CN113881788B - 一种基于微生物标记鉴识唾液与阴道分泌物的试剂盒及其应用 - Google Patents
一种基于微生物标记鉴识唾液与阴道分泌物的试剂盒及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种微生物标记鉴识试剂盒及其应用。所述试剂盒包括多重扩增引物组合及阳性质控品。不仅可以鉴识唾液和阴道分泌物，还可实现从多种体液构成的混合斑和陈旧斑中对唾液和阴道分泌物的精准溯源，不受其他体液的干扰。当样本DNA量低至0.1ng时仍能得到唾液和阴道分泌物中优势菌的检测结果。可实现对复杂混合斑中唾液和阴道分泌物的精准溯源，利用分析结果可进行案件定性，为司法案件提供有力证据。
Description
技术领域
本发明涉及基因检测技术领域，特别涉及一种基于微生物标记鉴识唾液与阴道分泌物的试剂盒及其应用。
背景技术
明确生物物证体液的组织来源，对于案件定性、犯罪现场重建尤为重要。性侵案件生物检材类型主要包括面部或隐私部位擦拭子，以及内裤、床单等，主要涉及人体唾液、阴道分泌物和精液等相关体液。
目前法医实验室对人体组织体液类型的识别主要基于免疫学反应或酶促反应，但仅对人体血液、人体精液的溯源鉴识形成行业标准。对于唾液的识别方法包括唾液淀粉酶实验和上皮细胞显微镜检测，但唾液淀粉酶实验特异性差，传统的上皮细胞显微镜检测法不仅需要的样本量大，而且可能对检材造成破坏导致无法进行后续检测。阴道分泌物则没有用于识别的特异蛋白质，采用组织学检测方法容易误判。因此国内外的研究一直致力于寻找阴道分泌物和唾液的各种分子标记，包括mRNA、microRNA(miRNA)、circular RNA(circRNA)以及DNA甲基化标记，但尚未形成有效的方法用于法医实践。
发明内容
本发明目的在于提供一种基于微生物标记的唾液与阴道分泌物鉴识试剂盒及其应用，以解决现有技术中所存在的一个或多个技术问题，提供至少一种有益的选择或创造条件。
本发明的第一目的在于提供一种多重扩增引物组合，包括如表1所述的特异性扩增目的核苷酸片段的引物对。
表1多重扩增引物
所述多重扩增引物组合能够通过一次反应鉴别出样本是否含有三种唾液优势菌种及六种阴道分泌物优势菌种，帮助鉴识唾液和阴道分泌物。
进一步，每对上游引物和下游引物中的任意一条引物的5’端标记有荧光发光基团。
进一步，所述荧光发光基团选自FAM、HEX、TAMRA或ROX中的至少一种。
本发明的第二目的在于提供一种微生物标记鉴识试剂盒，其中的多重扩增体系包括上述的多重扩增引物组合。
进一步，所述多重扩增体系的反应总体积为10μL，包括2×Master Mix(反应混合物)5μL，10×Primer Mix(多重扩增引物组合)1μL，余量由水补足。所述Master Mix包含反应必需组分PCR缓冲液、MgCl2、dNTPs、TaqDNA聚合酶等。
进一步，基于微生物标记的唾液与阴道分泌物鉴识鉴识试剂盒还包括阳性质控品，所述阳性质控品含有唾液链球菌、浅黄色奈瑟菌、变形链球菌、惰性乳杆菌、加氏乳酸杆菌、詹式乳酸杆菌、卷曲乳酸杆菌、阴道加德纳氏菌和阴道阿托波菌的特异性DNA片段以及如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.18所示引物所特异性扩增的核苷酸序列。
进一步，所述多重扩增体系的扩增程序为：95℃持续2min；94℃持续30s，58℃持续1min，72℃持续50s，共30个循环；72℃持续10min。
所述微生物标记鉴识试剂盒的使用方法：首先采用QIAGEN公司的DNeasyPowerSoil Kit提取样本总DNA，采用荧光分光光度计在260nm和280nm处分别测定DNA的吸光值，确定DNA浓度，并用1％的琼脂糖凝胶电泳检测DNA的质量；对符合要求的DNA样本，加入多重扩增体系，获得扩增产物后利用毛细管电泳、
3500 DNA测序仪或
GeneMapper ID V3.2进行分析检测。
本发明包括以下有益效果：
本发明提供的试剂盒不仅可以鉴识唾液和阴道分泌物，还可实现从多种体液构成的混合斑样本和陈旧斑中对唾液和阴道分泌物进行鉴识。当样本DNA量低至0.1ng时仍能得到唾液和阴道分泌物优势细菌的分析结果。可实现对复杂混合斑中的唾液和阴道分泌物进行溯源，利用分析结果可协助案件定性，为司法案件提供有力证据。
附图说明
图1是唾液的三个微生物标记的标准检测图谱；
图2是阴道分泌物的六个微生物标记的标准检测图谱；
图3是唾液样本和模拟案件的微生物标记检测结果，其中(A)为唾液样本微生物标记检测图谱，(B)为模拟案件中混合样本含有唾液的复杂斑微生物标记检测图谱；
图4是阴道分泌物样本和模拟案件的微生物标记检测结果，其中(A)为阴道分泌物样本微生物标记检测图谱，(B)为模拟案件中混合样本含有阴道分泌物的复杂斑微生物标记检测图谱；
图5是室温保存6个月的唾液样本的微生物标记检测结果；
图6是室温保存6个月的阴道分泌物样本的微生物标记检测结果；
图7是人体不同来源体液的微生物标记检测结果，其中(A)为外周血，(B)为唾液，(C)为皮肤擦拭物，(D)为泪液，(E)为阴道分泌液。
具体实施方式
下面将结合具体实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1、唾液和阴道分泌物微生物标记的标准DNA检测
1、制备模板。
