CN113866328A - 一种跨场景无标液自主识别非法添加药物的筛查方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于兽药质量检测技术领域,具体涉及一种跨场景无标液自主识别非法添加药物的筛查方法,先将非法添加药物在规定色谱条件下的紫外光谱图、保留时间等数据信息通过配有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪集成非法添加药物筛查方法包,再将方法包移植到具有数据兼容处理能力且配有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪上,即可采用该仪器对供试品溶液进行非法添加药物筛查检测。该方法能够自主识别、筛查供试品溶液中是否含有非法添加药物。本发明方法具有适用仪器范围广、操作简便快速、结果准确可靠、测量时间短、筛查范围大、检测成本低、适用性广、便于推广普及等特点。
Description
技术领域
本发明属于兽药质量检测技术领域,具体涉及一种跨场景无标液自主识别非法添加药物的筛查方法。
背景技术
2019年4月29日,农业农村部发布了《兽药中非法添加药物快速筛查法(液相色谱—二极管阵列法)》,方法涉及153个兽药非法添加成分。方法的发布对打击不按处方生产兽药的非法行为起到了积极作用。但是,该方法也存在一些不足之处:1、该方法以超高效液相色谱-二极管阵列法为主,而超高效液相色谱仪价格非常昂贵,不利于方法的普及和推广;2、由于方法的不可移植性给方法的应用带来诸多限制,如果仅凭方法提供的紫外光谱图库来进行人工识别,不仅难度大,而且准确度也不高;3、如果要在各个不同的实验室重建自己的光谱图库和方法,不仅费时费力且成本高昂,而且还会造成检测资源的极大浪费。
专利CN105203654B公开了一种用于测定中兽药散剂中11种非法添加药物含量的方法,包括以下步骤:(1)采用有机溶剂超声提取方法对待测兽药散剂进行预处理,有机溶剂为甲醇-水,甲醇和水的体积比为0.9-1.1:0.9-1.1;(2)通过液相色谱-串联质谱法对提取液中的喹乙醇、利巴韦林、金刚烷胺、金刚乙胺、地塞米松、氯霉素、己烯雌酚、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林和呋喃唑酮进行检测。本发明的样品预处理简单,以甲醇/水(50+50)作为提取试剂超声提取,过滤膜后即可上机检测,且回收率良好,但该法筛查范围较小。
专利CN107202839A公开了一种兽药制剂中108种非处方药物的筛查方法,包括以下步骤:标准工作溶液的配制、待测样品的分析前处理、数据库的建立和定性分析等,本发明搭建的高通量筛查和定性的检测平台,使得在本领域内从检测单一化合物向同时检测多种化合物的方向发展,与原有的技术相比,检测一种物质中多种化合物的技术手段更加完善,成本降低了很多,极大提高了工作效率。该方法在农业部实施的兽药非法添加及细菌耐药性计划中发挥了重要的作用。在我国省级畜产品质量检测中心进行样品检测,据不完全统计,推广应用样品数量共计万余份,但该方法操作复杂,提高了筛查成本。
发明内容
本发明针对现有技术的不足,提出了一种跨场景无标液自主识别非法添加药物的筛查方法。
具体是通过以下技术方案来实现的:
一种跨场景无标液自主识别非法添加药物的筛查方法,包括如下步骤:
1)将非法添加药物在规定色谱条件下的紫外光谱图、保留时间数据信息通过配有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪集成非法添加药物筛查方法包;
