CN113875844A - 互花米草提取物在植物源功能茶产品的应用及功能茶产品 - Google Patents

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Abstract

本发明是关于植物源功能茶产品技术领域，具体涉及互花米草提取物在制备功能性茶产品中的用途。利用互花米草提取物的生物活性，以及茶叶香气优雅，滋味醇厚的特点，烘焙出富集了互花米草功能因子的茶产品。本发明产品来源于可食用植物，绿色环保、健康无毒、对人体无负担，制备工艺高效利用了功能因子，茶汤馥郁香气怡人，兼有丰富的保健功能。

Description

互花米草提取物在植物源功能茶产品的应用及功能茶产品
技术领域
本发明涉及植物源功能茶产品技术领域，具体涉及互花米草提取物在制备功能性茶产品中的用途。本发明产品来源于可食用植物，绿色环保、健康无毒、对人体无负担，制备工艺高效利用了功能因子，茶汤馥郁香气怡人，所得茶产品兼有丰富的保健功能保肾护肝，降低血糖、尿酸、血脂、增强免疫力等，茶产品的部分效果比单纯提取物更好。
背景技术
互花米草(Spartina alterniflora Loise)为禾本科米草属多年生草本植物，是一种生存于海滨潮间带的盐生植物，在半日潮的海域该物种一天可能会被海水淹没两次，高脉冲、高缺氧、高含盐量的极度恶劣环境的胁迫，使该物种体内积累了多种生物活性物质。这些生物活性物质为该物种的资源化利用提供了基本条件。自上世纪80年代，以南京大学盐生植物实验室为代表的研究机构开展了对互花米草及生物矿质液活性物质的一系列研究，在国内外独创性地解决了米草提取物的食用问题，为互花米草资源化利用和进入市场提供了准入资格。随着对互花米草提取物(生物矿质液)单体化合物的分离、纯化与鉴定研究，发现提取物与人体健康关联度较高，有望应用至健康食品的开发中去。
福建省武夷山茶叶生产历史悠久，是红茶和乌龙茶的发源地。武夷岩茶属于乌龙茶，品质卓越，备受消费者喜爱。大红袍是武夷山传统四大名丛之首，是岩茶的珍品。时至今日，茶汤在全中国仍然有广泛的受众群体，很多人仍然在日常的生活当中以摄入茶汤为主要的水分摄入方式。在茶叶创新领域，通过富集功能因子，引入新的植物源活性成分创新产品，充分发挥大红袍这一天然健康饮料的利用价值，研发更多功能性饮品，以期为现代消费者提供多元的健康选择。
在植物源功能性茶饮领域，目前常见的是草药茶，往往存在口感差、草药或配方成分复杂、制备过程效率低下易破坏功效成分、不易保存、饮用不便、成茶功效成分含量较少、功效不明显的问题。部分功能茶饮为保证量产，所使用的功效成分使用化学合成，副产物带来副作用，既不健康也不环保。
发明内容
有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种植物源功能茶产品及其制备方法。本发明所提供的茶产品，来源于可食用植物，绿色环保、健康无毒、对人体无负担，制备工艺高效利用了功能因子，茶汤馥郁香气怡人，兼有丰富的保健功能保肾护肝，降低血糖、尿酸、血脂、增强免疫力等。
为了解决上述问题，本发明提供的技术方案是互花米草提取物在植物源功能茶产品的应用，其特征在于：所述的互花米草提取物为对香豆酸、苜蓿素、异戊基奎尼酸的一种或多种混合组成，具有多重保健的功效。
进一步地，使用的茶叶为岩茶。
本发明还提供了植物源功能茶产品的制备方法：
(1)称取一定量的互花米草提取物，溶于0.8％的羧甲基纤维素钠溶液获得功能液；
(2)将晒青后的茶叶放入做青间的综合做青机中，按照一定的茶叶和功能液比例，在摇青过程中多次少量地喷洒功能液，摇青结束后放入烘焙机中固样；
(3)先快速固样5min，后烘至足干，获得含有互花米草提取物的茶叶，经后续加工获得含有互花米草提取物的茶产品。
进一步地，所述的茶叶和功能液比例为每100g鲜叶喷洒20mg互花米草提取物，所述快速固样的温度为165℃，所述烘至足干的温度为103℃。
进一步地，所述的茶产品可以是茶叶成品、茶叶粉末等。
