CN114107130B - 一种复合微生物菌肥及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种复合微生物菌肥及其制备方法和应用，将地衣芽孢杆菌BCSW‑A10212、地衣芽孢杆菌TKPG091和地衣芽孢杆菌BCSW‑101的微生物混合菌剂与聚谷氨酸复配，该菌肥对小白菜的根系生长有促进作用，能够提高小白菜的叶绿素含量、干重及鲜重，对小白菜青虫的防治也有一定的作用，可以减少化肥使用的同时，改善土壤环境。
Description
技术领域
本发明属于种植技术领域，具体是涉及一种含聚谷氨酸具有促生解磷、固氮功效的复合微生物菌肥及制备方法和应用。
背景技术
复合生物菌肥具有广阔的发展前景，微生物肥料具有多重作用，它的核心是微生物，它极大的促进了作物的生长、改良土壤结构，提高作物产量。从严格意义上讲，生物菌肥不是直接供给营养物质，而是通过其中含有特定微生物的生命活动增加了土壤中养分供应量。
现有的复合微生物菌肥通过添加有机肥、菌剂非配复合微生物菌肥，复合微生物菌肥的作用如下：
促进植物生长。复合微生物菌肥具有特殊功效解磷、解钾和固氮的活微生物，通过添加各种元素、有机质营养成分、腐殖质等进一步促进植物生长，这是化学肥料所不能提供的。
提髙作物产量和质量。为了增产，人们对化肥过度依赖，很少施用生物肥料，大量的化学肥料施入，造成施肥过量，虽然土壤中会有大量的磷、钾，这不但会不利于植物生长，而且还会给土壤带来很大负面影响。微生物复合肥料的起作用的是有活性的微生物，通过固氮菌、解磷菌和解钾菌的分解作用，能使土壤中的难溶性矿物质释放出来，促进整个自然界的物质循环。
降低和减轻植物病虫害。拮抗是指微生物可产生－些代谢产物抑制或杀灭植物病原菌。一种微生物可以产生具有抑制多种病原微生物的活性物质，当微生物肥料施入土壤后，微生物会大量存在于植物根系土壤中，它们可抑制病原微生物的生长，还可诱导植物产生系统抗病性。还有研究发现，生防细菌可和病原微生物产生竞争作用，它们相互争土壤中的养分，生防菌需消耗大量的营养物质导致病原菌入侵时得不到营养物质，致病原菌侵染失败。微生物菌肥中的微生物，在作物根际内形成优势菌，拮抗了其它病原微生物，利于抗病防病，降低有害微生物的侵害。
绿叶植物产量的增加意味着更多的营养元素被植株吸收，营养元素被植株的吸收利用主要取决于土壤中养分的可利用性、植株养分的获取和吸收能力、植株对养分的同化能力三方面因此本研究以小白菜为供试作物，开展室内盆栽试验，研究对土壤碳(C)、氮(N)、磷(P)养分的可利用性，植株N、P、K养分的吸收能力和植株C、N同化能力的影响，探究复合微生物菌肥增产节肥途径和机理。
发明内容
本发明的目的是提供一种微生物菌肥，在降解无机磷、降解有机磷、固氮以及促进绿叶类植物对叶绿素的蓄积方面有贡献。本发明还公开了以聚谷氨酸发酵液为复配物，与地衣芽孢杆菌BCSW-A10212、地衣芽孢杆菌TKPG091、地衣芽孢杆菌BCSW-101组成一种能改善土壤环境，促进小白菜根系生长，对小白菜青虫防治有一定作用，增加小白菜产量和品质的复合微生物菌肥。
为实现上述目的，本文提供了一种保藏编号为CGMCC NO.23968的地衣芽孢杆菌BCSW-A10212，该菌作为微生物菌肥具有降解磷、固氮和促进叶绿素蓄积作用。
本发明还提供一种含有该菌的复合微生物菌肥，由地衣芽孢杆菌BCSW-A10212、地衣芽孢杆菌TKPG091和地衣芽孢杆菌BCSW-101组成，优选地，三种菌株按体积比1:1:1组合。
更优选地，本发明提供的一种复合微生物菌肥，由微生物混合菌剂和聚谷氨酸复配而成，筛选出复合微生物菌剂由地衣芽孢杆菌BCSW-A10212、地衣芽孢杆菌TKPG091和地衣芽孢杆菌BCSW-101组成；在降解无机磷、降解有机磷、固氮以及促进绿叶类植物对叶绿素的蓄积方面作用最为突出。
地衣芽孢杆菌BCSW-A10212，Bacillus licheniformis，保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2021年11月24日，保藏编号为：CGMCC NO.23968；
