆绿素含量以及有关物质，其色谱条件为：
色谱柱：phenomenex kinetex-XB C18，100mm×2.1mm×1.7um；
流动相A：浓度0.05mol/L的三(羟甲基)氨基甲烷水溶液，用磷酸调节溶液pH为4.0；
流动相B：乙腈和四氢呋喃按体积1:1的混合溶液；
设定梯度洗脱条件如下表所示：
Figure BDA0003398736460000031
设定流速为0.35mL/min；
设定柱温为40℃；
设定检测波为376nm；
设定进样量为2.0uL。
本发明中，一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法，其特征在于所述定量测定包括以下步骤：
1)取胆绿素对照品，用稀释剂溶解成浓度为0.005mg/mL的对照品溶液，取胆汁样品用稀释剂溶解为浓度为10mg/mL的供试品溶液；
2)分别取对照品溶液以及供试品溶液各2uL注入液相色谱仪中，记录色谱图中胆绿素的峰面积，按照外标法来计算，胆汁样品中胆绿素的含量。
所述动物胆汁为鸡胆汁、鸭胆汁、鹅胆汁、猪胆汁、牛胆汁、羊胆汁中的一种。优选动物胆汁为鸡胆汁或鸭胆汁。且应用于本专利方法验证所用的胆汁为鸡胆汁和鸭胆汁。
本发明中，所述稀释剂为二甲基亚砜。
由于在动物胆汁中还存在其它胆色素类物质，如猪牛胆汁中存在胆红素，因此还应包括系统适应性测定，测定方法如下：
分别取胆绿素、胆红素对照品，置于同一容量瓶中，用稀释剂溶解成胆绿素浓度为0.005mg/mL和胆红素浓度为0.02mg/mL的混合对照溶液，摇匀即得系统适应性溶液，取2uL进样记录色谱图各峰的分离度和理论塔板数。
本发明的优点和有益效果如下：
1、本发明方法能够快速准确的测定动物胆汁中胆绿素的含量；
2、相对现有的一些应用光度法(紫外分光光度计)胆色素检测方法，本发明方法应用超高效液相色谱(UPLC-UV)检测方法，该方法专属性强，准确性高；
3、由于动物胆汁中还存在其它胆色类物质，如胆红素，而现有的胆绿素检测方法，无法排除动物胆汁中胆红素的干扰，无法分离胆绿素和胆红素两种胆色素类物质，更无法有效定量动物胆汁中胆绿素的含量，而本方法在UPLC条件下，利用小粒径的超高压液相色谱柱的分离优势，能准确分离动物胆汁中胆绿素和胆红素，同时准确定量动物胆汁中胆绿素的含量，大大缩短了分析时间，提高了检测效率。
4、本发明选用性价比较高的紫外检测器(UV)，应用反相超高效液相色谱法，本方法灵敏度高、可靠性强，检测成本低，适用于动物胆汁中胆绿素提取生产中间产品控制以及中间体的质量考察。
附图说明
图1为空白溶剂(稀释剂)色谱图；
图2为实施例中胆绿素对照溶液平行样1色谱图；
图3为实施例中胆绿素对照溶液平行样2色谱图；
图4为实施例中鸡胆汁样品供试溶液平行样1色谱图；
图5为实施例中鸡胆汁样品供试溶液平行样2色谱图；
图6为实施例中鸭胆汁样品供试溶液平行样1色谱图；
图7为实施例中鸭胆汁样品供试溶液平行样2色谱图。
图8为系统适应性测定中胆红素对照溶液平行样1色谱图；
图9为系统适应性测定中胆红素对照溶液平行样2色谱图；
图10为胆绿素及胆红素系统适应性溶液色谱图；
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
实施例
如图1～图7所示，本实施例一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法中所述动物胆汁主要选用胆绿素含量较高的鸡胆汁和鸭胆汁；
本实施例所采用的色谱条件为：
色谱柱：phenomenex kinetex-XB C18，2.1mm×100mm，1.7um或效能相当色谱柱；
流动相A：浓度0.05mol/L的三(羟甲基)氨基甲烷水溶液，用磷酸调节溶液pH为4.0；
流动相B：乙腈和四氢呋喃按体积1:1的混合溶液；
稀释剂：二甲基亚砜；
梯度洗脱程序：见表1。
表1梯度洗脱程序
Figure BDA0003398736460000061
设定流速为0.35mL/min；
设定柱温为40℃；
设定检测波为376nm；
设定进样量为2.0uL。
UPLC胆色素含量测定的方法如下：
1)精密称取胆绿素对照品适量，用稀释剂溶解成浓度为0.005mg/mL的对照溶液，平行制备2份，分别取鸡胆汁和鸭胆汁样品适量，用稀释剂溶解成浓度为10mg/mL的供试溶液，鸡胆汁和鸭胆汁样品各平行制备2份；
2)分别取2uL进样，记录胆绿素对照品色谱图中胆绿素的峰面积(如图2～图3所示)和鸡胆汁以及鸭胆汁样品色谱图中胆绿素的峰面积(如图4～图7所示)。
3)按照外标法计算胆绿素的含量C。
如式(1)和式(2)所示：
Figure BDA0003398736460000071
Figure BDA0003398736460000072
式中：
Rf为胆绿素的响应因子；
Cs为对照溶液浓度，mg/mL；
As为对照溶液峰面积；
Ai为供试溶液峰面积；
Ci为供试溶液浓度，mg/mL；
根据以上公式计算得本实施例中鸡胆汁供试中胆绿素的平均含量为0.045％；鸭胆汁供试中胆绿素的平均含量为0.032％。
系统适应性测定
由于在动物胆汁中还存在其它胆色素类物质，如胆红素，因此还应包括系统适应性测定，其测定方法如下：
