CN108918712A - 一种胆红素含量的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种胆红素含量的检测方法,包括以下步骤:S1:原料选取;S2:干燥;S3:对照品溶液制备;S4:试品过筛;S5:称料;S6:装瓶进料;S7:超声处理;S8:过滤;S9进样分析;S10计算。本发明通过称取经五氧化二磷干燥剂干燥至恒重的胆红素对照品和胆红素样品作为检测样品,避免胆红素对照品和胆红素样品的干燥度不一致导致检测的数据产生误差,通过采用高效液相色谱法进行检测的方式,人为操作检测误差小,检测精度和检测效率高,重现性好,准确率高,适合广泛推广。
Description
技术领域
本发明涉及胆红素技术领域,具体为一种胆红素含量的检测方法。
背景技术
胆红素是胆色素的一种,是人胆汁中的主要色素,呈橙黄色。胆红素是体内铁卟啉化合物的主要代谢产物,有毒性,可对大脑和神经系统引起不可逆的损害,但也有抗氧化剂功能,可以抑制亚油酸和磷脂的氧化。胆红素是临床上判定黄疸的重要依据,也是肝功能的重要指标。胆红素是由红细胞中的血色素所制造的色素,红细胞有固定的寿命(正常红细胞的平均寿命约为120天),每日都会有所毁坏。此时,血色素会分解成为正铁血红素(haem)和血红素。正铁血红素在NADPH和H离子作用下生成胆绿素.三价Fe离子和CO,胆绿素再在NADPH和H离子作用下生成胆红素。血红素则会重新制成组织蛋白。
在胆红素含量检测过程中,传统的检测方法采用紫外-可见分光光度法进行测定,存在人为操作检测误差大、检测不准,检测时间长的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种胆红素含量的检测方法,通过称取经五氧化二磷干燥剂干燥至恒重的胆红素对照品和胆红素样品作为检测样品,避免胆红素对照品和胆红素样品的干燥度不一致导致检测的数据产生误差,通过采用高效液相色谱法进行检测的方式,人为操作检测误差小,检测精度和检测效率高,重现性好,准确率高,以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:一种胆红素含量的检测方法,包括以下步骤:
S1:原料选取,取样胆红素对照品和胆红素试品作为检测原料,均取样量不少于10mg,备用;
S2:干燥,将S1中的取样完成后的胆红素对照品和胆红素试品通过干燥剂进行干燥,干燥至胆红素对照品和胆红素试品重量均不会发生变化;
S3:对照品溶液制备,取样胆红素对照品作为检测原料,精密称定,加二氯甲烷制成每1ml含6.87-6.89μg的溶液,备用;
S4:试品过筛,将试品粉末经过六号筛过筛,备用;
S5:称料,称取S4中过筛后的试品进行精密称定,称取10-12mg试品,备用;
S6:装瓶进料,将S5中称取的胆红素试品放入棕色锥形瓶中,并分别加入二甲基亚砜:乙腈(8:2)混合液50-55ml,密塞,称定重量后振摇混匀;
S7:超声处理,将S6装瓶的试品液体进行超声处理40-44min,再进行称定重量,用二甲基亚砜:乙腈(8:2)混合液补足减失的重量,并摇匀处理;
S8:过滤,将S7中摇匀完成的混合液通过滤膜进行过滤,并将滤液进行收集,备用;
S9:进样分析,采用微量进样器取分别精密吸取S3中的对照品溶液与S8中供试品溶液各5-7μl,将取得的滤液注入液相色谱仪中测定,并记录色谱图;
S10:计算,按外标法计算主峰含量,即可获得胆红素的含量。
优选的,所述步骤S3、S5、S6和S7中的称量装置采用的均是ESJ-A系列全自动电子分析天平。
优选的,所述步骤S6中棕色锥形瓶的容积范围为50-60ml。