使用QIAGEN公司的DNeasy PowerSoil Kit(微生物DNA提取试剂盒)分别提取唾液链球菌(Streptococcus salivarius)、浅黄色奈瑟菌(Neisseria subflava)、变形链球菌(Streptococcus mutans)、惰性乳杆菌(Lactobacillus iners)、加氏乳酸杆菌(Lactobacillus gasseri)、詹式乳酸杆菌(Lactobacillus jensenii)、卷曲乳酸杆菌(Lactobacillus crispatus)、阴道加德纳氏菌(Gardnerella vaginalis)和阴道阿托波菌(Atopobium vaginae)的标准微生物菌株培养样本的总DNA。
2、荧光复合扩增。
分别取适量唾液三个微生物标记DNA混合物、阴道分泌物六个微生物标记DNA混合物加入10μL反应体系：2×MasterMix 5μL；10×Primer Mix 1μL，用水将反应体系补至10μL。PCR热循环条件如下：95℃持续2min；94℃持续30s，58℃持续1min，72℃持续50s，共30个循环；72℃持续10min。
3、毛细管电泳及分析。
1)电泳前变性处理体系：1.5μL纯化产物、0.3μL内标SIZ-500、10μL甲酰胺(Hi-Diformamide)；处理条件：95℃维持5min，0℃维持3min。
2)通过
3500测序仪完成对扩增产物的检测，数据分析利用
GeneMapperID软件完成。图1为唾液三个微生物标记的标准检测结果，图2为阴道分泌物六个微生物标记的标准检测结果。序号和微生物标记对应见表1。
实施例2、唾液样本及模拟案件中含有唾液混合样本的检测
收集健康志愿者的唾液样本5份，每份样本用无菌棉签采集，室温条件下阴干。随机抽取其中一份唾液样本混合皮肤擦拭物样本制备成模拟案件中的唾液皮肤混合迹样本检材。
采用Chelex-100法进行DNA提取。取适量唾液样本，加入80μL浓度为5％的Chelex-100溶液，56℃孵育30min，充分震荡后，95℃保温8min，震荡混匀，12000rpm离心3min取上清。
扩增与检测分析按照实施例1所述的检测条件进行。
结果见图3，图3(A)表示唾液样本的微生物标记检测结果，能够从图谱鉴别出该样本类型为唾液。图3(B)表示模拟案件中含有唾液混合样本的复杂斑微生物标记检测结果，能够从唾液优势菌种类型鉴别出该混合斑样本含有唾液成分。
实施例3、阴道分泌物样本及模拟案件中含有阴道分泌物混合样本的检测
收集健康女性阴道分泌物样本5份；每份样本用无菌棉签采集，室温条件下阴干。随机抽取其中一份阴道分泌物样本，混合其他血液样本，制备成模拟案件中含有阴道分泌物混合样本检材。
样本DNA提取与检测步骤参考实施例2进行。
结果见图4，图4(A)表示阴道分泌物样本的微生物标记检测结果，能够从图谱鉴别出该样本类型为阴道分泌物。图4(B)表示模拟案件中含有阴道分泌物混合样本的复杂斑微生物标记检测结果，能够从阴道分泌物优势菌种类型鉴别出该混合斑样本含有阴道分泌物成分。
实施例4、陈旧斑样本的检测
采集制备唾液斑及阴道分泌物样本。取200μL新鲜样本于采集卡或棉签上，在室温条件下晾干保存6个月。
样本DNA提取与检测步骤参考实施例2进行。
结果见图5与图6。其中，图5表示室温保存6个月的唾液样本的微生物标记检测结果，图6表示室温保存6个月的阴道分泌物样本的微生物标记检测结果。
实施例5、试剂盒对人体不同来源体液的区分效果验证
收集人体不同来源体液类型，包括外周血、唾液、皮肤擦拭物、泪液以及阴道分泌液样本。
样本DNA提取与检测步骤参考实施例2进行。
结果见图7，其中图7(A)为外周血，图7(B)为唾液，图7(C)为皮肤擦拭物，图7(D)为泪液，图7(E)为阴道分泌液的微生物标记检测图谱。结果证明，本研究建立的基于微生物标记用于唾液与阴道分泌物鉴识的试剂盒能够有效将唾液、阴道分泌液与其他法医常见体液进行区分，实现唾液与阴道分泌液的高效快速鉴识。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
SEQUENCE LISTING
<110> 南方医科大学;广东宠孚生物科技有限公司
<120> 一种基于微生物标记鉴识唾液与阴道分泌物的试剂盒及其应用
<130> 2021
<160> 18
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> Streptococcus salivarius
<400> 1
gtgaagaagc agtgggttac 20
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> Streptococcus salivarius
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<211> 21
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<213> Neisseria subflava
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<211> 21
<212> DNA
<213> Neisseria subflava
<400> 4
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<211> 21
<212> DNA