本发明提供了互花米草提取物对香豆酸的制备方法：
(1)将互花米草粉末置于NaOH溶液，常温避光搅拌24h，离心分离得到水解液和碱水解残渣残渣；用HCl溶液调节水解液的pH值为6，加入一定量的醇溶液沉淀除去半纤维素后，旋转蒸发除去乙醇，再次调节溶液pH值为2，沉淀出木素，悬浮液离心分离得到上层水解液，分别用乙酸乙酯和二氯甲烷萃取收集有机相，旋转蒸发除去有机溶剂，得到碱水解产物；
(2)取步骤(1)中得到的碱水解残渣，与二氧六环/HCl混合液混合，80℃油浴中回流反应3h，冷却离心得到离心液和沉淀；旋转蒸发除去二氧六环，调节pH值为6，再次离心分离得到沉淀和水解液，用等体积乙酸乙酯萃取分液收集有机相，旋转蒸发除去乙酸乙酯，得到酸水解产物；
(3)合并步骤(1)和步骤(2)得到的碱水解产物和酸水解产物，获得护花米草提取物粗膏，采用正相硅胶柱层析进行分离，二氯甲烷/甲醇系统进行100:0～100梯度洗脱，收集二氯甲烷:甲醇体积比为100:8梯度下的洗脱液。
(4)对步骤(3)的洗脱液采用ODS反相层析柱进行分离，流动相为甲醇与水的混合溶液，甲醇与水的体积比为4:6，收集第5个柱体积的洗脱液；
(5)对步骤(4)的洗脱液采用反相高效液相进行分离，C18反相高效液相制备柱，流动相为50％的甲醇水溶液，流速2ml/min，收集保留时间为9.7min的产物即为对香豆酸。
进一步地，所述的醇溶液为等体积95％乙醇溶液，所述的NaOH溶液浓度为1mol/L，所述的HCl溶液浓度为2mol/L。
本发明提供了互花米草提取物苜蓿素的制备方法：
(1)取干燥互花米草切断粉碎，加入70％甲醇溶液，按照料液比1：20，加热回流提取6小时，冷却至室温，抽滤并旋除提取溶剂得米草提取浸膏；
(2)将米草提取浸膏通过大孔吸附树脂柱色谱预处理，经70％乙醇洗脱，收集米草提取洗脱液；
(3)经高效液相色谱法提纯苜蓿素，色谱条件是：色谱柱Eclipse XDB-C18(250mmX4.6 mm,5μm)，柱温25℃，流动相A为乙睛，流动相B为0.5％磷酸水，检测波长为350nm，流速为1.0mL·min-1，收集保留时间为55min时的洗脱液，梯度洗脱；
(4)将步骤(3)中的洗脱液合并收集，旋干溶剂冷冻干燥即得米草中化合物苜蓿素粉末。
本发明提供了互花米草提取物异戊基奎尼酸的制备方法：
(1)将米草原草烘干切断，打成粉末，置于1000mL锥形瓶，通过一定条件的浸提超声，静置过滤获得上层一次浸提液和下层一次浸提滤渣；
(2)步骤(1)中获得的一次浸提滤渣按照步骤(1)所述方法再次浸提静置过滤得到上层二次浸提液和下层二次浸提滤渣，合并一次浸提液和二次浸提液浓缩干燥，获得米草浸提膏体；
(3)将米草浸提膏体进行柱色谱分离，获得米草提取物异戊基奎尼酸醇溶液；
(4)将步骤(3)获得的米草提取物异戊基奎尼酸醇溶液减压回收溶剂，浓缩后冷冻干燥，获得米草提取物异戊基奎尼酸粉末。
进一步地，所述的一定条件的浸提超声为采用料液比1:20g/mL，80％乙醇溶液，超声浸提温度为60℃，超声波功率为50W，超声时间40min；所述的柱色谱分离采用上样液浓度2.0mg/mL，上样液流速2.0BV/h，上样体积5.0BV，洗脱剂为乙醇和醋酸的混合溶剂，使pH为3，洗脱条件为洗脱液流速2.0BV/h，洗脱液体积4.0BV。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
一、植物源功能茶产品的制备方法更加高效、不易破坏互花米草提取物(对香豆酸、苜蓿素、异戊基奎尼酸)的功效成分。现有传统功能茶产品制备，一般是往茶株茶叶上喷洒功效成分，这容易使功效成分流失或失效；或者用功效成分浸泡茶叶容易造成浪费和茶叶本身的变化；或者在杀青、炒青步骤添加功效成分，很有可能因工艺温度过高且茶叶会逐渐带有粘性，很不利于功能液的分散和稳定。本发明着眼乌龙茶特有的做青工艺，一方面，在做青过程中和做青成熟时，茶叶的叶态虽有变化但仍大部分呈现出展开状态，做青成熟时青叶呈汤匙状绿底红镶边，茶青梗皮表面呈失水皱折状，褶皱的茶叶表面积较大，因此在此步骤喷涂互花米草提取物制备的功能液有利于功能液可能地均匀分布在茶叶的表面。另一方面，做青过程中温度适宜，溶剂部分会随着空气流动缓慢带走，但功效成分不易变质，使功效成分更好更多地粘附于茶叶表面。理论上，本制备方法不仅适用于大红袍，可以延及所有制备涉及做青工艺的茶叶。
二、本发明使用的植物源源自互花米草，我国生长大量的互花米草，甚至部分地区因互花米草过度生长扩张影响了部分沿海地区的生物多样性、具有负生态效应。本发明使用互花米草作为功效成分的来源，互花米草繁殖能力强生产力高，作为功能液功效成分的提取来源，相较于传统的中草药中提取功效成分如从苜蓿草中提取苜蓿素、从杜仲叶中提取绿原酸等，本发明的方案具有不可比拟的产量优势。收获互花米草进行开发利用，既有利于对其生物质进行综合利用，又有利于起到环境正生态效应的作用。
三、本发明将对香豆酸、苜蓿素、异戊基奎尼酸等互花米草提取物应用在茶产品中，适用人群更加广泛，对人体低毒性无负担。一般草药茶风味口感不如茶汤风味馥郁滋味醇爽，功效成分较低保健效果不如本发明提供的植物源功能性茶产品效果明确显著，让需求群体自主选择符合身体需求的功能茶产品。而相比保健酒产品，大部分保健酒产品都是用高浓度白酒作为基底，许多有慢性疾病和保健需求的人群是不宜使用的，本发明提供的植物源功能性茶产品取材均来自自然界可食用植物而无毒性风险，饮用方便，无毒性风险，适用人群更加广泛。
四、本发明提供的使用对香豆酸的茶产品，能够显著降低使用者尿酸水平，兼有保肾护肝，降低血糖的作用，尤其适用于痛风患者、高尿酸血症患者和高血糖患者。
五、本发明提供的使用苜蓿素的茶产品，具有降低血脂，免疫调节，抗炎等功能，适用于高血脂患者。
六、本发明提供的使用异戊基奎尼酸的茶产品，具有降低血液中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平的功效，能够保护肾脏、提神醒脑、调节人体糖脂代谢，尤其适用于肾虚血弱精神萎靡的人群。此外，与市面上常见的功效成分绿原酸相比，异戊基奎尼酸功效相近甚至略优，且绿原酸主要来源是杜仲科植物杜仲的叶，忍冬科植物的干燥花蕾或带初开的花，茜草科植物小果咖啡的种子等，而异戊基奎尼酸来源于植株高大，地下部分发达，繁殖力强生产力高的互花米草，相比于绿原酸的取材储备上更丰富，还有利于生态环境的保护。
七、本发明提供的对香豆酸的制备方法能够提高互花米草中对香豆酸的提取得率和纯度。目前，主要采用碱水解法或先碱水解再酸水解法从植物原料中分离对香豆酸。由于酯键和醚键的化学稳定性不同，它们对酸碱的稳定性亦不同。碱水解主要破坏对香豆酸与木素/碳水化合物间的酯键，同时伴随着木素和半纤维素溶出。酸水解则主要通过破坏对香豆酸与木素/碳水化合物间的醚键来分离对香豆酸。本发明通过添加醇沉淀步骤除去溶液中的半纤维素和添加酸沉淀步骤除去溶液中的木素，有利于减少半纤维素和木素对对香豆酸的干扰，提高对香豆酸的提取得率和纯度。
八、本发明制备出的茶叶成品可以破碎制成茶粉，便于日常携带和冲泡，也可以延及其他形式的茶产品。
九、本发明将岩茶大红袍所含茶多酚氨基酸、具有花香馥郁滋味醇爽的特点与互花米草提取物的保健效果结合，发挥“1+1＞2”的作用，在降低血中尿酸、谷丙转氨酶、尿素氮、肌酐等方面比单纯使用互花米草提取物的效果更好，也是应用上的突破。说明本发明提供的植物源功能茶产品具有更好的缓解痛风、保肝护肾的功效。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一
(1)将互花米草粉末置于NaOH(1mol/L)溶液，常温避光搅拌24h，离心分离得到水解液和碱水解残渣残渣；用HCl(2mol/L)调节水解液的pH值为6，加入等体积95％乙醇沉淀除去半纤维素后，旋转蒸发除去乙醇，再次调节溶液pH值为2，沉淀出木素，悬浮液离心分离得到上层水解液，分别用乙酸乙酯和二氯甲烷萃取收集有机相，旋转蒸发除去有机溶剂，得到碱水解产物；
(2)取步骤(1)中得到的碱水解残渣，与二氧六环/HCl混合液(体积比9∶1，HCl浓度2mol/L)混合，80℃油浴中回流反应3h，冷却离心得到离心液和沉淀；旋转蒸发除去二氧六环，调节pH值为6，再次离心分离得到沉淀和水解液，用等体积乙酸乙酯萃取分液收集有机相，旋转蒸发除去乙酸乙酯，得到酸水解产物；
(3)合并步骤(1)和步骤(2)得到的碱水解产物和酸水解产物，获得米草提取物粗膏，采用正相硅胶柱层析进行分离，二氯甲烷/甲醇系统进行100:0～100梯度洗脱，收集二氯甲烷:甲醇体积比为100:8梯度下的洗脱液；
(4)对步骤(3)的洗脱液采用ODS反相层析柱进行分离，流动相为甲醇与水的混合溶液，甲醇与水的体积比为4:6，收集第5个柱体积的洗脱液；
(5)对步骤(4)的洗脱液采用反相高效液相进行分离，C18反相高效液相制备柱，流动相为50％的甲醇水溶液，流速2ml/min，收集保留时间为9.7min的产物即为对香豆酸；
(6)称取一定量步骤(5)获得的互花米草提取物对香豆酸，溶于0.8％的羧甲基纤维素钠溶液获得功能液；
(7)将晒青后的大红袍放入做青间的综合做青机中，按照每100g鲜叶喷洒20mg对香豆酸的比例，摇青过程中多次少量地喷洒步骤(6)获得的功能液，摇青结束后放入烘焙机中固样；
(8)先以165℃快速固样5min，后用103℃烘至足干，得含对香豆酸的大红袍产品。
实施例二
(1)取干燥互花米草切断粉碎，加入70％甲醇溶液，按照料液比1：20，加热回流提取6小时，冷却至室温，抽滤并旋除提取溶剂得互花米草提取浸膏；
(2)将互花米草提取浸膏通过大孔吸附树脂柱色谱预处理，经70％乙醇洗脱，收集互花米草提取洗脱液；
(3)经高效液相色谱法提纯苜蓿素，色谱条件是：色谱柱Eclipse XDB-C18(250mmX4.6 mm,5μm)，柱温25℃，流动相A为乙睛，流动相B为0.5％磷酸水，检测波长为350nm，流速为1.0mL·min-1，收集保留时间为55min时的洗脱液，按下述梯度洗脱：0-15min阶段，流动相A 15％-20％；15-20min阶段，流动相A 20％-20％；20-70min阶段，流动相A20％-40％；70-70.1min阶段，流动相A 40％-80％；70.1-80min阶段，流动相A 80％-80％；80-80.1min阶段，流动相A 80％-15％；80.1-90min阶段，流动相A 15％-15％；
(4)将步骤(3)中的洗脱液合并收集，旋干溶剂冷冻干燥即得互花米草中化合物苜蓿素粉末；
(5)称取一定量步骤(4)获得的互花米草中化合物苜蓿素粉末，溶于0.8％的羧甲基纤维素钠溶液获得苜蓿素功能液；
(6)将晒青后的大红袍放入做青间的综合做青机中，按照每100g鲜叶喷洒20mg苜蓿素的比例，摇青过程中多次少量地喷洒步骤(5)获得的功能液，摇青结束后放入烘焙机中固样；
(7)先以165℃快速固样5min，后用103℃烘至足干，得含有苜蓿素的大红袍产品。
实施例三
(1)将互花米草原草烘干切断，打成粉末，置于1000mL锥形瓶，浸提条件采用料液比1:20g/mL，80％乙醇溶液，超声浸提温度为60℃，超声波功率为50W，超声时间40min，静置过滤获得上层一次浸提液和下层一次浸提滤渣；
(2)步骤(1)中获得的一次浸提滤渣按照步骤(1)所述方法再次浸提静置过滤得到上层二次浸提液和下层二次浸提滤渣，合并一次浸提液和二次浸提液浓缩干燥，获得互花米草浸提膏体；
(3)将互花米草浸提膏体进行柱色谱分离，上样液浓度2.0mg/mL，上样液流速2.0BV/h，上样体积5.0BV，洗脱剂为乙醇和醋酸的混合溶剂，使pH为3，洗脱条件为洗脱液流速2.0BV/h，洗脱液体积4.0BV，获得互花米草提取物异戊基奎尼酸醇溶液；
(4)将步骤(3)获得的互花米草提取物异戊基奎尼酸醇溶液减压回收溶剂，浓缩后冷冻干燥，获得互花米草提取物异戊基奎尼酸粉末；
(5)称取一定量步骤(4)获得的异戊基奎尼酸粉末，溶于0.8％的羧甲基纤维素钠溶液获得功能液；