优选的,所述步骤S7中超声处理条件下,功率为500-550W,频率为53-55kHz。
优选的,所述步骤S8中滤膜为0.45um滤膜。
优选的,所述步骤S9中液相色谱仪色谱条件与系统适用性试验是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以二甲基亚砜-乙腈溶液为流动相,二甲基亚砜-乙腈溶液比例5:7,检测波长为450nm,理论板数按胆红素峰计算应不低于3000。
优选的,所述步骤S2中采用的干燥剂为五氧化二磷干燥剂,所述五氧化二磷干燥剂为酸性干燥剂。
优选的,所述步骤S8中计算胆红素的含量的公式为:
与现有技术相比,本发明的有益效果是:本发明严格控制该胆红素含量的检测方法,通过严格控制该胆红素含量的检测方法的检测参数,本发明通过称取经五氧化二磷干燥剂干燥至恒重的胆红素对照品和胆红素样品作为检测样品,通过严格控制产品质量,避免胆红素对照品和胆红素样品的干燥度不一致导致检测的数据产生误差,通过采用高效液相色谱法进行检测的方式,人为操作检测误差小,检测精度和检测效率高,适合广泛推广。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合具体实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
实施例1
一种胆红素含量的检测方法,包括以下步骤:
S1:原料选取,取样胆红素对照品和胆红素试品作为检测原料,均取样10mg,备用;
S2:干燥,将S1中的取样完成后的胆红素对照品和胆红素试品通过干燥剂进行干燥,干燥至胆红素对照品和胆红素试品重量均不会发生变化;
S3:对照品溶液制备,取样胆红素对照品作为检测原料,精密称定,加二甲基亚砜:乙腈(8:2)混合液制成每1ml含6.87μg的溶液,备用;
S4:试品过筛,将试品粉末经过六号筛过筛,备用;
S5:称料,称取S4中过筛后的试品进行精密称定,称取10mg试品,备用;
S6:装瓶进料,将S5中称取的胆红素试品放入棕色锥形瓶中,并分别加入二甲基亚砜:乙腈(8:2)混合液50ml,密塞,称定重量后振摇混匀;
S7:超声处理,将S6装瓶的试品液体进行超声处理40min,再进行称定重量,用二甲基亚砜:乙腈(8:2)混合液补足减失的重量,并摇匀和离心处理;
S8:过滤,将S7中摇匀完成的混合液通过滤膜进行过滤,并将滤液进行收集,备用;
S9:进样分析,采用微量进样器取分别精密吸取S3中的对照品溶液与S8中供试品溶液各5μl,将取得的滤液注入液相色谱仪中测定,并记录色谱图;
S10:计算,按外标法计算主峰含量,即可获得胆红素的含量。
具体的,所述步骤S3、S5、S6和S7中的称量装置采用的均是ESJ-A系列全自动电子分析天平。
具体的,所述步骤S6中棕色锥形瓶的容积为50ml。
具体的,所述步骤S7中超声处理条件下,功率为500W,频率为53kHz。
具体的,所述步骤S8中滤膜为0.45um滤膜。
具体的,所述步骤S9中液相色谱仪色谱条件与系统适用性试验是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以二甲基亚砜-乙腈溶液为流动相,二甲基亚砜-乙腈溶液比例5:7,检测波长为450nm,理论板数按胆红素峰计算为3000。
具体的,所述步骤S2中采用的干燥剂为五氧化二磷干燥剂,所述五氧化二磷干燥剂为酸性干燥剂。
具体的,所述步骤S8中计算胆红素的含量的公式为:
实施例2
一种胆红素含量的检测方法,包括以下步骤:
S1:原料选取,取样胆红素对照品和胆红素试品作为检测原料,均取样12mg,备用;