<213> Streptococcus mutans
<400> 5
agaatactga ttggctgcgt c 21
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> Streptococcus mutans
<400> 6
cataaatgtt gccaaagttc a 21
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<211> 19
<212> DNA
<213> Lactobacillus iners
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ccaagagatc gggataaca 19
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<211> 21
<212> DNA
<213> Lactobacillus iners
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<211> 21
<212> DNA
<213> Lactobacillus gasseri
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aaataaaggc cagttactac c 21
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<212> DNA
<213> Lactobacillus gasseri
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<213> Lactobacillus jensenii
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tttcatgcga aagtagcttt t 21
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actttgcaaa tcgtgtagct a 21
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<213> Atopobium vaginae
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tctgggggct caacccctat c 21
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<212> DNA
<213> Atopobium vaginae
<400> 18
taatcctgtt cgctccccta 20
Claims (8)
1.一种多重扩增引物组，其特征在于，包括特异性扩增唾液链球菌（Streptococcus salivarius）、浅黄色奈瑟菌（Neisseria subflava）、变形链球菌（Streptococcus mutans）、惰性乳杆菌（Lactobacillus iners）、加氏乳酸杆菌（Lactobacillus gasseri）、詹式乳酸杆菌（Lactobacillus jensenii）、卷曲乳酸杆菌（Lactobacillus crispatus）、阴道加德纳氏菌（Gardnerella vaginalis）和阴道阿托波菌（Atopobium vaginae）核苷酸片段的上游引物和下游引物，各上游引物和下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1至SEQ IDNO.18所示。
2.根据权利要求1所述的多重扩增引物组，其特征在于，每对上游引物和下游引物中的任意一条引物的5’端标记有荧光发光基团。
3.根据权利要求2所述的多重扩增引物组，其特征在于，所述荧光发光基团选自FAM、HEX、TAMRA或ROX中的至少一种。
4.一种基于微生物标记鉴识唾液与阴道分泌物的试剂盒，其特征在于，包括多重扩增体系，所述多重扩增体系包括如权利要求1至3任一项所述的多重扩增引物组。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述多重扩增体系还包括Master Mix和水。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括阳性质控品，所述阳性质控品含有如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.18所示引物所特异性扩增的核苷酸序列。
7.根据权利要求4至6任一项所述试剂盒，其特征在于，所述多重扩增体系的扩增程序为：95 ℃持续2 min；94 ℃持续30 s，58 ℃持续1min，72 ℃持续50 s，共30个循环；72 ℃持续10min。
8.权利要求4至7任一项所述试剂盒在非疾病诊断目的司法鉴定中的应用，通过检测唾液链球菌（Streptococcus salivarius）、浅黄色奈瑟菌（Neisseria subflava）、变形链球菌（Streptococcus mutans）、惰性乳杆菌（Lactobacillus iners）、加氏乳酸杆菌（Lactobacillus gasseri）、詹式乳酸杆菌（Lactobacillus jensenii）、卷曲乳酸杆菌（Lactobacillus crispatus）、阴道加德纳氏菌（Gardnerella vaginalis）和阴道阿托波菌（Atopobium vaginae），实现唾液与阴道分泌液的鉴识。