分别取胆绿素、胆红素对照品，置于同一容量瓶中，用稀释剂溶解成胆绿素浓度为0.005mg/mL和胆红素浓度为0.02mg/mL的混合对照溶液，摇匀即得系统适应性溶液，取2uL进样记录色谱图各峰的分离度和理论塔板数。
为了进一步验证本方法的可行性，进行了以下方法学考察：
1.胆绿素专属性试验
精密称取胆绿素对照品适量，用稀释剂配制成0.005mg/mL的对照溶液，分别取鸡胆汁、鸭胆汁样品用稀释剂配制成10mg/mL的供试溶液，分别配制相同浓度的胆绿素和鸡胆汁、胆绿素和鸭胆汁的混合溶液，上述溶液分别取2uL进样，记录色谱图胆绿素峰的分离度和理论塔板数，结果见表2。
表2胆绿素专属性试验结果
Figure BDA0003398736460000081
结果表明：胆绿素的理论踏板数不小于2000，分离度不小于1.5。
2.胆绿素检测限和定量限试验
精密称取胆绿素对照品适量，用稀释剂分别配制成一定浓度，分别吸取2uL溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图。以信噪比约为3:1时的浓度作为检测限，以信噪比约为10:1时的浓度作为定量限，结果见表3。
表3胆绿素检测限和定量限试验结果
Figure BDA0003398736460000082
Figure BDA0003398736460000091
结果表明：胆绿素的检测限为0.000050mg/mL，定量限为0.00015mg/mL。
3.胆绿素线性试验
精密称取胆绿素对照品适量，用稀释剂分别配制为0.00015mg/mL、0.003mg/mL、0.004mg/mL、0.005mg/mL、0.006mg/mL、0.007mg/mL的线性溶液。分别取2uL溶液，注入液相色谱仪中，记录色谱图，各浓度的峰面积见表4。
表4胆绿素线性实验结果
Figure BDA0003398736460000092
Figure BDA0003398736460000101
以浓度对峰面积做线性回归，得线性方程相关系数r＝0.9999。
结果表明：胆绿素在0.00015mg/mL～0.007mg/mL浓度范围内线性良好。
4.胆绿素准确性试验
对照溶液的制备：精密称取胆绿素对照品约适量，用稀释剂溶解并稀释至0.005mg/mL，作为对照溶液。
供试溶液的制备：分别称取鸡胆汁样品和鸭胆汁样品适量，用稀释剂稀释至10mg/mL，作为供试溶液。
回收溶液的制备：精密称取胆绿素对照品约适量，用稀释剂稀释至0.005mg/mL作为加样溶液。分别称取100mg鸡胆汁和鸭胆汁样品于20.0mL容量瓶中，加入10.0mL加样溶液，加稀释剂至刻度线，摇匀，得回收溶液，鸡胆汁和鸭胆汁回收溶液各配置6份。按含量测定项下分别测定回收率，结果见表5。
表5胆绿素回收率测定结果
Figure BDA0003398736460000102
Figure BDA0003398736460000111
结果表明：本法测定胆绿素准确性良好。
5.胆绿素精密度试验
精密称取胆绿素对照品适量，分别用稀释剂溶解稀释至0.005mg/mL，分别取2uL溶液，注入液相色谱仪中，各连续进样6次。记录色谱图，结果见表6。
表6胆绿素重现性试验结果
Figure BDA0003398736460000112
Figure BDA0003398736460000121
在不同时间，由不同人员重复上述试验，结果见表7。
表7胆色素中间精密度试验结果
Figure BDA0003398736460000122
结果表明：本方法的精密度良好。
6.胆色素溶液稳定性试验
精密称取胆绿素对照品适量，用稀释剂溶解稀释至0.005mg/mL，分别在常温下放置0、4、8、12、24h，进样，记录主成分的峰面积变化，结果见表8。
表8溶液稳定性试验结果
Figure BDA0003398736460000123
Figure BDA0003398736460000131
结果表明：常温下24小时内胆绿素对照品溶液稳定性良好。
7.方法耐用性试验
精密称取胆绿素对照品适量，用稀释剂溶解稀释至0.005mg/mL，对色谱条件中的流速和色谱柱温度条件进行小范围改动，考察对主成分保留时间、分离度和理论塔板数的影响，考察结果见表9。
表9方法耐用性试验结果
Figure BDA0003398736460000132
各条件下胆绿素的理论塔板数大于2000，相邻两峰间的分离度大于1.5，说明在测定条件有小的变动时，测定条件符合耐用性要求。
8.样品含量测定
精密称取胆绿素对照品适量，用稀释剂配制成0.005mg/mL的对照溶液，分别取鸡胆汁、鸭胆汁样品各三批用稀释剂配制成10mg/mL的供试溶液，上述溶液分别取2uL进样，记录色谱图。用外标法计算，得不同批次的鸡胆汁样品中胆绿素含量和鸭胆汁样品中胆绿素含量结果，如表10所示。
表10不同批次的鸡胆汁及鸭胆汁样品中胆绿素含量结果
序号 样品名称 批号 胆绿素含量
1 鸡胆汁 J20201221 0.042％
2 鸡胆汁 J20210504 0.044％
3 鸡胆汁 J20210505 0.049％
4 鸭胆汁 Y20201221 0.031％
5 鸭胆汁 Y20210504 0.036％
6 鸭胆汁 Y20210505 0.029％