地衣芽孢杆菌TKPG091，Bacillus licheniformis，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2009年10月14日，保藏编号为：CGMCC NO.3336；
地衣芽孢杆菌BCSW-101，Bacillus paralicheniformis，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2019年12月02日，保藏编号为：CGMCC NO.19065。
优选地，地衣芽孢杆菌BCSW-A10212、地衣芽孢杆菌TKPG091和地衣芽孢杆菌BCSW-101的体积比为1:1:1。
进一步优选，微生物混合菌剂和聚谷氨酸复配的体积比为1:1。
为了筛选与聚谷氨酸复配效果最佳的微生物混合菌剂的培养基为：按质量百分比计，葡萄糖0.5％，硫酸铵0.2％，柠檬酸钠0.1％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.6％，磷酸氢二钾0.4％，聚谷氨酸纯品0.2％，初始pH7.0-7.2，所述聚谷氨酸纯品来自天津市北洋百川生物技术有限公司。
本发明还提供了该复合微生物菌肥的制备方法，其制备方法包括以下步骤：
1、分别将地衣芽孢杆菌BCSW-A10212、地衣芽孢杆菌TKPG091和地衣芽孢杆菌BCSW-101的菌种活化、培养和优化；
(1)菌种活化：
将4℃斜面保存的地衣芽孢杆菌BCSW-A10212(CGMCC NO.23968)、地衣芽孢杆菌TKPG091(CGMCC NO.3336)和地衣芽孢杆菌BCSW-101(CGMCC NO.19065)的培养基为LB培养基平板，按质量百分比计，该LB培养基的配方为酵母浸粉0.5％，蛋白胨1％，氯化钠1％，琼脂2％，pH 7.2～7.4。分别划线得LB斜面培养菌种。
(2)液体菌种培养：将LB液体培养基分装入250ml三角瓶中，每瓶装100ml，用接种环蘸取分别挑取地衣芽孢杆菌BCSW-A10212、地衣芽孢杆菌TKPG091和地衣芽孢杆菌BCSW-101的斜面培养菌种得到的单菌落，接入三角瓶中，置摇床上进行培养，培养温度37℃，转速220rpm，培养时间28h即可得到一级菌种。
(3)微生物混合菌剂发酵菌液制备(优化培养)：将优化培养基分装入500ml三角瓶中，每瓶装100ml，添加至优化培养基进行培养，优化培养基的配方为葡萄糖1％，硫酸锰0.09％，豆粕和氯化铵0.8％，豆粕与氯化铵的质量比为6：1，ZES酵母膏0.9％，单一用一级菌种培养后，分别按照2％的添加量，培养温度为37℃，培养转速为220rpm，培养时间为28h。
2、将步骤1中分别培养后的各菌剂按体积比等比例混合制备微生物混合菌剂；
3、将步骤2制备微生物混合菌剂与聚谷氨酸发酵液1：1进行复配。
在筛选与聚谷氨酸复配的微生物混合菌剂时，首先考虑微生物对聚谷氨酸是否有降解作用。所采用的筛选培养基按质量百分比为葡萄糖0.5％，硫酸铵0.2％，柠檬酸钠0.1％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.6％，磷酸氢二钾0.4％，聚谷氨酸纯品0.2％，初始pH7.0-7.2，所述聚谷氨酸纯品来自天津市北洋百川生物技术有限公司。
筛选降解有机磷微生物混合菌剂的培养基为葡萄糖1％，硫酸铵0.05％，硫酸镁0.03％，氯化钠0.03％，氯化钾0.03％，硫酸亚铁0.007％，MnSO4·H2O 0.007％，碳酸钙0.5％，酵母浸粉0.05％，初始pH7.0-7.5，用0.9％生理盐水稀释的卵黄液0.8％。所述微生物混合菌剂培养条件为，在温度37℃、转速220r/min条件下震荡培养，培养时间为7d，制备的复合微生物菌肥在降解土壤中有机磷的用途。