S2:干燥,将S1中的取样完成后的胆红素对照品和胆红素试品通过干燥剂进行干燥,干燥至胆红素对照品和胆红素试品重量均不会发生变化;
S3:对照品溶液制备,取样胆红素对照品作为检测原料,精密称定,加二甲基亚砜:乙腈(8:2)混合液制成每1ml含6.88μg的溶液,备用;
S4:试品过筛,将试品粉末经过六号筛过筛,备用;
S5:称料,称取S4中过筛后的试品进行精密称定,称取11mg试品,备用;
S6:装瓶进料,将S5中称取的胆红素试品放入棕色锥形瓶中,并分别加入二甲基亚砜:乙腈(8:2)混合液52.5ml,密塞,称定重量后振摇混匀;
S7:超声处理,将S6装瓶的试品液体进行超声处理42min,再进行称定重量,用二甲基亚砜:乙腈(8:2)混合液补足减失的重量,并摇匀和离心处理;
S8:过滤,将S7中摇匀完成的混合液通过滤膜进行过滤,并将滤液进行收集,备用;
S9:进样分析,采用微量进样器取分别精密吸取S3中的对照品溶液与S8中供试品溶液各6μl,将取得的滤液注入液相色谱仪中测定,并记录色谱图;
S10:计算,按外标法计算主峰含量,即可获得胆红素的含量。
具体的,所述步骤S3、S5、S6和S7中的称量装置采用的均是ESJ-A系列全自动电子分析天平。
具体的,所述步骤S6中棕色锥形瓶的容积为55ml。
具体的,所述步骤S7中超声处理条件下,功率为525W,频率为54kHz。
具体的,所述步骤S8中滤膜为0.45um滤膜。
具体的,所述步骤S9中液相色谱仪色谱条件与系统适用性试验是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以二甲基亚砜-乙腈溶液为流动相,二甲基亚砜-乙腈溶液比例5:7,检测波长为450nm,理论板数按胆红素峰计算应为3200。
具体的,所述步骤S2中采用的干燥剂为五氧化二磷干燥剂,所述五氧化二磷干燥剂为酸性干燥剂。
具体的,所述步骤S8中计算胆红素的含量的公式为:
实施例3
一种胆红素含量的检测方法,包括以下步骤:
S1:原料选取,取样胆红素对照品和胆红素试品作为检测原料,均取样15mg,备用;
S2:干燥,将S1中的取样完成后的胆红素对照品和胆红素试品通过干燥剂进行干燥,干燥至胆红素对照品和胆红素试品重量均不会发生变化;
S3:对照品溶液制备,取样胆红素对照品作为检测原料,精密称定,加二甲基亚砜:乙腈(8:2)混合液制成每1ml含6.89μg的溶液,备用;
S4:试品过筛,将试品粉末经过六号筛过筛,备用;
S5:称料,称取S4中过筛后的试品进行精密称定,称取12mg试品,备用;
S6:装瓶进料,将S5中称取的胆红素试品放入棕色锥形瓶中,并分别加入二甲基亚砜:乙腈(8:2)混合液55ml,密塞,称定重量后振摇混匀;
S7:超声处理,将S6装瓶的试品液体进行超声处理44min,再进行称定重量,用二甲基亚砜:乙腈(8:2)混合液补足减失的重量,并摇匀和离心处理;
S8:过滤,将S7中摇匀完成的混合液通过滤膜进行过滤,并将滤液进行收集,备用;
S9:进样分析,采用微量进样器取分别精密吸取S3中的对照品溶液与S8中供试品溶液各7μl,将取得的滤液注入液相色谱仪中测定,并记录色谱图;
S10:计算,按外标法计算主峰含量,即可获得胆红素的含量。
具体的,所述步骤S3、S5、S6和S7中的称量装置采用的均是ESJ-A系列全自动电子分析天平。
具体的,所述步骤S6中棕色锥形瓶的容积范围为60ml。
具体的,所述步骤S7中超声处理条件下,功率为550W,频率为55kHz。
具体的,所述步骤S8中滤膜为0.45um滤膜。