2)再将方法包移植到具有数据兼容处理能力且配有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪上;
3)配制供试品溶液,将其过0.45μm滤膜后备用:
中药固体制剂:取50mg,加甲醇10ml,机械搅拌或超声中任一方式处理10min;
中药液体制剂:取10μl~20μl,加甲醇10ml,摇匀;
化药液体制剂:取20μl,加甲醇10ml,摇匀;
其他化药制剂:取50mg,加甲醇10ml,机械搅拌或超声中任一方式处理10min,用甲醇稀释成含有效成分50μg~100μg/ml的溶液;
4)在同步骤1)规定色谱条件下,采用步骤2)中移植有非法添加药物筛查方法包的高效液相色谱仪对备用的供试品溶液进行检测,记录供试品的色谱图和紫外光谱图,采集相关数据信息,仪器即可自主比较供试品溶液的液相色谱保留时间及其紫外光谱图与方法包中的紫外光谱图库及相应非法添加药物对照品溶液的液相色谱保留时间是否一致,若供试品溶液紫外光谱图及其保留时间与非法添加药物对照品溶液紫外光谱图及保留时间一致,判为可疑阳性结果,即含有非法添加药物。
所述非法添加药物包括但不限于:4-硝基咪唑、阿苯达唑、阿苯达唑砜、阿莫西林、安乃近、安替比林、氨苄西林钠、氨茶碱、氨基比林、奥比沙星、吡哌酸、茶碱、穿心莲内酯、醋酸可的松、达氟沙星、地克珠利、地美硝唑、地塞米松、地塞米松磷酸钠、地塞米松磷酸酯、对乙酰氨基酚、恩诺沙星、二氟沙星、二甲氧苄啶、二硝托铵、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林、呋喃唑酮、呋塞米、氟苯尼考、氟虫腈、氟罗沙星、氟尼辛葡甲胺、黄芩苷、磺胺苯吡唑、磺胺吡啶、磺胺醋酰、磺胺地索辛、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺多辛、磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲异恶唑、磺胺甲恶唑、磺胺甲嘧啶、磺胺甲塞二唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺氯吡嗪钠、磺胺氯达嗪钠、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、甲砜霉素、甲基泼尼松龙、甲氧苄啶、孔雀石绿、喹烯酮、喹乙醇、莱克多巴胺、绿原酸、氯霉素、马波沙星、萘啶酸、萘夫西林、萘普生、尼卡巴嗪、诺氟沙星、培氟沙星、泼尼松龙、青霉素、氢化可的松、三氯苯达唑、色氨酸、沙丁胺醇、沙拉沙星、水杨酸、司帕沙星、替米考星、头孢喹肟、头孢拉定、头孢噻呋、土霉素、维生素B1、维生素B2、维生素B3、西诺沙星、烟酰胺、盐酸氨丙啉、盐酸多西环素、盐酸环丙沙星、盐酸金霉素、盐酸克伦特罗、盐酸氯丙嗪、盐酸普鲁卡因、盐酸小檗碱、盐酸异丙嗪、盐酸左旋咪唑、氧氟沙星、叶酸、乙酰甲喹、隐性孔雀石绿。
所述非法添加药物筛查方法包包括标准品溶液色谱与紫外光谱数据信息、建立的数据处理方法、建立的标准品紫外光谱库。
所述非法添加药物筛查方法包的制作方法,包括如下步骤:
S1配制标准工作溶液:取纯标准物质10mg置于100mL容量瓶中,加甲醇或水稀释并定容至刻度,摇匀即得;
S2标准工作溶液预处理:取标准工作溶液过0.45μm滤膜后,即得标准品溶液;
S3采用配有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪对标准品溶液进行检测,记录标准品的色谱图和紫外光谱图;