筛选降解无机磷微生物混合菌剂的培养基为葡萄糖1％，硫酸铵0.5％，硫酸镁0.03％，氯化钠0.03％，氯化钾0.03％，硫酸亚铁0.003％，四水合硫酸锰0.003％，磷酸钙1.25，初pH7.0-7.5；所述微生物混合菌剂培养条件为，在温度37℃、转速220r/min条件下震荡培养，培养时间为7d，制备的复合微生物菌肥在降解土壤中无机磷的用途。
筛选固氮微生物混合菌剂的培养基为甘露醇1％，碳酸钙0.5％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.02％，硫酸钙0.01％，氯化钠0.02％，初始pH为7.0-7.2；所述微生物混合菌剂培养条件为，在温度37℃、转速220r/min条件下震荡培养，培养时间为7d，制备的复合微生物菌肥在土壤中固氮的用途。
本发明所提供的一种复合微生物菌肥，可抑制金黄葡萄球菌和疮痂链霉菌。
应用时，将本发明公开的上述复合微生物菌肥稀释80-125倍，进行喷施种植实验，种植温度为25-30℃，种植湿度为40％。
优选地，复合微生物菌肥的应用，稀释一定比例直接对发芽后的种子进行喷施处理，具体的施用方法：将本发明的复合微生物菌肥稀释100倍后，对发芽的种子进行喷施，施用量为1000—2000g/亩，喷施后种植温度为25-30℃，种植湿度为40％
本发明的复合微生物菌肥，筛选出可以与聚谷氨酸复配的地衣芽孢杆菌混合菌剂，该地衣芽孢杆菌混合菌剂不仅不会对聚谷氨酸的成分进行降解，而且复配后，相互促进实现复合微生物菌肥的功效。首先，本发明的地衣芽孢杆菌混合菌剂通过生物降解有机磷和无机磷可以固定大气和土壤中的氮元素，有助于植物根系的吸收，可以提高绿叶植物的叶绿素含量，还可以有效的抑制不利于根系生长的致病菌；同时，聚谷氨酸发挥土壤保水剂作用，缓释作用，并且能促进营养成分的吸收；通过利用地衣芽孢杆菌混合菌剂和聚谷氨酸的协同作用，实现提供植物生长需要的氮、磷、钾等大量元素，铁、铜、锰、钙、硼等微量元素和大量有机质营养成分，以及供给植物生长所需的多种中量元素和腐殖质等，同时聚谷氨酸的缓释和保水作用，促进营养物质的流失，协助吸收，并具有对绿叶植物意想不到生长促进作用，包括对绿叶中叶绿素的蓄积，也包括对根系生长的促进。
本发明的ZES酵母膏购自大连珍奥生物技术股份有限公司，是一种酵母膏的型号。
本发明的有益效果是：
1、本发明制备的复合菌肥的复合微生物菌剂具有解磷、固氮功效，对小白菜的根系生长有促进作用，提高小白菜的产量，提高小白菜的叶绿素含量，干重及鲜重，将土壤中难溶磷变为可溶磷，促进小白菜的吸收。
2、制备该复合微生物菌肥的聚谷氨酸发酵液，聚谷氨酸是一种环保材料，具有极强的吸水性，进行喷施种植，改进土壤的蓬松度，提高土壤的保水能力，在湿度比较低的条件下，对小白菜的种植起促进作用。
3、生产该复合微生物菌肥的微生物混合菌剂中地衣芽孢杆菌BCSW-A10212，地衣芽孢杆菌TKPG091和地衣芽孢杆菌BCSW-101，这几株菌种都无毒无害并且从土壤中筛得的，能够有效的抑制常见的致病菌金黄色葡萄球菌和疮痂链霉菌。
因此，不用添加有机肥，通过微生物菌剂的降解磷功能和固氮功能，即可满足绿叶植物对土壤中营养物质的吸收，并且对植物中叶绿素的蓄积作用有着意想不到的效果。因此筛选的新型地衣芽孢杆菌组合对绿叶植物的生长促进具有重要意义和价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本发明实施例3中地衣芽孢杆菌BCSW-101对金黄色葡萄球菌的检测结果。
图2为本发明实施例3中地衣芽孢杆菌BCSW-A10212对金黄色葡萄球菌的检测结果。
图3为本发明实施例3中微生物混合菌剂对金黄色葡萄球菌的检测结果。
图4为本发明实施例3中微生物混合菌剂(左)和地衣芽孢杆菌BCSW-A10212(右)对疮痂链霉菌的检测结果。
图5为本发明实施例5中空白组收获的小白菜。
图6为本发明实施例5中对照组1处理组1收获的小白菜。
图7为本发明实施例5中对照组2处理组2收获的小白菜。
图8为本发明实施例5中实验组处理组3收获的小白菜。