具体的,所述步骤S9中液相色谱仪色谱条件与系统适用性试验是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以二甲基亚砜-乙腈溶液为流动相,二甲基亚砜-乙腈溶液比例5:7,检测波长为450nm,理论板数按胆红素峰计算为3500。
具体的,所述步骤S2中采用的干燥剂为五氧化二磷干燥剂,所述五氧化二磷干燥剂为酸性干燥剂。
具体的,所述步骤S8中计算胆红素的含量的公式为:
综上所述:本发明严格控制该胆红素含量的检测方法,通过严格控制该胆红素含量的检测方法的检测参数,本发明通过称取经五氧化二磷干燥剂干燥至恒重的胆红素对照品和胆红素样品作为检测样品,通过严格控制产品质量,避免胆红素对照品和胆红素样品的干燥度不一致导致检测的数据产生误差,通过采用高效液相色谱法进行检测的方式,人为操作检测误差小,检测精度和检测效率高,重现性好,准确率高,适合广泛推广。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种胆红素含量的检测方法,其特征在于:包括以下步骤:
S1:原料选取,取样胆红素对照品和胆红素试品作为检测原料,均取样量不少于10mg,备用;
S2:干燥,将S1中的取样完成后的胆红素对照品和胆红素试品通过干燥剂进行干燥,干燥至胆红素对照品和胆红素试品重量均不会发生变化;
S3:对照品溶液制备,取样胆红素对照品作为检测原料,精密称定,加二甲基亚砜:乙腈(8:2)混合液制成每1ml含6.87-6.89μg的溶液,备用;
S4:试品过筛,将试品粉末经过六号筛过筛,备用;
S5:称料,称取S4中过筛后的试品进行精密称定,称取10-12mg试品,备用;
S6:装瓶进料,将S5中称取的胆红素试品放入棕色锥形瓶中,并分别加入二甲基亚砜:乙腈(8:2)混合液50-55ml,密塞,称定重量后振摇混匀;
S7:超声处理,将S6装瓶的试品液体进行超声处理40-44min,再进行称定重量,用二甲基亚砜:乙腈(8:2)混合液补足减失的重量,并摇匀处理;
S8:过滤,将S7中摇匀完成的混合液通过滤膜进行过滤,并将滤液进行收集,备用;
S9:进样分析,采用微量进样器取分别精密吸取S3中的对照品溶液与S8中的供试品溶液各5-7μl,将取得的滤液注入液相色谱仪中测定,并记录色谱图;
S10:计算,按外标法计算主峰含量,即可获得胆红素的含量。
2.根据权利要求1所述的一种胆红素含量的检测方法,其特征在于:所述步骤S3、S5、S6和S7中的称量装置采用的均是ESJ-A系列全自动电子分析天平。
3.根据权利要求1所述的一种胆红素含量的检测方法,其特征在于:所述步骤S6中棕色锥形瓶的容积范围为50-60ml。
4.根据权利要求1所述的一种胆红素含量的检测方法,其特征在于:所述步骤S7中超声处理条件下,功率为500-550W,频率为53-55kHz。
5.根据权利要求1所述的一种胆红素含量的检测方法,其特征在于:所述步骤S8中滤膜为0.45um滤膜。
6.根据权利要求1所述的一种胆红素的检测方法,其特征在于:所述步骤S9中液相色谱仪色谱条件与系统适用性试验是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以二甲基亚砜-乙腈溶液为流动相,二甲基亚砜-乙腈溶液比例5:7,检测波长为450nm,理论板数按胆红素峰计算应不低于3000。
7.根据权利要求7所述的一种胆红素含量的检测方法,其特征在于:所述步骤S2中采用的干燥剂为五氧化二磷干燥剂,所述五氧化二磷干燥剂为酸性干燥剂。
8.根据权利要求1所述的一种胆红素含量的检测方法,其特征在于:所述步骤S10中计算胆红素的含量的公式为:
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