(6)将晒青后的大红袍放入做青间的综合做青机中，按照每100g鲜叶喷洒20mg异戊基奎尼酸的比例，摇青过程中多次少量地喷洒步骤(5)获得的功能液，摇青结束后放入烘焙机中固样；
(7)先以165℃快速固样5min，后用103℃烘至足干，得含有异戊基奎尼酸的大红袍产品。
功效验证方面：
实施例基于喂饲互花米草提取的对香豆酸、苜蓿素、异戊基奎尼酸制备的茶产品的动物实验。
1、试验材料与仪器
昆明种小白鼠，雄性，120只，体重20-25g，由南京医科大学动物饲养中心提供，清洁级：二级；造模剂次黄嘌呤(Aladdin Chemistry公司，批号：31813)；阳性对照：苯溴马隆(德国赫曼大药厂，批号:180619)；试验样品-1：实施例1(含互花米草提取物对香豆酸的大红袍)制备的粉末；试验样品-2：实施例1(含互花米草提取物对香豆酸的大红袍)制备的粉末与大豆多肽混合物；试验样品-3：实施例2(含互花米草提取物苜蓿素的大红袍)制备的粉末；试验样品-4：实施例2(含互花米草提取物苜蓿素的大红袍)制备的粉末与大豆多肽混合物；试验样品-5：实施例3(含互花米草提取物异戊基奎尼酸的大红袍)制备的粉末；试验样品-6：实施例3(含互花米草提取物异戊基奎尼酸的大红袍)制备的粉末与大豆多肽混合物；空白对照处理：生理盐水；试验药剂1：互花米草提取的对香豆酸；试验药剂2：互花米草提取的苜蓿素；试验药剂3：互花米草提取的异戊基奎尼酸；羧甲基纤维素钠(CMC-Na)(世贸天珍制药有限公司)。注射器1ml、5ml；离心管：1.5ml、2ml、5ml；采血用毛细血管；饲喂器；平头9#针头；贝克曼LX20全自动生化分析仪。
2、试剂配制
(1)试验样品-1配制：准确称取1g实施例1样品，用0.8％CMC-Na溶液将实施例1样品(按总皂苷含量5.7％计)配制成4.5mg/ml剂量试液。
(2)试验样品-2配制：称取0.5g实施例1样品加入0.5g大豆多肽(平均分子量788)，再用0.8％CMC-Na溶液配制成4.5mg/ml的剂量试液。
(3)试验样品-3配制：准确称取1g实施例2样品，用0.8％CMC-Na溶液将实施例2样品(按总皂苷含量5.7％计)配制成4.5mg/ml剂量试液。
(4)试验样品-4配制：称取0.5g实施例2样品加入0.5g大豆多肽(平均分子量788)，再用0.8％CMC-Na溶液配制成4.5mg/ml的剂量试液。
(5)试验样品-5配制：准确称取1g实施例3样品，用0.8％CMC-Na溶液将实施例3样品(按总皂苷含量5.7％计)配制成4.5mg/ml剂量试液。
(6)试验样品-6配制：称取0.5g实施例3样品加入0.5g大豆多肽(平均分子量788)，再用0.8％CMC-Na溶液配制成4.5mg/ml的剂量试液。
(7)CMC-Na溶液(0.8％)的配制：称取2.4克CMC-Na，倒入烧杯中煮沸使其完全溶解，然后再倒进容量瓶，用纯净水补足至300ml。
(8)50mg/ml次黄嘌呤的配制：称取1g次黄嘌呤，溶于20ml 0.8％CMC-Na溶液中。
(9)0.5mg/ml苯溴马隆配制：称取20mg苯溴马隆，溶于40ml 0.8％CMC-Na溶液中，使之浓度为0.5mg/ml。
(10)试验药剂1配制：称取20mg互花米草提取的对香豆酸，用0.8％CMC-Na溶液配制成0.5mg/ml的剂量试液。
(11)试验药剂2配制：称取20mg互花米草提取的苜蓿素，用0.8％CMC-Na溶液配制成0.5mg/ml的剂量试液。
(12)试验药剂3配制：称取20mg互花米草提取的异戊基奎尼酸，用0.8％CMC-Na溶液配制成0.5mg/ml的剂量试液。
3、模型动物试验组别设计
空白对照组(生理盐水)10只小鼠；模型组(0.8％CMC-Na)10只小鼠；试验样品-1组(4.5mg/ml)10只小鼠；试验样品-2组(4.5mg/ml)10只小鼠；试验样品-3组(4.5mg/ml)10只小鼠；试验样品-4组(4.5mg/ml)10只小鼠；试验样品-5组(4.5mg/ml)10只小鼠；试验样品-6组(4.5mg/ml)10只小鼠；对香豆酸组(0.5mg/ml)10只小鼠；苜蓿素组(0.5mg/ml)10只小鼠；异戊基奎尼酸组(0.5mg/ml)10只小鼠；苯溴马隆组(0.5mg/ml)10只小鼠。