Claims (5)

1.一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法，其特征在于，采用超高效液相色谱法应用紫外检测器来测定动物胆汁中胆绿素以及有关物质含量，其色谱条件为：
色谱柱：phenomenex kinetex-XB C18，100mm×2.1mm×1.7μm；
流动相A：浓度0.05mol/L的三羟甲基氨基甲烷水溶液，用磷酸调节溶液pH为4.0；
流动相B：乙腈和四氢呋喃按体积1:1的混合溶液；
设定梯度洗脱条件如下表所示：
Figure QLYQS_1
设定流速为0.35mL/min；
设定柱温为40℃；
设定检测波为376nm；
设定进样量为2.0μL。
2.根据权利要求1所述的一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法，其特征在于定量测定包括以下步骤：
1)取胆绿素对照品，用稀释剂溶解成浓度为0.005mg/mL的对照品溶液，取胆汁样品用稀释剂溶解为浓度为10mg/mL的供试品溶液；
2)分别取对照品溶液以及供试品溶液各2uL注入液相色谱仪中，记录色谱图中胆绿素的峰面积，按照外标法来计算，胆汁样品中胆绿素的含量。
3.根据权利要求2所述的一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法，其特征在于：所述动物胆汁为鸡胆汁、鸭胆汁、鹅胆汁、猪胆汁、牛胆汁、羊胆汁中的一种。
4.根据权利要求2所述的一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法，其特征在于：所述稀释剂为二甲基亚砜。
5.根据权利要求2所述的一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法，其特征在于，若在动物胆汁中还存在胆红素，还应包括系统适应性测定，测定方法如下：
分别取胆绿素、胆红素对照品，置于同一容量瓶中，用稀释剂溶解成胆绿素浓度为0.005mg/mL和胆红素浓度为0.02mg/mL的混合对照溶液，摇匀即得系统适应性溶液，取2uL进样记录色谱图各峰的分离度和理论塔板数。
CN202111491963.2A 2021-12-08 2021-12-08 一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法 Active CN114113404B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111491963.2A CN114113404B (zh) 2021-12-08 2021-12-08 一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111491963.2A CN114113404B (zh) 2021-12-08 2021-12-08 一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114113404A CN114113404A (zh) 2022-03-01
CN114113404B true CN114113404B (zh) 2023-07-07

