CN109276570A - 生物源大环分子的纳米药物及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及制药领域，且特别涉及一种生物源大环分子的纳米药物及其制备方法。生物源大环分子的纳米药物包含7‑乙基‑10‑羟基喜树碱和运输所述7‑乙基‑10‑羟基喜树碱的磷脂纳米盘，所述磷脂纳米盘包含朝向内部脂质的疏水面和朝外的亲水面。其具有优异的抗肿瘤性能，可忽略不计的全身毒性和长期免疫毒性。制备方法操作简单、反应条件温和，能够快速制备得到纳米药物。

Description

生物源大环分子的纳米药物及其制备方法
技术领域
本发明涉及制药领域，且特别涉及一种生物源大环分子的纳米药 物及其制备方法。
背景技术
恶性肿瘤作为全球较大的公共卫生问题之一，已经严重地威胁到 人类生命健康，成为新世纪人类的第二杀手。化疗就是通过使用化学 治疗药物杀灭癌细胞达到治疗目的，但是大多数的化疗药物在临床使 用过程中存在诸多问题，如水溶性和稳定性较差、毒性大、分布选择 性差、缺乏靶向性和体内循环时间短等，不仅疗效低，还会引发严重 的毒副作用，损害心、肝、肺、肾、骨髓等重要器官的功能，破坏免 疫系统，导致机体对肿瘤的自我保护屏障丧失，给病患带来痛苦。因 此，寻找高效、低毒的输送体系来解决化疗药物的上述问题已成为相 关领域的研究热点。
发明内容
本发明的目的在于提供一种生物源大环分子的纳米药物，其具有 优异的抗肿瘤性能，可忽略不计的全身毒性和长期免疫毒性。
本发明的另一目的在于提供一种生物源大环分子的纳米药物的 制备方法，其方法操作简单、反应条件温和，能够快速制备得到纳米 药物。
本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的：
本发明提出一种生物源大环分子的纳米药物，其包含7-乙基-10- 羟基喜树碱和运输所述7-乙基-10-羟基喜树碱的磷脂纳米盘，所述磷 脂纳米盘包含朝向内部脂质的疏水面和朝外的亲水面。
本发明提出一种生物源大环分子的纳米药物的制备方法，包括以 下步骤：将磷脂分子和7-乙基-10-羟基喜树碱混合后再与两亲性的膜 支架蛋白混合以形成纳米药物；
其中，膜支架蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，其编码 序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明的有益效果是：本发明的生物源大环分子的纳米药物以抗 癌药物SN38充当客体，磷脂纳米盘充当主体，磷脂纳米盘朝向内部 脂层的疏水面和朝外的亲水面的使得其在水溶液中具有很高的溶解 度，同时具有非常高的稳定性，并可对SN38进行高效地运输。而SN38 和磷脂纳米盘相互作用显着提高了SN38的溶解度，有效抑制了内酯 开环，有利于维持SN38的抗癌活性。通过充分利用超分子化学和纳 米技术，这种超分子纳米医药具有优异的抗肿瘤性能，可忽略不计的 全身毒性和长期免疫毒性。同时，由于其在拓扑结构和生物源方面具 有明显的优势，这种超分子聚合物纳米医药具有良好的抗肿瘤效果， 为癌症治疗打开了一扇新的大门。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下 将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为检测分析中SN38-ND的透射电子显微镜表征图；
图2为检测分析中SN38-ND、SN38和ND的紫外-可见吸收 光谱；
图3为检测分析中SN38-ND、SN38和ND的荧光光谱图；
图4为λ＝280nm处SN38-ND的体积排阻色谱表征图谱；
图5为λ＝450nm处SN38-ND的体积排阻色谱表征图谱；
图6为紫外吸收图谱；
图7为检测分析中高效液相色谱表征图；
图8为细胞毒性试验的CCK-8assay分析图；
图9位激光共聚焦显微镜检测图；
图10为对比例8的紫外分析检测图谱。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对 本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明 具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪 器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
在本发明的描述中，需要说明的是，术语“第一”、“第二”等仅用 于区分描述，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
下面对本发明实施例的生物源大环分子的纳米药物及其制备方 法具体说明。
本发明实施例提供一种生物源大环分子的纳米药物，其包含7- 乙基-10-羟基喜树碱和运输所述7-乙基-10-羟基喜树碱的磷脂纳米 盘，磷脂纳米盘包含朝向内部脂质的疏水面和朝外的亲水面。该7- 乙基-10-羟基喜树碱为疏水性药物，而磷脂纳米盘朝内的疏水面为7- 乙基-10-羟基喜树碱提供疏水环境，保证7-乙基-10-羟基喜树碱能够 与磷脂纳米盘稳定地结合，而磷脂纳米盘朝外的亲水面可以促进对人 体对生物源大环分子的纳米药物的吸收，继而提升7-乙基-10-羟基喜 树碱的溶解度和药效。
进一步地，本发明实施例采用的7-乙基-10-羟基喜树碱(编号为 SN38)为伊立替康的活性代谢物。伊立替康是一种拓扑异构酶I抑 制剂，是从亚洲乔木树干液中分离到的天然产物喜树碱的类似物，其 对许多恶性肿瘤有效，但是其在人体内利用率低，因此其相对活性代 谢物抗肿瘤效果差，起效慢，且增加其他脏腑器官负荷，容易引发其 他副作用。
同时，在人体内仅2-8％的伊立替康转化为其活性代谢产物 SN38，SN38具有比伊立替康高100至1000倍的细胞毒活性，但是 SN38水溶性极差(<5μg/mL)，且在任何一种生物相容性的试剂中都 无法溶解，导致其极难被人体吸收，进一步地，SN38的α-内脂环是 其抗癌活性的关键部位，内酯环在碱性条件下水解形成羧酸盐形式， 而开环的SN38羧酸盐不具有治疗效果，即为非活性形式。在人体内， 血浆蛋白优先与非活性形式结合，从而促使SN38更加容易从活性形 式转向非活性形式，使平衡向右移动，从而使更多的SN38失去活性。 因此，具有活性的SN38在人体内稳定性差，继而也影响其治疗效果。
但是SN38与磷脂纳米盘内的疏水面作用，提升SN38在生理环 境中水解的稳定性，使得有更多具有活性的SN38可以运输至治疗部 位。在人体内的而磷脂纳米盘的亲水性，也促进人体对SN38的吸收 量，进一步提升其治疗效果。
进一步地，磷脂纳米盘是由两亲性的膜支架蛋白和磷脂分子构 成。具体地，磷脂纳米盘是2个膜支架蛋白(编号：MSP)分别头尾 相接的环绕在磷脂分子外侧，2个所述膜支架蛋白的螺旋构象均平行 于磷脂分子，且所述膜支架蛋白的疏水残基位于其螺旋构象内侧。这 样就形成了外径10nm、内径7nm、高5.5nm的具有磷脂双分子层 的圆盘状类细胞膜结构，即磷脂纳米盘。
膜支架蛋白选自载脂蛋白(apo)A-I。膜支架蛋白为载脂蛋白(apo) A-I的缩减版蛋白，能够与磷脂分子更好地作用并能够保证SN38可 以进入磷脂纳米盘的疏水腔中，抑制内酯环开环，有效地其保持抗癌 功效。
进一步地，磷脂分子选自合成脂质或者天然脂质；
优选，所述合成脂质包括带电磷脂或者磷脂酰胆碱类化合物；
更优选，所述磷脂酰胆碱类化合物包括二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱 (编号:DMPC)、磷脂酰胆碱(编号:PC)、二棕榈酸磷脂酰胆碱(编 号:DPPC)或棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(编号:POPC)中的任意一种或多 种；
优选，所述带电磷脂选自磷脂酰乙醇胺(编号:PE)、磷脂酰丝氨 酸(编号:PS)或者磷脂酰甘油(编号:PG)中的任意一种或多种。
采用上述磷脂分子能够保证在水溶液中具有很高的溶解度，同时 具有非常高的稳定性的磷脂纳米盘的形成，且保证磷脂纳米盘与 SN38的作用效果。
本发明实施例还提供一种生物源大环分子的纳米药物的制备方 法，包括以下步骤：
将磷脂分子和7-乙基-10-羟基喜树碱混合后再与两亲性的膜支 架蛋白混合以形成纳米药物。
具体地，S1、制备磷脂分子溶液；
对磷脂分子进行处理，首先按照每毫克磷脂分子溶解于0.1-0.15 毫升氯仿与甲醇的混合溶液(氯仿：甲醇＝3:1，v/v)，而后真空干 燥，用N2轻微吹干，-20℃保存。采用上述方法去除磷脂分子中的杂 质，保证磷脂分子的质量和纯度。
而后将磷脂分子与缓冲液混合以形成浓度为8-12.5mg/mL的磷 脂分子溶液，采用的缓冲液为18-22mM pH为3.0-5.0的醋酸钠缓冲 液，且混合过程中需要采用漩涡震荡使得磷脂分子均匀分散。采用上 述浓度的磷脂分子溶液能够保证磷脂分子、膜支架蛋白和7-乙基-10- 羟基喜树碱充分地进行反应，保证7-乙基-10-羟基喜树碱能够与磷脂 纳米盘的疏水器作用。
S2、制备药物溶液；
将所述7-乙基-10-羟基喜树碱与溶剂混合以形成浓度为 4-5mg/mL的药物溶液，溶剂为含硫有机溶剂，优选为DMSO，采用 DMSO能够充分溶解7-乙基-10-羟基喜树碱,特别是对SN38溶解性良 好。采用上述浓度的药物溶液，能够保证7-乙基-10-羟基喜树碱与磷脂纳米盘的作用，保证7-乙基-10-羟基喜树碱的吸收，以及在人体运 输过程中稳定性，继而保证其药效。
S3、制备第一混合液；
而后将药物溶液与所述磷脂分子溶液按照体积比为1:3-5混合以 形成第一混合液。采用上述比例混合药物溶液和磷脂分子溶液，保证 后续制备得到的生物源大环分子的纳米药物有良好地治疗效果。
且在混合过程中震荡混合溶液3-5小时，混合的温度为20-30℃， 采用上述条件能充分混合均匀，保证后续反应的顺利进行。
S4、制备蛋白溶液；
将所述膜支架蛋白与缓冲液混合以形成浓度为4-5mg/mL蛋白溶 液，缓冲液为15-25mM pH为7.3-7.5的PBS缓冲液，采用上述缓冲 溶液能够良好地溶解膜支架蛋白，继而保证磷脂纳米盘的形成，保证 磷脂纳米盘与7-乙基-10-羟基喜树碱的作用。
S5、制备第二混合液；
将蛋白溶液与第一混合液按照体积比为1:1.25-1.75的比例混合 以形成第二混合液。采用上述比例能够保证生物源大环分子的纳米药 物的形成，保证其溶解性和稳定性。形成第二混合液是需要进行超声， 直至第二混合液澄清，采用超声促进反应的进行，且超声的温度为 22-25℃。
超声完成后进行透析以形成所述纳米药物，具体地，超声完成后 用2×PBS透析过夜，8000rpm离心取上清得到生物源大环分子的纳 米药物，并用后续紫外、荧光光谱表征。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供一种生物源大环分子的纳米药物(本实施例提供的 生物源大环分子的纳米药物编号为SN38-ND)，其包含SN38和运 输SN38的磷脂纳米盘，磷脂纳米盘是两个MSP分别头尾相接的环 绕在磷脂分子—DMPC外侧，2个MSP的螺旋构象均平行于磷脂分 子，且MSP的疏水残基位于其螺旋构象内侧。
本实施例提供一种生物源大环分子的纳米药物的制备方法，包括 以下步骤：
100mg DMPC溶于10mL氯仿与甲醇的混合溶液(氯仿：甲醇 ＝3:1，v/v)。分装成10份，真空干燥4h，用N2轻微吹干，-20℃保 存。使用时取1份DMPC，其DMPC含量为10mg，用0.95mL 20mM pH＝5.0醋酸钠缓冲液漩涡震荡使之均匀分散。
将5mg SN38溶解在1mLDMSO中，得到浓度为5mg/mL的药物 溶液。取0.25mLSN38DMSO溶液与1mL磷脂分子溶液混合，25℃ 下震荡4h以形成第一混合溶液。
将5mg MSP溶解在1mL的20mM pH为7.4的PBS缓冲液， 得到浓度为5mg/mL的蛋白溶液，再将第一混合溶液与蛋白溶液以 3:2的比例超声混合，直至溶液变澄清，并保持超声器里的温度为 24℃。用2×PBS透析过夜，8000rpm离心取上清，用于后续紫外、 荧光光谱表征。
实施例2-4
实施例2-4提供的生物源大环分子的纳米药物与实施例1提供的 生物源大环分子的纳米药物基本结构相同，区别在于具体采用的原料 不同。实施例2-4提供的生物源大环分子的纳米药物的制备方法与实 施例1提供的生物源大环分子的纳米药物的制备方法的基本操作相 同，区别在于具体地操作条件不同。
实施例2
生物源大环分子的纳米药物，采用的磷脂分子为磷脂酰胆碱。
每毫克磷脂分子溶解于0.15毫升氯仿与甲醇的混合溶液，磷脂 分子溶液的浓度为8mg/mL，缓冲液为18mM，pH＝3.0醋酸钠缓冲溶 液。药物溶液的浓度为4mg/mL，药物溶液与磷脂分子溶液的体积比 为1:3，震荡温度为20℃，震荡时间为5小时。蛋白溶液的浓度为4mg/mL，蛋白溶液与第一混合溶液的体积比为1:1.25，超声温度为 22℃。
实施例3
生物源大环分子的纳米药物，采用的磷脂分子为磷脂酰甘油。
每毫克磷脂分子溶解于0.12毫升氯仿与甲醇的混合溶液，磷脂 分子溶液的浓度为12.5mg/mL，缓冲液为22mM,pH＝4.0醋酸钠缓冲 溶液。药物溶液的浓度为4.5mg/mL，药物溶液与磷脂分子溶液的体 积比为1:5，震荡温度为30℃，震荡时间为3小时。蛋白溶液的浓度 为4.2mg/mL，蛋白溶液与第一混合溶液的体积比为1:1.75，超声温 度为23℃。
实施例4
生物源大环分子的纳米药物，采用的磷脂分子为二棕榈酸磷脂酰 胆碱和棕榈酰油酰磷脂酰胆碱的混合物。
每毫克磷脂分子溶解于0.13毫升氯仿与甲醇的混合溶液，磷脂 分子溶液的浓度为9mg/mL，缓冲液为19mM,pH＝4.5醋酸钠缓冲溶 液。药物溶液的浓度为4.6mg/mL，药物溶液与磷脂分子溶液的体积 比为1:3.5，震荡温度为27℃，震荡时间为4.5小时。蛋白溶液的浓 度为4.8mg/mL，蛋白溶液与第一混合溶液的体积比为1:1.6，超声温 度为24℃。
检测分析
对实施例1制备得到的生物源大环分子的纳米药物(SN38-ND) 进行检测分析，参见图1-图5。
图1为SN38-ND的TEM表征图，根据图1可知，SN38-ND成 功构建。
图2为紫外-可见吸收光谱；其中a为1mg/mL游离SN-38 在DMSO中的吸收曲线；b为SN38-ND在NaAc pH＝5.0缓冲液中 的吸收曲线；c为空ND在20mM NaAc pH＝5.0缓冲液中的曲线。
图3为荧光光谱(λex＝370nm)，其中，a为游离SN-38在 DMSO中的曲线图；b为SN38-ND在NaAc pH＝5.0缓冲液中的曲线； c为空ND在NaAc pH＝5.0缓冲液中的曲线。图4为λ＝280nm处 SN38-ND的SEC表征图谱。图5为λ＝450nm处SN38-ND的SEC 表征图谱。
根据图2-5可知，SN38在DMSO中的紫外-可见吸收光谱产生 以370nm为中心的单个主峰。相比之下，PBS中SN38-ND的光谱与 DMSO中游离SN38的光谱强度相似，表明SN38在水溶液中溶解。 在DMSO中激发游离SN38产生分别以450nm和570nm为中心的两 个发射峰(激发370nm)。与DMSO中的SN38相比，PBS中的 SN38-ND产生发射光谱，其强度在450nm处显着衰减和蓝移，但 570nm处的发射峰增强。在形成SN38-ND后，SN38的溶解度增加 至69.6μg/mL即177.4μM，这是天然SN38(<5μg/mL)的14倍。原 因可能是ND中心的磷脂为SN38提供了疏水环境。同时，ND的浓 度为76.6μM，表明在单个ND中存在2-3个SN38分子。
其中，SN38的溶解度的测试方法如下：
(1)分别配制2，4，6，8，10μg/mL的SN38-DMSO溶液， 测定每个样品在370nm下的紫外吸收值，绘制标准曲线方程为 y＝0.05045x+0.0489，具体结果参见图6：
(2)按照文中的制备方法制备SN38-ND，稀释10倍后在370nm 下测试其紫外吸收值为0.40，带入标准曲线方程，得到原始溶液的 SN38含量为69.6μg/mL，即177.4μM。
稳定性检测
对SN38进行高效液相色谱检测
具体检测结果参见图7，图7中A为SN38的pH依赖性转化， B为游离SN38在20mMNaAc-HAc缓冲液(pH＝5.0)中的HPLC C18 表征图，C为游离SN38在20mM PBS缓冲液(pH＝7.4)中的HPLC C18表征图，D为SN38-ND在20mM PBS缓冲液(pH＝7.4)中的 HPLC C18表征图。根据图7可知，ND还显着提高了SN38在生理 环境中水解的稳定性，具体地，根据图7A可知，SN38的内酯形式 对其抗癌具有活性，而其羧酸盐形式在生理pH下无活性，因此导致 抗癌功效的丧失。根据图7B和7C可知，对于游离SN38，85％的内 酯形式在pH＝7.4的20mM PBS缓冲液中在2小时内转化为羧酸盐 形式。根据图7D可知，形成SN38-ND后水解速率大大减慢(SN38 小于5％水解成羧酸盐形式)，可能是因为SN38深入渗透到ND的 疏水腔中，抑制内酯环开环。由于非共价络合，SN38的内酯形式得 到了极大的保持。在相同的时间段内检测到可忽略的羧酸盐形式的 SN38(图7D)。该观察证实，ND的形成可以有效地保持抗癌功效， 这对于体外和体内抗癌治疗是重要的。
利用评估SN38-ND的抗癌功效
具体操作如下：在补充有10％热灭活的胎牛血清(FBS)的RPMI 1640中培养MCF-7细胞。将细胞以1×104个细胞/孔的密度接种在 96孔细胞培养板中。12小时后达到70％时，将细胞与100μL细胞培 养基一起培养，加入含有0,20,40,60,80,100μM的样品，继续培养24小时，然后培养细胞。在37℃下用10μLCCK-8储备溶液处理。将板 在培养箱中温育1小时，并通过酶标仪测量96孔板中每个样品在 450nm处的吸光度。未处理的细胞用作对照。所有实验均进行五次。 样品分别为SN38-ND，游离SN38和ND。检测结果参见图8。
根据图8可知，由于在空ND组中仅仅发生细胞活力和细胞增殖 的最小变化，ND显示出对细胞系极佳的生物相容性。另一方面，用 游离SN38/SN38-ND孵育的细胞的存活比例随着浓度的增加而降 低。然而，游离SN38显示出非常有限的抗癌功效，因为当培养pH 为7.4时SN38转化为羧酸盐形式。相比之下，SN38-ND具有活性， 并且具有明显的抗癌功效，IC50值为48μM，这可能是由于SN-38在 ND内部仍保持内酯形式。这些结果表明SN38-ND不仅保持了抗癌 药物的生物活性，而且提高了SN38的pH稳定性。
利用聚焦激光扫描显微镜(CLSM)研究了SN38-ND在MCF-7 细胞中的细胞内吞行为。
具体操作如下：将细胞以1.0×105/孔的密度接种在3.5cm共聚 焦培养皿中，在含有10％FBS的2.0mL RPMI 1640培养基中培养过 夜。然后去除培养基并加入浓度为20μM的SN38-ND。在37℃温 育4小时后，除去培养基，用PBS洗涤细胞三次。然后，将细胞染 色并用PBS冲洗细胞三次并进行CLSM(Olympus FV1000，Japan) 表征。检测结果参见图9。
根据图9可知，荧光和发光信号定位在细胞的区域，因此表明细 胞和这些颗粒之间存在显着程度的相互作用。散布在细胞质和膜上的 绿点表明SN38-NDs有效进入。此外，图1中的三维图像根据绿色和 红色通道的分布提供了SN38-ND内吞作用的进一步证据。
对比例1-7：按照实施例1提供的制备方法制备生物源大环分子 的纳米药物，区别在于，与磷脂纳米盘作用的药物不同，具体为如下 药物
而后分别对对比例1-7的生物源大环分子的纳米药物进行紫外分 析检测，发现上述药物均未与磷脂纳米盘作用，说明与磷脂纳米盘特 异性地与SN38作用。
对比例8：按照实施例1提供的制备方法制备生物源大环分子的 纳米药物，区别在于，与磷脂纳米盘作用的药物为伊立替康，对该生 物源大环分子的纳米药物进行紫外分析检测，检测结果参见图10， 发现磷脂纳米盘能够与伊立替康作用。鉴于伊立替康与SN38化学结 构与极性相近，说明磷脂纳米盘对于所包裹的药物结构具有一定的选 择性。
对比例9：按照实施例1提供的制备方法制备生物源大环分子的 纳米药物，区别在于形成磷脂纳米盘的磷脂分子是棕榈酰油酰磷脂酰 胆碱(POPC)，对该生物源大分子对该生物源大环分子的纳米药物进 行检测和分析，发现SN38溶解度为55.2μg/mL即140.7μM，说明 磷脂纳米盘对SN38的包裹能力明显下降。
对比例10：按照实施例1提供的制备方法制备生物源大环分子 的纳米药物，区别在于蛋白溶液和第一混合溶液的体积比为1:5，而 后对生物源大环分子的纳米药物进行检测和分析，发现SN38溶解度 为45.0μg/mL即114.7μM，说明磷脂纳米盘对SN38的包裹能力明显 下降。
综上所述，本发明的生物源大环分子的纳米药物以抗癌药物SN38 充当客体，磷脂纳米盘充当主体，磷脂纳米盘朝向内部脂层的疏水面 和朝外的亲水面的使得其在水溶液中具有很高的溶解度，同时具有非 常高的稳定性，并可对SN38进行高效地运输。而SN38和磷脂纳米 盘相互作用显着提高了SN38的溶解度，有效抑制了内酯开环，有利 于维持SN38的抗癌活性。由于其在拓扑结构和生物源方面具有明显 的优势，这种超分子纳米医药具有优异的抗肿瘤性能，可忽略不计的 全身毒性和长期免疫毒性，为癌症治疗提供了新的方法。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施 例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范 围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本 领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他 实施例，都属于本发明保护的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 西北工业大学
<120> 生物源大环分子的纳米药物及其制备方法
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 834
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
atgggtcatc atcatcatca tcacattgag ggacgtctga agctgttgga caattgggac 60
tctgttacgt ctaccttcag taaacttcgc gaacaactgg gccccgtgac gcaggaattc 120
tgggacaacc tggaaaaaga aaccgaggga ctgcgtcagg aaatgtccaa agatttagaa 180
gaggtgaagg ccaaggttca gccatatctc gatgactttc agaaaaaatg gcaggaagag 240
atggaattat atcgtcaaaa ggtggaaccg ctgcgtgcgg aactgcaaga gggggcacgc 300
caaaaactcc atgagctcca agagaagctc agcccattag gcgaagaaat gcgcgatcgc 360
gcccgtgcac atgttgatgc actccggact catttggcgc catatctcga tgactttcag 420
aaaaaatggc aggaagagat ggaattatat cgtcaaaagg tggaaccgct gcgtgcggaa 480
ctgcaagagg gggcacgcca aaaactccat gagctccaag agaagctcag cccattaggc 540
gaagaaatgc gcgatcgcgc ccgtgcacat gttgatgcac tccggactca tttggcgccg 600
tattcggatg aacttcgcca gcgtttggcc gcacgtctcg aggcgctgaa agaaaacggg 660
ggtgcccgct tggctgagta ccacgcgaaa gcgacagaac acctgagcac cttgagcgaa 720
aaagcgaaac cggcgctgga agatctacgc cagggcttat tgcctgttct tgagagcttt 780
aaagtcagtt ttctgtcagc tctggaagaa tatactaaaa agctgaatac ccag 834
<210> 2
<211> 278
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Met Gly His His His His His His Ile Glu Gly Arg Leu Lys Leu Leu
1 5 10 15
Asp Asn Trp Asp Ser Val Thr Ser Thr Phe Ser Lys Leu Arg Glu Gln
20 25 30
Leu Gly Pro Val Thr Gln Glu Phe Trp Asp Asn Leu Glu Lys Glu Thr
35 40 45
Glu Gly Leu Arg Gln Glu Met Ser Lys Asp Leu Glu Glu Val Lys Ala
50 55 60
Lys Val Gln Pro Tyr Leu Asp Asp Phe Gln Lys Lys Trp Gln Glu Glu
65 70 75 80
Met Glu Leu Tyr Arg Gln Lys Val Glu Pro Leu Arg Ala Glu Leu Gln
85 90 95
Glu Gly Ala Arg Gln Lys Leu His Glu Leu Gln Glu Lys Leu Ser Pro
100 105 110
Leu Gly Glu Glu Met Arg Asp Arg Ala Arg Ala His Val Asp Ala Leu
115 120 125
Arg Thr His Leu Ala Pro Tyr Leu Asp Asp Phe Gln Lys Lys Trp Gln
130 135 140
Glu Glu Met Glu Leu Tyr Arg Gln Lys Val Glu Pro Leu Arg Ala Glu
145 150 155 160
Leu Gln Glu Gly Ala Arg Gln Lys Leu His Glu Leu Gln Glu Lys Leu
165 170 175
Ser Pro Leu Gly Glu Glu Met Arg Asp Arg Ala Arg Ala His Val Asp
180 185 190
Ala Leu Arg Thr His Leu Ala Pro Tyr Ser Asp Glu Leu Arg Gln Arg
195 200 205
Leu Ala Ala Arg Leu Glu Ala Leu Lys Glu Asn Gly Gly Ala Arg Leu
210 215 220
Ala Glu Tyr His Ala Lys Ala Thr Glu His Leu Ser Thr Leu Ser Glu
225 230 235 240
Lys Ala Lys Pro Ala Leu Glu Asp Leu Arg Gln Gly Leu Leu Pro Val
245 250 255
Leu Glu Ser Phe Lys Val Ser Phe Leu Ser Ala Leu Glu Glu Tyr Thr
260 265 270
Lys Lys Leu Asn Thr Gln
275

Claims (10)

1.一种生物源大环分子的纳米药物，其特征在于，其包含7-乙基-10-羟基喜树碱和运输所述7-乙基-10-羟基喜树碱的磷脂纳米盘，所述磷脂纳米盘包含朝向内部脂质的疏水面和朝外的亲水面。
2.根据权利要求1所述的生物源大环分子的纳米药物，其特征在于，所述磷脂纳米盘是由两亲性的膜支架蛋白和磷脂分子构成。
3.根据权利要求2所述的生物源大环分子的纳米药物，其特征在于，所述磷脂纳米盘是2个膜支架蛋白分别头尾相接的环绕在磷脂分子外侧，2个所述膜支架蛋白的螺旋构象均平行于磷脂分子，且所述膜支架蛋白的疏水残基位于其螺旋构象内侧。
4.根据权利要求2或3所述的生物源大环分子的纳米药物，其特征在于，所述膜支架蛋白选自载脂蛋白(apo)A-I。
5.根据权利要求2或3所述的生物源大环分子的纳米药物，其特征在于，所述磷脂分子选自合成脂质或者天然脂质；
优选，所述合成脂质包括带电磷脂或者磷脂酰胆碱类化合物；
更优选，所述磷脂酰胆碱类化合物包括二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱或棕榈酰油酰磷脂酰胆碱中的任意一种或多种。
6.权利要求5所述的生物源大环分子的纳米药物的用途，其特征在于，所述带电磷脂选自磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸或者磷脂酰甘油中的任意一种或多种。
7.一种权利要求1所述的生物源大环分子的纳米药物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将磷脂分子和7-乙基-10-羟基喜树碱混合后再与两亲性的膜支架蛋白混合以形成纳米药物。
8.权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述磷脂分子和所述7-乙基-10-羟基喜树碱混合是将所述磷脂分子与缓冲液混合以形成浓度为8-12.5mg/mL的磷脂分子溶液；
并将所述7-乙基-10-羟基喜树碱与溶剂混合以形成浓度为4-5mg/mL的药物溶液；
而后将药物溶液与所述磷脂分子溶液按照体积比为1:3-5混合以形成第一混合液。
9.权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述纳米药物是将所述膜支架蛋白与缓冲液混合以形成浓度为4-5mg/mL蛋白溶液与第一混合液按照体积比为1:1.25-1.75的比例混合以形成第二混合液。
10.权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述第一混合液和所述蛋白溶液混合形成澄清的第二混合液后进行透析以形成所述纳米药物。
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