CN109207410B - 一株解钾假单胞菌及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一株解钾假单胞菌及其应用。采取的技术方案为：提供了一株解钾假单胞菌，在CGMCC的保藏号为CGMCC No.15914。本发明提供的一株解钾假单胞菌，该菌株能分解利用土壤中的难溶性钾矿物，增加钾细菌筛选培养基中的可溶性钾含量，具备分泌胞外酶强化植株抗性的功能，还能提高修复的作物生物量，可用于制备土壤生物改良菌剂。

Description

一株解钾假单胞菌及其应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一株解钾假单胞菌及其应用。
背景技术
钾在植物体内以离子状态存在，是60多种酶的活化剂，是构成细胞渗透势的重要成分，能促进植株茎秆健壮，改善果实品质，增强植株抗寒能力，提高果实的糖分和维生素C的含量。钾素供应不足时，碳水化合物代谢受到干扰，光合作用受抑制，而呼吸作用加强，同时造成植株抗逆能力减弱，易受病害侵袭，作物品质呈下降趋势。使用钾肥可提高作物含钾量，但大量化学钾肥的施用，不仅投入较大，且容易破坏土壤结构，造成土壤板结，土壤微生物多样性下降，不利于土地生产力的可持续发展。
解钾微生物是一种能将含钾矿物如长石、云母和硅酸盐等不能被作物吸收利用的矿物态钾分解产生水溶性钾的微生物，目前认为其解钾机理是破坏难溶矿物的晶格结构释放有效钾元素，此过程还能加速土壤形成。解钾菌能作为微生物肥料，其制备的生物钾肥具有提高土壤肥力作用，同时减少化肥过度施用造成的环境污染和资源浪费，产生良好的经济、社会效益，符合“绿色环保，持续发展”的时代需求。
中国约有60％的耕地缺钾，耕地速效钾含量正以每年2×10-6～3×10-6的速度下降，且由此造成的土壤矿质营养元素比例失调导致的作物减产也十分严重。此外，研究表明植物发生缺素症的土壤条件，常伴随逆生环境的存在，因此在土壤解钾菌株筛选时应同样重视其提高植株抗性的复合功能。
目前研究者们在解钾微生物的选育和生物钾肥的制备方面取得了一定的研究进展，但《硅酸盐细菌的研究进展》指出大多数菌株的解钾量是从相对层面进行分析的，其表现为解钾作用非常明显，但就绝对值而言，则十分有限。而且还存在菌种在土壤中的定殖能力差、解钾效果不明显、增产效果不稳定的问题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一株解钾假单胞菌及其应用，解决了现有技术中菌种在土壤中的定殖能力差、解钾效果不明显、增产效果不稳定的问题。
本发明的目的是提供一株解钾假单胞菌及其应用。
本发明提供的一株解钾假单胞菌应理解为一株具有解钾能力的假单胞菌。
为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案是：
本发明提供了一株假单胞菌，所述假单胞菌为假单胞菌KSX1-2，Pseudomonassp.，于2018年06月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.15914。
本发明提供了一株假单胞菌，其16SrDNA测序结果如SEQ ID NO：1所示。
本发明还提供了所述的假单胞菌在促进植物生长中的应用。
优选的，所述的假单胞菌在制备土壤解钾生物制剂中的应用。
优选的，所述应用的条件为：pH值为5.0～10.0，温度为4～37℃。
优选的，所述生物制剂由假单胞菌KSX1-2发酵液、生物炭和粪便发酵产物制备。
优选的，所述假单胞菌KSX1-2发酵液、生物炭和粪便发酵产物的质量比为1：5：20。
