CN113999818B - 一种基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条，由样品垫、胶体金探针垫、纤维素膜和吸水垫组成，纤维素膜上设有一条检测线、一条质控线，所述胶体金探针垫包含由胶体金标记的特异性结合包虫病囊液抗原的单克隆抗体组成，所述的胶体金探针上的单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.22389的小鼠杂交瘤细胞产生；所述一条检测线包括特异性结合包虫病囊液抗原的单克隆抗体,所述的检测线上的单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.22388的小鼠杂交瘤细胞产生。本发明具有简便性、敏感性、特异性和快速性的优点，适于临床和现场使用。
Description
技术领域
本发明属于生物工程领域，涉及一种胶体金免疫层析试纸条，具体来说是一种基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条。
背景技术
棘球蚴病(echinococcosis)又称包虫病(Hydatid disease或 Hydatidosis)，是由棘球绦虫属(带绦虫科)的绦虫幼虫阶段寄生在人、畜体内引起一种人畜共患寄生虫病。包虫病呈世界性分布，主要流行于欧洲、非洲北部、亚洲、南美洲和大洋洲，在我国主要见于新疆、宁夏、青海、西藏、甘肃、四川阿坝和甘孜、云南迪庆、陕西北部和内蒙古西部等地。目前全世界报道棘球属绦虫有6种，在我国分布有3种，即细粒棘球绦虫(E.granulosus)、多房棘球绦虫(E.multilocularis)和石渠棘球绦虫(E.shiquicus)。细粒棘球绦虫，其幼虫叫囊性棘球蚴，主要寄生在牛、羊及人体内，可引起囊性包虫病(cystic echinococ-cosis，CE)。多房棘球绦虫，其幼虫叫泡状棘球蚴，主要寄生在鼠类体内，人体的肝脏内也有寄生的。可引起泡型包虫病(alveolar echinococcosis，AE)，又称虫癌，但其流行和发病率低于囊性包虫病10％。石渠棘球绦虫。目前还没有发现感染牛、羊、及人，只是在高原鼠兔体内分离出该绦虫。
目前，人类包虫病的诊断主要基于影像学方法。如X光检查、B型超声诊断、 CT扫描、核磁共振等物理诊断方法。B超是诊断CE和AE的常用方法，可以确定囊肿或病变的位置、数量和大小，尽管这很费时。但这些方法不能进行早期诊断 (影像学诊断出的包虫病人已不太适合药物治疗)，且对有些囊肿、脓肿或肿块不能进行有效鉴别而误诊。同时影像检查设备携带不便，且对操作人员的技术要求较高，在疾病诊断与流行病学调查中的应用受到限制。
免疫学方法诊断棘球蚴病具有快速、敏感、特异、价廉等优点，被广泛应用于该病的诊断及检疫中，辅以影象学诊断，可达到早期诊断的目的。免疫学方法在包虫病诊断上的应用最广泛的是应用纯化天然抗原或重组抗原检测包虫病人特异抗体，常用检测方法有间接血凝法(Indirect haemagglutination assay； IHA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、酶联免疫电转移印渍法(Enzyme-linked immunoelectrotransfer blot assay；EITBA)，以及金标免疫点印渍法 (Gold-labelled dot blotting；GDB；俗称膜法或渗滤法)。但这些方法或费时费力、或需要冷链系统保存试剂、或对仪器设备及操作人员的要求较高而不适合现场使用。利用免疫层析技术发展起来的免疫层析试纸条 (Immunochromatographic trips；ICT，又简称Dipstick)，优点是操作简便，耗时短，判断直观明确，不依赖专门仪器设备和专业技术经验。目前已有多种基于检测循环抗体的免疫试纸条产品问世并在实验室和现场使用，这些产品使用天然抗原诊断具有高敏感性，但特异性不强。使用纯化抗原的特异性较高，但敏感性却有所降低。另外检测循环抗体不能区分既往感染和现症感染，不利于病人的早期诊断和流行病控制策略的及时制定和实施。
