CN114010801A - 一种l-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体及其制备与应用 - Google Patents

一种l-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体及其制备与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及纳米技术领域，尤其是涉及一种L‑抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体及其制备与应用，解决现阶段小分子肽吸收性差的问题。所述L‑抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体包括小分子肽、L‑抗坏血酸棕榈酸酯、大豆卵磷脂，不含胆固醇。制备时通过梯度减压旋蒸成膜、循环低温超声‑高速离心获得L‑抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体。该方法操作简单、制备得到的脂质体粒径小(＜120nm)。大豆卵磷脂可将亲水性的小分子肽包裹在亲水内核中，从而减少肠道环境和消化酶对小分子肽的降解。同时，L‑抗坏血酸棕榈酸酯将疏水尾嵌合在大豆卵磷脂表面，可靶向钠依赖维生素C转运体1，显著提高小肠细胞对小分子肽的吸收。

Description

一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体及其制备与 应用
技术领域
本发明涉及纳米技术领域，尤其是涉及一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体及其制备与应用。
背景技术
近年来，食源性小分子肽因其独特的生理活性功能而受到广泛关注，是目前功能食品领域的研究热点，已被证明是一种对人体具有诸多健康影响的功能成分，其生理活性主要包括抗氧化、免疫调节、抗菌、降血压、降胆固醇等。但是小分子肽经口服摄入后存在生物利用度低这一问题。造成小分子肽口服生物利用度低的原因主要包括：(1)稳定性差，大多数小分子肽是亲水性的，在胃肠道内复杂环境下稳定性差，易被胃酸、胃蛋白酶、胰蛋白酶、多种肽酶等分解；(2)吸收性差，小肠吸收屏障特别是小肠上皮细胞对小分子肽的吸收能力有限，且小肠上皮细胞内存在溶酶体，溶酶体内存在的多种蛋白酶和肽酶均会对小分子肽造成降解。这些因素会降低小分子肽的口服生物利用度。因此，迫切需要开发一种对小分子肽进行有效保护的技术手段以提高其口服生物利用度。
纳米载体在提高小分子肽生物利用度方面具有诸多优势。当前已有研究利用纳米载体以提高小分子肽生物利用度方面的零星报道，专利CN 112439050 A公布了一种提高蛋清ACE抑制肽稳定性和生物利用度的方法，该方法利用多孔四氧化三锰纳米载体，通过非共价键作用负载蛋清ACE抑制肽，宣称可提高ACE肽在胃肠环境中的稳定性。专利CN107048417 A公布了一种高生物利用度的桃仁多肽口服液的制备方法，具体涉及添加甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺乙酸酯和微胶囊化处理，以提高桃仁多肽的稳定性。专利CN107183308A提供了一种包埋小分子肽的纳米颗粒及其制备方法，以解决蛋清源小分子肽在体内胃肠道消化系统中极易被降解而不能以完整形式被吸收的问题，该发明采用了离子凝胶的方式，以壳聚糖和三聚磷酸钠为纳米包材，对蛋清源小分子肽进行包埋。这些专利技术帮助解决了小分子肽经口服摄入后在胃肠道中稳定性差这一问题，但大部分都忽视了如何提高小分子肽的小肠吸收这一难题。
发明内容
为了解决上述问题，本发明的目的是提供一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体及其制备与应用。该方法不仅可以解决小分子肽吸收性差这一问题，而且可以提高小分子肽在胃肠环境中的稳定性。
本发明的一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体，填补了促进小分子肽吸收利用方面的空白，所用壁材生物相容性好、安全性高，制备方法简便、易于控制和操作、无有毒有机溶剂残留。本发明的一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体，包括小分子肽、L-抗坏血酸棕榈酸酯、大豆卵磷脂；其中，大豆卵磷脂将亲水性的小分子肽包裹在大豆卵磷脂亲水内核中，从而避免肠道环境和消化酶对小分子肽的降解。重要的是，L-抗坏血酸棕榈酸酯将疏水尾嵌合在大豆卵磷脂表面，可靶向钠依赖维生素C转运体1，显著提高小肠细胞对小分子肽的吸收。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