优选的，所述假单胞菌KSX1-2发酵液的制备过程为：将所述假单胞菌KSX1-2种子液接入到牛肉膏蛋白胨液体培养基中发酵20～24h制备。
优选的，所述种子液的制备过程为：从假单胞菌KSX1-2保藏斜面刮取一接种环菌体接种到50mL牛肉膏蛋白胨液体培养基，于26～30℃，摇培22～26h制得一级种子液，再将一级种子液逐级扩大培养，直至所需发酵液体积的20％。
本发明具有以下有益效果：
1、本发明提供的假单胞菌KSX1-2是一株高效分解含钾矿物的细菌，其土壤解钾效果好，定殖能力强，同时具备一定的促进植物生长和提高作物抗性的作用，解决了普通解钾微生物在逆生环境中解钾能力差、促生效应不稳定，定殖效果欠缺等问题。
2、本发明将假单胞菌KSX1-2进行了发酵，其发酵液显著增强了作物种子发芽率、生物量和逆境抗性，有利于作物育苗和增产。
3、本发明将作物种子用假单胞菌KSX1-2制备的浸种菌液处理后，能有效提高种子的萌发率，并显著增加作物营养生长期的生物量。
4、本发明施用假单胞菌KSX1-2发酵液与生物炭和羊粪发酵产物进行复配得到的土壤解钾生物制剂后，基质速效钾含量增加，作物营养生长期间生物量提高显著，土壤保水性能明显增强，植株细胞分裂素、赤霉素的分泌量和活性均有提高，并产生能够抑制作物病原体/病原菌生长的吩嗪类化合物。
附图说明
图1为假单胞菌KSX1-2在钾细菌筛选培养基上生长图；
图2为假单胞菌KSX1-2在粗砂土培养基中速效钾含量及pH变化折线图；
图3为假单胞菌KSX1-2在LB培养基上的菌落图；
图4为假单胞菌KSX1-2革兰氏染色图；
图5为假单胞菌KSX1-2的扫描电镜图；
图6为假单胞菌KSX1-2在牛肉膏蛋白胨中的生长曲线图；
图7为假单胞菌KSX1-2 16SrDNA测序进化树示意图；
图8为假单胞菌KSX1-2菌液处理小白菜种子耐盐胁迫萌发图；
图9两种土壤解钾生物制剂处理粗砂土后西洋蓍草移栽30d后对比图；
图10施用不同土壤解钾生物制剂对西洋蓍草冠径、株高、烘干生物量的影响图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
若未特别指明，实施举例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
实施例1解钾菌株的筛选
(1)培养基的准备
牛肉膏蛋白胨固体培养基：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂18g，蒸馏水1000mL，pH＝7.0，121℃灭菌20min。
牛肉膏蛋白胨液体培养基：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1000mL，pH＝7.0，121℃灭菌20min。
解钾细菌筛选固体培养基：蔗糖5g,MgSO4·7H2O 0.5g,FeCl3 0.005g,CaCO30.1g，钾长石2g，琼脂20g，pH＝7.4，去离子水1000mL。
解钾细菌筛选液体培养基：蔗糖5g,MgSO4·7H2O 0.5g,FeCl3 0.005g,CaCO30.1g，钾长石2g，pH＝7.4，去离子水1000mL。
(2)假单胞菌的筛选
选取在侵蚀作用强烈发生养分贫瘠的初育土地区原生植被(这里的侵蚀作用强烈发生的主要外营力为风蚀作用，表土层无保留，母质层保留完整；养分贫瘠是有机质含量<6g/kg，速效氮含量<30mg/kg，有效磷含量<3mg/kg，速效钾含量<30mg/kg；初育土是土壤发育程度微弱，土壤剖面层次分异不明显，母质特征显著，剖面类型多为A-C或A-R型，这里的A为表土层，C为母质层，R为基岩)，小心去掉根周土壤保留根际土，装袋低温保藏带回实验室，于超净工作台用灭菌毛刷辅以无菌水剥离洗涤。洗涤完成后转移到500mL三角瓶中，置于摇床中30℃，180r/min震荡20min，静置10min，得到土壤悬浊液，取0.2mL土壤悬浊液于血球计数板用显微镜观察并推算悬浊液中菌体大概数量，采用灭菌水稀释到100CFU/mL后吸取0.5mL均匀涂布于牛肉膏蛋白胨固体培养基中。将培养皿倒置于30℃恒温培养1～2天，蘸取不同类型的单菌落，经平板划线纯化3次以上后，4℃保存于对应的斜面培养基中待用。
