CN113861147A - 一种用于检测草甘膦的荧光传感器的制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

一种用于检测草甘膦的荧光传感器的制备方法与应用，涉及草甘膦检测领域，尤其涉及一种荧光传感器的制备方法及其在草甘膦检测中的应用。是要解决现有检测草甘膦的方法存在品前处理繁琐、检测耗时长、成本高、难以大规模常规化检测的问题。方法：将荧光探针L溶于HEPES缓冲溶剂中，加入硝酸铜孵育，即得到荧光传感器。本发明制备的荧光传感器对草甘膦具有良好的选择性，实际检测中样品前处理的方法简单，不受其他有机磷农药的干扰，检测灵敏度高、速度快、成本低，不需要昂贵的大型仪器和复杂的样品前处理，能够实现草甘膦的大规模、常规化检测。本发明用于草甘膦的检测领域。

Description

一种用于检测草甘膦的荧光传感器的制备方法与应用
技术领域
本发明涉及草甘膦检测领域，尤其涉及一种荧光传感器的制备方法及其在草甘膦检测中的应用。
背景技术
草甘膦是一种内吸传导型慢性广谱灭生性有机磷除草剂，主要通过抑制5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶的活性，阻碍植物体内莽草素向芳香族氨基酸的转化，使蛋白质的合成受到干扰，从而导致植物死亡。与其他除草剂相比，草甘膦具有高效、广谱、非选择性、环境中易分解、对哺乳动物低毒等优点，被广泛应用于农业、林业、水产等领域，现已成为世界上应用最广、产量最大的农药品种。
长期广泛的使用草甘膦已引起严重的环境污染，对人类健康造成严重威胁。最近的研究表明，草甘膦能够引起多种健康危害，可能会引发淋巴腺癌、血管瘤、胰腺癌、肺癌等，并被世界卫生组织(WHO)列为2A类致癌物。目前，全世界范围内已有超过30个国家或地区开始禁止或限制使用草甘膦，并对加强了对环境中草甘膦残留的监测。因此，对环境样品中草甘膦的分析检测具有重要意义。
检测草甘膦的方法主要有化学分析法、分光光度法、气相色谱法、高效液相色谱法、色谱质谱联用法等，其中常规的化学分析法、分光光度法在草甘膦的检测中存在灵敏度低、易受其它离子干扰的等缺点；目前应用较多的是色谱分析法，虽然色谱法具有准确性高、分离效果、结果稳定性、操作重复性好等优点，但是在检测过程中需要对草甘膦进行衍生化前处理，检测操作繁琐，检测耗时长、成本高、无法实时检测，并且需要大型且昂贵的仪器，对设备和操作人员的要求较高，难以实现大规模、常规化检测。
发明内容
本发明是要解决现有检测草甘膦的方法存在品前处理繁琐、检测耗时长、成本高、难以大规模常规化检测的问题，提供一种用于检测草甘膦的荧光传感器的制备方法与应用。
本发明用于检测草甘膦的荧光传感器的制备方法，包括以下步骤：
将荧光探针L溶于HEPES缓冲溶剂中，配制成1.0×10-4～1.0×10-6mol/L溶液，加入硝酸铜，孵育孵育时间为2～5min，即得到荧光传感器；
所述荧光探针L的分子结构为：
Figure BDA0003293810810000021
优选的，HEPES缓冲溶剂中DMSO与水的体积比为7:3。
优选的，HEPES缓冲溶液中HEPES浓度为10mM；pH为5～10，优选为7.4。
进一步的，荧光探针L与Cu2+的摩尔比为1:(1～2)，优选为1:1.5。
所述荧光探针L的制备方法，包括以下步骤：
一、将7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酸乙酯、水合肼和四氢呋喃回流反应2～6h；脱除溶剂后重结晶，得7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酰肼；
二、在催化剂存在下，将7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酰肼和4-二乙氨基水杨醛在乙醇中回流反应10～20h；反应产物过滤干燥得粗品，粗品经重结晶提纯，即得荧光探针L。
优选的，步骤一中所述重结晶溶剂为甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇，其中优选异丙醇。
优选的，步骤二中催化剂为盐酸、乙酸或丙酸，其中优选乙酸。
优选的，步骤二中重结晶溶剂为THF、DMF、DMSO或NMP，其中优选DMF。
上述方法制备的荧光传感器在检测草甘膦中的应用。
利用荧光传感器检测草甘膦的具体方法为：
向荧光传感器中加入待测浓度的草甘膦样品，在435nm激发光作用下，测量荧光传感器在550nm处荧光发射峰强度值，并按如下方程式得到待测草甘膦溶液的浓度X：
Y＝15.65×X－2.05
其中，X为草甘膦浓度，Y为荧光发射峰强度值。
本发明在实际进行含草甘膦样品检测时，样品通过离心、过滤，除去固体颗粒杂质的前处理即可。