具体实施方式
以下结合实施例，对本发明的具体实施方式进行更加详细的说明，以便更好地阐述本方面的方案及其各方面的优点。应当指出，以下描述的具体实施方式和实施例的目的仅说明，并不是对本发明的限制。
实施例1
验证微生物菌剂能与聚谷氨酸进行复配，对聚谷氨酸没有降解作用。
按照实例1的微生物菌剂的培养方法进行培养，验证过程所采用的培养基为所采用的筛选培养基为葡萄糖0.5％，硫酸铵0.2％，柠檬酸钠0.1％，硫酸镁0.02％，磷酸二氢钾0.6％，磷酸氢二钾0.4％，聚谷氨酸纯品0.2％，初始pH7.0-7.2，所述聚谷氨酸标品来自天津市北洋百川生物技术有限公司。
培养28h后按照4％的接菌量，接入含有纯品聚谷氨酸的培养基中，培养温度为37℃，培养转速为220rpm，培养天数为3d，发酵结束后，用CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)测定发酵液中聚谷氨酸的含量，结果见表1：
表1微生物混合菌剂发酵结束后聚谷氨酸含量
从表1可以看出，可以看出地衣芽孢杆菌A10212，地衣芽孢杆菌TPGK091和地衣芽孢杆菌BCSW-101发酵结束后与初始聚谷氨酸含量2g/L相接近，所以微生物混合菌剂能够聚谷氨酸进行复配，制备微生物菌肥。
实施例2
验证微生物混合菌剂和单一菌株解无机磷、解有机磷、固氮能力
按照实例1微生物菌剂的培养方法，对地衣芽孢杆菌BCSW-A10212，地衣芽孢杆菌TKPG091和地衣芽孢杆菌BCSW-101单一菌株和三株混合菌剂进行培养后混合，按照8％的接种量接种于无机磷培养基，有机磷培养基，固氮培养基，培养温度为37℃，培养转速为220rpm，培养天数为7d，培养结束后用钼锑抗显色法和凯氏定氮法测定发酵液中的可溶磷含量和总氮，结果见表2：
表2微生物混合菌剂和单一菌株降解无机磷和有机磷磷能力、固氮能力
从表2可以看出，可以看出地衣芽孢杆菌BCSW-A10212和微生物混合菌剂具有解磷和固氮能力，且微生物混合菌剂的各项指标均强于单一菌株，通过不同筛选培养基的筛选，用钼锑抗显色法和凯氏定氮法测定可溶磷含量和总氮含量，来验证微生物混合菌剂的解磷、固氮能力。
实施例3
验证本发明微生物混合菌剂和单一菌株对致病菌之间的拮抗作用。
在小白菜种植过程中，微生物菌肥对小白菜的青虫防治有一定的作用，实验方法如下：
大肠杆菌和金黄葡萄球菌的培养基为LB培养基。疮痂链霉菌的培养基为SP培养基，该配方为酵母浸粉0.4％、麦芽提取物1％、葡萄糖0.4％，pH 7.0～7.2，(质量百分比)。
将灭过菌的LB固体培养基(琼脂添加量2％)倒平板，每个平板倒15mL至20mL，其凝固后为下层培养基，然后将灭过菌的牛津杯置于下层培养基表面，另取琼脂添加量1.5％的LB或SP培养基，加入3％的致病指示菌(大肠杆菌、金黄葡萄球菌和疮痂链霉菌中的一种)，混匀倒在下层培养基上，其凝固后为上层培养。将牛津杯取出，露出凹槽，把0.1mL被试菌菌液(实施例1混合得到的微生物菌剂)注入凹槽内，正置于37℃生化培养箱中培养18h，观察并记录有无透明圈或菌体稀薄现象的平板编号。微生物混合菌剂和单一菌株对致病菌的抑制作用如图1、图2、图3、图4所示。实验结果可以看出地衣芽孢杆菌BCSW-A10212和微生物混合菌剂对致病菌金黄色葡萄球菌和疮痂链霉菌均有抑制作用。附图中图1、图2、图3可以明显看出微生物混合菌剂的抑菌圈比地衣芽孢杆菌BCSW-A10212、地衣芽孢杆菌BCSW-101的抑菌圈大,抑制金黄色葡萄球菌效果强，图4可以看出微生物混合菌剂的抑菌圈比地衣芽孢杆菌BCSW-A10212的抑菌圈大，抑菌疮痂链霉菌效果强。
实施例4
验证复合微生物菌肥对小白菜的种植有效果。
实验材料：小白菜种子。
实验场地：天津市北洋百川生物技术有限公司实验室。
发芽实验：
种植前先进行小白菜的发芽试验，将小白菜种子用纱布进行覆盖，用水浸湿，在室温下进行发芽实验,发芽48h左右。将发芽种子种在距土壤表面5cm处，用土壤进行覆盖。
实验设计(喷施实验)：