第一步初筛：从保存斜面上用接种环均匀刮取一接种环菌体画十字于解钾细菌筛选固体培养基，将画好的平板倒置放在28℃的培养箱中，每天观察生长情况，具体参见图1所示，结果表明：菌体能够在解钾细菌筛选培养基良好生长并出现十字菌面，表明该菌体能够利用难溶性矿物钾。
第二步复筛：将上述能够在解钾细菌筛选固体培养基上正常生长的6株菌体分别接入装有8mL牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于28℃摇床培养24h，制得菌液；取2mL菌液接种到灭菌的50mL解钾细菌筛选液体培养基中，于28℃，180r/min摇床培养7d后，取2mL培养液于4℃，12000r/min离心10min，取上清液并稀释至0.2～2mg/L，通过原子吸收火焰分光光度法测定可溶性钾含量，同一菌株重复3次。结果表明，所有菌株解钾作用以假单胞菌KSX1-2最优，达到39.18±4.57mg/L。
同时另取3mL菌液接种于80mL贫瘠初育土(全钾含量为4.55±0.17g/kg)等钾置换钾长石的解钾细菌筛选液体培养基中，于28℃180r/min摇床培养7d，期间每隔12h取样4mL，用于测定pH和可溶性钾含量，同一菌株重复3次。结果从图2中可以看出，从接种KSX1-2菌株后的前6次取样的解钾细菌筛选培养基中可溶性钾含量逐步上升，之后趋于平稳，并于第13次取样时达到整个培养过程中的最高值21.11±1.53mg/L，而该培养基中的pH值则表现为前10次取样期间均存在缓慢下降，并于5.1左右趋于稳定。
(3)菌株性状特征
形态特征：该菌株为杆状，(0.3～0.8)μm×(1.0～1.1)μm，革兰氏染色为阴性，无芽孢。
菌落特征为：该菌在牛肉膏蛋白胨平板上培养24h后，菌落呈橘黄色，半透明，菌落几乎呈圆形，表面凸起，光滑，较粘稠，挑取有丝；其生长pH值范围为5.0～10.0，最适生长pH值为7，生长温度范围为4～37℃，最适生长温度为28℃。
实施例2解钾菌株的生理生化鉴定
将实施例1中筛选得到的解钾能力最强的假单胞菌KSX1-2保藏至牛肉膏蛋白胨固体培养基的斜面上，并进行一系列生理生化鉴定，其菌株的菌落形态如图3所示、革兰氏染色如图4所示、扫描电镜如图5所示、生长曲线如图6所示，并进行DNA提取，16SrDNA的扩增和测序。
利用引物27F和1492R进行扩增16SrDNA，引物序列如下：
27F：5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3
1492R：5-GGTTACCTTGTTACGACTT-3
PCR扩增条件为94℃3min；94℃30s，55℃30s，72℃90s，30个循环；72℃10min。
对PCR扩增产物进行测序，测序结果(详见SEQ ID NO：1)制作成进化树，如图7所示，将其命名为假单胞菌KSX1-2，并于2018年06月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，菌种名称：假单胞菌KSX1-2(Pseudomonas sp.)，保藏号为CGMCC No.15914。
实施例3假单胞菌KSX1-2的ACC脱氨酶活性测定
(1)培养基的准备
DF培养基：MnSO4·7H2O 0.2g，KH2PO4 4.0g，Na2HPO4 6.0g，柠檬酸2.0g，葡萄糖2.0g，葡萄糖酸钠2.0g，(NH4)2SO4 2.0g，组分一与组分二溶液各取0.1mL，H2O 1000mL，pH＝7.2。组分一的制备：将CuSO4·5H2O 78.22mg,MoO3 10mg,H3BO3 10mg,ZnSO4·7H2O124.6mg,MnSO4·H2O 11.9mg，溶解于100mL无菌蒸馏水中。组分二的制备：将FeSO4·7H2O100mg溶于10mL已灭菌的蒸馏水中，充分振荡。将组份一和组份二，均置于-4℃保存备用。
ADF培养基：把ACC溶于超纯水，用细菌过滤器过滤灭菌，加入到不含有(NH4)2SO4且预先灭菌的DF培养基中，pH＝7.2。ACC添加的终浓度为3.0mmol/L。
(2)ACC脱氨酶活性测定
a、将实施例1中筛选得到的解钾能力最强的假单胞菌KSX1-2保藏至牛肉膏蛋白胨固体培养基的斜面上，从假单胞菌KSX1-2保藏斜面上刮取一接种环菌体接入5mL牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于28℃，180r/min振荡培养24h，吸取培养后的培养菌液2mL接种到50mL牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于28℃，180r/min培养24～48h，于4℃，12000r/min离心10min收集菌体。
b、将菌体用不含(NH4)2SO4的DF培养基洗涤、离心3次(12000r/min，5min，每管加5mL DF)，将菌体重悬于5mL ADF培养基中，28℃，180r/min摇床培养24h后离心收集菌体。
c、将菌体用0.1mol/L Tris-HCl缓冲液(即0.1mol/L的Tris溶液通过HCl调节pH＝7.6)于4℃，12000r/min离心5min、洗涤2次。并取菌体重悬于1mL0.1mol/L Tris-HCl缓冲液中(pH＝7.6),于4℃，12000r/min离心5min收集菌体，再将菌体重悬于600μL 0.1mol/LTris-HCl缓冲液(pH＝8.5)中，添加30μL甲苯迅速振荡30s以破碎细胞，得到粗酶液，取100μL粗酶液，于4℃储存用于测定蛋白浓度。
d、另取粗酶液200μL并加入20μL 0.5mol/L的ACC混匀，进行水浴(30℃,15min)，以不添加ACC的空白作对照。同时加入1mL 0.56mol/L HCl终止此反应，12000r/min离心5min。取上清液1mL加入800μL 0.56mol/L HCl和300μL 0.2％2,4-二硝基苯肼溶液，使其充分溶解，30℃恒温30min，再加入2mL 2mol/L NaOH混匀，于540nm测吸光度值，重复4次并设置对照组。
α-丁酮酸标准曲线的绘制：利用0.1mol/L Tris-HCl(pH＝8.5)缓冲液，配制100mmol/L的α-丁酮酸母液，将该浓度的母液稀释为10mmol/L的α-丁酮酸溶液。将稀释得到的10mmol/L的α-丁酮酸溶液用0.1mmol/L Tris-HCl缓冲液(pH＝8.5)进一步稀释定容，配制成0、0.02439、0.04879、0.07317、0.09756、0.1220、0.1463μmol/mL的α-丁酮酸溶液(α-丁酮酸浓度范围在0.024～0.293μmol/mL之间与吸光度值存在线性增长)，于540nm测定吸光度值(ABS)，测定值分别为0.07、0.203、0.329、0.454、0.581、0.717、0.833。以吸光度值(OD540)为纵坐标，以α-丁酮酸的浓度(mmol/L)为横坐标绘制标准曲线，得到线性回归得到方程y(ABS)＝5.226x+0.0729，R2＝0.9998。