S4利用数据处理软件操作系统对标准品的色谱图和紫外光谱图进行相关数据采集,建立数据处理方法,确定各成分的保留时间,设置紫外光谱匹配参数,建立紫外光谱库;
S5把采集的标准品溶液色谱峰保留时间、建立的数据处理方法和紫外光谱库集成非法添加药物筛查方法包。
所述规定色谱条件为:采集波长为190-400nm,带宽1.0nm,提取波长为240、280、320、360nm,流速为1.0ml/min,柱温30℃,进样量为10μl,流动相A为水-1mol/L醋酸铵溶液,流动相B为甲醇-1mol/L醋酸铵溶液,采用梯度洗脱。
所述色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱(C18柱)。
所述梯度洗脱程序:0.00-0.25min,流动相A保持98%,流动相B保持2%;0.25-12.25min,流动相A降至1%,流动相B升至99%;12.25min-13.00min,流动相A保持1%,流动相B保持99%;13.00-13.01min,流动相A升至98%,流动相B降至2%;13.01-20.00min,流动相A保持98%,流动相B保持2%。
所述1mol/L醋酸铵溶液,其配制方法为:取醋酸铵77g,置100mL烧杯中,加水溶解后转移至1000mL量瓶中,洗涤烧杯2~3次,洗液合并入量瓶中,加水稀释至刻度,用冰醋酸调节pH值至4.96~5.04。
所述流动相A,其配制方法为:取10.0mL1mol/L醋酸铵溶液,置1000mL量瓶中,加水稀释至刻度。
所述流动相B,其配制方法为:取10.0mL1mol/L醋酸铵溶液,置1000mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度。
所述步骤2)中高效液相色谱仪的软件操作系统具有与集成方法包的的软件操作系统的兼容性。
所述设置紫外光谱匹配参数,包括如下步骤:
步骤4.1设置积分参数:平滑宽度:0.1~2.0;基线噪音范围:4.1~4.3min;最小峰面积1.0mAU*min;积分起止时间:4.0~16.0min;通道和进样类型:所有通道和任意进样类型;
步骤4.2建立样品组分表:输入标准溶液化学组分的名称及相应的保留时间;设置保留时间相关参数,保留时间窗口范围,一般为3%~5%,如品牌型号差异较大时,可设为10%~20%,组分匹配条件选择光谱和时间;
步骤4.3参比紫外光谱参数设置:选择参比光谱,设置匹配标准,匹配阈值:一般为980,磺胺嘧啶设为950、限制波长范围:一般设为200nm~400nm,部分在低波长段易受到干扰的药物可设为210nm~400nm。
所述紫外光谱库包括各非法添加药物对照品溶液色谱峰的保留时间,峰顶点处的紫外光谱最大吸收波长值,具体如表1所示:
表1
有益效果:
本发明筛查方法具有适用仪器范围广、操作简便快速、结果准确率高(筛查结果对标具体兽药品种及其含量测定和鉴别检验,或经进一步验证后,准确率达98%以上)、测定时间短、筛查对象范围大、筛查成本低、适用性广、便于推广普及等特点。
本发明方法可在不同实验室场景的室温条件下进行检测并自主识别非法添加药物,无需重新配制标准工作溶液,无需重建标准品紫外光谱图库,无需重建数据处理方法,可最大限度降低标准物质消耗以及检验检测人员的工作量。
附图说明
图1:实施例1中20种非法添加药物的紫外光谱图;
图2:实施例2中供试品溶液的色谱图;
图3:实施例2的供试品溶液中乙酰甲喹紫外光谱筛查结果图;
图4:实施例2的供试品溶液中水杨酸紫外光谱筛查结果图;
图5:实施例3供试品溶液的色谱图;
图6:实施例3的供试品溶液中氧氟沙星的UV图;
图7:实施例4供试品溶液的色谱图;
