CN114009339A - 一种以赤苍藤叶片诱导出芽的方法 - Google Patents

一种以赤苍藤叶片诱导出芽的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114009339A
CN114009339A CN202111304576.3A CN202111304576A CN114009339A CN 114009339 A CN114009339 A CN 114009339A CN 202111304576 A CN202111304576 A CN 202111304576A CN 114009339 A CN114009339 A CN 114009339A
Authority
CN
China
Prior art keywords
leaves
litsea cubeba
tender leaves
tender
water
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202111304576.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114009339B (zh
Inventor
刘华才
黄光耀
黎彩凤
黄妮靖
刘文华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Qinzhou Economic Crop Technology Promotion Station
Original Assignee
Qinzhou Economic Crop Technology Promotion Station
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Qinzhou Economic Crop Technology Promotion Station filed Critical Qinzhou Economic Crop Technology Promotion Station
Priority to CN202111304576.3A priority Critical patent/CN114009339B/zh
Publication of CN114009339A publication Critical patent/CN114009339A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114009339B publication Critical patent/CN114009339B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/005—Methods for micropropagation; Vegetative plant propagation using cell or tissue culture techniques
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/002—Culture media for tissue culture

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明属于生物技术领域，公开了一种以赤苍藤叶片诱导出芽的方法，包括以下步骤：首先，剪取赤苍藤的嫩叶，以流动水清洗干净嫩叶表面的灰尘等污渍，滤干水滴；在超净工作台上，用无菌滤纸吸干赤苍藤嫩叶表面水分，用0.1%HgCl2灭菌4~5min，无菌水冲洗3~5次，滤干水，备用；再将嫩叶横切成3～4段，接入芽诱导培养基中，先暗培养7天，再光照培养，50天时，愈伤组织上长出芽的数量为5～12个/段。本发明方法，以赤苍藤嫩叶为外植体，诱导出愈伤组织和芽，解决了赤苍藤以芽繁芽难的问题，且叶片取材容易，不影响嫩茎食用，为赤苍藤繁育大量种苗提供新的思路和方法。该方法具有操作简单、重复性好、安全高效等优点。