ACC脱氨酶活力计算：参照Lowry法，比色测定细胞提取液中总蛋白质含量，以牛血清白蛋白作为标准物，绘制牛血清白蛋白标准曲线。参考Saleh等的方法，以反应体系中每毫克菌体蛋白酶每小时催化ACC脱氨生成α-丁酮酸的μmol量表示ACC脱氨酶活力，其酶活力单位为α-丁酮酸μmol/(mg·h)，酶活性测定设置空自对照。测定结果为4次重复，其平均值为3.01±0.54α-丁酮酸μmol/(mg·h)。
实施例4假单胞菌KSX1-2的菌液处理提高盐胁迫抗逆性
采用菌液浸种的方式来验证假单胞菌KSX1-2是否能够提高作物抗性。将实施例1中筛选得到的解钾能力最强的假单胞菌KSX1-2保藏至牛肉膏蛋白胨固体培养基的斜面上，从假单胞菌KSX1-2保藏斜面刮取一接种环菌体接种于含50mL灭菌牛肉膏蛋白胨液体培养基的锥形瓶(150mL规格)内，于28℃，180r/min摇床培养24h制备浸种菌液①(菌体浓度为5×108CFU/mL)，将①用灭菌水稀释5倍制得浸种菌液②，挑选80粒大小基本一致的小白菜种子分别置于上述浸种菌液①和②中浸泡2h，将浸种后的小白菜种子置于用5mL 1％NaCl盐溶液浸润滤纸的平皿内，在25～35℃，60％～80％的湿度条件下培养，同时设置培养基浸种处理和不浸种对照，处理和对照均重复3次，其余操作相同，3d后，记录发芽情况，并拍照对比，结果详见图8所示。
结果表明：在1％NaCl盐胁迫下，不浸种对照的小白菜种子总共只有95粒发芽，与该处理相比，使用假单胞菌KSX1-2的浸种菌液①和②处理，发芽率分别提高142％和46.5％，鲜重分别增加了2.59倍与2.14倍，干重分别增加了1.26倍与0.97倍，均达到显著差异，表明浸种处理后能够显著提高小白菜种子在盐胁迫下的逆境萌发。
实施例5土壤解钾生物制剂的应用
1、本盆栽试验于温网棚内进行。
2、供试土壤：养分极端贫瘠的粗砂土(含砂粒95％以上，粒径为0.5～1mm)，风干、过10mm筛备用，pH＝7.38，有机质3.67±0.07g/kg(重铬酸钾外加热法)，碱解氮1.46±0.06mg/kg(1mol/L NaOH碱解扩散法)，速效磷1.58±0.04mg/kg(0.5mol/L NaHCO3钼锑抗比色法)和速效钾52.7±1.22mg/kg(1mol/L中性NH4Ac法提取，火焰原子吸收光度法测定)。
3、供试原料：发酵液的菌体浓度为109CFU/mL，发酵液由假单胞菌KSX1-2种子液(将实施例1中筛选得到的解钾能力最强的假单胞菌KSX1-2保藏至牛肉膏蛋白胨固体培养基的斜面上，从假单胞菌KSX1-2保藏斜面刮取一接种环菌体接种到50mL牛肉膏蛋白胨液体培养基，于28℃，摇培24h制得一级种子液，再将一级种子液按照20％(V/V)的接入量全部接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中发酵培养24h得到二级种子液，如此循环逐级扩大培养，直至获得所需发酵液体积20％的种子液，发酵过程中液体体积会发生变化，但属于可接受误差)，全部接入到牛肉膏蛋白胨液体培养基中发酵20～24h制备。
生物炭为市售生物炭，有机肥为羊粪自然堆肥产物。
4、供试作物：贫瘠耐受作物西洋蓍草，确保极端养分条件下对照组能够存活。
5、试验设置两个处理：
Figure BDA0001845736000000091
灭菌发酵液制备的土壤解钾生物制剂处理(发酵液∶生物炭∶羊粪发酵产物＝1∶5∶20，按质量比计)
Figure BDA0001845736000000092
未灭菌发酵液制备的土壤解钾生物制剂处理(配比同上)，将