发明内容
本发明的目的在于提出一种基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条及制备方法，解决现有免疫诊断技术不能体现包虫病的感染状况的问题，对于进行包虫病早期诊断、疗效考核、判断预后以及流行病学调查也具有重要意义。
本发明提供了一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC No.22388。
本发明还提供了上述的小鼠杂交瘤细胞产生的可以特异性结合包虫病囊液抗原的单克隆抗体。
本发明提供了一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC No.22389。
本发明还提供了上述的小鼠杂交瘤细胞产生的可以特异性结合包虫病囊液抗原的单克隆抗体。
本发明还提供了上述的基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条，包括一个样品垫、纤维素膜和吸水垫，所述的样品垫和纤维素膜的一侧之间设置有一个胶体金探针垫，所述的胶体金探针垫和样品垫、纤维素膜之间紧密连接，所述的纤维素膜的另外一侧设置有吸水垫，所述的纤维素膜的另外一侧和所述的吸水垫紧密连接，所述的胶体金探针垫上设置有胶体金标记探针，所述胶体金探针是由胶体金标记的特异性结合包虫病囊液抗原的单克隆抗体组成，所述的胶体金探针上的单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.22389的小鼠杂交瘤细胞产生；所述纤维素膜上从靠近胶体金探针垫的一端开始依次设置有一条检测线和一条质控线，其中，检测线为特异性结合包虫病囊液抗原的单克隆抗体,所述的检测线上的单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.22388的小鼠杂交瘤细胞产生；所述的质控线由特异性结合所述胶体金标记探针的二抗或链球菌G蛋白或金黄色葡萄球菌A 蛋白组成。
进一步的，所述的免疫层析试条背面设置一个起支撑作用的背板。
进一步的，将所述带有背板的免疫层析试条装入一个盒体中，所述的盒体对应于样品垫的部位设有加样孔，所述的盒体对应于检测线和质控线的部位设有观测窗以及检测线和质控线的位置标识。
具体的，所述纤维素膜可以是硝酸纤维素膜(NC膜)或醋酸纤维素膜或混合膜；所述胶体金探针垫为玻璃纤维膜或聚脂纤维膜；所述样品垫可以是抗原过滤血细胞的滤血膜样品垫，所述滤血膜样品垫是棉籽绒和纤维素的混合物或玻璃纤维和纤维素的混合物，适合于全血样品和血清样品；所述样品垫也可以是不具备过滤血细胞功能的玻璃纤维或吸水纸样品垫，适合于血清样品；所述吸水垫由吸水材料制备，如吸水纸。
具体的，所述纤维素膜宽度控制在20～30mm；所述吸水垫可宽度为20～40mm，所述胶体金探针垫的宽度为5～10mm；所述样品垫宽度为10～40mm。
进一步的，检测线的单克隆抗体工作浓度为0.1～2.0mg/mL，喷涂量为0.5～ 1μL/cm；质控线二抗或链球菌G蛋白或金黄色葡萄球菌A蛋白的工作浓度为 0.1～2.0mg/mL，喷涂量为0.5～1μL/cm；胶体金标记探针单克隆抗体的工作浓度(以蛋白浓度计)：8～40μg/mL，喷涂量为40～50μL/cm。
进一步的，所述的免疫层析试纸条背面背板材料的选择是多种多样的，可以是塑料板，如聚氯乙烯板(PVC)等。
进一步的，将所述带有背板的免疫层析试纸条切成3～5mm宽，装入一个检测卡的盒体中。
本发明采用胶体金标记的特异性结合包虫病囊液抗原的单克隆抗体作为检测探针，附着于胶体金探针垫上。检测过程中，复溶的胶体金标记探针可以与受试者血样裂解液中的包虫病囊液抗原特异性结合，形成抗原-探针复合物。
本发明将另一种特异性结合包虫病囊液抗原的单克隆抗体固定在纤维素膜上，形成一条检测线。当受试者血样裂解液流过检测线时，抗原-探针复合物会被固定的特异性抗体捕获，形成肉眼可见的沉淀线(色带)。若血样中含有包虫病囊液抗原检测线会显色。
