CN113933415B - 一种hplc-ms/ms测定人血浆中糠酸酯浓度的方法 - Google Patents

一种hplc-ms/ms测定人血浆中糠酸酯浓度的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种液相色谱串联四级杆质谱(HPLC‑MS/MS)检测血浆中糠酸莫米松的浓度的方法。该方法包括如下步骤：1.标准工作溶液的配制；2.标准曲线及质控配制过程；3.血浆样品前处理过程；4.HPLC‑MS/MS测定过程；本发明方法专属性强、灵敏度高、特异性强、操作简单，可以满足临床大批量样品分析要求。

Description

一种HPLC-MS/MS测定人血浆中糠酸酯浓度的方法
技术领域
本发明涉及分析技术领域，具体涉及一种检测人血浆中糠酸酯浓度的检测方法
背景技术
糠酸莫米松的化学名为9，21-二氯-11b，17-二羟基-16a-甲基孕甾-1，4-二烯-3，20-二酮17-(2-糠酸酯)。化学结构式为C27H30Cl2O6，分子量为521.44。糠酸莫米松是一种局部用糖皮质激素，在发挥局部抗炎作用的剂量下并不引起全身作用。鼻喷雾给药后，糠酸莫米松血浆中的系统生物利用度<1％，鼻喷吸入200μg药物后，血浆中的峰浓度(Cmax)约10.0pg/mL，需要使用较低定量下限的分析方法进行检测，以计算药代动力学参数。再者，由于糠酸莫米松的结构特点，中性甾体，在质谱中不容易带电，在电喷雾电离(ESI)正离子扫描条件下，容易形成加合离子峰，且信号因两个氯原子的存在而被稀释，要达到较低的检测下限具有挑战性。因此，亟待开发一种灵敏的检测方法，用于检测糠酸莫米松在人体血浆中的浓度。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测人血浆中糠酸酯浓度的检测方法。
本发明的目的是提供一种检测糠酸莫米松在人体血浆中浓度的方法，该方法专属性强、灵敏度高、特异性高、操作简单，可以满足临床大批量样品分析要求。应用于糠酸莫米松的药代动力学研究和一致性评价，有助于准确快速的研究该化合物的药代动力学特征，获得相应的PK参数，为糠酸莫米松的一致性评价和其它临床研究建立基础。
本发明提供的人血浆中糠酸莫米松定量的检测方法，包括如下步骤:
1)标准曲线及质控工作溶液的配制：称取糠酸莫米松对照品至玻璃瓶中，加入适量的甲醇或乙腈或不同比例的甲醇乙腈混合溶液配制成浓度为0.50～5.00mg/mL的糠酸莫米松储备液，再将所述糠酸莫米松储备液用50～80％甲醇或乙腈或甲醇/乙腈水溶液稀释成浓度为5.0～400pg/mL的工作溶液；
糠酸莫米松-D3内标工作液的配制：称取糠酸莫米松-D3内标对照品至玻璃瓶中，加入适量的甲醇或乙腈或不同比例的甲醇乙腈混合溶液配制成浓度为0.50～5.00 mg/mL的糠酸莫米松-D3内标储备液，将上述糠酸莫米松-D3储备液用50～80％甲醇或乙腈或甲醇/乙腈水溶液稀释得到所述糠酸莫米松-D3内标工作液；所有储备液和工作溶液在2～8℃保存，备用；
2)标准曲线、质控配制过程：精密移取步骤1)所述各浓度的工作溶液，分别加入到空白血浆中涡旋混匀，配制成标准曲线及质控样品；
3)血浆样品前处理过程：取血浆样品于玻璃离心管中，向其中加入所述糠酸莫米松-D3内标工作液，涡旋混匀，并加入萃取剂，涡旋混匀，于2～8℃的离心机高速离心 5～10min；取上清液挥干浓缩，挥干后加入50～80％甲醇或乙腈，涡旋混匀，得到待测样品；
HPLC-MS/MS测定过程：将所述待测样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中进行检测；
数据处理过程：以糠酸莫米松和糠酸莫米松-D3的色谱峰面积比为纵坐标，根据标准曲线计算血浆中糠酸莫米松的浓度，单位为pg/mL。
上述方法中，所述HPLC-MS/MS测定过程工作条件为：
液相条件：色谱柱为Thermo Hypersil GOLD(2.0～4.6×50～150mm，2.0～5.0μm)；流动相A：水(含1-5mM碳酸氢铵)溶液；流动相B：乙腈-水(95:5，v/v，含1-5mM 碳酸氢铵)溶液；柱温为30～50℃，流速为0.4～1.0mL/min；洗脱方式为梯度洗脱；
质谱条件：离子源类型为电喷雾离子化源(ESI)，采用正离子(Postive)电离方式；多反应监测(MRM)检测模式；电喷雾电压4500～5500eV；离子源温度：300～650℃；气帘气20～40psi；碰撞池气体：4～8psi，雾化气Gas1：50～90psi；辅助加热气：50～90 psi；数据收集时间：6～10min；
前处理条件：所使用的离心管均为玻璃材质的、使用0.05～0.3M的NaOH调节血浆pH，；使用不同比例的正己烷和甲基叔丁基醚混合萃取剂。
血浆样品前处理中所述离心机转速≥1500g离心力；具体为1550g；
所述萃取剂为由甲基叔丁基醚和正己烷组成的混合液；所述甲基叔丁基醚和正己烷的体积比为3:7；
所述涡旋步骤中，转速为1500-2000rpm；具体为1700-2000rpm；时间为3-5min。
优选地，所述HPLC-MS/MS测定过程中糠酸莫米松的监测离子对为 m/z521.2→m/z355.2，四极杆驻留时间均为50～150ms，去簇电压均70eV，碰撞能量为 23eV。
优选地，所述HPLC-MS/MS测定过程中糠酸莫米松-D3的监测离子对为m/z 524.2→m/z 373.2，四极杆驻留时间为50～150ms，去簇电压70eV，碰撞能量17eV。
优选地，标准曲线、质控的配制过程中所述标准曲线6～10个样品，糠酸莫米松浓度为0.250～20.0pg/mL。
优选地，标准曲线、质控的配制过程中所述随行质控样品由低、中、高、稀释质控4个浓度所组成；其中稀释质控样品浓度为30pg/mL，稀释因子为2。
进一步地，所述色谱条件还包括：自动进样器清洗溶液为体积比为400：400：200：1的甲醇：乙腈：水和甲酸组成的混合液；自动进样器温度：2～8℃；自动进样器清洗模式：进样前和进样后清洗；自动进样器清洗体积：300～600μL；自动进样器清洗时浸泡时间2～5s；自动进样器进样体积：10～50μL。
与现有技术相比，本发明的有益的效果是：
1.本发明的HPLC-MS-MS方法专属性强，糠酸莫米松的保留时间为3.47min左右，内标糠酸莫米松-D3保留时间在3.47min左右，糠酸莫米松和糠酸莫米松-D3的峰形良好，无杂峰干扰测定，基线平稳；
2.本发明方法的灵敏度高，糠酸莫米松血浆中最低定量限为0.25pg/mL，能准确测定血浆中糠酸莫米松的浓度，特异性高。
3.本发明人血浆样品前处理中使用液液萃取进行前处理。操作简单，可以适用临床大批量样品的常规测定。
4.本发明人血浆样品前处理使用玻璃离心管结合相应的萃取试剂，极大的提高了回收率，提高灵敏度，减少血浆量的使用，可以更好的保护受试者权益。
5.本发明人使用SCIEX液质联用系统中的切换阀，实现一个梯度内先对糠酸莫米松进行分离检测，后对色谱柱进行反冲洗，完全消除基质效应，提高灵敏度。
6.本发明方法快速、准确、操作简便，为糠酸莫米松的血药浓度测定提供了依据。
附图说明
图1为人血浆中糠酸莫米松测定的代表性标准曲线。
图2为人血浆中糠酸莫米松测定的代表性空白基质样品色谱图。
图3为人血浆中糠酸莫米松测定的代表性定量下限(LLOQ)样品色谱图(0.250 pg/mL)。
图4为人血浆中糠酸莫米松测定的代表性受试者用药后的色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但本发明并不限于以下实施例。所述方法如无特别说明均为常规方法。所述原材料如无特别说明均能从公开商业途径获得。
本发明的实验耗材与仪器见下表1：
表1、实验耗材与仪器列表
Figure BDA0003289099400000031
/>
Figure BDA0003289099400000041
实施例
人血浆中糠酸莫米松浓度检测的HPLC-MS/MS方法建立：
标准和质控工作溶液的配制：由两名分析员分别精密称取糠酸莫米松标准物质约3mg，加入适量甲醇溶液，涡旋，超声溶解，配制成浓度为0.500mg/mL的标准物质储备液，标记为MF-Stock。所有储备液保存在2～8℃冰箱中，备用；将配制好的储备液用50％乙腈逐级稀释，具体稀释浓度见下表1：
表1-1糠酸莫米松标准曲线工作液配制表
Figure BDA0003289099400000042
/>
Figure BDA0003289099400000051
注：上述配制操作可根据实际需要进行调整，最终浓度不变。
表1-2糠酸莫米松质控工作液配制表
Figure BDA0003289099400000052
注：上述配制操作可根据实际需要进行调整，最终浓度不变。
内标工作液的配制：精密称取糠酸莫米松-D3内标，加入适量甲醇溶液，涡旋，超声溶解，配制成浓度为0.500mg/mL的糠酸莫米松-D3内标储备液，标记为MF-D3- Stock，保存在2～8℃冰箱中，备用。将配制好的储备液用50％乙腈逐级稀释，具体稀释浓度见下表2：
表2糠酸莫米松-D3内标工作液配制表
Figure BDA0003289099400000053
/>
Figure BDA0003289099400000061
注：上述配制操作可根据实际需要进行调整，最终浓度不变。
标准曲线质控样品配制过程：将空白血浆于室温环境解冻，按表3进行血浆样品的配制；
表3-1糠酸莫米松标准曲线配制
Figure BDA0003289099400000062
注：上述配制操作可根据实际需要进行调整，最终浓度不变，并记录空白基质的批号。
表3-2糠酸莫米松质控样品配制
Figure BDA0003289099400000063
注：上述配制操作可根据实际需要进行调整，最终浓度不变，并记录空白基质的批号。
血浆样品前处理：
精密吸取600μL空白血浆，置于10mL玻璃管中；分别加入50μL 50％乙腈水溶液(含内标1.00ng/mL MF-D3)涡旋混合均匀；加入100μL的0.1M氢氧化钠涡旋混合均匀；加入4mL提取试剂(甲基叔丁基醚：正己烷＝3:7，v:v)，1700rpm涡旋振荡5min，混合均匀；在2-8℃、1550g条件下，离心5min；取上清液3.6mL于10mL 玻璃管中；在45℃下离心浓缩挥干；加入100μL的50％乙腈水溶液，2000rpm涡旋振荡3min，混合均匀；取全部上清液于96孔板中；进样25.0μL进行HPLC-MS/MS 分析。
LC-MS/MS测定过程工作条件为：
A、液相条件：见表4
表4洗脱梯度
Figure BDA0003289099400000071
/>
Figure BDA0003289099400000081
B.质谱条件：见表5
表5质谱条件
Figure BDA0003289099400000082
数据处理：糠酸莫米松和氘代内标糠酸莫米松-D3的色谱图采集和色谱峰积分由软件Analyst 1.6.3软件(AB Sciex公司)进行处理，以糠酸莫米松和糠酸莫米松-D3 色谱峰面积比为纵坐标，用加权(W＝1/x2)最小二乘法以血浆中糠酸莫米松的浓度(X) 与峰面积比(Y)进行线性回归，所得的回归方程(Y＝a+bX)即为标准曲线，根据标准曲线计算人血浆中糠酸莫米松的浓度。
分析结果：以糠酸莫米松和糠酸莫米松-D3的色谱峰面积比为纵坐标，用加 (W＝1/x2)最小二乘法以血浆中糠酸莫米松的浓度(X)与峰面积比(Y)进行线性回归。所得的糠酸莫米松标准曲线Y＝0.0284X+0.0037，相关系数r2＝0.9987。标准曲线图如图1所示。应用例
本应用例对上述实施例中HPLC-MS/MS方法测定人血浆中糠酸莫米松的准确度、精密度、选择性、定量下限、回收率、基质效应、稀释可靠性、残留效应、稳定性等进行评价。
(1)精密度和准确度考察：取600μL上述的HQC、MQC、LQC和LLOQ 4个浓度的质控样品各一份，置于10mL玻璃管中；分别加入50μL 50％乙腈水溶液(含内标1.00ng/mL MF-d3)涡旋混合均匀；加入100μL的0.1M氢氧化钠涡旋混合均匀；加入4mL提取试剂(甲基叔丁基醚：正己烷＝3:7，v:v)，1700rpm涡旋振荡5min，混合均匀；在常温、1550g条件下，离心5min；取上清液3.6mL于10mL玻璃管中；在45℃下离心浓缩挥干；加入100μL的50％乙腈水溶液，2000rpm涡旋振荡3min，混合均匀；取全部上清液于96孔板中，待HPLC-MS/MS分析。于不同天每个浓度处理6个重复样品，并分别在不同天测定3个分析批次，计算批间精密度和准确度，结果如下表6所表示：
表6糠酸莫米松批间精密度和准确度
Figure BDA0003289099400000091
/>
Figure BDA0003289099400000101
/>
Figure BDA0003289099400000111
(2)选择性考察：取600μL的不同批次的空白血浆各一份，置于10mL玻璃管中；分别加入50μL 50％乙腈水溶液涡旋混合均匀；加入100μL的0.1M氢氧化钠涡旋混合均匀；加入4mL提取试剂(甲基叔丁基醚：正己烷＝3:7，v:v)，1700rpm涡旋振荡5min，混合均匀；在常温、1550g条件下，离心5min；取上清液3.6mL于10 mL玻璃管中；在45℃下离心浓缩挥干；加入100μL的50％乙腈水溶液，2000rpm 涡旋振荡3min，混合均匀；取全部上清液于96孔板中，待HPLC-MS/MS分析。考察基质的选择性，结果如下表7所表示：
表7糠酸莫米松在血浆中的选择性
Figure BDA0003289099400000112
/>
Figure BDA0003289099400000121
(3)定量下限考察：取不同批次的空白血浆配制LLOQ样品各一份，取600μL 置于10mL玻璃管中；分别加入50μL 50％乙腈水溶液(含内标1.00ng/mL MF-d3) 涡旋混合均匀；加入100μL的0.1M氢氧化钠涡旋混合均匀；加入4mL提取试剂(甲基叔丁基醚：正己烷＝3:7，v:v)，1700rpm涡旋振荡5min，混合均匀；在常温、1550 g条件下，离心5min；取上清液3.6mL于10mL玻璃管中；在45℃下离心浓缩挥干；加入100μL的50％乙腈水溶液，2000rpm涡旋振荡3min，混合均匀；取全部上清液于96孔板中，待HPLC-MS/MS分析。考察定量下限，结果如下表8所表示：
表8糠酸莫米松在血浆中定量下限得考察
Figure BDA0003289099400000122
(4)回收率考察：提取后样品处理：取HQC、MQC、LQC质控样品，每个浓度平行处理6份，取600μL置于10mL玻璃管中；分别加入50μL 50％乙腈水溶液(含内标1.00ng/mL MF-d3)涡旋混合均匀；加入100μL的0.1M氢氧化钠涡旋混合均匀；加入4mL提取试剂(甲基叔丁基醚：正己烷＝3:7，v:v)，1700rpm涡旋振荡5min，混合均匀；在常温、1550g条件下，离心5min；取上清液3.6mL于10mL玻璃管中；在45℃下离心浓缩挥干；加入100μL的50％乙腈水溶液，2000rpm涡旋振荡3min，混合均匀；取全部上清液于96孔板中，待HPLC-MS/MS分析；未提取样品处理：平行处理18份，取600μL的空白血浆，置于10mL玻璃管中；分别加入50μL 50％乙腈水溶液涡旋混合均匀；加入100μL的0.1M氢氧化钠涡旋混合均匀；加入4mL提取试剂(甲基叔丁基醚：正己烷＝3:7，v:v)，1700rpm涡旋振荡5min，混合均匀；在常温、1550g条件下，离心5min；取上清液3.6mL于10mL玻璃管中；在45℃下离心浓缩挥干；加入30μL的HQC、MQC、LQC工作液，50μL的50％乙腈水溶液(含内标1.00ng/mL MF-d3)、20μL的50％乙腈水溶液，每个浓度处理6份，2000rpm涡旋振荡3min，混合均匀；取全部上清液于96孔板中，待HPLC-MS/MS分析。分别用提取后糠酸莫米松峰面积比上未提取糠酸莫米松峰面积，和提取后糠酸莫米松-D3峰面积比上未提取糠酸莫米松峰-D3面积，考察糠酸莫米松和氘代内标糠酸莫米松-D3，结果如下表9所表示：
表9-1糠酸莫米松在血浆中回收率的考察
Figure BDA0003289099400000131
表9-2糠酸莫米松-D3在血浆中回收率的考察
Figure BDA0003289099400000132
/>
Figure BDA0003289099400000141
(5)基质效应考察：基质样品处理：正常空白基质、高血脂基质、溶血基质配制的HQC、MQC、LQC质控样品，每个浓度平行处理3份，各取600μL置于10mL玻璃管中；分别加入50μL 50％乙腈水溶液(含内标1.00ng/mL MF-d3)涡旋混合均匀；加入100μL的0.1M氢氧化钠涡旋混合均匀；加入4mL提取试剂(甲基叔丁基醚：正己烷＝3:7，v:v)，1700rpm涡旋振荡5min，混合均匀；在常温、1550g条件下，离心5min；取上清液3.6mL于10mL玻璃管中；在45℃下离心浓缩挥干；加入100μL 的50％乙腈水溶液，2000rpm涡旋振荡3min，混合均匀；取全部上清液于96孔板中，待HPLC-MS/MS分析；
不含基质样品处理：取600μL的纯水溶液，置于10mL玻璃管中；分别加入50 μL50％乙腈水溶液涡旋混合均匀；加入100μL的0.1M氢氧化钠涡旋混合均匀；加入 4mL提取试剂(甲基叔丁基醚：正己烷＝3:7，v:v)，1700rpm涡旋振荡5min，混合均匀；在常温、1550g条件下，离心5min；取上清液3.6mL于10mL玻璃管中；在45℃下离心浓缩挥干；加入30μL的HQC、MQC、LQC工作液，50μL的50％乙腈水溶液(含内标1.00ng/mL MF-d3)、20μL的50％乙腈水溶液，每个浓度处理6份，2000 rpm涡旋振荡3min，混合均匀；取全部上清液于96孔板中，待HPLC-MS/MS分析。考察糠酸莫米松在血浆中的基质效应，结果如下表10所表示：
表10糠酸莫米松在血浆中基质效应的考察结果
Figure BDA0003289099400000151
/>
Figure BDA0003289099400000161
(6)稀释考察：取稀释质控300μL与300μL空白基质混匀，置于10mL玻璃管中；每个浓度平行处理6份，分别加入50μL 50％乙腈水溶液(含内标1.00ng/mL MF-d3)涡旋混合均匀；加入100μL的0.1M氢氧化钠涡旋混合均匀；加入4mL提取试剂(甲基叔丁基醚：正己烷＝3:7，v:v)，1700rpm涡旋振荡5min，混合均匀；在常温、1550g条件下，离心5min；取上清液3.6mL于10mL玻璃管中；在45℃下离心浓缩挥干；加入100μL的50％乙腈水溶液，2000rpm涡旋振荡3min，混合均匀；取全部上清液于96孔板中，待HPLC-MS/MS分析；考察糠酸莫米松稀释可靠性，结果如下表11所表示：
表11糠酸莫米松在血浆中稀释可靠性考察结果
Figure BDA0003289099400000162
Figure BDA0003289099400000171
/>
残留效应考察：
样品处理方法：残留效应将在每个分析批中的每条标准曲线定量上限(ULOQ)样品后进空白样品来评价。残留空白样品处理同双空白样品。接受标准：空白样品中待测物保留时间处残留峰峰面积不超过当批标准曲线中STD1(LLOQ浓度水平)峰面积均值的20％。空白样品中内标保留时间处残留峰峰面积不超过当批标准曲线中 STD1(LLOQ浓度水平)内标峰面积均值的5％。考察结果如表12所示，各分析批中残留考察均符合接受标准。
表12糠酸莫米松残留效应考察结果
Figure BDA0003289099400000172
各种稳定性考察：对糠酸莫米松储备液和工作液进行了短期和长期的稳定性考察；队糠酸莫米松在基质中的各种条件稳定性进行考察，结果如下表13所表示：
表13糠酸莫米松各种稳定性考察结果
Figure BDA0003289099400000173
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Figure BDA0003289099400000181
本发明人血浆中糠酸莫米松定量检测的方法各项指标均符合2020版中国药典9012生物样品定量分析方法的要求。采用本方法能够高效、谨慎、便捷、准确、真实的进行生物样品中糠酸莫米松的分析，可以有效地应用于糠酸莫米松临床检测和药代动力学研究。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (4)

1.一种采用高效液相色谱-串联质谱仪进行血浆中糠酸莫米松检测的方法，包括：
1)标准曲线及质控工作溶液的配制：称取糠酸莫米松对照品至玻璃瓶中，加入适量的甲醇或乙腈或不同比例的甲醇乙腈混合溶液配制成浓度为0.50～5.00mg/mL的糠酸莫米松储备液，再将所述糠酸莫米松储备液用50～80％甲醇或乙腈或甲醇/乙腈水溶液稀释成浓度为5.0～400pg/mL的工作溶液；
糠酸莫米松-D3内标工作液的配制：称取糠酸莫米松-D3内标对照品至玻璃瓶中，加入适量的甲醇或乙腈或不同比例的甲醇乙腈混合溶液配制成浓度为0.50～5.00mg/mL的糠酸莫米松-D3内标储备液，将上述糠酸莫米松-D3储备液用50～80％甲醇或乙腈或甲醇/乙腈水溶液稀释得到所述糠酸莫米松-D3内标工作液；所有储备液和工作溶液在2～8℃保存，备用；
2)标准曲线、质控配制过程：精密移取步骤1)所述各浓度的工作溶液，分别加入到空白血浆中涡旋混匀，配制成标准曲线及质控样品；
3)血浆样品前处理过程：取血浆样品于玻璃离心管中，向其中加入所述糠酸莫米松-D3内标工作液，涡旋混匀，并加入萃取剂，涡旋混匀，于2～8℃的离心机高速离心5～10min；取上清液挥干浓缩，挥干后加入50～80％甲醇或乙腈，涡旋混匀，得到待测样品；
所述萃取剂为由甲基叔丁基醚和正己烷组成的混合液；所述甲基叔丁基醚和正己烷的体积比为3:7；
HPLC-MS/MS测定过程：将所述待测样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中进行检测；
所述HPLC-MS/MS测定过程工作条件为：
液相条件：色谱柱为Thermo Hypersil GOLD，4.6×100mm，5.0μm；流动相A：含2mM碳酸氢铵水溶液；流动相B：乙腈-水溶液，其中，乙腈和水的体积比为95:5，并含2mM碳酸氢铵；
柱温为40℃，流速为0.4～1.0mL/min；洗脱方式为梯度洗脱；
所述梯度洗脱按照如下进行：
Figure FDA0003976719890000021
使用SCIEX液质联用系统中的切换阀，实现一个梯度内先对糠酸莫米松进行分离检测，后对色谱柱进行反冲洗；
所述切换阀的操作如下：3.8min从A切换到B，7.5min从B切换到A；质谱条件：离子源类型为电喷雾离子化源，采用正离子电离方式；多反应监测检测模式；电喷雾电压5500eV；离子源温度：650℃；气帘气20psi；碰撞池气体：6psi，雾化气Gas1：65psi；辅助加热气：70psi；数据收集时间：6.5min；
所述HPLC-MS/MS测定过程中糠酸莫米松的监测离子对为m/z521.2→m/z355.2，四极杆驻留时间均为50～150ms，去簇电压均70eV，碰撞能量为23eV；
前处理条件：所使用的离心管均为玻璃材质的、使用0.05～0.3M的NaOH调节血浆pH；使用不同比例的正己烷和甲基叔丁基醚混合萃取剂；
所述HPLC-MS/MS测定过程中糠酸莫米松-D3的监测离子对为m/z 524.2→m/z 373.2，四极杆驻留时间为50～150ms，去簇电压70eV，碰撞能量17eV；
数据处理过程：以糠酸莫米松和糠酸莫米松-D3的色谱峰面积比为纵坐标，根据标准曲线计算血浆中糠酸莫米松的浓度，单位为pg/mL。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，血浆样品前处理中所述离心机转速≥1500g离心力；
所述涡旋步骤中，转速为1500-2000rpm；时间为3-5min。
3.根据权利要求1-2任一所述的方法，其特征在于：所述标准曲线、质控配制过程中所述随行质控样品由低、中、高、稀释质控4个浓度所组成，其中稀释质控样品的浓度为30.0pg/mL，稀释因子为2。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述色谱条件还包括：自动进样器清洗溶液为体积比为400：400：200：1的甲醇：乙腈：水和甲酸组成的混合液；自动进样器温度：4～8℃；自动进样器清洗模式：进样前和进样后清洗；自动进样器清洗体积：300～600μL；自动进样器清洗时浸泡时间2～5s；自动进样器进样体积：10～50μL。
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