Family

ID=80363447

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111491963.2A Active CN114113404B (zh) 2021-12-08 2021-12-08 一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114113404B (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108254461A (zh) * 2017-12-29 2018-07-06 中山百灵生物技术有限公司 一种新的牛磺胆酸含量以及有关物质的检测方法
CN108918712A (zh) * 2018-07-18 2018-11-30 安徽科宝生物工程有限公司 一种胆红素含量的检测方法
CN112748249A (zh) * 2020-12-18 2021-05-04 深圳市绘云生物科技有限公司 新生儿胆道闭锁诊断标志物的应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004020980A2 (en) * 2002-08-27 2004-03-11 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Assays for the detection of biliverdin in birds and reptiles
US8455222B2 (en) * 2009-11-04 2013-06-04 Utah State University Biliverdin from a non-animal source

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108254461A (zh) * 2017-12-29 2018-07-06 中山百灵生物技术有限公司 一种新的牛磺胆酸含量以及有关物质的检测方法
CN108918712A (zh) * 2018-07-18 2018-11-30 安徽科宝生物工程有限公司 一种胆红素含量的检测方法
CN112748249A (zh) * 2020-12-18 2021-05-04 深圳市绘云生物科技有限公司 新生儿胆道闭锁诊断标志物的应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Determination of porphyrins and biliverdin in bile and excreta of birds by a single liquid chromatography– ultraviolet detection analysis;Rafael Mateo et al;Journal of Chromatography B;第810卷;305-311 *
High-performance liquid chromatographic separation and quantitation of tetrapyrroles from biological materials;Herbert L. Bonkovsky et al;Analytical Biochemistry;第155卷;56-64 *
新的色谱 分析技术在胆红素分析研究中的应用;陈执中等;沈阳药科大学学报;第06卷(第03期);217-219 *
高效液相 色谱分离胆绿素Ⅸ二甲酯异构体;闫芳等;色谱;第09卷(第02期);122-123 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN114113404A (zh) 2022-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107247093B (zh) 尿液中游离甲氧基肾上腺素类物质的检测方法
CN106950306B (zh) 一种测定复方氨基酸注射液中半胱氨酸含量的方法
CN109060983A (zh) 一种液相色谱-串联质谱检测甲氧基肾上腺素类物质的方法
CN108169385A (zh) 一种利用超高效液相色谱串接QDa同时快速检测保健酒中六种糖类物质的方法
CN115308319A (zh) 一种全氟及多氟烷基化合物非靶向筛查的定量方法
CN109765322B (zh) 荆芥的特征图谱构建方法和质量检测方法
CN114113404B (zh) 一种新的动物胆汁中胆绿素含量检测方法
CN113960241A (zh) 基于薄层色谱-近红外光谱联用技术快速筛查保健品中非法添加违禁化学物的方法
CN111855866A (zh) 一种快速测定烟用添加剂中甲醛的方法
CN116953142A (zh) 茶叶中花青素的液相色谱质谱联用检测方法
CN111721865A (zh) 同时测定烟草中14种多酚类化合物的hplc-dad分段检测方法
CN111337620B (zh) 一种检测复方氨基酸注射液中3-氨基-2-哌啶酮含量的方法
CN115266998A (zh) 一种钠盐类分子中钠离子含量的检测方法
CN114778743A (zh) L-脯氨酸中痕量手性异构体d-脯氨酸的检测方法
CN114689737A (zh) 一种s-邻氯苯甘氨酸甲酯酒石酸盐有关物质的分析方法
CN111351886A (zh) 一种测定酚磺乙胺药物中含有的杂质及其主药含量的方法
CN113533576B (zh) 一种检测雪茄烟中多酚化合物的方法
CN113075146B (zh) 一种有机显色剂、基于其的有机络合物探针及其制备方法和用途
CN110455953A (zh) 一种快速同时检测苯乳酸、苯甲酸以及山梨酸的方法
CN110672771B (zh) 一种再造烟叶中的11种色素的检测方法
CN110161137A (zh) 一种测定叶绿素铁钠盐的方法
CN114047280B (zh) 一种医疗器械浸提液中不挥发性未知物含量的检测方法
CN114034804B (zh) 一种测定卡托普利片中脯氨酸含量的方法
CN106841462A (zh) 一种西青果中没食子酸的检测方法
CN113777197A (zh) 一种同时测定桔霉素和1-羟基-2-萘甲酸的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20230615

Address after: No. 12, Yuyi Road, South China Modern Chinese Medicine City, Nanlang, Zhongshan, Guangdong 528451

Applicant after: Zhongshan Baisheng Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: No. 28, Jiuzhou Avenue, Torch Development Zone, Zhongshan City, Guangdong Province

Applicant before: Zhongshan bailing Biotechnology Co.,Ltd.

TA01 Transfer of patent application right
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant