CN108719057B - 沙棘组培快繁与植株再生方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供沙棘组培快繁与植株再生方法，包括以下步骤：(1)选择材料：以嫩茎尖作为组培育苗材料；(2)对材料进行消毒；(3)茎尖的诱导；(4)茎尖的增殖；(5)茎尖的生根；(6)移栽：在生根培养基中诱导生根35‑50天后成苗移栽，移入基质中进行培养，移苗后的第一周将湿度控制在95％以上，逐渐延长通风和光照时间，13‑15d才能完全自然通风；同时要控制好温度，白天温度控制在25±2℃，夜间控制在16‑18℃；待苗高50cm以上时，移栽至大田。本发明的沙棘组培快繁与植株再生方法能够有效提高沙棘嫩茎尖在组培过程中的诱导率、增殖率及生根率，移栽后，成活率也达到95％以上。
Description
技术领域
本发明属于通过组织培养技术的植物再生技术领域，具体涉及沙棘组培快繁与植株再生方法。
背景技术
沙棘(拉丁学名：Hippophae rhamnoides Linn.)为多年生落叶果树，灌木或小乔木。其果实、果皮、叶片、树皮及其加工制品含有280多种生理活性物质，具有强烈的消炎、杀菌、止痛和促进组织再生的特殊功效。其中许多成分在杀死和抑制肿瘤细胞、抗辐射、抗凝血、降血压、防止血管栓塞、抗衰老、抗疲劳、增强机体活力和免疫力等方面都显示出神奇的治疗效果。
沙棘枝叶茂盛、侧根发达、根蘖性极强，能迅速串根自蘖形成密集的群体，并能与放线菌、细菌、分枝杆菌等共生形成大量根瘤，具有比大豆更强的固氮能力(每公顷可固氮180kg)。此外，具有生长迅速，耐干旱，耐盐碱瘠薄，御严寒酷暑，具有保持水土、防风固沙、改良土壤和适应性强等促进生态平衡的明显作用，不仅是干旱风沙地区造林绿化的先锋树种，也是重要的薪炭林和饲料林树种。所以，在当前的退耕还林、农林产业结构调整中，种植沙棘具有重要的营养价值、生态价值和经济价值。
沙棘雌雄异株，靠种子繁殖在生产上难以保持优良品种的特性；根蘖繁殖繁殖系数较低。目前生产上采用的扦插繁殖成活率也不高，还容易传播病害。利用组织培养方法工厂化的繁育种苗不仅能大大提高繁殖系数，还可以建立离体无性种质资源库，替代占用大量土地面积的资源圃。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了沙棘组培快繁与植株再生方法。
本发明提供沙棘组培快繁与植株再生方法，包括以下步骤：
(1)选择材料：以嫩茎尖作为组培育苗材料；
(2)对材料进行消毒；
(3)茎尖的诱导：将消毒后的嫩茎尖的基部叶片剥离，接种于诱导培养基中进行培养；
(4)茎尖的增殖：将嫩茎尖在诱导培养基中诱导24-28天后转入增殖培养基中进行增殖培养；
(5)茎尖的生根：将增殖培养获得的丛生苗单株切下，接种到生根培养基中进行诱导生根；
(6)移栽：在生根培养基中诱导生根35-50天后成苗移栽，移入基质中进行培养，移苗后的第一周将湿度控制在95％以上，逐渐延长通风和光照时间，13-15d才能完全自然通风；同时要控制好温度，白天温度控制在25±2℃，夜间控制在16-18℃；待苗高50cm以上时，移栽至大田。
作为优选，步骤(2)中，所述消毒的具体方法为：取嫩茎尖，剥除外围叶片，先用自来水清洗干净，流动自来水清洗9-13min，蒸馏水冲洗2-3遍，然后置入已预灭菌30-40min的超净工作台上，接着用0.1％的HgCl2消毒2-3min，期间不断震摇，最后用灭菌蒸馏水冲洗6-7次。
作为优选，步骤(3)中，所述诱导培养基的配方为：1/2MS+6-BA 0.2-0.4mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
作为优选，步骤(3)中，所述诱导培养时的培养条件为：温度25±1℃，湿度50％-60％，光照强度2000-2500Lx，光照时间13-15h/d。
作为优选，步骤(4)中，所述增殖培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.3-0.5mg/L+IAA0.1-0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
作为优选，步骤(4)中，所述增殖培养时的培养条件为：温度25±1℃，湿度50％-70％，光照强度2000-3000Lx，光照时间13-16h/d。
作为优选，步骤(5)中，所述生根培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.1mg/L+IBA0.9-1.1mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L。
作为优选，步骤(5)中，所述生根培养时的培养条件为：温度25±1℃，湿度60％-70％，光照强度2500-3000Lx，光照时间14-16h/d。
作为优选，步骤(6)中，所述基质由草炭土、珍珠岩和蛭石按照体积比1.5-2.5:2:1混合而成。
本发明的沙棘组培快繁与植株再生方法能够有效提高沙棘嫩茎尖在组培过程中的诱导率、增殖率及生根率，移栽后，成活率也达到95％以上。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售。
在本发明中，1/2MS和1/2B5均为本领域技术人员知晓的公知常识，其为大量元素减半的MS培养基和B5培养基。MS培养基和B5培养基同样为本领域技术人员知晓的公知常识。
本发明的沙棘组培快繁与植株再生方法包括以下步骤：
(1)试验材料：大田采的嫩茎尖，整个生长季节只要茎尖没有退化成刺都可以采。
(2)茎尖的消毒方法：取嫩茎尖，剥除外围叶片，先用自来水清洗干净，流动自来水清洗9-13min，蒸馏水冲洗2-3遍，然后置入已预灭菌30-40min的超净工作台上，接着用0.1％的HgCl2消毒2-3min，期间不断震摇，最后用灭菌蒸馏水冲洗6-7次。用酒精的话，褐化会非常严重，而用上述消毒方法，则褐化率在1％以内。
(3)茎尖的诱导：将消毒后的嫩茎尖放在灭菌的滤纸上将水分吸干，切成0.5cm-1.5cm长，将嫩茎尖基部叶片剥离，接种于诱导培养基中进行培养，培养条件为：温度25±1℃，湿度50％-60％，光照强度2000-2500Lx，光照时间13-15h/d。
诱导培养基配方为：1/2MS+6-BA 0.2-0.4mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
上述诱导培养基在多个沙棘品种上均可使用，比如雄株、QX-0601、辽阜和QX-0103等，尤其是在辽阜品种上使用上述诱导培养基诱导效果最好，诱导率在87-95％之间。
(4)茎尖的增殖：将嫩茎尖在诱导培养基中诱导24-28天后转入增殖培养基中进行增殖培养，一般26-30天继代一次，培养条件为：温度25±1℃，湿度50％-70％，光照强度2000-3000Lx，光照时间13-16h/d。
增殖培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.3-0.5mg/L+IAA 0.1-0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
上述增殖培养基在多个沙棘品种上均可使用，当选择雄株或QX-0601品种时，增殖率最高，在87-94％之间，且长势很好。
(5)茎尖的生根：将增殖培养获得的丛生苗单株切下，接种到生根培养基中进行诱导生根，培养条件为：温度25±1℃，湿度60％-70％，光照强度2500-3000Lx，光照时间14-16h/d。
生根培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.1mg/L+IBA 0.9-1.1mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L。
上述生根培养基在沙棘品种辽阜和QX-0103中生根较好，在89-94％之间。在其余沙棘品种中几乎不生根。
(6)移栽：在生根培养基中诱导生根35-50天后成苗移栽，此时，根部长到3.6-4.7cm，将瓶内苗直接取出洗净根部，移入基质中进行培养，获得再生植株。基质由草炭土、珍珠岩和蛭石按照体积比1.5-2.5:2:1混合而成。
移苗成功的关键在于最初一周内湿度的控制，移苗后的第一周将湿度控制在95％以上，逐渐延长通风和光照时间，13-15d才能完全揭开帘子，进行自然通风。同时要控制好温度，白天温度应控制在25±2℃，夜间控制在16-18℃。待苗高50cm以上时，移栽至大田。
试管苗移栽20d后，成活率可达95％以上。
实施例1
本发明的沙棘组培快繁与植株再生方法包括以下步骤：
(1)试验材料：大田采的嫩茎尖，整个生长季节只要茎尖没有退化成刺都可以采。
(2)茎尖的消毒方法：取嫩茎尖，剥除外围叶片，先用自来水清洗干净，流动自来水清洗11min，蒸馏水冲洗3遍，然后置入已预灭菌35min的超净工作台上，接着用0.1％的HgCl2消毒2.5min，期间不断震摇，最后用灭菌蒸馏水冲洗7次。褐化率为1％。
(3)茎尖的诱导：将消毒后的嫩茎尖放在灭菌的滤纸上将水分吸干，切成1cm长，将茎尖基部叶片剥离，接种于诱导培养基中进行培养，培养条件为：温度25℃，湿度55％，光照强度2200Lx，光照时间14h/d。
诱导培养基配方为：1/2MS+6-BA 0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
沙棘品种为雄株时，诱导率为83％；沙棘品种为QX-0601时，诱导率为80％；沙棘品种为辽阜时，诱导率为95％；沙棘品种为QX-0103时，诱导率为82％。
(4)茎尖的增殖：将嫩茎尖在诱导培养基中诱导26天后转入增殖培养基中进行增殖培养，一般28天继代一次，培养条件为：温度25℃，湿度60％，光照强度2500Lx，光照时间15h/d。
增殖培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.4mg/L+IAA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
沙棘品种为雄株时，增殖率为92％；沙棘品种为QX-0601时，增殖率为94％；沙棘品种为QX-0103时，增殖率为82％。
(5)茎尖的生根：将增殖培养获得的丛生苗单株切下，接种到生根培养基中进行诱导生根，培养条件为：温度25℃，湿度65％，光照强度2800Lx，光照时间15h/d。
生根培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.1mg/L+IBA 1.0mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L。
沙棘品种为辽阜时，生根率为94％；沙棘品种为QX-0103时，生根率为92％。
(6)移栽：在生根培养基中诱导生根45天后成苗移栽，此时，根部长到3.6-4.7cm，将瓶内苗直接取出洗净根部，移入基质中进行培养，获得再生植株。基质由草炭土、珍珠岩和蛭石按照体积比2:2:1混合而成。
移苗成功的关键在于最初一周内湿度的控制，移苗后的第一周将湿度控制在95％以上，逐渐延长通风和光照时间，14d才能完全揭开帘子，进行自然通风。同时要控制好温度，白天温度应控制在25℃，夜间控制在17℃。待苗高50cm以上时，移栽至大田。
试管苗移栽20d后，成活率可达97％。
实施例2
本发明的沙棘组培快繁与植株再生方法包括以下步骤：
(1)试验材料：大田采的嫩茎尖，整个生长季节只要茎尖没有退化成刺都可以采。
(2)茎尖的消毒方法：取嫩茎尖，剥除外围叶片，先用自来水清洗干净，流动自来水清洗9min，蒸馏水冲洗3遍，然后置入已预灭菌40min的超净工作台上，接着用0.1％的HgCl2消毒2min，期间不断震摇，最后用灭菌蒸馏水冲洗7次。褐化率为1％。
(3)茎尖的诱导：将消毒后的嫩茎尖放在灭菌的滤纸上将水分吸干，切成1.5cm长，将茎尖基部叶片剥离，接种于诱导培养基中进行培养，培养条件为：温度24℃，湿度50％，光照强度2000Lx，光照时间15h/d。
诱导培养基配方为：1/2MS+6-BA 0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
沙棘品种为雄株时，诱导率为80％；沙棘品种为QX-0601时，诱导率为81％；沙棘品种为辽阜时，诱导率为92％；沙棘品种为QX-0103时，诱导率为84％。
(4)茎尖的增殖：将嫩茎尖在诱导培养基中诱导28天后转入增殖培养基中进行增殖培养，一般26天继代一次，培养条件为：温度24℃，湿度50％，光照强度3000Lx，光照时间13h/d。
增殖培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.3mg/L+IAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
沙棘品种为雄株时，增殖率为87％；沙棘品种为QX-0601时，增殖率为88％；沙棘品种为QX-0103时，增殖率为79％。
(5)茎尖的生根：将增殖培养获得的丛生苗单株切下，接种到生根培养基中进行诱导生根，培养条件为：温度26℃，湿度60％，光照强度3000Lx，光照时间14h/d。
生根培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.1mg/L+IBA 1.1mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L。
沙棘品种为辽阜时，生根率为91％；沙棘品种为QX-0103时，生根率为89％。
(6)移栽：在生根培养基中诱导生根50天后成苗移栽，此时，根部长到3.6-4.7cm，将瓶内苗直接取出洗净根部，移入基质中进行培养，获得再生植株。基质由草炭土、珍珠岩和蛭石按照体积比2.5:2:1混合而成。
移苗成功的关键在于最初一周内湿度的控制，移苗后的第一周将湿度控制在95％以上，逐渐延长通风和光照时间，15d才能完全揭开帘子，进行自然通风。同时要控制好温度，白天温度应控制在27℃，夜间控制在18℃。待苗高50cm以上时，移栽至大田。
试管苗移栽20d后，成活率可达95％。
实施例3
本发明的沙棘组培快繁与植株再生方法包括以下步骤：
(1)试验材料：大田采的嫩茎尖，整个生长季节只要茎尖没有退化成刺都可以采。
(2)茎尖的消毒方法：取嫩茎尖，剥除外围叶片，先用自来水清洗干净，流动自来水清洗13min，蒸馏水冲洗2遍，然后置入已预灭菌30min的超净工作台上，接着用0.1％的HgCl2消毒3min，期间不断震摇，最后用灭菌蒸馏水冲洗6次。褐化率为1％。
(3)茎尖的诱导：将消毒后的嫩茎尖放在灭菌的滤纸上将水分吸干，切成0.5cm长，将茎尖基部叶片剥离，接种于诱导培养基中进行培养，培养条件为：温度26℃，湿度60％，光照强度2500Lx，光照时间13h/d。
诱导培养基配方为：1/2MS+6-BA 0.4mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
沙棘品种为雄株时，诱导率为78％；沙棘品种为QX-0601时，诱导率为84％；沙棘品种为辽阜时，诱导率为87％；沙棘品种为QX-0103时，诱导率为82％。
(4)茎尖的增殖：将嫩茎尖在诱导培养基中诱导24天后转入增殖培养基中进行增殖培养，一般30天继代一次，培养条件为：温度26℃，湿度70％，光照强度2000Lx，光照时间16h/d。
增殖培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.5mg/L+IAA 0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。
沙棘品种为雄株时，增殖率为91％；沙棘品种为QX-0601时，增殖率为89％；沙棘品种为QX-0103时，增殖率为82％。
(5)茎尖的生根：将增殖培养获得的丛生苗单株切下，接种到生根培养基中进行诱导生根，培养条件为：温度24℃，湿度70％，光照强度2500Lx，光照时间16h/d。
生根培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.1mg/L+IBA 0.9mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L。
沙棘品种为辽阜时，生根率为89％；沙棘品种为QX-0103时，生根率为92％。
(6)移栽：在生根培养基中诱导生根35天后成苗移栽，此时，根部长到3.6-4.3cm，将瓶内苗直接取出洗净根部，移入基质中进行培养，获得再生植株。基质由草炭土、珍珠岩和蛭石按照体积比1.5:2:1混合而成。
移苗成功的关键在于最初一周内湿度的控制，移苗后的第一周将湿度控制在95％以上，逐渐延长通风和光照时间，13d才能完全揭开帘子，进行自然通风。同时要控制好温度，白天温度应控制在23℃，夜间控制在18℃。待苗高50cm以上时，移栽至大田。
试管苗移栽20d后，成活率可达95％。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.沙棘组培快繁与植株再生方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)选择材料：以嫩茎尖作为组培育苗材料；
(2)对材料进行消毒，所述消毒的具体方法为：取嫩茎尖，剥除外围叶片，先用自来水清洗干净，流动自来水清洗9-13min，蒸馏水冲洗2-3遍，然后置入已预灭菌30-40min的超净工作台上，接着用0.1％的HgCl2消毒2-3min，期间不断震摇，最后用灭菌蒸馏水冲洗6-7次；
(3)茎尖的诱导：将消毒后的嫩茎尖的基部叶片剥离，接种于诱导培养基中进行培养，所述诱导培养基的配方为：1/2MS+6-BA 0.2-0.4mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L；
(4)茎尖的增殖：将嫩茎尖在诱导培养基中诱导24-28天后转入增殖培养基中进行增殖培养，所述增殖培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.3-0.5mg/L+IAA 0.1-0.3mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L；
(5)茎尖的生根：将增殖培养获得的丛生苗单株切下，接种到生根培养基中进行诱导生根，所述生根培养基配方为：1/2B5+6-BA 0.1mg/L+IBA 0.9-1.1mg/L+蔗糖20g/L+琼脂6g/L；
(6)移栽：在生根培养基中诱导生根35-50天后成苗移栽，移入基质中进行培养，移苗后的第一周将湿度控制在95％以上，逐渐延长通风和光照时间，13-15d才能完全自然通风；同时要控制好温度，白天温度控制在25±2℃，夜间控制在16-18℃；待苗高50cm以上时，移栽至大田。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述诱导培养时的培养条件为：温度25±1℃，湿度50％-60％，光照强度2000-2500Lx，光照时间13-15h/d。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，所述增殖培养时的培养条件为：温度25±1℃，湿度50％-70％，光照强度2000-3000Lx，光照时间13-16h/d。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(5)中，所述生根培养时的培养条件为：温度25±1℃，湿度60％-70％，光照强度2500-3000Lx，光照时间14-16h/d。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(6)中，所述基质由草炭土、珍珠岩和蛭石按照体积比1.5-2.5:2:1混合而成。
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