本发明的第一个目的是提供一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体，包括小分子肽、L-抗坏血酸棕榈酸酯、大豆卵磷脂；
所述大豆卵磷脂将亲水性的小分子肽包裹在大豆卵磷脂亲水内核中，L-抗坏血酸棕榈酸酯将疏水尾嵌合在大豆卵磷脂表面。
在本发明的一个实施方式中，所述小分子肽、L-抗坏血酸棕榈酸酯、大豆卵磷脂质量比为1：(2-10)：(10-50)。
在本发明的一个实施方式中，所述小分子肽的相对分子质量小于1000。
本发明的第二个目的是提供一种上述L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体的制备方法，包括以下步骤：
(1)将大豆卵磷脂和L-抗坏血酸棕榈酸酯在无水乙醇中混匀，离心后取上清液；
(2)将步骤(1)得到的上清液在梯度减压条件下旋蒸除去无水乙醇，形成薄膜；
(3)将小分子肽溶解后离心，取上清液与步骤(2)得到的薄膜水化，得到混合物；
(4)将步骤(3)得到的混合物破碎后离心，留上清液；沉淀重复多次破碎并离心，得到L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体的悬液。
在本发明的一个实施方式中，步骤(2)中，梯度减压过程为首先在真空度为0.09-0.1MPa的条件下迅速蒸发3/4无水乙醇，然后将真空度降为0.06-0.07MPa继续缓慢蒸发掉剩余无水乙醇；旋蒸温度为41-45℃。
在本发明的一个实施方式中，步骤(3)中，小分子肽溶解于去离子水或者生理盐水中。
在本发明的一个实施方式中，步骤(3)中，通过震荡水浴将上清液与薄膜水化，所述震荡水浴温度为37-45℃，所述震荡频率为50-160转/分钟。
在本发明的一个实施方式中，步骤(4)中，混合物在低温冰浴下进行探头超声破碎，超声破碎时间为2-12min，功率为300-450W。
在本发明的一个实施方式中，步骤(4)中，离心过程中离心力为6000-12000g，离心时间为5-30min，沉淀重复破碎、离心5-10次。
本发明的第三个目的是提供一种上述L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体在制备提高小分子肽吸收或口服生物利用度药物中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明的L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体不仅可以解决小分子肽吸收性差这一问题，而且可以提高小分子肽在胃肠环境中的稳定性。
(2)本发明的L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体，填补了促进小分子肽吸收利用方面的空白，所用壁材生物相容性好、安全性高，制备方法简便、易于控制和操作、无有毒有机溶剂残留；大豆卵磷脂将亲水性的小分子肽包裹在大豆卵磷脂亲水内核中，从而避免肠道环境和消化酶对小分子肽的降解。重要的是，L-抗坏血酸棕榈酸酯将疏水尾嵌合在大豆卵磷脂表面，可靶向钠依赖维生素C转运体1，显著提高小肠细胞对小分子肽的吸收。
附图说明
图1为实施例1得到的L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体粒径分布图；
图2为实施例2得到的L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体电势分布图；
图3为实施例2得到的L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体透射电镜(TEM)图；
图4为L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体对小肠Caco-2细胞存活率的影响示意图；
图5为L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体在模拟胃肠消化过程中小分子肽的稳定性实验示意图；
图6为L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体与Caco-2细胞作用后的激光共聚焦(CLSM)观察示意图；
图7为L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体、未经修饰的脂质体和游离肽溶液在大鼠小肠中的离体渗透实验结果示意图；
图8为L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体和未经修饰的脂质体在各类抑制剂的作用下的细胞摄取机制示意图。