图8:实施例4的供试品溶液中磺胺甲恶唑的UV图;
图9:实施例4的供试品溶液中磺胺嘧啶的UV图;
图10:实施例5供试品溶液的色谱图;
图11:实施例5的供试品溶液中安乃近的UV图;
图12:实施例6供试品溶液的色谱图;
图13:实施例6的供试品溶液中水杨酸的UV图;
图14:实施例7供试品溶液的色谱图;
图15:实施例7的供试品溶液中恩诺沙星的UV图;
图16:实施例7的供试品溶液中磺胺间甲氧嘧啶的UV图;
图17:实施例7的供试品溶液中甲氧苄啶的UV图;
图18:实施例8供试品溶液的色谱图;
图19:实施例8供试品溶液的紫外光谱筛查结果图;
图20:实施例8中疑似甲砜霉素的某成分的紫外光谱图;
图21:实施例8中疑似添加甲砜霉素的板蓝根注射液加入甲砜霉素标准品后所得溶液的色谱图。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明,但本发明并不局限于这些实施方式,任何在本实施例基本精神上的改进或代替,仍属于本发明权利要求所要保护的范围。
实施例1
101种药物紫外光谱库的建立,包括以下步骤:
步骤1:根据物质的化学性质选择适当的溶剂配制单一成分的标准工作溶液;除阿莫西林、青霉素、头孢噻呋外以水为溶剂,其他药物均以甲醇为溶剂配制标准工作溶液;标准工作溶液的浓度按纯品计算为100μg/mL,即按纯品计算称取标准物质10mg置于100mL容量瓶中,加溶剂稀释并定容至刻度,摇匀即得;
步骤2:取标准工作溶液过0.45μm滤膜后,即得标准品溶液;
步骤3:采用配有二极管阵列检测器的赛默飞Thermo Scientific Ultimate 3000高效液相色谱仪(仪器编号为Y5-223)对标准品溶液进行检测,记录标准品的色谱图和紫外光谱图;
所述高效液相色谱仪的工作条件:采集波长为190-400nm,带宽1.0nm,参比波长设为OFF,提取波长为240、280、320、360nm,流速为1.0ml/min,进样量为10μl,流动相A为水-1mol/L醋酸铵溶液(体积比99∶1),流动相B为甲醇-1mol/L醋酸铵溶液(体积比99∶1);色谱柱为Agilent ZORBAX SB C18,规格为4.6×250mm,粒径为5μm;柱温箱温度为30℃;采用梯度洗脱,梯度洗脱程序如表2:
表2
时间 | A | B |
0.00 | 98 | 2 |
0.25 | 98 | 2 |
12.25 | 1 | 99 |
13.00 | 1 | 99 |
13.01 | 98 | 2 |
20.00 | 98 | 2 |
步骤4:利用变色龙软件对标准品的色谱图和紫外光谱图进行相关数据采集,对DAD采集到的色谱和光谱数据进行处理,建立数据处理方法和标准品紫外光谱库:
步骤4.1设置积分参数:平滑宽度:0.1~2.0;基线噪音范围:4.1~4.3min;最小峰面积1.0mAU*min;积分起止时间:4.0~16.0min;通道和进样类型:所有通道和任意进样类型;
步骤4.2建立样品组分表:输入标准溶液化学组分的名称及相应的保留时间;设置保留时间相关参数,保留时间窗口范围,一般为3%~5%,如品牌型号差异较大时,可设为10%~20%,组分匹配条件选择光谱和时间;
步骤4.3参比紫外光谱参数设置:选择参比光谱,设置匹配标准,匹配阈值:一般为980,磺胺嘧啶设为950,限制波长范围:一般设为200nm~400nm,部分在低波长段易受到干扰的药物可设为210nm~400nm;
步骤4.4根据采集到的紫外光谱相关信息建立紫外光谱库;
步骤4.5把采集的标准品溶液数据信息、建立的数据处理方法和紫外光谱库集成为非法添加药物筛查方法包。