(1)CK，空白组:用相同量的自来水进行喷施。
(2)处理组1，对照组1：取0.8ml的微生物混合菌剂按照实例1的微生物菌剂培养方法进行培养稀释至80ml-100ml左右进行喷施。
(3)处理组2，对照组2：取0.8ml的聚谷氨酸发酵液稀释至80ml-100ml左右进行喷施
(4)处理组3，实验组:取0.8ml聚谷氨酸发酵液和0.8ml微生物混合菌剂按照实例1的微生物菌剂培养方法复配稀释至80ml-100ml进行喷施。
种植实验：前期浇水量较大，每天进行浇水，浇水量为100-120ml每天，小白菜苗涨势较好时，浇水量控制在60-70ml每天，在缺水条件下，进行小白菜的种植，种植温度控制在25-30℃，种植湿度控制在40％，在小白菜长出7-8真叶，并且小白菜的叶片较大时进行收获，进行小白菜根长，株高，干重及鲜重的测定，对收获后的小白菜进行有机质，总氮，碱解氮，硝态氮，速效磷的测定，结果见表3：
1.小白菜的根长及株高量取方法：取6株长势一致具有代表性的小白菜，量取小白菜的根须长为小白菜的根长，从最高叶片量取到小白菜根的底部为小白菜的株高，结果见表4：
2.小白菜干重测定方法：选取6株长势一致具有代表性的小白菜，用千分之一的称称取小白菜的重量为小白菜的鲜重，用105℃的烘箱烘干30分钟后，调节温度为75℃，烘干至恒重，用相同的称称取的重量为小白菜的干重，结果见表4：
3.小白菜叶绿素测定方法：用乙醇与丙酮体积比为1：1进行浸提，新鲜的小白菜洗净，晾干，去掉也叶片的大叶脉后，取0.5g剪成2mm左右的碎片于具塞比色管中，每支比色管中加入10ml浸提液，不时摇动，在黑暗中进行，每个样品重复三次，等叶片变白时，用水定容至25ml，用分光光度计测定654nm，663nm的吸光度值，结果见表5：
叶绿素含量(SPAD)＝叶绿素a含量+叶绿素b含量
其中V为浸提液的体积ml；W为小白菜叶片的重量g。
表3不同处理组种植前后土壤指标对比
从表3可以看出，可以看出复合微生物菌肥能够提高土壤速效磷含量，并且能够提高总氮及硝态氮含量，氮和磷都最小白菜的生长有促进作用，有机质含量表示土壤的养分指标，种植后土壤的有机质含量降低，但是收获的小白菜长势较好，比空白组的小白菜长势更好，说明复合微生物菌肥对小白菜的生长起促进作用。
表4不同处理小白菜的生长指标对比
| 处理 | 根长(cm) | 株高(cm) | 鲜重(g) | 干重(g) |
| CK | 4.28±0.22 | 13.8±0.82 | 0.4682±0.0258 | 0.0417±0.0102 |
| 处理1 | 5.14±0.35 | 14.88±0.69 | 0.5357±0.0193 | 0.0451±0.0126 |
| 处理2 | 5.78±0.12 | 15±0.53 | 0.5361±0.0243 | 0.0486±0.0116 |
| 处理3 | 7.34±0.24 | 16±1.54 | 0.6011±0.0346 | 0.0498±0.0133 |
从表4可以看出，不同处理可以看出明显的差别，复合微生物菌肥能够促进小白菜根系生长，能够提高小白菜产量，能够提高小白菜干重及鲜重，说明复合微生物菌肥比单一菌剂和单一聚谷氨酸发酵液对小白菜的生长促进做用更明显。
表5不同处理组小白菜叶绿素含量对比
| 处理 | 叶绿素a含量(mg/g) | 叶绿素b含量(mg/g) | 叶绿素含量SPAD(mg/g) |
| CK | 0.5724 | 0.3108 | 0.8832 |
| 处理1 | 0.6466 | 0.2377 | 0.8843 |
| 处理2 | 0.5388 | 0.2139 | 0.7527 |
| 处理3 | 0.6591 | 0.2543 | 0.9134 |
从表5可以看出，不同组处理的小白菜的叶绿素含量可以看出明显区别，通过浸提液(乙醇与丙酮体积比为1：1)浸提叶绿素含量较高，在光的作用下更稳定，能够看出复合微生物菌肥处理过的小白菜的叶绿素含量高于其他空白组和对照组，说明复合微生物菌肥能够提高小白菜的叶绿素含量。
附图中图5、图6、图7、图8分别为实施例5中，空白组、对照组1、对照组2、实验组小白菜生长的状况。从图5、6、7、8对比可以明显看出的是，实验组的小白菜根的长度是由明显优势的，复合微生物菌肥对小白菜根系生长有促进作用。
Claims (10)
1.保藏编号为CGMCC NO.23968的地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）BCSW-A10212；所述地衣芽孢杆菌BCSW-A10212，保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2021年11月24日，保藏编号为：CGMCCNO.23968。
2.权利要求1所述的保藏编号为CGMCC NO.23968的地衣芽孢杆菌BCSW-A10212作为微生物菌肥在解无机磷、解有机磷、固氮以及促进小白菜对叶绿素的蓄积的应用。
3.一种复合微生物菌肥，其特征在于，含有权利要求1所述的地衣芽孢杆菌BCSW-A10212。
4.根据权利要求3所述的一种复合微生物菌肥，其特征在于，含有微生物混合菌剂，所述的微生物混合菌剂由保藏编号为CGMCC NO.23968的地衣芽孢杆菌BCSW-A10212、保藏编号为CGMCC NO.3336的地衣芽孢杆菌TKPG091和保藏编号为CGMCC NO.19065地衣芽孢杆菌BCSW-101组成；所述地衣芽孢杆菌TKPG091, Bacillus licheniformis ，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2009年10月14日，保藏编号为：CGMCC NO.3336；地衣芽孢杆菌BCSW-101,Bacillus paralicheniformis, 保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物保藏中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2019年12月02日，保藏编号为：CGMCC NO.19065。
5.根据权利要求4所述的一种复合微生物菌肥，其特征在于，所述微生物混合菌剂中，地衣芽孢杆菌BCSW-A10212、地衣芽孢杆菌TKPG091和地衣芽孢杆菌BCSW-101按体积比为1:1:1复配。
6.根据权利要求4所述的一种复合微生物菌肥，其特征在于，所述复合微生物菌肥由微生物混合菌剂和聚谷氨酸按体积比1:1复配而成。
7.权利要求6所述的一种复合微生物菌肥的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）分别将地衣芽孢杆菌A10212、地衣芽孢杆菌TKPG091和地衣芽孢杆菌BCSW-101的活化、培养和优化；（2）将步骤（1）中单一培养后的各菌混合，制备微生物混合菌剂；（3）将步骤（2）制备的微生物混合菌剂与聚谷氨酸发酵液1：1进行复配。
8.根据权利要求3-6中任一项所述的一种复合微生物菌肥或权利要求7所述的复合微生物菌肥的制备方法制备的复合微生物菌肥，其特征在于，可抑制金黄葡萄球菌和疮痂链霉菌。
9.根据权利要求3-6中任一项所述的一种复合微生物菌肥或权利要求7所述的复合微生物菌肥的制备方法制备的复合微生物菌肥的应用，其特征在于，将复合微生物菌肥稀释100-125倍，对小白菜发芽的种子进行喷施，施用量为1000—2000g/亩，喷施后种植温度为25-30℃，种植湿度为40%。
10.根据权利要求3-6中任一项所述的一种复合微生物菌肥，其特征在于，为筛选复合微生物菌肥中能与聚谷氨酸复配的微生物混合菌剂所采用的筛选培养基按质量百分比为葡萄糖0.5%，硫酸铵0.2%，柠檬酸钠0.1%，硫酸镁0.02%，磷酸二氢钾0.6%，磷酸氢二钾0.4%，聚谷氨酸纯品0.2%，初始pH7.0-7.2。
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