具体实施方式
本发明提供一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体，包括小分子肽、L-抗坏血酸棕榈酸酯、大豆卵磷脂；
所述大豆卵磷脂将亲水性的小分子肽包裹在大豆卵磷脂亲水内核中，L-抗坏血酸棕榈酸酯将疏水尾嵌合在大豆卵磷脂表面。
在本发明的一个实施方式中，所述小分子肽、L-抗坏血酸棕榈酸酯、大豆卵磷脂质量比为1：(2-10)：(10-50)。
在本发明的一个实施方式中，所述小分子肽的相对分子质量小于1000。
本发明提供一种上述L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体的制备方法，包括以下步骤：
(1)将大豆卵磷脂和L-抗坏血酸棕榈酸酯在无水乙醇中混匀，离心后取上清液；
(2)将步骤(1)得到的上清液在梯度减压条件下旋蒸除去无水乙醇，形成薄膜；
(3)将小分子肽溶解后离心，取上清液与步骤(2)得到的薄膜水化，得到混合物；
(4)将步骤(3)得到的混合物破碎后离心，留上清液；沉淀重复多次破碎并离心，得到L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体的悬液。
在本发明的一个实施方式中，步骤(2)中，梯度减压过程为首先在真空度为0.09-0.1MPa的条件下迅速蒸发3/4无水乙醇，然后将真空度降为0.06-0.07MPa继续缓慢蒸发掉剩余无水乙醇；旋蒸温度为41-45℃。
在本发明的一个实施方式中，步骤(3)中，小分子肽溶解于去离子水或者生理盐水中。
在本发明的一个实施方式中，步骤(3)中，通过震荡水浴将上清液与薄膜水化，所述震荡水浴温度为37-45℃，所述震荡频率为50-160转/分钟。
在本发明的一个实施方式中，步骤(4)中，混合物在低温冰浴下进行探头超声破碎，超声破碎时间为2-12min，功率为300-450W。
在本发明的一个实施方式中，步骤(4)中，离心过程中离心力为6000-12000g，离心时间为5-30min，沉淀重复破碎、离心5-10次。
本发明提供一种上述L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体在制备提高小分子肽吸收或口服生物利用度药物中的应用。
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
本实施例提供一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体。
将大豆卵磷脂120mg，L-抗坏血酸棕榈酸酯30mg溶于40mL无水乙醇中，室温下搅拌1小时，然后5000g离心10分钟，取上清液。将上清液转入旋转蒸发瓶中，先在真空度为0.095MPa的条件下迅速蒸发乙醇，然后待溶剂剩余约10mL时将真空度降为0.07MPa继续缓慢蒸发掉剩余乙醇，旋蒸温度为41℃，旋转蒸发成膜，除去溶剂。另外，取小分子肽AFGIN10mg加入15mL去离子水中，然后将溶解有小分子肽的溶液加入到旋转成膜的烧瓶中，37℃下旋转震荡水化1h，震荡频率为90转/分钟，将所得产物冰浴超声分散，冰浴超声时间为5min，超声功率为300w，超声频率(间隔)为超声3s，停2s。将超声后的产物8000g离心，离心时间10min，收集上清液，沉淀部分加入5mL去离子水继续低温超声-高速离心操作，低温超声-高速离心循环8次，合并上清液次得到表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的小分子肽脂质体。用激光粒度分析仪测定含有表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的小分子肽脂质体其平均粒径为114.64±3.06nm，见图1所示。用马尔韦纳米粒度电位仪测定含有表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的小分子肽脂质体的Zeta电势为-31.5±0.264mV。通过透析法进行测定，表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的小分子肽脂质体的包封率为78.94±1.64％。
实施例2
本实施例提供一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体。