本实施例为获取101种药物的紫外光谱图、保留时间及100μg/mL浓度时的色谱峰面积等基础相关信息(如表1所示),为非法添加药物筛查提供参考;
本实施例还比较了101种药物分别在Rorbax SB-C18、Symmetry C18和HypersilGOLD相同规格色谱柱的保留时间,结果表明,85%以上药物的保留时间相对偏差不大于10%;101种药物在两个不同批号的Rorbax SB-C18色谱柱上的保留时间,90%以上药物的保留时间相对偏差不大于5%;101种药物在两台同一品牌的仪器上使用同一Rorbax SBC18色谱柱的保留时间,90%以上药物的保留时间相对偏差不大于10%;
本实施例列举了4-硝基咪唑、磺胺甲恶唑、磺胺嘧啶、安乃近、氧氟沙星、氨苄西林钠、磺胺间甲氧嘧啶、甲氧苄啶、奥比沙星、吡哌酸、茶碱、穿心莲内酯、醋酸可的松、恩诺沙星、地克珠利、地美硝唑、地塞米松、地塞米松磷酸钠、青霉素、水杨酸这20种非法添加药物的紫外光谱图,如图1所示。
实施例2
某乙酰甲喹注射液非法添加水杨酸的筛查方法,包括如下步骤:
步骤1实验准备:选择配备二极管阵列检测器的赛默飞Thermo ScientificUltimate 3000高效液相色谱仪(仪器编号为Y5-254)、数据采集处理软件操作平台为变色龙软件操作系统,色谱柱为Agilent ZORBAX SB C18(SN编号为USCL094771),规格为4.6×250mm,粒径为5μm;
步骤2:将实施例1所得的非法添加药物筛查方法包移植到编号为Y5-254的配有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪上;
步骤3制备供试品溶液:吸取某待检乙酰甲喹注射液20μl置于10mL量瓶中,加适量甲醇溶解后,再加甲醇稀释并定容至刻度,摇匀即得;取适量的供试品溶液过0.45μm滤膜后备用;
步骤4流动相准备:以水-1mol/L醋酸铵溶液(体积比99∶1)为流动相A,甲醇-1mol/L醋酸铵溶液(体积比99∶1)为流动相B;
步骤5:直接从非法添加药物筛查方法包中调用仪器检测方法和数据处理方法对备用的供试品溶液进行检测;
步骤6:仪器自主识别供试品溶液中含有乙酰甲喹和水杨酸两个主要成分(见图2),经检查,紫外光谱图轮廓清晰,明显,与标准库中的对应图谱匹配良好(3-4),初步判定为检出乙酰甲喹和水杨酸;
步骤7:对标《兽药质量标准》2017年版化学药品卷乙酰甲喹注射液相关内容,可知,其不应当含有水杨酸,故判定为该乙酰甲喹注射液疑似非法添加水杨酸;
经进一步采用现有技术进行检测确认,该乙酰甲喹注射液确实添加了水杨酸。
实施例3
某硫酸黏菌素可溶性粉非法添加氧氟沙星的筛查方法,包括如下步骤:
步骤1、2同实施例2;
步骤3制备供试品溶液:称取某硫酸黏菌素可溶性粉100mg,置20mL容量瓶中,加甲醇约10ml,超声处理10~20min,取出,静置至室温,加甲醇稀释并定容至刻度,摇匀即得;取适量的供试品溶液过0.45μm滤膜后备用;
步骤4、5同实施例2;
步骤6:仪器自主识别供试品溶液中含有氧氟沙星(见图5),经检查,紫外光谱图轮廓清晰,明显,与标准库中的对应图谱匹配良好(图1和图6),初步判定为检出氧氟沙星;
步骤7:对标《中国兽药典》2015年版一部硫酸黏菌素可溶性粉相关内容,可知,其不应当含有氧氟沙星,故判定为该硫酸黏菌素可溶性粉疑似非法添加氧氟沙星;经进一步采用现有技术进行检测确认,该硫酸黏菌素可溶性粉确实添加了氧氟沙星。
实施例4
某磺胺嘧啶钠注射液中非法添加磺胺甲恶唑的筛查方法,包括如下步骤:
步骤1、2同实施例2;
步骤3制备供试品溶液:吸取某磺胺嘧啶钠注射液20μl置于10mL量瓶中,加适量甲醇溶解后,再加甲醇稀释并定容至刻度,摇匀即得;取适量的供试品溶液过0.45μm滤膜后备用;
步骤4、5同实施例2;
步骤6:仪器自主识别供试品溶液中含有磺胺嘧啶和磺胺甲恶唑(见图7),经检查,紫外光谱图轮廓清晰,明显,与标准库中的对应图谱匹配良好(图8-9),初步判定为检出磺胺嘧啶和磺胺甲恶唑;
步骤7:对标《中国兽药典》2015年版一部磺胺嘧啶钠注射液相关内容,可知,其不应当含有磺胺甲恶唑,故判定为该磺胺嘧啶钠注射液疑似非法添加磺胺甲恶唑;
经进一步采用现有技术进行检测确认,该磺胺嘧啶钠注射液中确实添加了磺胺甲恶唑。
实施例5
某注射用青霉素钾中非法添加安乃近的筛查方法,包括如下步骤:
步骤1、2同实施例2;
步骤3制备供试品溶液:称取某注射用青霉素钾100mg,置20mL容量瓶中,加甲醇约10ml,超声处理10~20min,取出,静置至室温,加甲醇稀释并定容至刻度,摇匀即得;取适量的供试品溶液过0.45μm滤膜后备用;
步骤4、5同实施例2;
步骤6:仪器自主识别供试品溶液中含有安乃近(见图10),经检查,紫外光谱图轮廓清晰,明显,与标准库中的对应图谱匹配良好(图11),初步判定为检出安乃近;
步骤7:对标《中国兽药典》2015年版一部注射用青霉素钾相关内容,可知,其不应当含有安乃近,故判定为该注射用青霉素钾疑似非法添加安乃近或为假兽药;
经进一步采用现有技术进行检测确认,该注射用青霉素钾中确实了添加安乃近,却不含青霉素。
实施例6
某樟脑磺酸钠注射液中非法添加水杨酸的筛查方法,包括如下步骤:
步骤1、2同实施例2;
步骤3制备供试品溶液:吸取某樟脑磺酸钠注射液20μl置于10mL量瓶中,加适量甲醇溶解后,再加甲醇稀释并定容至刻度,摇匀即得;取适量的供试品溶液过0.45μm滤膜后备用;
步骤4、5同实施例2;
步骤6:仪器自主识别供试品溶液中含有水杨酸(见图12),经检查,紫外光谱图轮廓清晰,明显,与标准库中的对应图谱匹配良好(图1和图13),初步判定为检出水杨酸;
步骤7:对标《兽药质量标准》2017年版化学药品卷樟脑磺酸钠注射液相关内容,可知,其不应当含有水杨酸,故判定为该樟脑磺酸钠注射液疑似非法添加水杨酸;
经进一步采用现有技术进行检测确认,该樟脑磺酸钠注射液中确实添加了水杨酸。
实施例7
某复方磺胺间甲氧嘧啶钠注射液中非法添加恩诺沙星的筛查方法,包括如下步骤:
步骤1、2同实施例2;
步骤3制备供试品溶液:吸取某复方磺胺间甲氧嘧啶钠注射液20μl置于10mL量瓶中,加适量甲醇溶解后,再加甲醇稀释并定容至刻度,摇匀即得;取适量的供试品溶液过0.45μm滤膜后备用;
步骤4、5同实施例2;
步骤6:仪器自主识别供试品溶液中含有甲氧苄啶、磺胺间甲氧嘧啶和恩诺沙星三个主要成分(见图14),经检查,紫外光谱图轮廓清晰,明显,与标准库中的对应图谱匹配良好(图1和图15-17),初步判定为检出甲氧苄啶、磺胺间甲氧嘧啶和恩诺沙星;
步骤7:对标《兽药质量标准》2017年版化学药品卷复方磺胺间甲氧嘧啶钠注射液相关内容,可知,其不应当含有恩诺沙星,故判定为该复方磺胺间甲氧嘧啶钠注射液疑似非法添加恩诺沙星;
经进一步采用现有技术进行检测确认,该复方磺胺间甲氧嘧啶钠注射液中确实添加了恩诺沙星。
实施例8
某板蓝根注射液疑似非法添加甲砜霉素的筛查方法,包括如下步骤:
步骤1、2同实施例2;
步骤3制备供试品溶液:吸取某某板蓝根注射液20μl置于10mL量瓶中,加适量甲醇溶解后,再加甲醇稀释并定容至刻度,摇匀即得;取适量的供试品溶液过0.45μm滤膜后备用;
步骤4、5同实施例2;