Figure BDA0001845736000000093
和
Figure BDA0001845736000000094
分别与5kg粗砂土均匀混合后装盆，注水500mL备用，选取长势基本一致的西洋蓍草幼苗进行移栽，每盆3株，每个处理3个重复，随机排列。试验期间其他农学管理措施一致，移栽30天拍照记录长势，如图9所示，然后全部收获并测定株高、根长、地上部分和地下部分烘干生物量(105℃杀青30min，75℃烘干至恒重)，结果如图10所示。
结果表明：在粗砂土中施用未灭菌发酵液制备的土壤解钾生物制剂
Figure BDA0001845736000000095
(图10中的②)较灭菌发酵液制备的土壤解钾生物制剂
Figure BDA0001845736000000096
(图10中的①)贫瘠耐受作物西洋蓍草的冠径和株高分别增加29.13％和39.68％，地上部分和地下部分生物量分别提高了57.48％和77.78％，存在明显的促进作用。
实施例6幼苗生长过程中活性成分的测定
测定过程中的发酵液为实施例5中菌体浓度为109CFU/mL的发酵液。
细胞分裂素产生情况的生物测定
在西洋蓍草生长初期，截取西洋蓍草的第一片真叶放入去离子水中，待用。在试管中加入2mL去离子水和2mL发酵液，并用去离子水作为对照，将西洋蓍草取出切段，装入试管中，每管十段，25℃暗室中放置三天后，目测叶片保绿情况。绿叶级别划分为：深绿、浅绿、黄绿、黄和黄白。结果显示：经发酵液处理后的真叶都处于浅绿以及上的情况，而对照组的真叶处于黄绿的阶段，经发酵液处理后的真叶的颜色明显比未经发酵液处理的真叶颜色深，可认为发酵液中的菌株产生或增加了延缓植株离体叶片中叶绿素分解作用的细胞分裂素类物质。
赤霉素产生情况的生物测定
取一次性透明塑料杯，每2只重复，每只杯中分别加入1mL发酵液和9mL去离子水，同时用自来水作对照，在每只杯中放入5株西洋蓍草幼苗，并用培养皿盖住杯子，放置27℃在散射光下培养，培养期间补充蒸发掉的水分，当苗高和杯高相近时取出培养皿，10天后至对照的第三片叶子开始长出时测量各株幼苗第二叶叶鞘长度，用统计学方法进行显著性检验。结果显示：采用发酵液培养的西洋蓍草幼苗的叶长比未用发酵液培养的西洋蓍草幼苗的叶长显著的提高，增长率为22.5％，存在明显的促进作用，可认为是发酵液中的菌株产生或增加了赤霉素类物质，促进了西洋蓍草幼苗叶片的伸长。
吩嗪类化合物的分析检测
将发酵液以12000rpm离心3min，取上清，用6mol/mL HCl调节pH值至2.0，然后用两倍体积的乙酸乙酯震荡萃取，静置后将有机相取出加入1/10体积的去离子水振荡后静置分层，收集有机相并将其置于真空干燥箱完全干燥，并用甲醇溶解后进行HPLC分析。结果显示：在色谱图中出现了吩嗪-1-羧酸、绿脓菌素、1-羟基-吩嗪和藤黄绿菌素，该吩嗪类化合物和藤黄绿菌素均为假单胞菌的主要代谢产物，具有抑制病原菌的生物活性，结果可参见图8和图9可以看出，小白菜种子萌发过程中和西洋蓍草的生长过程中并没有出现病变，可认为是假单胞菌KSX1-2分泌的吩嗪类化合物和藤黄绿菌素有效的抑制了作物生长过程中的其根部的病原体/病原菌。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Figure BDA0001845736000000111
Figure BDA0001845736000000121
序列表
<110> 四川大宇中和农业科技发展有限公司
<120> 一株解钾假单胞菌及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1380
<212> DNA
<213> 假单胞菌KSX1-2(Pseudomonas sp.)
<400> 1
ttagactagc tacttctggt gcaacccact cccatggtgt gacgggcggt gtgtacaagg 60
cccgggaacg tattcaccgc gacattctga ttcgcgatta ctagcgattc cgacttcacg 120
cagtcgagtt gcagactgcg atccggacta cgatcggttt tgtgggatta gctccacctc 180
gcggcttggc aaccctctgt accgaccatt gtagcacgtg tgtagcccag gccgtaaggg 240
ccatgatgac ttgacgtcat ccccaccttc ctccggtttg tcaccggcag tctccttaga 300
gtgcccacca ttacgtgctg gtaactaagg acaagggttg cgctcgttac gggacttaac 360
ccaacatctc acgacacgag ctgacgacag ccatgcagca cctgtctcaa tgctcccgaa 420
ggcaccaatc catctctgga aagttcattg gatgtcaagg cctggtaagg ttcttcgcgt 480
tgcttcgaat taaaccacat gctccaccgc ttgtgcgggc ccccgtcaat tcatttgagt 540
tttaaccttg cggccgtact ccccaggcgg tcaacttaat gcgttagctg cgccactaag 600
agctcaaggc tcccaacggc tagttgacat cgtttacggc gtggactacc agggtatcta 660
atcctgtttg ctccccacgc tttcgcacct cagtgtcagt atcagtccag gtggtcgcct 720
tcgccactgg tgttccttcc tatatctacg catttcaccg ctacacagga aattccacca 780
ccctctacca tactctagct cgacagtttt gaatgcagtt cccaggttga gcccggggct 840
ttcacatcca acttaacgaa ccacctacgc gcgctttacg cccagtaatt ccgattaacg 900
cttgcaccct ctgtattacc gcggctgctg gcacagagtt agccggtgct tattctgtcg 960
gtaacgtcaa aacaattacg tattaggtaa ctgcccttcc tcccaactta aagtgcttta 1020
caatccgaag accttcttca cacacgcggc atggctggat caggctttcg cccattgtcc 1080
aatattcccc actgctgcct cccgtaggag tctggaccgt gtctcagttc cagtgtgact 1140
gatcatcctc tcagaccagt tacggatcgt cgccttggtg agccattacc tcaccaacta 1200
gctaatccga cctaggctca tctgatagcg caaggcccga aggtcccctg ctttctcccg 1260
taggacgtat gcggtattag cgtccgtttc cgagcgttat cccccactac caggcagatt 1320
cctaggcatt actcacccgt ccgccgctct caagaggtgc aagcacctct ctaccgctcg 1380

Claims (8)

1.一株假单胞菌(Pseudomonas sp.)，其特征在于：所述假单胞菌命名为KSX1-2，于2018年06月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCCNo.15914。
2.如权利要求1所述的假单胞菌KSX1-2在促进植物生长中的应用。
3.根据权利要求2所述的假单胞菌KSX1-2在促进植物生长中的应用，其特征在于：所述假单胞菌KSX1-2在制备土壤解钾生物制剂中的应用。
4.根据权利要求3所述的假单胞菌KSX1-2在促进植物生长中的应用，其特征在于：所述应用的条件为：pH值为5.0～10.0，温度为4～37℃。
5.根据权利要求3所述的假单胞菌KSX1-2在促进植物生长中的应用，其特征在于：所述生物制剂由假单胞菌KSX1-2发酵液、生物炭和粪便发酵产物制备。
6.根据权利要求5所述的假单胞菌KSX1-2在促进植物生长中的应用，其特征在于：所述生物制剂中假单胞菌KSX1-2发酵液、生物炭和粪便发酵产物的质量比为1：5：20。
7.根据权利要求5所述的假单胞菌KSX1-2在促进植物生长中的应用，其特征在于：所述假单胞菌KSX1-2发酵液的制备过程为：将所述假单胞菌KSX1-2种子液接入到牛肉膏蛋白胨液体培养基中发酵20～24h制备。
8.根据权利要求7所述的假单胞菌KSX1-2在促进植物生长中的应用，其特征在于：所述种子液的制备过程为：从假单胞菌KSX1-2保藏斜面刮取一接种环菌体接种到50mL牛肉膏蛋白胨液体培养基，于26～30℃，摇培22～26h制得一级种子液，再将一级种子液逐级扩大培养，直至所需发酵液体积的20%。
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