4、实验方法：
对各组受试动物每天给药一次(每天给药前称体重)，连续给药7天，各动物组实验方法：对1-12组动物分别进行胃内给药(i.g.)，其中：
(1)组i.g.生理盐水0.1ml/10g；
(2)组i.g.0.8％CMC-Na 0.1ml/10g；
(3)组i.g.试验样品-1 0.1ml/10g；
(4)组i.g.试验样品-2 0.1ml/10g；
(5)组i.g.试验样品-3 0.1ml/10g；
(6)组i.g.试验样品-4 0.1ml/10g；
(7)组i.g.试验样品-5 0.1ml/10g；
(8)组i.g.试验样品-6 0.1ml/10g；
(9)组i.g.试验药剂1 0.1ml/10g；
(10)组i.g.试验药剂2 0.1ml/10g；
(11)组i.g.试验药剂3 0.1ml/10g；
(12)组i.g.溴苯马龙0.1ml/10g。
第8天最后一次给药30min后，除生理盐水组，其他各组腹腔(i.p.)注射已配制的50mg/ml次黄嘌呤，按剂量1000mg/kg体重给药，在给药后30-40min，立刻摘除眼球采血，置离心管中，在室温下，待血清渗出，取出离心(15000rpm，4min)，吸取上层血清置带盖的样品管中，根据所得血清体积，全部用生理盐水配制到所需体积。
在贝克曼LX20全自动生化分析仪上测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、总蛋白(TP)、血尿酸(uricacid,UA)、谷丙转氨酶(glutamic-pyr uvic transaminase,PT)、指标体重等指标。所有数据经Spss11.5软件包处理，采用单因素方差分析，用均数±标准差(x±s)表示。
5、实验结果
5.1实验鼠血尿酸测定结果
表1试验样品对实验小鼠血尿酸的影响(μM)
Figure BDA0003286291180000151
注：*P<0.05，表示差异显著，**P<0.01，表示差异非常显著，***P<0.001，表示差异极其显著，下表同此。
经测试血尿酸结果如表1所示，试验药品1组及2个试验样品(包括试验样品-1和试验样品-2组)都有不同程度的较为明显的对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平降低的影响。而且在本实验设计范围内，试验药品对香豆酸组效果显著，阳性对照苯溴马隆组效果不显著，这一结果表明说明本发明制备的含互花米草提取物对香豆酸的茶产品能够降低高尿酸血症实验小鼠的血尿酸水平，效果优于溴苯马龙。
5.2实验鼠谷丙转氨酶测定结果
表2试验样品对实验小鼠谷丙转氨酶的影响(U/L)
Figure BDA0003286291180000152
Figure BDA0003286291180000161
经测试，试验药品1组及两个试验样品组(包括试验样品-1和试验样品-2组)都有不同程度的对高尿酸血症小鼠血清谷丙转氨酶水平降低的影响，而且在本实验设计范围内，两个试验样品组效果显著，其谷丙转氨酶非常接近生理盐水组的正常水平。说明本发明制备的含互花米草提取物对香豆酸的茶产品的相比于纯对香豆酸更具有保肝护肝、低毒性的功效，效果明显优于比单纯使用对香豆酸，略胜于溴苯马龙。
5.3实验鼠血糖测定结果
表3试验样品对实验小鼠血糖的影响(mM)
Figure BDA0003286291180000162
经测试，试验样品1组及两个试验样品组(包括试验样品-1和试验样品-2组)都有不同程度的对高尿酸血症小鼠血糖水平降低的影响，而且在本实验设计范围内，对香豆酸组效果非常显著，阳性对照苯溴马隆组效果不显著。说明本发明制备的含互花米草提取物对香豆酸的茶产品具有降低血糖的功效。
5.4实验鼠总胆固醇测定结果
表4试验样品对实验小鼠总胆固醇的影响(mM)
Figure BDA0003286291180000163
Figure BDA0003286291180000171
经测试，试验药剂2组及两个样品组(包括试验样品-3和试验样品-4组)都有不同程度的对高尿酸血症小鼠血清总胆固醇水平降低的影响，而且在本实验设计范围内，各试验组效果显著，说明本发明制备的含互花米草提取物苜蓿素的茶产品能够降低实验鼠总胆固醇水平。
5.5实验鼠甘油三酯测定结果
表5试验样品对实验小鼠甘油三酯的影响(mM)
Figure BDA0003286291180000172
经测试，试验药剂2组及两个样品组(包括试验样品-3和试验样品-4组)都有不同程度的较为显著的对高尿酸血症小鼠血清甘油三酯水平降低的影响。说明本发明制备的含互花米草提取物苜蓿素的茶产品能够降低实验鼠甘油三酯水平。综合5.4和5.5的试验结果，说明含互花米草提取物苜蓿素的茶产品具有降低血脂的作用。
5.6实验鼠总蛋白测定结果
表6试验样品对实验小鼠总蛋白的影响(g/L)
Figure BDA0003286291180000173
Figure BDA0003286291180000181
经测试，模型组的高尿酸血症小鼠血清总蛋白显著下降，而试验药剂2组、试验药剂3组及4个样品组(包括试验样品-3、试验样品-4组、试验样品-5组、试验样品-6组)都能提高对高尿酸血症小鼠血清总蛋白水平，而且在本实验设计范围内，各试验组效果都非常显著，两个试验药剂组及四个样品组血清总蛋白非常接近生理盐水组的正常水平，说明含互花米草提取物苜蓿素和异戊基奎尼酸的茶产品具有抗炎、免疫调节的作用。
5.7实验鼠体重测定结果
表7试验药剂对实验鼠体重的影响(g)
Figure BDA0003286291180000182
注：各组增重比较，没有显著差异。
经测试，试验各组(包括生理盐水的空白组、模型组)喂养7天后体重均有增加，各组动物增重的水平差异不大。
5.8实验鼠尿素氮测定结果
表8试验样品对实验小鼠尿素氮的影响(mM)
Figure BDA0003286291180000191
经测试，试验药品3组及两个试验样品组(包括试验样品-5组和试验样品-6组)都能不同程度的降低高尿酸血症小鼠血清尿素氮水平，而且在本实验设计范围内，试验药品3组的异戊基奎尼酸效果显著，阳性对照苯溴马隆组效果非常显著，两个试验样品组效果极其显著。说明含互花米草提取物异戊基奎尼酸的茶产品相较于单纯的提取物具有更强的降低血清尿素氮的功效。
5.9实验鼠肌酐测定结果
表9试验样品对实验小鼠肌酐的影响(mM)
Figure BDA0003286291180000192
经测试，试验药品3组及两个试验样品组(包括试验样品-5组和试验样品-6组)都有不同程度的对高尿酸血症小鼠血清肌酐水平降低的影响，而且在本实验设计范围内，试验药品3组及两个试验样品组效果达到显著以上，除了异戊基奎尼酸组，其他各试验组血清肌酐都接近生理盐水组的正常水平。说明含互花米草提取物异戊基奎尼酸的茶产品具有降低肌酐的功效。综合5.8和5.9的结果，表明含互花米草提取物异戊基奎尼酸的茶产品具有显著的保护肾脏功效，尤其适用于肾虚血弱精神萎靡的人群。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.互花米草提取物在植物源功能茶产品的应用,其特征在于：所述的互花米草提取物为对香豆酸、苜蓿素、异戊基奎尼酸的一种或多种混合组成。
2.根据权利要求1所述的一种植物源功能茶产品,其特征在于：使用的茶叶为岩茶。
3.根据权利要求2所述的一种植物源功能茶产品,其特征在于：所述茶产品的制备方法：
(1)称取一定量的互花米草提取物，溶于0.8％的羧甲基纤维素钠溶液获得功能液；
(2)将晒青后的茶叶放入做青间的综合做青机中，按照一定的茶叶和功能液比例，在摇青过程中多次少量地喷洒功能液，摇青结束后放入烘焙机中固样；
(3)先快速固样5min，后烘至足干，获得含有互花米草提取物的茶叶，经后续加工获得含有互花米草提取物的茶产品。