步骤6:仪器自主识别供试品溶液中含有甲砜霉素(见图18),经检查,紫外光谱图轮廓清晰,明显,与标准库中的对应图谱匹配尚可(图1和图19),初步判定为检出甲砜霉素;
步骤7:对标《兽药质量标准》2017年版中药卷板蓝根注射液相关内容,可知,其不应当含有甲砜霉素,故判定为该板蓝根注射液疑似非法添加甲砜霉素;
经采用现有技术进行进一步验证,特别是把甲砜霉素对照品溶液加入该板蓝根注射液制成甲砜霉素和可疑成分浓度相当的供试品溶液进行检测后出现2个色谱峰(表明甲砜霉素和疑似成分保留时间不一致,即非同一物质),可确认该板蓝根注射液没有添加甲砜霉素(图20~21),而是含有某种未知化合物。
Claims (10)
1.一种跨场景无标液自主识别非法添加药物的筛查方法,其特征在于,包括如下步骤:
1)将非法添加药物在规定色谱条件下的紫外光谱图、保留时间数据信息通过配有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪集成非法添加药物筛查方法包;
2)再将方法包移植到具有数据兼容处理能力且配有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪上;
3)配制供试品溶液,将其过0.45μm滤膜后备用:
中药固体制剂:取50mg,加甲醇10ml,机械搅拌或超声中任一方式处理10min;
中药液体制剂:取10μl~20μl,加甲醇10ml,摇匀;
化药液体制剂:取20μl,加甲醇10ml,摇匀;
其他化药制剂:取50mg,加甲醇10ml,机械搅拌或超声中任一方式处理10min,用甲醇稀释成含有效成分50μg~100μg/ml的溶液;
4)在同步骤1)规定色谱条件下,采用步骤2)中移植有非法添加药物筛查方法包的高效液相色谱仪对备用的供试品溶液进行检测,记录供试品的色谱图和紫外光谱图,采集相关数据信息,仪器即可自主比较供试品溶液的保留时间及其紫外光谱图与方法包中的紫外光谱图库及相应非法添加药物对照品溶液的保留时间是否一致,若供试品溶液紫外光谱图及其保留时间与非法添加药物对照品溶液紫外光谱图及保留时间一致,判为可疑阳性结果,即含有非法添加药物。
2.如权利要求1所述一种跨场景无标液自主识别非法添加药物的筛查方法,其特征在于,所述非法添加药物包括但不限于:4-硝基咪唑、阿苯达唑、阿苯达唑砜、阿莫西林、安乃近、安替比林、氨苄西林钠、氨茶碱、氨基比林、奥比沙星、吡哌酸、茶碱、穿心莲内酯、醋酸可的松、达氟沙星、地克珠利、地美硝唑、地塞米松、地塞米松磷酸钠、地塞米松磷酸酯、对乙酰氨基酚、恩诺沙星、二氟沙星、二甲氧苄啶、二硝托铵、呋喃它酮、呋喃妥因、呋喃西林、呋喃唑酮、呋塞米、氟苯尼考、氟虫腈、氟罗沙星、氟尼辛葡甲胺、黄芩苷、磺胺苯吡唑、磺胺吡啶、磺胺醋酰、磺胺地索辛、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺多辛、磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲异恶唑、磺胺甲恶唑、磺胺甲嘧啶、磺胺甲塞二唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺氯吡嗪钠、磺胺氯达嗪钠、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、甲砜霉素、甲基泼尼松龙、甲氧苄啶、孔雀石绿、喹烯酮、喹乙醇、莱克多巴胺、绿原酸、氯霉素、马波沙星、萘啶酸、萘夫西林、萘普生、尼卡巴嗪、诺氟沙星、培氟沙星、泼尼松龙、青霉素、氢化可的松、三氯苯达唑、色氨酸、沙丁胺醇、沙拉沙星、水杨酸、司帕沙星、替米考星、头孢喹肟、头孢拉定、头孢噻呋、土霉素、维生素B1、维生素B2、维生素B3、西诺沙星、烟酰胺、盐酸氨丙啉、盐酸多西环素、盐酸环丙沙星、盐酸金霉素、盐酸克伦特罗、盐酸氯丙嗪、盐酸普鲁卡因、盐酸小檗碱、盐酸异丙嗪、盐酸左旋咪唑、氧氟沙星、叶酸、乙酰甲喹、隐性孔雀石绿。