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Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114672576B (zh) * | 2022-04-20 | 2023-10-13 | 山西医科大学 | 一种基于rt-rpa-lfd技术快速检测体液斑的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012117431A1 (en) * | 2011-03-03 | 2012-09-07 | Molecular Digital Diagnostics S.R.L. | Method and reagent kit for the identification of biological fluids in a sample |
| WO2013133298A1 (ja) * | 2012-03-07 | 2013-09-12 | 国立大学法人 東京大学 | 炎症性腸疾患の検出方法及びヒト唾液細菌叢の検査方法 |
| WO2016020081A1 (en) * | 2014-08-05 | 2016-02-11 | Alfa Wassermann S.P.A. | Identification of vaginal bacteria |
| CN112176079A (zh) * | 2020-10-27 | 2021-01-05 | 深圳大学 | 一种基于四重液滴数字pcr检测女性阴道微生物的引物探针组合及其应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012117431A1 (en) * | 2011-03-03 | 2012-09-07 | Molecular Digital Diagnostics S.R.L. | Method and reagent kit for the identification of biological fluids in a sample |
| WO2013133298A1 (ja) * | 2012-03-07 | 2013-09-12 | 国立大学法人 東京大学 | 炎症性腸疾患の検出方法及びヒト唾液細菌叢の検査方法 |
| WO2016020081A1 (en) * | 2014-08-05 | 2016-02-11 | Alfa Wassermann S.P.A. | Identification of vaginal bacteria |
| CN112176079A (zh) * | 2020-10-27 | 2021-01-05 | 深圳大学 | 一种基于四重液滴数字pcr检测女性阴道微生物的引物探针组合及其应用 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| E De Vittori et al..Improvement and automation of a real-time PCR assay for vaginal fluids.《Forensic science international》.2016,第262卷第179-182页. * |
| Ju Yeon Jung et al..Rapid oral bacteria detection based on real-time PCR for the forensic identification of saliva.《Scientific reports》.2018,第18卷(第8期),第1-10页. * |
| Kai-Nan Zou et al..Identification of vaginal fluid, saliva, and feces using microbial signatures in a Han Chinese population.《Journal of forensic and legal medicine》.2016,第43卷第126-131页. * |
| Saverio Giampaoli et al..Molecular identification of vaginal fluid by microbial signature.《Forensic science international》.2012,第6卷(第5期),第559-564页. * |
| 邹凯南 等.人体生物性物质来源鉴定及法医学应用研究进展.《法医学杂志》.2016,第32卷(第3期),第204-210页. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113881788A (zh) | 2022-01-04 |
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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