CN106900553A - 一种民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法 - Google Patents

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    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Abstract

本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法，包括依次进行的如下步骤：获取赤苍藤的外植体、外植体的诱导培养、不定芽的继代培养、不定芽的生根培养、试管苗移栽；所述的外植体的诱导培养的诱导培养基包括：MS培养基、4.0～6.0mg/L 6‑BA、0.5～1.0mg/L NAA、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.5～1.0g/L活性炭，pH为5.4～5.8，本发明的方法的民间药食同源植物赤苍藤试管苗移栽成活率达到91％以上。

Description

一种民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法
技术领域
本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法。
背景技术
药食同源植物赤苍藤(Erythropalum scandens BL.)又名蚂蟥藤、龙香藤、细绿藤等，为铁青树科赤苍藤属木质藤本植物，主要分布于我国广西、广东、云南、贵州等地，常见于低山丘陵或山区溪边、山谷、密林或疏林、林缘或灌丛中。赤苍藤具有清热利湿、祛风活血的功效，在广西民间常用于肝炎、肿瘤、尿道炎、急性肾炎等疾病的治疗。此外，赤苍藤属于野菜中叶菜类的一种，具有鲜嫩、清醇、芳香等独特滋味，富含胡萝卜素，维生素以及铁、锌、铜、锰等矿物质，广西民间有采摘赤苍藤当茶饮用的习惯。同时，赤苍藤花排成腋生的二歧聚伞花序，花冠白色，花萼筒顶端有宿存的波状裂齿，成熟时淡红褐色，干后为黄褐色。叶纸质至厚纸质，卵形，叶上面绿色，背面粉绿色，结成下垂的果实，成熟时蓝紫色，是极具观赏价值的观叶、观果景观树种。
由于野生赤苍藤生长境地的特殊性，难以采摘，无法满足市场需求，因此大面积栽培势在必行。鉴于目前国内对赤苍藤的人工繁育未取得突破性进展，有必要建立赤苍藤的组织培养快繁体系，本发明选择赤苍藤带节茎段为外植体，经诱导培养、继代培养、生根培养以及移栽等步骤，实现了药食同源植物赤苍藤的组培快繁。本发明具成本低、工艺简单、周期短等特点，可直接用于赤苍藤种苗的工厂化生产，对于赤苍藤的遗传改良和种质资源保护具有重要的现实意义。
目前，国内外尚未有赤苍藤组织培养技术的报道，也未有赤苍藤组培快繁专利的申请。
发明内容
本发明的目的是提供一种民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法，本发明选择赤苍藤带节茎段为外植体，经诱导培养、继代培养、生根培养以及移栽等步骤，实现了药食同源植物赤苍藤的组培快繁，从而实现了本发明的目的。
本发明提供的技术方案为：一种民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法，包括依次进行的如下步骤：获取赤苍藤的外植体、外植体的诱导培养、不定芽的继代培养、不定芽的生根培养、试管苗移栽；
所述的外植体的诱导培养的诱导培养基包括：MS培养基、4.0～6.0mg/L 6-BA、0.5～1.0mg/L NAA、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.5～1.0g/L活性炭，pH为5.4～5.8。
在上述的民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法中，所述的外植体的诱导培养的方法为：将赤苍藤的外植体经清洗消毒处理后切成2.0～2.5cm左右的带节藤茎并接种到诱导培养基中，置于25～28℃进行全暗培养25～30天即可诱导形成不定芽。
在上述的民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法中，不定芽的继代培养所用的继代培养基包括：MS培养基、2.0～3.0mg/L 6-BA、0.2～0.5mg/L NAA、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.1～0.5g/L活性炭，pH为5.4～5.8。
在上述的民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法中，所述的不定芽的继代培养的方法具体为：将经过外植体的诱导培养得到的不定芽切成长约1～2cm的茎段并接种到继代培养基中培养25～30天即可实现不定芽的继代。
在上述的民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法中，不定芽的生根培养所用的生根培养基包括：1/2MS、0.5～1.0mg/L IBA、2.0～4.0mg/L NAA、15～20g/L蔗糖、3.0～4.0g/L琼脂、0.1～0.5g/L活性炭，pH为5.4～5.8。
在上述的民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法中，所述的不定芽的生根培养的方法为：将经过不定芽的继代培养得到的长约1.5～2.0cm的不定芽从基部切取并接种到生根培养基中培养25～30天即能实现试管苗的生根。
在上述的民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法中，所述的试管苗移栽的方法具体为：将经过不定芽的生根培养得到的生长良好的试管苗在温室的自然光下炼苗1～3天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、树皮混合基质中栽培成苗即得种苗。
在上述的民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法中，所述的外植体的诱导培养、不定芽的继代培养的培养条件均为：培养温度为25～28℃，光照强度为2000～2500lx，光照时间为10～12小时/天。
在上述的民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法中，获取赤苍藤的外植体的具体方法为：在野外选取生长健壮、无明显病害的赤苍藤植株中上部、向阳充实的带节藤茎为外植体，采集后立即进行保水保湿处理。
有益效果：
本发明利用植物组织培养技术实现了民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁，本发明具成本低、工艺简单、周期短等特点，其成活率达到了91％以上，可直接用于赤苍藤种苗的工厂化生产。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
实施例一
(1)外植体采集：在野外选取生长健壮、无明显病害的赤苍藤植株中上部、向阳充实的带节藤茎为外植体，采集后立即进行保水保湿处理并及时带回实验室。
(2)诱导培养：当步骤(1)采集回实验室外植体先在自来水下冲洗过夜，置于超净工作台中于75％的乙醇溶液中消毒10秒钟，无菌水冲洗3次后用无菌滤纸吸干水分后，置于0.1％的升汞溶液中消毒10分钟，无菌水冲洗3次后用无菌滤纸吸干水分后切成2.0～2.5cm左右的带节藤茎并接种到诱导培养基中，置于25℃进行全暗培养25天即可诱导形成不定芽，诱导率为79.5％，污染率低于15％。所述的诱导培养基为：MS培养基+6.0mg/L6-BA+1.0mg/L NAA+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂+0.5g/L活性炭，pH为5.4。
(3)继代培养：将步骤(2)诱导得到的不定芽切成长约1～2cm的茎段并接种到继代培养基中培养25天即可实现不定芽的继代，增殖系数达到5倍。所述的继代培养基为：MS培养基+3.0mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+20g/L蔗糖+3.5g/L琼脂+0.1g/L活性炭，pH为5.4。
(4)生根培养：将步骤(3)继代得到的长约1.5～2.0cm的不定芽从基部切取并接种到生根培养基中培养25天即能实现试管苗的生根，生根率为86.8％。所述的生根培养基为：1/2MS+1.0mg/L IBA+4.0mg/L NAA+15g/L蔗糖+3.0g/L琼脂+0.1g/L活性炭，pH为5.4。
(5)移栽：将步骤(4)根系生长良好的试管苗在温室的自然光下炼苗1天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、树皮混合基质中栽培成苗即得种苗，移栽30天后成活率为95.2％。
上述步骤(3)～(4)的培养条件为：培养温度为25℃，光照强度为2000lx，光照时间为10小时/天。
实施例二
(1)外植体采集：在野外选取生长健壮、无明显病害的赤苍藤植株中上部、向阳充实的带节藤茎为外植体，采集后立即进行保水保湿处理并及时带回实验室。
(2)诱导培养：当步骤(1)采集回实验室外植体先在自来水下冲洗过夜，置于超净工作台中于75％的乙醇溶液中消毒23秒钟，无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸干水分后，置于0.1％的升汞溶液中消毒15分钟，无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸干水分后切成2.0～2.5cm左右的带节藤茎并接种到诱导培养基中，置于27℃进行全暗培养28天即可诱导形成不定芽，诱导率为81.3％,污染率低于10％。所述的诱导培养基为：MS培养基+5.0mg/L6-BA+7.5mg/L NAA+25g/L蔗糖+3.7g/L琼脂+0.8g/L活性炭，pH为5.6。
(3)继代培养：将步骤(2)诱导得到的不定芽切成长约1～2cm的茎段并接种到继代培养基中培养28天即可实现不定芽的继代，增殖系数达到4.2倍。所述的继代培养基为：MS培养基+2.5mg/L 6-BA+0.35mg/L NAA+25g/L蔗糖+3.7g/L琼脂+0.3g/L活性炭，pH为5.7。
(4)生根培养：将步骤(3)继代得到的长约1.5～2.0cm的不定芽从基部切取并接种到生根培养基中培养28天即能实现试管苗的生根，生根率为88.5％。所述的生根培养基为：1/2MS+0.75mg/L IBA+3.0mg/L NAA+18g/L蔗糖+3.5g/L琼脂+0.3g/L活性炭，pH为5.7。
(5)移栽：将步骤(4)根系生长良好的试管苗在温室的自然光下炼苗2天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、树皮混合基质中栽培成苗即得种苗，移栽30天后成活率为91.5％。
上述步骤(3)～(4)的培养条件为：培养温度为26℃，光照强度为2300～lx，光照时间为11小时/天。
实施例三
(1)外植体采集：在野外选取生长健壮、无明显病害的赤苍藤植株中上部、向阳充实的带节藤茎为外植体，采集后立即进行保水保湿处理并及时带回实验室。
(2)诱导培养：当步骤(1)采集回实验室外植体先在自来水下冲洗过夜，置于超净工作台中于75％的乙醇溶液中消毒15秒钟，无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸干水分后，置于0.1％的升汞溶液中消毒20分钟，无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸干水分后切成2.0～2.5cm左右的带节藤茎并接种到诱导培养基中，置于28℃进行全暗培养30天即可诱导形成不定芽，诱导率为80.9％，污染率低于8％。所述的诱导培养基为：MS培养基+4.0mg/L6-BA+0.5mg/L NAA+30g/L蔗糖+4.0g/L琼脂+1.0g/L活性炭，pH为5.8。
(3)继代培养：将步骤(2)诱导得到的不定芽切成长约1～2cm的茎段并接种到继代培养基中培养30天即可实现不定芽的继代，增殖系数达到3倍。所述的继代培养基为：MS培养基+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+4.0g/L琼脂+0.5g/L活性炭，pH为5.8。
(4)生根培养：将步骤(3)继代得到的长约1.5～2.0cm的不定芽从基部切取并接种到生根培养基中培养30天即能实现试管苗的生根，生根率为86.4％。所述的生根培养基为：1/2MS+0.5mg/L IBA+2.0mg/L NAA+20g/L蔗糖+4.0g/L琼脂+0.3g/L活性炭，pH为5.7。
(5)移栽：将步骤(4)根系生长良好的试管苗在温室的自然光下炼苗3天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、树皮混合基质中栽培成苗即得种苗，移栽30天成活率为94.7％。
上述步骤(3)～(4)的培养条件为：培养温度为28℃，光照强度为2500lx，光照时间为12小时/天。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法，其特征在于：包括依次进行的如下步骤：获取赤苍藤的外植体、外植体的诱导培养、不定芽的继代培养、不定芽的生根培养、试管苗移栽；
所述的外植体的诱导培养的诱导培养基包括：MS培养基、4.0～6.0mg/L 6-BA、0.5～1.0mg/L NAA、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.5～1.0g/L活性炭，pH为5.4～5.8。
2.根据权利要求1所述的民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法，其特征在于：所述的外植体的诱导培养的方法为：将赤苍藤的外植体经清洗消毒处理后切成2.0～2.5cm的带节藤茎并接种到诱导培养基中，置于25～28℃进行全暗培养25～30天即可诱导形成不定芽。
3.根据权利要求1所述的民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法，其特征在于：不定芽的继代培养所用的继代培养基包括：MS培养基、2.0～3.0mg/L 6-BA、0.2～0.5mg/L NAA、20～30g/L蔗糖、3.5～4.0g/L琼脂、0.1～0.5g/L活性炭，pH为5.4～5.8。
4.根据权利要求3所述的民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法，其特征在于：所述的不定芽的继代培养的方法具体为：将经过外植体的诱导培养得到的不定芽切成长1～2cm的茎段并接种到继代培养基中培养25～30天即可实现不定芽的继代。
5.根据权利要求1所述的民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法，其特征在于：不定芽的生根培养所用的生根培养基包括：1/2MS、0.5～1.0mg/L IBA、2.0～4.0mg/L NAA、15～20g/L蔗糖、3.0～4.0g/L琼脂、0.1～0.5g/L活性炭，pH为5.4～5.8。
6.根据权利要求5所述的民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法，其特征在于：所述的不定芽的生根培养的方法为：将经过不定芽的继代培养得到的长1.5～2.0cm的不定芽从基部切取并接种到生根培养基中培养25～30天即能实现试管苗的生根。
7.根据权利要求1所述的民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法，其特征在于：所述的试管苗移栽的方法具体为：将经过不定芽的生根培养得到的生长良好的试管苗在温室的自然光下炼苗1～3天，洗净根部的培养基移栽于体积比为1:1的腐殖土、树皮混合基质中栽培成苗即得种苗。
8.根据权利要求1至7任一所述的民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法，其特征在于：所述的外植体的诱导培养、不定芽的继代培养的培养条件均为：培养温度为25～28℃，光照强度为2000～2500lx，光照时间为10～12小时/天。
9.根据权利要求1至7任一所述的民间药食同源植物赤苍藤的组培快繁方法，其特征在于：获取赤苍藤的外植体的具体方法为：在野外选取生长健壮、无明显病害的赤苍藤植株中上部、向阳充实的带节藤茎为外植体，采集后立即进行保水保湿处理。
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