4.根据权利要求3所述的一种植物源功能茶产品,其特征在于：茶叶和功能液比例为每100g鲜叶喷洒20mg互花米草提取物，所述快速固样的温度为165℃，所述烘至足干的温度为103℃。
5.根据权利要求2所述的一种植物源功能茶产品，其特征在于：所述对香豆酸的制备方法：
(1)将互花米草粉末置于NaOH溶液，常温避光搅拌24h，离心分离得到水解液和碱水解残渣残渣；用HCl溶液调节水解液的pH值为6，加入一定量的醇溶液沉淀除去半纤维素后，旋转蒸发除去乙醇，再次调节溶液pH值为2，沉淀出木素，悬浮液离心分离得到上层水解液，分别用乙酸乙酯和二氯甲烷萃取收集有机相，旋转蒸发除去有机溶剂，得到碱水解产物；
(2)取步骤(1)中得到的碱水解残渣，与二氧六环/HCl混合液混合，80℃油浴中回流反应3h，冷却离心得到离心液和沉淀；旋转蒸发除去二氧六环，调节pH值为6，再次离心分离得到沉淀和水解液，用等体积乙酸乙酯萃取分液收集有机相，旋转蒸发除去乙酸乙酯，得到酸水解产物；
(3)合并步骤(1)和步骤(2)得到的碱水解产物和酸水解产物，获得护花米草提取物粗膏，采用正相硅胶柱层析进行分离，二氯甲烷/甲醇系统进行100:0～100梯度洗脱，收集二氯甲烷:甲醇体积比为100:8梯度下的洗脱液。
(4)对步骤(3)的洗脱液采用ODS反相层析柱进行分离，流动相为甲醇与水的混合溶液，甲醇与水的体积比为4:6，收集第5个柱体积的洗脱液；
(5)对步骤(4)的洗脱液采用反相高效液相进行分离，C18反相高效液相制备柱，流动相为50％的甲醇水溶液，流速2ml/min，收集保留时间为9.7min的产物即为对香豆酸。
6.根据权利要求5所述的一种植物源功能茶产品，其特征在于：所述的醇溶液为等体积95％乙醇溶液，所述的NaOH溶液浓度为1mol/L，所述的HCl溶液浓度为2mol/L。
7.根据权利要求2所述的一种植物源功能茶产品，其特征在于：所述的苜蓿素的制备方法：
(1)取干燥互花米草切断粉碎，加入70％甲醇溶液，按照料液比1：20，加热回流提取6小时，冷却至室温，抽滤并旋除提取溶剂得米草提取浸膏；
(2)将米草提取浸膏通过大孔吸附树脂柱色谱预处理，经70％乙醇洗脱，收集米草提取洗脱液；
(3)经高效液相色谱法提纯苜蓿素，色谱条件是：色谱柱Eclipse XDB-C18(250mmX4.6mm,5μm)，柱温25℃，流动相A为乙睛，流动相B为0.5％磷酸水，检测波长为350nm，流速为1.0mL·min-1，收集保留时间为55min时的洗脱液，梯度洗脱；
(4)将步骤(3)中的洗脱液合并收集，旋干溶剂冷冻干燥即得米草中化合物苜蓿素粉末。
8.根据权利要求2所述的一种植物源功能茶产品，其特征在于：所述的异戊基奎尼酸的制备方法：
(1)将米草原草烘干切断，打成粉末，置于1000mL锥形瓶，通过一定条件的浸提超声，静置过滤获得上层一次浸提液和下层一次浸提滤渣；
(2)步骤(1)中获得的一次浸提滤渣按照步骤(1)所述方法再次浸提静置过滤得到上层二次浸提液和下层二次浸提滤渣，合并一次浸提液和二次浸提液浓缩干燥，获得米草浸提膏体；
(3)将米草浸提膏体进行柱色谱分离，获得米草提取物异戊基奎尼酸醇溶液；
(4)将步骤(3)获得的米草提取物异戊基奎尼酸醇溶液减压回收溶剂，浓缩后冷冻干燥，获得米草提取物异戊基奎尼酸粉末。
9.根据权利要求8所述的一种植物源功能茶产品，其特征在于：所述的一定条件的浸提超声为采用料液比1:20g/mL，80％乙醇溶液，超声浸提温度为60℃，超声波功率为50W，超声时间40min；所述的柱色谱分离采用上样液浓度2.0mg/mL，上样液流速2.0BV/h，上样体积5.0BV，洗脱剂为乙醇和醋酸的混合溶剂，使pH为3，洗脱条件为洗脱液流速2.0BV/h，洗脱液体积4.0BV。
10.据权利要求1所述的一种植物源功能茶产品,其特征在于：所述的茶产品是茶叶成品、茶叶粉末。
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