Description

一种以赤苍藤叶片诱导出芽的方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体是一种以赤苍藤叶片诱导出芽的方法。
背景技术
赤苍藤（Erythropalum scandens Blume）为铁青树科药食两用藤本植物，全草入药，具清热利湿、祛风活血的功效，主治水肿、小便不利、黄疸、半身不遂、风湿骨痛和跌打损伤等；现代研究表明，赤苍藤茎叶水提物具有抗痛风作用。赤苍藤的嫩叶、嫩茎可食用，维生素含量高，氨基酸种类齐全，有益健康的锌铁钙等矿物质含量丰富，是一种营养价值高、且优于常见蔬菜的野生优质森林蔬菜。
随着人们生活水平提高，有痛风的人群越来越多，痛风发作时的疼痛难忍，严重困扰着病人的日常工作与生活，而且目前还没有非常有效的治疗方法。赤苍藤的抗通风作用，让许多痛风患者看到摆脱病痛的曙光。赤苍藤不仅在愉悦口感中补充机体所需的营养，还能通过日常饮食达到对痛风有效防治，促进身体健康，因此，备受关注。
赤苍藤主要分布于广东、广西、贵州、云南等地，野生于低山及丘陵地区或山区溪边、山谷、密林或疏林的林缘或灌丛中。由于赤苍藤种子萌发率低，扦插难度大，导致赤苍藤种苗少，目前还未见大规模种植。植物组织培养技术能在短时间内生产出大量种苗，对于常规技术种苗繁殖困难的作物，植物组培技术扩繁种苗在规模化栽培中显得尤为重要。在赤苍藤组培快繁过程中发现，以嫩芽和嫩茎段为外植体诱导出无菌芽的难度非常大。
发明内容
本发明针对赤苍藤组培快繁中以芽繁芽比较困难的问题，以赤苍藤嫩叶为外植体，通过植物生长调节剂诱导出愈伤组织，并长出芽，完成了以赤苍藤叶片诱导出芽的方法。
实现本发明目的的技术方案是：
一种以赤苍藤叶片诱导出芽的方法，包括以下步骤：
（1）赤苍藤嫩叶灭菌：剪取赤苍藤的嫩叶，以流动水清洗干净嫩叶表面的灰尘等污渍，滤干水滴；在超净工作台上，用无菌滤纸吸干赤苍藤嫩叶表面水分，用0.1%HgCl2灭菌4~5min，无菌水冲洗3~5次，滤干水，备用；
（2）赤苍藤嫩叶诱导出芽培养：在超净工作台上，将步骤（1）中的嫩叶成3～4段，接入芽诱导培养基中，先暗培养7 天，再光照培养，18～25天时叶片切口处开始膨大长出愈伤组织，并陆续长出芽，50 天时，愈伤组织上长出芽的数量为5～12个/段；
所述芽诱导培养基为：MS+SL0.05～0.5mg/L+6-BA0.1～1.0mg/L+ TDZ0.05～0.5mg/L +2,4-D0.05～0.5mg/L+IBA0.01～0.2mg/L+Gln1.0～10.0mg/L+蔗糖25 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0。
所述芽诱导培养基优选为：MS+SL0.2mg/L+6-BA0.5mg/L+ TDZ0.1mg/L +2,4-D0.2mg/L +IBA0.1mg/L+Gln5.0mg/L +蔗糖25 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0。
步骤（2）的光照培养条件为：温度为28±1℃，光照时间为12小时/天，光照强度为2000 Lx。
培养基中，MS为基本培养基，植物生长调节剂试剂均为分析纯，水为蒸馏水。SL为独脚金内酯，具有刺激寄生植物种子萌发，调控侧芽萌发作用；6-BA为6-苄氨基嘌呤，具有促进植物细胞生长，诱导芽的分化，促进侧芽生长，促进细胞分裂，还能减少植物体内叶绿素的分解，具有抑制衰老、保绿作用；TDZ能刺激离体体细胞胚胎发生，刺激体内生长素类物质合成，诱导不定芽发生作用；2,4-D为2,4-二氯苯氧乙酸，诱导愈伤组织、芽、根的形成等；IBA为萘乙酸，具有促进细胞分化和分裂作用；Gln为谷氨酰胺，是能促进生长激素释放的氨基酸之一，具有促进细胞快速分裂的作用；这些植物生长调节剂共同作用促进赤苍藤嫩叶诱导出愈伤组织，并长芽。
本发明方法，以赤苍藤嫩叶为外植体，诱导出愈伤组织和芽，解决了赤苍藤以芽繁芽难的问题，且叶片取材容易，不影响嫩茎食用，为赤苍藤繁育大量种苗提供新的思路和方法。该方法具有操作简单、重复性好、安全高效等优点。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明内容作进一步的说明，但不是对本发明的限定。
实施例1
一种以赤苍藤叶片诱导出芽的方法，包括以下步骤：
（1）赤苍藤嫩叶灭菌：在晴天的上午，剪取赤苍藤的嫩叶，以流动水清洗干净表面的灰尘等污渍，滤干水滴；在超净工作台上，用无菌滤纸吸干将赤苍藤叶片表面水分，用0.1%HgCl2灭菌4min，无菌水冲洗5次，滤干水，备用；
（2）赤苍藤嫩叶诱导出芽培养：在超净工作台上，将步骤（1）中的嫩叶切成3～4段，接入芽诱导培养基中，先暗培养7 天，再光照培养，25天时叶片切口处开始膨大长出愈伤组织，并陆续长出芽，50 天时，愈伤组织上长出芽的数量为5个/段；
所述芽诱导培养基为：MS+SL0.05mg/L+6-BA0.1mg/L+ TDZ0.05mg/L +2,4-D0.05mg/L +IBA0.01mg/L+Gln1.0mg/L +蔗糖25 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0。
实施例2
一种以赤苍藤叶片诱导出芽的方法，包括以下步骤：
（1）赤苍藤嫩叶灭菌：在晴天的上午，剪取赤苍藤的嫩叶，以流动水清洗干净表面的灰尘等污渍，滤干水滴；在超净工作台上，用无菌滤纸吸干将赤苍藤叶片表面水分，用0.1%HgCl2灭菌4min，无菌水冲洗5次，滤干水，备用；
（2）赤苍藤嫩叶诱导出芽培养：在超净工作台上，将步骤（1）中的嫩叶切成3～4段，接入芽诱导培养基中，先暗培养7天，再光照培养，18天时叶片切口处开始膨大长出愈伤组织，并陆续长出芽，50天时，愈伤组织上长出芽的数量为10个/段，部分芽有玻璃化现象；
所述芽诱导培养基为：MS+SL0.5mg/L+6-BA1.0mg/L+ TDZ0.5mg/L +2,4-D0.5 mg/L +IBA0.2 mg/L+Gln10.0mg/L +蔗糖25 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0。
实施例3
（1）赤苍藤嫩叶灭菌：在晴天的上午，剪取赤苍藤的嫩叶，以流动水清洗干净表面的灰尘等污渍，滤干水滴；在超净工作台上，用无菌滤纸吸干将赤苍藤叶片表面水分，用0.1%HgCl2灭菌4min，无菌水冲洗5次，滤干水，备用；
（2）赤苍藤嫩叶诱导出芽培养：在超净工作台上，将步骤（1）中的嫩叶切成3～4段，接入芽诱导培养基中，先暗培养7天，再光照培养，20天时叶片切口处开始膨大长出愈伤组织，并陆续长出芽，50天时，愈伤组织上长出芽的数量为12个/段；
所述芽诱导培养基为：MS+SL0.2 mg/L+6-BA0.5 mg/L+ TDZ0.1 mg/L +2,4-D0.2mg/L +IBA0.1 mg/L+Gln5.0mg/L +蔗糖25 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0。
实施例1～3中的步骤（2）光照培养条件为：温度为28±1℃，光照时间为12小时/天，光照强度为2000 Lx。

Claims (4)

1.一种以赤苍藤叶片诱导出芽的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）赤苍藤嫩叶灭菌：
剪取赤苍藤的嫩叶，以流动水清洗干净嫩叶表面的灰尘等污渍，滤干水滴；
在超净工作台上，用无菌滤纸吸干赤苍藤嫩叶表面水分，用HgCl2灭菌，无菌水冲洗，冲洗后滤干水，备用；
（2）赤苍藤嫩叶诱导出芽培养：
在超净工作台上，将步骤（1）中的嫩叶切成段，接入芽诱导培养基中，先暗培养，再光照培养；
所述芽诱导培养基为：MS+SL0.05～0.5 mg/L+6-BA0.1～1.0 mg/L+ TDZ0.05～0.5mg/L +2,4-D0.05～0.5 mg/L+IBA0.01～0.2 mg/L+Gln1.0～10.0mg/L+蔗糖25 g/L+琼脂5g/L，pH值为6.0；
所述光照培养的条件为：温度为28±1℃，光照时间为12小时/天，光照强度为2000 Lx。
2.根据权利要求1所述的以赤苍藤叶片诱导出芽的方法，其特征在于：步骤（1）所述灭菌是采用0.1%HgCl2灭菌4~5min，无菌水冲洗3~5次。
3.根据权利要求1所述的以赤苍藤叶片诱导出芽的方法，其特征在于：步骤（2）赤苍藤嫩叶诱导出芽培养的具体步骤是，在超净工作台上，将步骤（1）中的嫩叶切成3～4段，接入芽诱导培养基中，先暗培养7天，再光照培养，18～25天时叶片切口处开始膨大长出愈伤组织，并陆续长出芽，50 天时，愈伤组织上长出芽的数量为5～12个/段。
4.根据权利要求1-3任一项所述的以赤苍藤叶片诱导出芽的方法，其特征在于：所述芽诱导培养基为：MS+SL0.2 mg/L+6-BA0.5 mg/L+ TDZ0.1 mg/L +2,4-D0.2 mg/L +IBA0.1mg/L+Gln5.0mg/L +蔗糖25 g/L+琼脂5 g/L，pH值为6.0。
CN202111304576.3A 2021-11-05 2021-11-05 一种以赤苍藤叶片诱导出芽的方法 Active CN114009339B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111304576.3A CN114009339B (zh) 2021-11-05 2021-11-05 一种以赤苍藤叶片诱导出芽的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111304576.3A CN114009339B (zh) 2021-11-05 2021-11-05 一种以赤苍藤叶片诱导出芽的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114009339A true CN114009339A (zh) 2022-02-08
CN114009339B CN114009339B (zh) 2022-09-30

Family

ID=80061772

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111304576.3A Active CN114009339B (zh) 2021-11-05 2021-11-05 一种以赤苍藤叶片诱导出芽的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114009339B (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106900553A (zh) * 2017-03-13 2017-06-30 玉林师范学院 一种民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106900553A (zh) * 2017-03-13 2017-06-30 玉林师范学院 一种民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN114009339B (zh) 2022-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101120653B (zh) 无籽罗汉果及其培育方法
CN107148850A (zh) 一种延长玫瑰花期的方法
Forsyth et al. An improved method of in vitro propagation of Dioscorea bulbifera
CN115281081A (zh) 一种微型试管脱毒种姜的繁育方法
US7402433B2 (en) Method of in-vitro micropropagation of Piper longum plants
CN108077068A (zh) 一种猕猴桃无菌种苗的快速繁殖方法
CN111066654A (zh) 一种多肉植物的组培快繁方法
CN106258993A (zh) 一种蓝莓组培方法
Agnihotri et al. In vitro cloning of female and male Carica papaya through tips of shoots and inflorescences
KR101836619B1 (ko) 기내배양에 의한 블랙커런트 묘목의 대량생산 방법
CN105028193A (zh) 一种利用蓝莓莱格西叶片诱导产生微不定芽的繁育方法
CN114009339B (zh) 一种以赤苍藤叶片诱导出芽的方法
CN112119913A (zh) 一种甘薯的脱毒扩繁方法
CN110741928A (zh) 一种核桃育种方法
CN107466850B (zh) 蓝莓种植及其幼苗快速培育方法
CN112369326B (zh) 一种心叶牛舌草“哈德斯本冰淇淋”的组织培养方法
CN114287341A (zh) 培养蓝莓组织的方法
KR100620799B1 (ko) 재분화 및 재분화된 물푸레나무과 식물체의토양순화이식방법
KR20140024766A (ko) 상록성 진달래의 조직배양에 의한 대량 증식방법
CN110574688A (zh) 北美红枫的育苗方法
CN113179954B (zh) 红梗艾以茎段培育组培苗的方法
KR101899140B1 (ko) 두릅나무의 대량생산을 위한 배양방법
CN114303956B (zh) 一种重瓣百合离体快繁育苗方法
CN108184672B (zh) 一种八月瓜茎段愈伤组织诱导培养方法
CN116158350B (zh) 绞股蓝组织培养基以及绞股蓝不定根的培养方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant