CN113957023A

CN113957023A - 弱后酸化融合魏斯氏菌及其应用

Info

Publication number: CN113957023A
Application number: CN202111517475.4A
Authority: CN
Inventors: 迟原龙; 胡容; 张其圣; 唐垚
Original assignee: Sichuan University
Current assignee: Sichuan University
Priority date: 2021-12-13
Filing date: 2021-12-13
Publication date: 2022-01-21
Anticipated expiration: 2041-12-13
Also published as: CN113957023B

Abstract

本发明属于微生物技术领域，公开了一种弱后酸化融合魏斯氏菌及其应用。本发明提供的弱后酸化魏斯氏菌PCYLJY‑1适用于制备弱后酸化发酵果蔬制品，而现有技术中的弱后酸化菌株只适用于解决发酵乳后酸化问题，该菌株不仅具有显著的弱后酸化效果，而且具有优良的发酵品质，在解决发酵果蔬制品后酸化问题上具有巨大的应用潜力。本发明提供的弱后酸化魏斯氏菌PCYLJY‑1是通过评估菌株酸化特性筛选的天然弱后酸化菌株，其弱后酸化性能稳定。

Description

弱后酸化融合魏斯氏菌及其应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体涉及弱后酸化融合魏斯氏菌及其应用。

背景技术

发酵果蔬制品因含有丰富的维生素、矿物质、益生菌而广受消费者的青睐，发酵果蔬制品主要由乳酸菌进行乳酸发酵赋予食品独特的风味，随着酸度的下降，发酵果蔬制品逐渐成熟，消费者能接受的发酵果蔬的最佳酸度为pH在3.6左右，总滴定酸（TTA）在0.3g乳酸/100g果蔬左右。在运输、销售和贮藏期间，发酵果蔬制品中活性乳酸菌会继续代谢产酸，使其酸度超出消费者所能接受的最佳酸度范围，出现后酸化现象。后酸化会造成发酵果蔬制品风味下降、质地软化、色泽劣变、益生菌活性和数量降低等问题，是目前发酵果蔬行业亟待解决的技术瓶颈。

利用具有弱后酸化能力的乳酸菌进行食品发酵已被证实是解决后酸化问题的有效途径，目前已有专利报道诱变选育弱后酸化保加利亚乳杆菌（CN103215199 A）、嗜热链球菌（CN113151250 A）、瑞士乳杆菌（CN111206003 A）等菌株用以解决发酵乳的后酸化问题，但上述这些菌株主要适用于发酵乳制品中。由于乳品与果蔬的成分组成存在较大的差异，导致上述弱后酸化的菌株不适用于发酵果蔬制品，且适用于果蔬发酵的弱后酸化菌株未见相关报道。此外，诱变育种是筛选弱后酸化菌株的有效方法，但该方法存在操作复杂、筛选菌株性状不稳定、存在安全隐患等问题。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

为解决背景技术中的问题，本发明的目的在于提供一种弱后酸化融合魏斯氏菌及其应用。

为达到上述目的，本发明采用的第一个技术方案为：

弱后酸化融合魏斯氏菌（Weissellaconfusa)PCYLJY-1，所述融合魏斯氏菌2021年11月15日保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为 CGMCC No.23918，保藏地址为中国北京市，中国科学院微生物研究所。

本发明采用的第二个技术方案为：一种菌剂，包含第一个技术方案的弱后酸化融合魏斯氏菌PCYLJY-1。

本发明采用的第三个技术方案为：一种组合物，包含第一个技术方案的弱后酸化融合魏斯氏菌PCYLJY-1。

本发明采用的第四个技术方案为：第一个技术方案的弱后酸化融合魏斯氏菌PCYLJY-1或第二个技术方案的菌剂或第三个技术方案的组合物在制备弱后酸化发酵食品或食品添加剂中的应用。

进一步的，所述的发酵食品或食品添加剂为发酵蔬菜、发酵果蔬汁或发酵剂。

利用本发明的弱后酸化融合魏斯氏菌PCYLJY-1进行发酵制备的发酵蔬菜在贮藏期内酸度保持稳定，pH稳定在3.8~4.0，TTA稳定在0.25g乳酸/100g发酵蔬菜~0.26g乳酸/100g发酵蔬菜，乳酸含量稳定在1.40g/kg~1.50g/kg，发酵蔬菜有较高的酸度喜好度。

进一步的，所述发酵蔬菜包括发酵萝卜、发酵黄瓜、发酵甘蓝、发酵卷心菜；所述的发酵果蔬汁包括发酵猕猴桃汁、发酵芒果汁、发酵胡萝卜汁。

本发明采用的第五个技术方案为：一种发酵蔬菜，使用第一个技术方案的弱后酸化融合魏斯氏菌PCYLJY-1进行发酵制得。

进一步的，弱后酸化融合魏斯氏菌PCYLJY-1的接种量为10⁶CFU/g~10⁷CFU/g。

进一步的，发酵蔬菜的盐浓度为3%~5%，发酵蔬菜25℃恒温发酵。

本发明采用的第六个技术方案为：一种发酵果蔬汁，使用第一个技术方案的弱后酸化融合魏斯氏菌PCYLJY-1进行发酵制得。

进一步的，弱后酸化融合魏斯氏菌PCYLJY-1的接种量为10⁶CFU/mL~10⁷CFU/mL。

进一步的，发酵果蔬汁25℃恒温发酵。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

（1）本发明提供的弱后酸化魏斯氏菌PCYLJY-1适用于制备弱后酸化发酵果蔬制品，而现有技术中所使用的菌株都只适用于解决发酵乳后酸化问题，利用该菌株发酵的蔬菜在贮藏期内酸度保持稳定，pH稳定在3.8~4.0，TTA稳定在0.25g乳酸/100g发酵蔬菜~0.26g乳酸/100g发酵蔬菜，乳酸含量稳定在1.40g/kg~1.50g/kg，发酵蔬菜有较高的酸度喜好度，具有显著的弱后酸化效果，此外，利用该菌株发酵的发酵蔬菜具有优良的质构和色泽、丰富的氨基酸和风味物质含量，具有优良的发酵品质，在解决发酵果蔬制品后酸化问题上具有巨大的应用潜力。

（2）本发明提供的弱后酸化魏斯氏菌PCYLJY-1是通过评估菌株酸化特性筛选的天然弱后酸化菌株，其弱后酸化性能稳定。

附图说明

图1为实施例1中4株异型乳酸发酵菌株的H⁺-ATPase活力图；

图2 为实施例2中12号弱后酸化菌株不同传代菌株的发酵pH和TTA；

图3 为实施例3中融合魏斯氏菌PCYLJY-1和对照菌株发酵泡菜的pH（a）和TTA（b）；

图4 为实施例3中融合魏斯氏菌PCYLJY-1和对照菌株发酵泡菜的乳酸（a）和乙酸（b）含量图；

图5 为实施例3中融合魏斯氏菌PCYLJY-1和对照菌株在泡菜发酵体系中的生长情况；

图6 为实施例3中融合魏斯氏菌PCYLJY-1和对照菌株发酵泡菜的氨基酸含量图；

图7 为实施例3中融合魏斯氏菌PCYLJY-1和对照菌株发酵泡菜的感官评定图。

具体实施方式

下面结合附图1-7和具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

本发明以从发酵蔬菜制品中筛选分离的菌株为研究对象，通过分析菌株的产酸速率、酸敏感性、产酸代谢、产酸关键酶H⁺-ATPase活力筛选获得一株具有弱后酸化能力的融合魏斯氏菌PCYLJY-1，并发明了该菌株应用于发酵果蔬制品及发酵菌剂的方法。

本发明实施例中使用的部分试剂、仪器以及测试方法如下：

1 菌株、试剂及实验仪器

（1）对照菌株：导致发酵果蔬制品后酸化的微生物主要是产酸速率快、耐酸性强的植物乳杆菌，为了说明筛选菌株的弱后酸化效果，采用植物乳杆菌模式菌株CGMCC1.2437作为对照菌株，对照菌株植物乳杆菌CGMCC1.2437购买于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌株-80℃保藏于20%的甘油中。

（2）主要试剂：磷酸二氢钾、钼酸铵、浓盐酸、浓硫酸、抗坏血酸、无水氯化锡、牛血清白蛋白、考马斯亮蓝G-250、90%乙醇、85%磷酸、Tris-HCl缓冲液(75mmol/L，pH=7，含有10mmol/L MgSO₄)、甲苯、Tris-HCl缓冲液(50mmol/L，pH=7.5，含有10mmol/L MgSO₄)、腺苷-5′-三磷酸二钠盐(ATP)、50%三氯乙酸等，所有试剂均为分析纯。

（3）主要仪器：PHS-3C酸度计、V-1800PC型紫外分光光度计、质构仪、色差仪、高速冷冻离心机、生物洁净工作台、生化培养箱、高压灭菌器等。

2 评估菌株的弱后酸化效果

菌株的弱后酸化效果与其产酸速率、酸敏感性、产酸代谢和产酸关键酶H⁺-ATPase活力密切相关，产酸速率决定菌株一定时间内的酸度积累，酸敏感性决定菌株的存活率和产酸量，产酸代谢途径影响菌株代谢有机酸的种类和量，H⁺-ATPase是菌株应对酸胁迫的关键酶，与菌株的后酸化能力密切相关。使用的评估方法如下：

（1）菌株分离纯化：采用10倍梯度稀释、平板涂布、划线从发酵果蔬制品中分离纯化出实验菌株，实验菌株-20℃保藏于20%的甘油中。

（2）菌株活化：将（1）中保藏于-20℃的实验菌株按2%（v/v）接种到新鲜的MRS肉汤培养基37℃培养24h，转接培养3代使菌株活化。

（3）产酸速率：取活化菌液按2%（v/v）接种到新鲜的MRS肉汤培养基37℃培养72h，测定发酵上清液的pH和TTA。pH采用pH计测定，TTA参照GB12456-2021测定。

（4）酸敏感性：取活化菌液按2%(v/v)接种到pH=6.2的正常MRS肉汤培养基和pH=4的酸性MRS肉汤培养基中37℃恒温培养24h，采用紫外分光光度计测定菌悬液OD₆₀₀。

（5）产酸代谢：取活化菌液按2%（v/v）接种到含有2%（w/v）葡萄糖的MRS肉汤培养基中37℃培养72h。采用高效液相色谱法（HPLC）测定发酵液中有机酸含量。测定方法为：准确吸取1mL发酵上清液加入9mL无菌水稀释10倍，混匀、超声、过滤，待测。测定条件：色谱分离柱：Sepax ME-H（NP）（7.8mm×300mm）；流动相：2.5MmH₂SO₄；柱温：55℃；进样量：10uL；流速：0.5mL/min；检测器：紫外检测器；检测波长：210nm。

（6）产酸关键酶H⁺-ATPase活力：（a）建立磷含量标准曲线：钼蓝比色法；（b）建立蛋白质标准曲线：Bradford蛋白质浓度测定试剂盒；（c）提取H⁺-ATPase：采用-80℃反复冻融法提取H⁺-ATPase；（d）测定H⁺-ATPase活力：取25μL H⁺-ATPase提取液加入1mL Tris-HCl（pH=7.5）缓冲液和10μL 0.3mol/L ATP，37℃反应5min后立即加入20uL CCl₃COOH终止反应，离心取上清液测定磷含量和蛋白质含量。H⁺-ATPase活力以单位时间(min)、单位质量(mg)酶蛋白催化ATP释放出一个PO₄ ^3-量(umol)作为H⁺-ATPase的一个活力单位U(μmol/mg/min)，H⁺-ATPase活力计算公式为：

。

3 评估弱后酸化菌株的发酵效果

利用弱后酸化菌株发酵泡菜评估其发酵效果，将萝卜原料漂烫30s左右，按菜：水=1:1（w/w）的比例加入预先灭菌的3%-5%（w/v）的食盐水中，按10⁶CFU/g接种发酵菌株，25℃恒温发酵，分别在发酵第0d、2d、4d、6d、8d取样测定发酵泡菜的相关指标，测定的指标包括pH、TTA、活菌数、质构、色泽、有机酸、氨基酸、挥发性风味物质、感官评定。