将大豆卵磷脂100mg，L-抗坏血酸棕榈酸酯20mg溶于60mL无水乙醇中，室温下搅拌1小时，然后5000g离心10分钟，取上清液。将上清液转入旋转蒸发瓶中，先在真空度为0.09MPa的条件下迅速蒸发乙醇，然后待溶剂剩余约15mL时将真空度降为0.06MPa继续缓慢蒸发掉剩余乙醇，旋蒸温度为45℃，旋转蒸发成膜，除去溶剂。另外，取小分子肽QDGNPL10mg加入10mL去离子水中，然后将溶解有小分子肽的溶液加入到旋转成膜的烧瓶中，45℃下旋转震荡水化1h，震荡频率为160转/分钟，将所得产物冰浴超声分散，冰浴超声时间为12min，超声功率为350w，超声频率(间隔)为超声3s，停2s。将超声后的产物12000g离心，离心时间5min，收集上清液，沉淀部分加入2mL生理盐水继续低温超声-高速离心操作，低温超声-高速离心循环5次，合并上清液次得到表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的小分子肽脂质体。用激光粒度分析仪测定含有表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的小分子肽脂质体其平均粒径为112.35±3.32nm。用马尔韦纳米粒度电位仪测定含有表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的小分子肽脂质体的Zeta电势为-25.567±1.357mV，如图2。
实施例3
本实施例提供一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体。
将大豆卵磷脂500mg，L-抗坏血酸棕榈酸酯100mg溶于60mL无水乙醇中，室温下搅拌1小时，然后5000g离心10分钟，取上清液。将上清液转入旋转蒸发瓶中，先在真空度为0.1MPa的条件下迅速蒸发乙醇，然后待溶剂剩余约15mL时将真空度降为0.065MPa继续缓慢蒸发掉剩余乙醇，旋蒸温度为43℃，旋转蒸发成膜，除去溶剂。另外，取小分子肽AHLL 10mg加入10mL去离子水中，然后将溶解有小分子肽的溶液加入到旋转成膜的烧瓶中，40℃下旋转震荡水化1h，震荡频率为50转/分钟，将所得产物冰浴超声分散，冰浴超声时间为2min，超声功率为450w，超声频率(间隔)为超声3s，停2s。将超声后的产物6000g离心，离心时间30min，收集上清液，沉淀部分加入2mL生理盐水继续低温超声-高速离心操作，低温超声-高速离心循环10次，合并上清液次得到表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的小分子肽脂质体。用激光粒度分析仪测定含有表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的小分子肽脂质体其平均粒径为107.72±4.09nm nm。用马尔韦纳米粒度电位仪测定含有表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的小分子肽脂质体的Zeta电势为-22.364±2.073mV。通过透析法进行测定，表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的小分子肽脂质体的包封率为82.55±3.52％。用透射电镜扫描观察形貌，可见表面修饰有L-抗坏血酸棕榈酸酯的小分子肽脂质体外观呈球状，结构清晰，如图3所示。
实施例4
L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体对Caco-2细胞的细胞毒性
良好的安全性和生物相容性是纳米载体应用的前提，本实验采用Caco-2细胞，评价了L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体的细胞毒性。具体的细胞毒性评价操作如下：
培养Caco-2细胞，转入96孔板中，设置control组(空白对照组)和实验组，其中实验组分为7个小组，A的浓度分别为1、5、10、50、100、250、500μg/mL。每组设置5个复孔，细胞密度为1×105个/mL，培养24h。结束后通过CCK 8试剂盒法进行检测。采用酶联免疫检测仪在波长为450nm条件下测定吸光度值，以未处理细胞为参照，计算细胞存活率。细胞存活率的计算公式如下：
细胞存活率(％)＝OD样品/OD对照×100％
实验结果如图4所示：细胞毒性实验表明，在1-500μg/mL浓度下，L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体的细胞存活率均很高，且与对照组相比细胞活性没有显著性差异。说明L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体具有很好的安全性和生物相容性。
实施例5
L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体对小分子肽在胃肠消化过程中的稳定性研究
分别配置模拟胃液和模拟肠液，方法如下所述。量取浓盐酸23.4mL，用高纯水稀释配置成23.4％(v/v)的稀盐酸溶液。取上述稀盐酸溶液1.64mL，加入1.0g胃蛋白酶和适量水先混匀，再加水稀释定容至100mL，即得模拟胃液(SGF)，该模拟胃液的pH为2.0。精密称取0.68g磷酸二氢钾，加水溶解在烧杯中，用浓度为0.1mol/L的NaOH溶液调成pH为6.8的溶液。另精密称取1.0g胰蛋白酶，加适量水溶解，将两种溶液在一起均匀混合，加水稀释定容至100mL，即得模拟肠液(SIF)，pH约为6.8。
将适量的脂质体悬浮液与SGF按比例1:1(v/v)混合，在37℃恒温水浴条件下缓慢搅拌，孵育2h。然后，将胃消化产物与SIF按比例1:1(v/v)混合，37℃恒温水浴条件下缓慢搅拌，继续孵育2h。在适当的时间间隔，取一定量的混合物到10mL离心管中，加入5倍体积的乙醇，用超声的方法使脂质体破乳。破乳后的液体经3K的超滤管离心，收集滤出液，采用HPLC方法测定小分子肽含量。HPLC洗脱溶液为A相纯乙腈，B相为0.1％三氟乙酸水溶液，条件为0-5min，5％A；5-15min，5-45％A，15-25min，90％A，检测波长214nm，进样量10μL。结果如图5所示，L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体在模拟胃肠消化过程中小分子肽AHLL的残留量始终高于未经包埋的AHLL，说明L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体在胃肠消化过程中可以降低胃肠道环境和消化酶对小分子肽的降解。
实施例6
L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体对Caco-2细胞摄取效率评价
取处于对数生长期的单层培养Caco-2细胞，用0.25％胰蛋白酶和0.25％EDTA消化单层培养细胞，用含10％胎牛血清的DMEM培养液配成单细胞悬液，以每孔1×105个细胞接种于培养皿中，每孔体积1mL，将培养皿移入二氧化碳培养箱中，37℃，5％二氧化碳及饱和湿度条件下培养过夜，使细胞贴壁。次日，用含1％胎牛血清的DMEM培养液配制20μg/mL经香豆素-6荧光标记的L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体(AHLL-Lipo-AP)和未经修饰的小分子肽脂质体溶液(AHLL-Lipo)。将培养皿中的培养液吸出，加入经香豆素-6荧光标记的L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体和未经修饰的小分子肽脂质体溶液，37℃孵育1h，吸弃上清液。用PBS溶液洗涤培养皿三次，在激光共聚焦显微镜下观察细胞吸收情况(图6)。结果显示L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体被细胞大量摄取，远高于未经修饰的脂质体，说明L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体可以更好的被肠细胞吸收利用。
实施例7
L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体在大鼠离体小肠内的渗透性研究
取十二只SD大鼠过夜禁食，实验当天腹腔注射过量水合氯醛处死，打开腹腔后各剪取5cm的空肠并两端结扎。然后向肠腔内注入0.4mL的游离肽AHLL溶液、未经修饰的小分子肽脂质体、经L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体。然后将肠段置于10mL充氧的KR缓冲液中于37℃以100rpm振摇，于0.5、1、1.5和2小时分别取出500μL的缓冲液用于测定小分子肽的含量，然后加入等体积的新鲜缓冲液以保证体积恒定。结果如图7所示，不同剂型的游离肽AHLL都呈现时间依赖性，时间越长，渗透量越高，在同一肠段孵育时，小分子肽的渗透量为：L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体＞未经修饰的小分子肽脂质体>游离肽溶液。这表明L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体可以更好的经过肠道渗透进入血液，提高小分子肽生物利用度。
实施例8
L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体在细胞内摄取机制研究
为了确定L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体的摄取机制，将处于对数生长期的Caco-2细胞以3×105个细胞/孔的速度在六孔板中培养48小时。添加抑制剂(2mL)如下：氯丙嗪(30μmol/L)、阿米洛利(50μM)、甲基β-环糊精(M-β-CD；2.5mM)、吲哚美辛(15μg/mL)、根皮素(10μg/mL)。在实施低温摄取实验时，将细胞先放在4℃条件下30min后，再低温摄取lh，剩下操作和之前一样。对照组放在37℃下摄取。随后，将C6标记的L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体(AHLL-Lipo-AP)和未经修饰的小分子肽脂质体溶液(AHLL-Lipo)悬浮在含有上述抑制剂之一的无血清DMEM中的细胞1小时(C6终浓度为1μg/mL)。孵育后，洗涤、收获细胞并通过流式细胞仪分析。结果如图7所示，在相应的内吞作用的各种抑制剂中，吲哚美辛(特异性抑制小窝蛋白介导的内吞作用)的存在显著降低了细胞对这两种纳米颗粒的摄取(p<0.01)。阿米洛利(巨胞饮特异性抑制剂)则显著抑制了AHLL-Lipo-AP的摄取，这说明AHLL-Lipo-AP在摄取过程中会通过巨胞饮的形式进入细胞。此外，在4℃的条件下摄取过程也被抑制，这是内吞作用可能受到限制的温度。在与根皮素(特异性抑制钠依赖维生素C转运体1介导的转运途径)孵育后，AHLL-Lipo的摄取过程没有明显变化，但是AHLL-Lipo-AP的摄取被显著抑制，这说明AHLL-Lipo-AP是通过钠依赖维生素C转运体1介导进入细胞的。小肠上皮细胞中的钠依赖维生素C转运体1在整个小肠部位均有大量表达，其介导转运的纳米载体可以避免进入溶酶体，从而轻松实现溶酶体逃逸，大大减少纳米载体包埋的小分子肽与溶酶体的接触，进而降低了小分子肽被溶酶体内多种酶的降解。靶向钠依赖维生素C转运体1的AHLL-Lipo-AP实现了小分子肽的高效肠道吸收和转运。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体，其特征在于，包括小分子肽、L-抗坏血酸棕榈酸酯、大豆卵磷脂；
所述大豆卵磷脂将亲水性的小分子肽包裹在大豆卵磷脂亲水内核中，L-抗坏血酸棕榈酸酯将疏水尾嵌合在大豆卵磷脂表面。
2.根据权利要求1所述的一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体，其特征在于，所述小分子肽、L-抗坏血酸棕榈酸酯、大豆卵磷脂质量比为1：(2-10)：(10-50)。
3.根据权利要求1所述的一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体，其特征在于，所述小分子肽的相对分子质量小于1000。
4.一种如权利要求1所述的L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将大豆卵磷脂和L-抗坏血酸棕榈酸酯在无水乙醇中混匀，离心后取上清液；
(2)将步骤(1)得到的上清液在梯度减压条件下旋蒸除去无水乙醇，形成薄膜；
(3)将小分子肽溶解后离心，取上清液与步骤(2)得到的薄膜水化，得到混合物；
(4)将步骤(3)得到的混合物破碎后离心，留上清液；沉淀重复多次破碎并离心，得到L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体的悬液。
5.根据权利要求4所述的一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，梯度减压过程为首先在真空度为0.09-0.1MPa的条件下迅速蒸发3/4无水乙醇，然后将真空度降为0.06-0.07MPa继续缓慢蒸发掉剩余无水乙醇；旋蒸温度为41-45℃。
6.根据权利要求4所述的一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，小分子肽溶解于去离子水或者生理盐水中。
7.根据权利要求4所述的一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，通过震荡水浴将上清液与薄膜水化，所述震荡水浴温度为37-45℃，所述震荡频率为50-160转/分钟。
8.根据权利要求4所述的一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，混合物在低温冰浴下进行探头超声破碎，超声破碎时间为2-12min，功率为300-450W。
9.根据权利要求4所述的一种L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，离心过程中离心力为6000-12000g，离心时间为5-30min，沉淀重复破碎、离心5-10次。
10.一种如权利要求1所述的L-抗坏血酸棕榈酸酯修饰的小分子肽脂质体在制备提高小分子肽吸收或口服生物利用度药物中的应用。
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