本发明将可与检测探针特异性结合的二抗抗体固定在纤维素膜上作为质控线。胶体金标记探针是特异性结合包虫病囊液抗原的单克隆小鼠抗体，相应的质控线采用羊抗小鼠IgG的抗抗体。无论待检样品中是否含有包虫病囊液抗原，本发明的诊断试纸条质控线位置总能形成色带，该条色带是判定检测过程是否正常和诊断试纸条是否变质的标准。
与胶体金标记探针特异性结合的质控线不限于使用羊抗鼠IgG，也可采用金黄色葡萄球菌A蛋白,链球菌G蛋白，或者采用其他动物如兔抗鼠IgG抗体的单抗或多抗，同样能实现本发明的发明目的，这是领域的一般技术人员都知晓的。
本发明中的细胞株F3B6，属于小鼠杂交瘤细胞，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)中，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号(中科院微生物研究所)，保藏日期为2021年07月08日，保藏号为CGMCC No：22388。
本发明中的细胞株C4H6，属于小鼠杂交瘤细胞，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)中，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号(中科院微生物研究所)，保藏日期为2021年07月08日，保藏号为CGMCC No：22389。
本发明和已有技术相比，其技术效果是积极和明显的。本发明的免疫层析试纸条具有以下优点：
(1)敏感性及特异性高：实验室考核结果显示，本发明的免疫层析试纸条检测敏感性为88.4％，特异性为92.6％；
(2)检测方法简单快速，检测标本广泛，血清和全血都可以直接使用，结果判断明确直观，不需要专门仪器和专业技术经验，非专业技术人员按照说明书即可操作，很适合现场和基层使用；
(3)跟检测抗体的产品相比，本发明的诊断试条可以发现潜在的现症感染患者，可以进行药物疗效评价；
(4)稳定性好，易于保存。成本低廉，易于进行工业化生产，适于临床和现场使用。
附图说明
图1是本发明的一种基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条的正面、纵截面的结构示意图。其中：1为样品垫；2为胶体金探针垫；3为纤维素膜；4为吸水垫；5为检测线；6为质控线；7为背板。
图2是本发明的一种基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条的检测卡结果判读示意图。其中：11为试纸条检测卡；12为观测窗；13为加样孔； 14(T)为检测卡上检测线的位置标识；15(C)为检测卡上第质控线的位置标识。图中检测卡A判为阴性；检测卡B判包虫病感染阳性；检测卡C、D判为无效检测。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
实施例1包虫病囊液抗原的单克隆抗体的制备
制备包虫病纯化囊液抗原：取新鲜或冷冻保存的羊肝包囊液，3000rpm离心 30分钟，除去沉淀。上清液对5mM pH5.0的醋酸缓冲液透析过夜，透析液5000rpm 离心30分钟，收集沉淀。用pH8.0的200mM PBS溶解沉淀，再加入饱和硫酸铵至40％，4℃静置12小时；13000rpm离心30分钟，除去沉淀，上清液对pH7.4， 10mM PBS透析过夜。回收透析液，测定蛋白浓度，即获得包虫病纯化囊液抗原。该抗原用于制备单克隆抗体。
免疫：每只BALB/c小鼠首次腹腔注射100μg上述纯化的包虫病囊液抗原+ 福氏完全佐剂的混悬液，以后每隔1月注射100μg纯化的纯化囊液抗原+福氏不完全佐剂的混悬液1次，共2次，并于杀鼠取脾进行细胞融合的前3d经尾静脉直接注射抗原加强免疫1次。
杂交瘤细胞的产生：SP2/0瘤细胞与免疫鼠脾细胞的融合及杂交瘤细胞的克隆按本领域常规方法进行。以上述纯化的包虫病囊液抗原包板对杂交瘤细胞培养上清进行常规ELISA检测抗体分泌以及效价以筛选杂交瘤细胞株，选择效价高的细胞株进行三次克隆后注射小鼠产生腹水。
单克隆抗体(McAb)免疫球蛋白亚类鉴定：经浓缩的杂交瘤细胞培养上清液使用小鼠单克隆抗体Ig类/亚类鉴定试剂盒(洛阳佰奥通实验材料中心)按其说明书操作鉴定McAb免疫球蛋白亚类。
腹水生产与腹水效价决定：每只BALB/c小鼠腹腔注射5×106杂交瘤细胞， 1周后随时观察并取腹水。以纯化的重组融合蛋白包被酶标板，腹水进行倍比稀释，第1稀释度为1：1000，用常规ELISA法确定腹水效价。
免疫印迹实验：取10份包虫病病人混合血清经处理后进行SDS-PAGE电泳，而后转移至硝酸纤维薄膜上。转移完毕后硝酸纤维素膜用含5％脱脂奶粉的PBS 溶液室温封闭1h，用PBS含0.5％TritonX-100(PBS-T)洗涤3次，按1：20000 稀释度加入待筛选的单克隆抗体，4℃过夜，用PBS-T洗涤3次，加入用PBS稀释1：5000的辣根过氧化物酶标记的兔抗鼠抗体室温摇2h，同法洗涤3次，再用PBS洗涤1次，用二氨基联苯胺(DAB)底物系统(DAB 50mg，PBS100ml，30％ H2O2 10μL)显色。
筛选得到细胞株F3B6、细胞株C4H6,可以特异性结合包虫病囊液抗原的单克隆抗体：
由细胞株F3B6生产的抗体mAbF3B6属于IgG2a亚类，与重组抗原反应效价1： 25600，用于在硝酸纤维素膜上包被；
由细胞株C4H6生产的抗体mAbC4H6属于IgG2a亚类，与重组抗原反应效价1： 51200，用于标记胶体金探针。
将含单克隆抗体的小鼠腹水，使用G蛋白层析柱(美国GenScript产品) 按产品说明书纯化单克隆抗体。
本发明中的细胞株F3B6，属于小鼠杂交瘤细胞，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)中，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号(中科院微生物研究所)，保藏日期为2021年07月08日，保藏号为CGMCC No：22388。
本发明中的细胞株C4H6，属于小鼠杂交瘤细胞，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)中，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号(中科院微生物研究所)，保藏日期为2021年07月08日，保藏号为CGMCC No：22389。
实施例2基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条的制备
1.抗包虫病囊液抗原的单克隆抗体由实施例1制备所得。
2.羊抗鼠IgG由购买获得(Cohesion Biosciences公司)。
3.单克隆抗体胶体金探针溶液的制备
(1)用柠檬酸还原法制备胶体金：
将质量百分比浓度为0.01％的HAuCl4(上海国药集团化学试剂有限公司) 水溶液煮沸，搅拌下加入2mL质量百分比浓度为1％的柠檬酸三钠水溶液，继续煮沸，直到液体呈深红色，得到胶体金溶液。
(2)免疫胶体金探针垫的制备：
用0.1M K2CO3溶液调节pH值至7.2，每100mL胶体金溶液加入抗包虫病囊液抗原单克隆抗体mAbC4H6至终浓度为6μg/mL，搅拌30min，再加入PEG20000 至终浓度为0.05％，搅拌30min，10000rpm离心30min，弃上清，用10mM， pH7.4的HEPES缓冲液洗涤沉淀，并将其复溶于15mL含15％蔗糖的10mM， pH7.5的HEPES缓冲液中，得到包虫病囊液抗原单抗mAbC4H6胶体金探针溶液。取上述包虫病囊液单抗胶体金探针溶液1200μL，喷涂到长300mm、宽80mm 的玻璃纤维垫(Ahlstrom公司)上，37℃下干燥0.5小时，得到免疫胶体金探针垫。
4.快速诊断免疫试纸条的包被和装配
如图1所示，为基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条的正面/纵截面结构图，试纸条由样品垫1、胶体金探针垫2、硝酸纤维素膜3和吸水垫4 四部分粘贴在PVC背板7上组成；硝酸纤维素膜上设有一条检测线5和一条质控线6。该试纸条的制备方法包括以下步骤：
(1)硝酸纤维素膜的包被：选择长300mm、宽20mm的硝酸纤维素膜(Sartorius 公司)。将另一株包虫病囊液抗原单克隆抗体mAbF3B6用10mM，pH7.4的磷酸缓冲液(PBS)配制到0.3mg/mL，用BIODOT公司XZ1000点样机包被于硝酸纤维素膜靠底边Y＝8.5mm处，形成一条检测线5；将羊抗鼠IgG用10mM，pH7.4 的磷酸缓冲液配制到0.3mg/mL，用点样机包被于硝酸纤维素膜靠底边 Y＝12.0mm处，形成一条质控线6；包被好的硝酸纤维素膜置37℃下干燥2小时。
(2)基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条的制备：用一块单面涂了不干胶的PVC底板，中间粘贴上处理好的上述硝酸纤维素膜；膜靠近质控线的一端紧密粘贴吸水垫(MILLIPORE公司)；膜靠近检测线5的一端紧密粘贴胶体金探针垫；胶体金探针垫另一端紧密粘贴滤血膜样品垫(杰一公司)；样品垫、胶体金探针垫和硝酸纤维素膜的连接处表面粘贴隐形贴纸；按需要切割试纸条，宽4.0mm，长8.0mm。将免疫层析试纸条装入定制的试纸条检测卡盒体中(如图2)，该盒体11对应于试纸条的样品垫的部位设有加样孔 13，对应于试纸条的检测线和质控线的部位设有观测窗12，检测线质控线的位置分别依次标识T(14)、C(15)，再加干燥剂后密封单包装保存。
5.基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试剂盒的制备
基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试剂盒由试纸卡、缓冲液、采血管、说明书共同组成。
缓冲液：含有10mM磷酸缓冲液，150mM NaCl，pH7.4；
毛细采血管：容量5μL的自吸式微量吸管(上海白洋仪表有限公司)；
实施例3基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条的实验室和现场检测评价
1.检测方法
样本要求：检测样本为全血或血清，使用采血针采集末梢血(现场)或使用已采集的静脉抗凝血(实验室)。样本采集后应尽快进行检测，若不能及时检测，采集的全血样本需等其自然凝集后收集血清，在2～8℃可以保存3天，如果需要长期保存，需在-20℃以下保存，避免反复冻融。样本需要在含干冰的保温瓶或其它装置条件下运输。
检测方法：用毛细采血管吸取待测血样标本至刻度线(5μL)，放入试纸条检测卡(图2中11)的加样孔(图2中13)中，缓慢滴加4滴(120～200μL)溶胞液，10分钟后观察观测窗(图2中12)里硝酸纤维素膜上的显色情况，观察超过 30分钟无效。
结果判定：如图2所示
(1)仅在质控线C显色，检测线T不显色，判为阴性，提示没有包虫病感染 (图2-A)；
(2)质控线C显色，检测线T显色，判为有包虫病感染(图2-B)；
(3)质控线C不显色，无论检测线T是否显色，表明不正确的操作过程或者试剂盒已变质失效(图2-C、图2-D)。
2.实验结果
用本发明的基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条进行实验室和现场检测考核结果。
如表1所示，由表1可以看出本发明的基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条的敏感性为88.4％特异性可达92.6％。上述检测结果表明本发明的基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条可以用于包虫病的快速检测。
表1本发明基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条实验室现场检测结果
| 血样来源 | 实验例数 | 阳性例数(P％) |
| 包虫病患者 | 86 | 76(88.4％) |
| 健康人 | 95 | 7(7.4％) |
| 黑热病患者 | 20 | 0 |
| 血吸虫病患者 | 20 | 0 |
| 疟疾患者 | 20 | 0 |
| 肝吸虫病患者 | 20 | 0 |
| 肺吸虫病患者 | 20 | 0 |
| 弓形虫病患者 | 20 | 0 |
实施例4基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条与检测包虫病IgG 抗体的免疫层析试条对比
使用本发明基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条与两种检测包虫病抗体的免疫层析试条(基于使用天然粗抗原和重组抗原)共同检测60份包虫病人血样60份(其中囊型包虫病病人血样40份，泡型包虫病病人血样20份)，阴性健康人血样40份。
表2本发明基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条与检测包虫病IgG抗体的免疫层析试条对比
由于IgG抗体在感染病原体后10-15天产生，持续时间较长，甚至在病原体被消灭后还能维持数月至数年，因此检测IgG循环抗体只能用于对既往感染的诊断，不能判断现症感染，也不能用于药效评价，对于HIV等因免疫缺陷而抗体水平低下的病人也无法用检测IgG抗体的方法进行诊断。而循环抗原的水平一般与感染虫荷呈正相关性，可以比较即时地体现出患者包虫病感染的情况。本发明基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条与检测包虫病IgG抗体的免疫层析试条相比较，在检测时间、使用便捷性、检测敏感性、特异性等主要性能指标比较接近，在原料获得的稳定性、可判断现症感染、适用免疫缺陷者和可用于药效评价方面具有优势。
Claims (7)
1.一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC No.22388。
2.权利要求1所述的小鼠杂交瘤细胞产生的可以特异性结合包虫病囊液抗原的单克隆抗体。
3.一种小鼠杂交瘤细胞，其保藏号为CGMCC No.22389。
4.权利要求3所述的小鼠杂交瘤细胞产生的可以特异性结合包虫病囊液抗原的单克隆抗体。
5.一种基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条，其特征在于：包括一个样品垫、纤维素膜和吸水垫，所述的样品垫和纤维素膜的一侧之间设置有一个胶体金探针垫，所述的胶体金探针垫和样品垫、纤维素膜之间紧密连接，所述的纤维素膜的另外一侧设置有吸水垫，所述的纤维素膜的另外一侧和所述的吸水垫紧密连接，所述的胶体金探针垫上设置有胶体金标记探针，所述胶体金探针是由胶体金标记的特异性结合包虫病囊液抗原的单克隆抗体组成，所述的胶体金探针上的单克隆抗体由保藏号为CGMCC No .22389的小鼠杂交瘤细胞产生；所述纤维素膜上从靠近胶体金探针垫的一端开始依次设置有一条检测线和一条质控线，其中，检测线为特异性结合包虫病囊液抗原的单克隆抗体,所述的检测线上的单克隆抗体由保藏号为CGMCC No .22388的小鼠杂交瘤细胞产生；所述的质控线由特异性结合所述胶体金标记探针的二抗或链球菌G蛋白或金黄色葡萄球菌A蛋白组成。
6.如权利要求5所述的一种基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条，其特征在于：所述的免疫层析试纸条背面设置一个起支撑作用的背板。
7.如权利要求6所述的一种基于检测循环抗原的诊断包虫病的免疫层析试条，其特征在于：将所述带有背板的免疫层析试纸条装入一个盒体中，所述的盒体对应于样品垫的部位设有加样孔，所述的盒体对应于检测线和质控线的部位设有观测窗以及检测线和质控线的位置标识。
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| CN111796103A (zh) * | 2020-07-17 | 2020-10-20 | 青海省人民医院 | 一种检测棘球蚴病的胶体金试纸条及其制备方法 |
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