（1）pH：采用pH计测定。

（2）TTA：参照GB12456-2021测定。

（3）活菌数：参照GB4789.2-2016测定。

（4）质构：TA-XT2i质构仪（英国，SMS公司），测定条件为：测定模式：TPA模式；测试前速度：1mm/s；测试速度：5mm/s；测试后速度：5mm/s；2次测定时间间隔：5s；测定距离：15mm；探头型号：P/36R；压缩率：50%；触发力：5.0g；记录硬度、弹性、咀嚼性、黏聚性、凝聚力等数据。

（5）色泽：利用色差仪测定色泽，将样品粉碎，混合均匀后，在康氏皿中按压平整，将开机预热30min后的色差仪正压样品进行测定，记录仪器显示屏上的L^*、a^*、b^*值。

（6）有机酸：采用高效液相色谱法（HPLC）测定有机酸；测定方法为：准确称取1.00g粉碎的泡菜样品加入1mL无菌水稀释2倍，混匀、超声、过滤，待测。测定条件：色谱分离柱：Sepax ME-H（NP）（7.8mm×300mm）；流动相：2.5MmH₂SO₄；柱温：55℃；进样量：10uL；流速：0.5mL/min；检测器：紫外检测器；检测波长：210nm。

（7）氨基酸：采用高效液相色谱法（HPLC）测定氨基酸；样品处理：取100uL样品处理液加入200uL衍生试剂，涡旋混合20s后室温反应1h，加入2mL水和1mL正己烷反应1min，弃去上清液，取下层溶液过滤待测。测定条件：色谱分离柱：月旭Ultimate Amino Acid（4.6mm×250mm，5um）；流动相：流动相A：0.1mol/L醋酸钠（pH=6.5)：乙腈=93：7，流动相B：水：乙腈=20：80；柱温：40℃；进样量：10uL；流速：1mL/min；检测器：二级管阵列检测器；检测波长：254nm。

（8）挥发性风味物质：采用顶空固相微萃取（SPME）-GC-MS测定挥发性风味物质；样品处理：称取2.00克左右研磨样品于顶空瓶中，加入5uL内标浓度为0.4ug/mL的4-甲基-2-戊醇，40℃水浴30min，萃取30min。气相色谱条件：毛细管柱型号：DB-WAX（60m×0.25mm×0.25um）；载气为纯度99.99%氦气；升温程序：40℃（0min）以16℃/min到75℃（保持0min），以2℃/min到94℃（保持10min），以2℃/min到110℃（保持1min），以3℃/min到122℃（保持1min），以2℃/min到130℃（保持1min），以2℃/min到136℃（保持1min），以2℃/min到143℃（保持1min），以6℃/min到200℃（保持5min）。MS条件：电子离子源(EI)；电子能量70eV；离子源温度230℃；接口温度250℃；检测器电压0.1kV；扫描质量范围(m/z)35.00~350.00amu。

（9）感官评定：采用定量描述分析和5点喜好度标度法对发酵泡菜的酸度、酸度喜好度、脆度、色泽、滋味进行感官评定。

实施例1 弱后酸化菌株的筛选

实验菌株从全国各地发酵蔬菜分离纯化而得，发酵蔬菜样品如表1所示，取适量发酵果蔬样品于均质机均质均匀，取1mL均质液加入9mL无菌生理盐水中制成10^-1的菌悬液，按10倍梯度稀释制得10^-2~10^-6菌悬液，吸取10^-4、10^-5、10^-6浓度梯度的菌悬液100uL分别涂布于MRS培养基平板上， 37℃厌氧培养48 h。根据菌落形态特征挑选不同菌落形态的单个菌落划线纯化3~ 4次，将所得纯种菌株编号，一共从发酵蔬菜分离纯化得到59株菌株。

表1 菌株筛选的样品表

。

发酵蔬菜分离纯化所得59株菌株的产酸速率如表2所示，不同菌株产酸速率差异较大，筛选得到pH>4.4、TTA<0.6的23株缓慢产酸菌株；23株缓慢产酸的菌株的酸敏感性如表3所示，筛选在pH=6.2正常的MRS肉汤培养基中生长良好（扣除空白培养基0D₆₀₀>1），在pH=4的酸性MRS肉汤培养基中生长较差（扣除空白培养基OD₆₀₀<0.3）的11株菌株作为对酸敏感的菌株。11株对酸敏感菌株的有机酸代谢如表4所示，其中3、5、7、12号4株菌株有机酸产物有乳酸和乙酸，属于异型乳酸发酵菌株；4株异型乳酸发酵菌株的产酸关键酶H⁺-ATPase如图1所示，其中12号菌株H⁺-ATPase的酶活力最低，因此选择12号缓慢产酸、对酸敏感、产酸关键酶H⁺-ATPase酶活力最低的异型乳酸发酵菌株为弱后酸化菌株。

表2 59株菌株的产酸速率

。

对照菌株：植物乳杆菌CGMCC1.2437

表3 23株缓慢产酸菌株的酸敏感性

。

对照菌株：植物乳杆菌CGMCC1.2437

表4 11株对酸敏感菌株发酵液中有机酸含量

。

对照菌株：植物乳杆菌CGMCC1.2437。同一列中使用不同字母的平均值(a-i)有显著差异(p<0.05)，结果为菌株发酵液有机酸含量减空白培养基的有机酸含量。

实施例2弱后酸化菌株遗传稳定性及菌株鉴定

将实施例1中12号弱后酸化菌株经MRS肉汤培养基进行传代10代培养，以2%(v/v)接种量每隔8h传代一次，传代过程中取样后在相同条件下培养后测定pH、TTA，结果如图2所示，pH、TTA基本保持一致，该菌株发酵产酸方面具有良好的遗传稳定性。

采用细菌基因组DNA抽提试剂盒提取12号菌株DNA并进行PCR扩增，PCR扩增后将产物切胶、纯化、回收后，送至生工生物工程(上海)有限公司进行测序，核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。测序结果经National Center for Biotechnology Information (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)在线序列比对：该菌株的16SrRNA与Weissellaconfusa strain WJ202021同源性为99％，具有较高的同源性，但尚有部分序列存在一定差异，属新菌株，命名为PCYLJY-1。

实施例3融合魏斯氏菌PCYLJY-1在制备发酵泡菜中的应用

按10⁶CFU/g接种PCYLJY-1和对照菌株植物乳杆菌CGMCC1.2437发酵泡菜，发酵泡菜于25℃贮藏，分别在泡菜贮藏第0d、2d、4d、6d、8d取样测定泡菜pH、TTA、活菌数、质构、色泽、有机酸、氨基酸、挥发性风味物质、感官评定，以对照菌株CGMCC1.2437发酵泡菜为对照，评估PCYLJY-1的发酵效果。

（1）发酵泡菜后酸化效果

融合魏斯氏菌PCYLJY-1发酵泡菜的pH和TTA变化如图3所示，PCYLJY-1发酵泡菜的pH和TTA在贮藏期内保持稳定，pH稳定在3.80左右，TTA稳定在0.26g乳酸/100g泡菜左右，而对照菌株CGMCC1.2437发酵泡菜稳定pH低至3.12，TTA在贮藏期内保持增长高达0.54g乳酸/100g泡菜；PCYLJY-1发酵泡菜的有机酸含量变化如图4所示，PCYLJY-1发酵泡菜乳酸含量稳定在1.48g/kg，显著低于对照菌株CGMCC1.2437发酵泡菜乳酸含量4.26g/kg；对发酵泡菜的酸度和酸度喜好度进行感官评定，结果如图7所示，PCYLJY-1发酵泡菜的酸度评分为3.25，显著低于对照菌株CGMCC1.2437发酵泡菜酸度评分4.75，PCYLJY-1发酵泡菜的酸度喜好度评为4.25分则显著高于对照菌株CGMCC1.2437发酵泡菜的酸度喜好度2.88，以上结果表明利用融合魏斯氏菌PCYLJY-1发酵泡菜具有显著的弱后酸化效果，可延长泡菜的保质期。