3.如权利要求1所述一种跨场景无标液自主识别非法添加药物的筛查方法,其特征在于,所述非法添加药物筛查方法包包括非法添加药物对照品溶液色谱与紫外光谱数据信息、建立的数据处理方法、建立的标准品紫外光谱库。
4.如权利要求1或3所述一种跨场景无标液自主识别非法添加药物的筛查方法,其特征在于,所述非法添加药物筛查方法包的制作方法,包括如下步骤:
S1配制标准工作溶液:取纯标准物质10mg置于100mL容量瓶中,加甲醇或水稀释并定容至刻度,摇匀即得;
S2标准工作溶液预处理:取标准工作溶液过0.45μm滤膜后,即得标准品溶液;
S3采用配有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪对标准品溶液进行检测,记录标准品的色谱图和紫外光谱图;
S4利用数据处理软件操作系统对标准品的色谱图和紫外光谱图进行相关数据采集,建立数据处理方法,确定各成分的保留时间,设置紫外光谱匹配参数,建立紫外光谱库;
S5把采集的标准品溶液数据信息、建立的数据处理方法和紫外光谱库集成非法添加药物筛查方法包。
5.如权利要求1或3所述一种跨场景无标液自主识别非法添加药物的筛查方法,其特征在于,所述规定色谱条件为:采集波长为190-400nm,带宽1.0nm,提取波长为240、280、320、360nm,流速为1.0ml/min,进样量为10μl,柱温箱温度为30℃,流动相A为水-1mol/L醋酸铵溶液,流动相B为甲醇-1mol/L醋酸铵溶液,梯度洗脱。
6.如权利要求1或3所述一种跨场景无标液自主识别非法添加药物的筛查方法,其特征在于,所述色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱。
7.如权利要求1或3所述一种跨场景无标液自主识别非法添加药物的筛查方法,其特征在于,所述梯度洗脱程序:0.00-0.25min,流动相A保持98%,流动相B保持2%;0.25-12.25min,流动相A降至1%,流动相B升至99%;12.25min-13.00min,流动相A保持1%,流动相B保持99%;13.00-13.01min,流动相A升至98%,流动相B降至2%;13.01-20.00min,流动相A保持98%,流动相B保持2%。
8.如权利要求5所述一种跨场景无标液自主识别非法添加药物的筛查方法,其特征在于,所述1mol/L醋酸铵溶液,其配制方法为:取醋酸铵77g,置100mL烧杯中,加水溶解后转移至1000mL量瓶中,洗涤烧杯2~3次,洗液合并入量瓶中,加水稀释至刻度,用冰醋酸调节pH值至4.96~5.04。
9.如权利要求5所述一种跨场景无标液自主识别非法添加药物的筛查方法,其特征在于,所述流动相A,其配制方法为:取10.0mL1mol/L醋酸铵溶液,置1000mL量瓶中,加水稀释至刻度。
10.如权利要求5所述一种跨场景无标液自主识别非法添加药物的筛查方法,其特征在于,所述流动相B,其配制方法为:取10.0mL1mol/L醋酸铵溶液,置1000mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度。
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