（2）发酵泡菜品质

如图5所示，PCYLJY-1在泡菜发酵体系生长良好，在泡菜发酵第2天活菌数高达7.77 LogCFU.mL^-1，说明该菌株能成为发酵体系中的优势微生物；融合魏斯氏菌PCYLJY-1和对照菌株发酵泡菜的质构、色泽如表5、表6所示，与对照菌株CGMCC1.2437发酵泡菜相比，PCYLJY-1发酵泡菜具有更高的硬度、弹性、L^*和b^*值，表明PCYLJY-1发酵泡菜具有更好的质构和色泽，弱后酸化有效改善了发酵果蔬质地软化、色泽裂变的问题；图6为融合魏斯氏菌PCYLJY-1和对照菌株发酵泡菜的氨基酸含量，随着贮藏时间延长，游离氨基酸含量的含量呈现逐渐减少的趋势，但PCYLJY-1发酵泡菜游离氨基酸含量始终高于对照菌株发酵泡菜，PCYLJY-1发酵泡菜贮藏8天后泡菜游离氨基酸含量达32.86mg.100g^-1，而对照菌株CGMCC1.2437发酵泡菜游离氨基酸含量为27.47 mg.100g^-1；表7为融合魏斯氏菌PCYLJY-1和对照菌株发酵泡菜的挥发性风味物质和含量，相比于对照菌株CGMCC1.2437发酵泡菜，PCYLJY-1发酵泡菜含有更多挥发性风味物质，其中硫化物和醇类是其主要的挥发性风味物质；融合魏斯氏菌PCYLJY-1和对照菌株发酵泡菜感官评定结果，采用五点喜好度标度法对泡菜感官评定，PCYLJY-1发酵泡菜色泽、脆度和滋味的平均评分分别为4.63、4.00、4.13，对照菌株CGMCC1.2437发酵泡菜色泽、脆度和滋味的平均评分分别为3.88、3.13、2.88，PCYLJY-1发酵泡菜具有更好的色泽、质构和脆度，而以上结果表明PCYLJY-1菌株具有优良的发酵效果，可用于发酵弱后酸化的果蔬制品。

表5 融合魏斯氏菌PCYLJY-1和对照菌株发酵泡菜的质构变化

。

对照菌株：植物乳杆菌CGMCC1.2437

表6 融合魏斯氏菌PCYLJY-1和对照菌株发酵泡菜的色泽变化

。

对照菌株：植物乳杆菌CGMCC1.2437

表7 融合魏斯氏菌PCYLJY-1和对照菌株发酵泡菜的主要挥发性风味成分及相对含量

。

对照菌株：植物乳杆菌CGMCC1.2437；-：未检出

经过大量实验验证，本发明的融合魏斯氏菌PCYLJY-1用于制备发酵蔬菜时，接种量在10⁶CFU/g~10⁷CFU/g，发酵蔬菜贮藏期内的pH为3.8-4.0，TTA为0.25g乳酸/100g发酵蔬菜~0.26 g乳酸/100g发酵蔬菜，具有显著的弱后酸化效果，可延长发酵蔬菜的保质期，同时制备的发酵蔬菜具有更好的色泽、质构和脆度。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换，而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

<110>四川大学

<120>弱后酸化融合魏斯氏菌及其应用

<160> 1

<210> 1

<211> 1469

<212> DNA

<213>人工序列

<400> 1

ATAGAATGCG GTCTATAATG CAGTCGAACG CTTTGTGGTT CAACTGATTT 50

GAAGAGCTTG CTCAGATATG ACGATGGACA TTGCAAAGAG TGGCGAACGG 100

GTGAGTAACA CGTGGGAAAC CTACCTCTTA GCAGGGGATA ACATTTGGAA 150

ACAGATGCTA ATACCGTATA ACAATGACAA CCGCATGGTT GTTATTTAAA 200

AGATGGTTCT GCTATCACTA AGAGATGGTC CCGCGGTGCA TTAGCTAGTT 250

GGTAAGGTAA TGGCTTACCA AGGCGATGAT GCATAGCCGA GTTGAGAGAC 300

TGATCGGCCA CAATGGGACT GAGACACGGC CCATACTCCT ACGGGAGGCA 350

GCAGTAGGGA ATCTTCCACA ATGGGCGAAA GCCTGATGGA GCAACGCCGC 400

GTGTGTGATG AAGGGTTTCG GCTCGTAAAA CACTGTTGTA AGAGAAGAAT 450

GACATTGAGA GTAACTGTTC AATGTGTGAC GGTATCTTAC CAGAAAGGAA 500

CGGCTAAATA CGTGCCAGCA GCCGCGGTAA TACGTATGTT CCAAGCGTTA 550

TCCGGATTTA TTGGGCGTAA AGCGAGCGCA GACGGTTATT TAAGTCTGAA 600

GTGAAAGCCC TCAGCTCAAC TGAGGAATTG CTTTGGAAAC TGGATGACTT 650

GAGTGCAGTA GAGGAAAGTG GAACTCCATG TGTAGCGGTG AAATGCGTAG 700

ATATATGGAA GAACACCAGT GGCGAAGGCG GCTTTCTGGA CTGTAACTGA 750

CGTTGAGGCT CGAAAGTGTG GGTAGCAAAC AGGATTAGAT ACCCTGGTAG 800

TCCACACCGT AAACGATGAG TGCTAGGTGT TTGAGGGTTT CCGCCCTTAA 850

GTGCCGCAGC TAACGCATTA AGCACTCCGC CTGGGGAGTA CGACCGCAAG 900

GTTGAAACTC AAAGGAATTG ACGGGGACCC GCACAAGCGG TGGAGCATGT 950

GGTTTAATTC GAAGCAACGC GAAGAACCTT ACCAGGTCTT GACATCCCTT 1000

GACAACTCCA GAGATGGAGC GTTCCCTTCG GGGACAAGGT GACAGGTGGT 1050

GCATGGTTGT CGTCAGCTCG TGTCGTGAGA TGTTGGGTTA AGTCCCGCAA 1100

CGAGCGCAAC CCTTATTACT AGTTGCCAGC ATTCAGTTGG GCACTCTAGT 1150

GAGACTGCCG GTGACAAACC GGAGGAAGGT GGGGATGACG TCAAATCATC 1200

ATGCCCCTTA TGACCTGGGC TACACACGTG CTACAATGGC GTATACAACG 1250

AGTTGCCAAC CCGCGAGGGT GAGCTAATCT CTTAAAGTAC GTCTCAGTTC 1300

GGATTGTAGG CTGCAACTCG CCTACATGAA GTCGGAATCG CTAGTAATCG 1350

CGGATCAGCA CGCCGCGGTG AATACGTTCC CGGGTCTTGT ACACACCGCC 1400

CGTCACACCA TGAGAGTTTG TAACACCCAA AGCCGGTGGG GTAACCTTCG 1450

GAGCCAGCCG TCTAAGTGA 1469

Claims

1.弱后酸化融合魏斯氏菌（Weissella confusa)PCYLJY-1，其特征在于，所述融合魏斯氏菌于2021年11月15日保藏至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为 CGMCC No. 23918，保藏地址为中国北京市，中国科学院微生物研究所。

2.一种菌剂，包含如权利要求1所述的弱后酸化融合魏斯氏菌PCYLJY-1。

3.一种组合物，包含如权利要求1所述的弱后酸化融合魏斯氏菌PCYLJY-1。

4.如权利要求1所述的弱后酸化融合魏斯氏菌PCYLJY-1或如权利要求2所述的菌剂或如权利要求3所述的组合物在制备弱后酸化发酵食品或食品添加剂中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的发酵食品或食品添加剂为发酵蔬菜、发酵果蔬汁或发酵剂。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述发酵蔬菜包括发酵萝卜、发酵黄瓜、发酵甘蓝、发酵卷心菜；

所述的发酵果蔬汁包括发酵猕猴桃汁、发酵芒果汁、发酵胡萝卜汁。

7.一种发酵蔬菜，其特征在于，使用如权利要求1所述的弱后酸化融合魏斯氏菌PCYLJY-1进行发酵制得。

8.如权利要求7所述的发酵蔬菜，其特征在于，所述弱后酸化融合魏斯氏菌PCYLJY-1的接种量为10⁶CFU/g~10⁷CFU/g；

所述发酵蔬菜的盐浓度为3%~5%，发酵蔬菜25℃恒温发酵。

9.一种发酵果蔬汁，其特征在于，使用如权利要求1所述的弱后酸化融合魏斯氏菌PCYLJY-1进行发酵制得。

10.如权利要求9所述的发酵果蔬汁，其特征在于，所述弱后酸化融合魏斯氏菌PCYLJY-1的接种量为10⁶CFU/mL~10⁷CFU/mL；

所述发酵果蔬汁25℃恒温发酵。