本发明的原理：
本发明所制备的荧光探针L结构中具有较大的共轭体系和刚性共平面，能够产生稳定的荧光；荧光探针L含有的酰腙基团能够与金属离子(如Cu2+)络合，由于酰腙基团中氮原子的给电子能力消失，荧光探针L与Cu2+络合物(即荧光传感器)荧光淬灭；有机磷农药草甘膦与Cu2+具有较强的结合能力，能够夺取荧光传感器中的Cu2+，使荧光传感器荧光恢复，进而实现草甘膦的检测。荧光传感器检测草甘膦的响应机理见图1。
本发明的有益效果：
1)本发明制备的荧光传感器对草甘膦具有良好的选择性，不受其他有机磷农药的干扰，检测灵敏度高、速度快、成本低，不需要昂贵的大型仪器和复杂的样品前处理，能够实现草甘膦的大规模、常规化检测。
2)本发明的荧光传感器本身没有荧光，呈现荧光OFF状态；加入草甘膦之后，荧光传感器具有强荧光，呈现荧光ON状态；即可表示为荧光传感器对草甘膦的“OFF-ON”荧光检测。本发明制备的荧光传感器不仅实现了对草甘膦“OFF-ON”荧光检测，而且在可见光/紫外光下荧光传感器对草甘膦具有明显的颜色/荧光变化，便于肉眼观测，在不借助仪器设备的条件下，可实现草甘膦的简单定性检测。
3)本发明制备的荧光传感器在0～16μM(即0～2.7μg/mL)内，其荧光发射峰强度与草甘膦浓度具有良好的线性关系，检测极限低至6.7×10-8mol/L(即11.3ng/mL)，实现了草甘膦的痕量定性、定量检测。
4)本发明方法在实际进行含草甘膦样品检测时，样品通过离心、过滤，除去固体颗粒杂质的前处理即可，样品前处理方法简单。
附图说明
图1为本发明制备的荧光传感器检测草甘膦的原理图；
图2为荧光探针L对Cu2+的Job’s plot曲线；
图3为荧光传感器对草甘膦的Job’s plot曲线；
图4为金属离子对荧光传感器的影响；
图5为荧光传感器检测草甘膦的选择性；
图6为共存有机磷农药对荧光传感器检测草甘膦的影响；
图7为pH对荧光传感器检测草甘膦的影响；
图8为荧光传感器对不同浓度草甘膦的荧光发射光谱变化图；
图9为荧光传感器在550nm处荧光发射峰强度值与草甘膦浓度的线性关系图；
图10为在可见光(a)、紫外光365nm(b)下，荧光探针L(1#)、荧光传感器(2#)、荧光传感器分别与草甘膦(3#)、敌百虫(4#)、亚胺硫磷(5#)、敌敌畏(6#)、马拉硫磷(7#)、氧化乐果(8#)、乐果(9#)、灭线磷(10#)、杀螟硫磷(11#)、甲基对硫磷(12#)、对硫磷(13#)、草铵膦(14#)作用后的荧光传感器颜色、荧光变化图；
图11为本发明制备7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酰肼的1H NMR谱图；
图12为本发明制备7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酰肼的13C NMR谱图；
图13为本发明制备7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酰肼的红外光谱图；
图14为本发明制备7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酰肼的高分辨质谱图；
图15为本发明制备荧光探针L的1H NMR谱图；
图16为本发明制备荧光探针L的13C NMR谱图；
图17为本发明制备荧光探针L的红外光谱图；
图18为本发明制备荧光探针L的高分辨质谱图。
具体实施方式
本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
具体实施方式一：本实施方式用于检测草甘膦的荧光传感器的制备方法，包括以下步骤：
将荧光探针L溶于HEPES缓冲溶剂中，配制成1.0×10-4～1.0×10-6mol/L溶液，加入硝酸铜，孵育孵育时间为2～5min，即得到荧光传感器；
所述荧光探针L的分子结构为：
Figure BDA0003293810810000041
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述HEPES缓冲溶剂中DMSO与水的体积比为7:3。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式二不同的是：所述HEPES缓冲溶液中HEPES浓度为10mM；pH为5～10。其它与具体实施方式二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式二不同的是：所述HEPES缓冲溶液中HEPES浓度为10mM；pH为7.4。其它与具体实施方式二相同。
本实施方式采用HEPES缓冲溶液是为了防止探针溶液的pH变化，同时可以验证探针是否可以用于细胞实验。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述荧光探针L与Cu2+的摩尔比为1:(1～2)。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述荧光探针L与Cu2+的摩尔比为1:1.5。其它与具体实施方式一相同。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一不同的是：所述荧光探针L的制备方法，包括以下步骤：
一、将7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酸乙酯、水合肼和四氢呋喃回流反应2～6h；脱除溶剂后重结晶，得7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酰肼；
二、在催化剂存在下，将7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酰肼和4-二乙氨基水杨醛在乙醇中回流反应10～20h；反应产物过滤干燥得粗品，粗品经重结晶提纯，即得荧光探针L。其它与具体实施方式一相同。
所述化合物7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酸乙酯的合成方法参考文献Yin Haijing,Zhang Buchang,Yu Haizhu,et al.Two-Photon Fluorescent Probes forBiological Mg2+Detection Based on 7-Substituted Coumarin[J].The Journal ofOrganic Chemistry,2015,80(9),4306-4312)。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式七不同的是：步骤一中所述重结晶溶剂为甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇。其它与具体实施方式七相同。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式七或八不同的是：步骤二中催化剂为盐酸、乙酸或丙酸。其它与具体实施方式七或八相同。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式七、八或九不同的是：步骤二中重结晶溶剂为THF、DMF、DMSO或NMP。其它与具体实施方式七、八或九相同。
具体实施方式十一：本实施方式荧光传感器在检测草甘膦中的应用。
具体实施方式十二：本实施方式与具体实施方式十不同的是：利用荧光传感器检测草甘膦的具体方法为：
向荧光传感器中加入待测浓度的草甘膦样品，在435nm激发光作用下，测量荧光传感器在550nm处荧光发射峰强度值，并按如下方程式得到待测草甘膦溶液的浓度X：
Y＝15.65×X－2.05
其中，X为草甘膦浓度，Y为荧光发射峰强度值。其它与具体实施方式十相同。
在实际进行含草甘膦样品检测时，样品通过离心、过滤，除去固体颗粒杂质的前处理即可。
下面对本发明的实施例做详细说明，以下实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方案和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1：
本实施例荧光探针L的制备方法，按以下步骤进行：
一、在250mL三口瓶中加入7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酸乙酯3.9g、质量浓度80％的水合肼3.4g和四氢呋喃100mL，回流反应6h。减压脱除溶剂，乙醇重结晶，得黄色固体7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酰肼3.2g，收率为85.6％。
7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酰肼的1H NMR谱图、13C NMR谱图、红外光谱图、质谱图分别如图11、12、13、14所示。
7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酰肼的1H NMR、13C NMR、IR、MS数据如下：
m.p.121.8～122.4℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:11.47(s,1H),7.93(s,1H),7.53～7.44(m,2H),7.27(d,J＝8.0Hz,1H),7.06(s,2H),7.02～6.95(m,3H),6.92(d,J＝1.5Hz,1H),3.80(s,3H)；13C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ:159.55,156.07,140.14,132.96,127.97,122.15,120.47,117.84,114.40,114.19,89.86,88.18,55.28；IR(KBr)ν:3344,2962,2804,2206,1603,1548,1511,1362,1247,1029,836,820cm-1；HRMS(ESI+)calcd for C19H14N2O4[M+H]+:335.0954,found 335.1786。
二、在250mL三口瓶中加入7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酰肼2.0g、4-二乙氨基水杨醛1.3g、冰乙酸0.5mL和无水乙醇100mL，回流反应15h；冷却至室温后，过滤干燥，DMF重结晶，得荧光探针L 2.1g，收率为68.8％。
荧光探针L的1H NMR谱图、13C NMR谱图、红外光谱图、质谱图分别如图15、16、17、18所示。
荧光探针L的1H NMR、13C NMR、IR、MS数据如下：
m.p.187.2～187.8℃；1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:11.40(d,J＝4.9Hz,2H),8.85(s,1H),8.77(s,1H),7.66(d,J＝7.9Hz,1H),7.57～7.48(m,2H),7.35(d,J＝9.0Hz,1H),7.12～7.06(m,2H),7.05～6.95(m,2H),6.35(dd,J＝8.9,2.3Hz,1H),6.14(d,J＝2.3Hz,1H),3.81(s,3H),3.40(q,J＝7.0Hz,4H),1.12(t,J＝7.0Hz,6H)；13C NMR(75MHz,DMSO-d6)δ:164.14,161.64,160.27,159.03,158.43,152.11,133.96,133.62,131.01,126.53,122.91,119.36,118.87,114.93,114.28,106.58,104.87,97.39,92.12,88.34,55.78,13.00；IR(KBr)ν:2973,2931,2208,1629,1604,1513,1351,1247,1235,1133,831cm-1；HRMS(ESI+)calcd for C30H27N3O5[M+H]+:510.1951,found 510.2048。
本实施例荧光探针L的合成路线如下：
Figure BDA0003293810810000071
其中1表示7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酸乙酯，2表示7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酰肼。
实施例2：荧光传感器的制备
采用实施例1制备的荧光探针L，准确称量10.2mg荧光探针L溶解于200mL HEPES缓冲溶液(VDMSO:V水＝7:3,HEPES 10mM,pH＝7.4)，配制成1.0×10-4mol/L溶液A；取20mL浓度为1.0×10-4mol/L溶液A，再加入1.5eq.的硝酸铜，用HEPES缓冲溶液(VDMSO:V水＝7:3,HEPES10mM,pH＝7.4)定容至200mL，孵育3min后，即得荧光传感器。
荧光探针L对Cu2+的Job’s plot曲线(图2)表明，在HEPES缓冲溶液(VDMSO:V水＝7:3,HEPES 10mM,pH＝7.4)中，荧光探针L与Cu2+络合比为1:2；荧光传感器对草甘膦的Job’splot曲线(图3)表明，在HEPES缓冲溶液(VDMSO:V水＝7:3,HEPES 10mM,pH＝7.4)中，荧光传感器与草甘膦络合比为1:2；在草甘膦检测过程中，草甘膦夺取荧光传感器的Cu2+，每个荧光传感器分子中含有两个Cu2+，并被两分子草甘膦夺去，即草甘膦与Cu2+络合比为1:1。
实施例3：金属离子对荧光传感器的影响
本实施例采用实施例1制备的荧光探针L和实施例2制备的荧光传感器检测金属离子对荧光传感器的影响。
每次取3mL浓度为1.0×10-5mol/L的荧光探针L和荧光传感器溶液于比色皿中，依次加入5eq.的Co2+、Zn2+、Ca2+、Cr3+、K+、Ni2+、Al3+、Fe3+、Mg2+、Pb2+、Na+、Sr3+、Ce3+、Ag+、Li+、Cd2+和Hg2+，在435nm激发光作用下，测量荧光探针L与荧光传感器在550nm处荧光发射峰强度值，其结果如图4所示，
Figure BDA0003293810810000072
表示荧光探针L+金属离子；
Figure BDA0003293810810000073
表示荧光传感器+金属离子。荧光探针L中加入Cu2+后，具有明显的荧光猝灭效应，而加入其它金属离子未能引起明显的荧光变化，荧光探针L对Cu2+表现出优异的选择性络合能力，因此选择荧光探针L与Cu2+构建荧光传感器；荧光传感器中加入的金属离子均未引起明显的荧光变化，荧光传感器具有优异的抗金属离子干扰能力。
实施例4：荧光传感器检测草甘膦的选择性
本实施例采用实施例2制备的荧光传感器检测草甘膦的选择性。
每次取3mL浓度为1.0×10-5mol/L的荧光传感器溶液于比色皿中，依次加入4eq.的草甘膦、敌百虫、亚胺硫磷、敌敌畏、马拉硫磷、氧化乐果、乐果、灭线磷、杀螟硫磷、甲基对硫磷、对硫磷和草铵膦，在435nm激发光作用下，测量荧光传感器的荧光发射光谱，其结果如图5所示。荧光传感器中加入草甘膦后，荧光明显增强，而加入其他有机磷农药未引起明显的荧光变化，荧光传感器对草甘膦呈现出优异的选择性识别能力。
实施例5：共存有机磷农药对荧光传感器检测草甘膦的影响
采用实施例2制备的荧光传感器，每次取3mL浓度为1.0×10-5mol/L的荧光传感器溶液于比色皿中，加入1.5eq.草甘膦后，再依次加入4eq.的敌百虫、亚胺硫磷、敌敌畏、马拉硫磷、氧化乐果、乐果、灭线磷、杀螟硫磷、甲基对硫磷、对硫磷和草铵膦，在435nm激发光作用下，测量荧光传感器在550nm处荧光发射峰强度值，其结果如图6所示，
Figure BDA0003293810810000081
表示荧光传感器+其他有机磷农药，
Figure BDA0003293810810000082
表示荧光传感器+其他有机磷农药+草甘膦。荧光传感器中加入草甘膦后，再加入其他有机磷农药，荧光强度无明显变化，共存有机磷农药对荧光传感器检测草甘膦无明显干扰。
实施例6：pH对荧光传感器检测草甘膦的影响
采用实施例2制备的荧光传感器，为验证荧光传感器的实用性，测试了不同pH对荧光传感器识别草甘膦的影响，如图7所示，■表示荧光传感器，●表示荧光传感器+草甘膦。荧光传感器在pH 2～10范围内，550nm处的荧光发射峰强度均较弱，在此范围内荧光传感器很稳定；pH大于10后，550nm处的荧光发射峰强度明显增强，这可能是由于强碱性条件下，Cu2+被置换或者荧光探针L的结构被破坏所导致的。加入草甘膦后，pH在5～10范围内荧光传感器在550nm出荧光发射发强度较强，说明荧光传感器可在弱酸性、中性、弱碱性条件下检测草甘膦，具有较宽的pH适用范围。
实施例7：草甘膦浓度对荧光传感器荧光发射光谱的影响
采用实施例2制备的荧光传感器，每次取3mL浓度为1.0×10-5mol/L的荧光传感器溶液于比色皿中，依次加入0、0.1、0.2……2.0eq.的草甘膦，在435nm激发光作用下，测量荧光传感器的荧光发射光谱，其结果如图8所示；同时测试荧光传感器在550nm处荧光发射峰强度值随草甘膦浓度的变化，其结果如图9所示。
由图8、图9可知，当草甘膦浓度在0～2.7μg/mL(即0～16μM)内，随草甘膦浓度的增大，荧光传感器在550nm处荧光发射峰强度值逐渐增大；草甘膦浓度与荧光发射峰强度值具有良好的线性关系，线性方程为：y＝15.65x-2.05，线性相关系数R2达到0.9980。根据检测限的计算公式：检测限＝3σ/k，计算出荧光传感器对草甘膦的检测限为6.7×10-8mol/L(即11.3ng/mL)，这说明该荧光传感器灵敏度高，可实现草甘膦的痕量定性、定量检测。
实施例8：可见光及紫外光(365nm)下荧光传感器定性检测草甘膦
采用实施例2制备的荧光传感器，准确量取1.5mL荧光传感器溶液，分别加入4eq.的草甘膦、敌百虫、亚胺硫磷、敌敌畏、马拉硫磷、氧化乐果、乐果、灭线磷、杀螟硫磷、甲基对硫磷、对硫磷和草铵膦，在可见光下得到图10(a)所示的结果；在紫外光365nm下得到图10(b)所示的结果。从图10(a)、10(b)中可以看出，荧光传感器与有机磷农药作用后，仅有草甘膦具有明显的颜色/荧光变化，对草甘膦显现出优异的选择性，可用于草甘膦的定性检测，操作简便、检测速度快。
实施例9：荧光传感器在实际水样中检测草甘膦
为了考察荧光传感器在实际环境中的潜在应用，选取实验室自来水和松花江水(中国哈尔滨)两种水样，并对水样进行预处理：所取水样在转速12000rpm条件下离心10min，用0.45μm过滤器处理过滤，配制浓度分别为：0.25μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、2.5μg/mL的草甘膦溶液。
采用实施例2制备的荧光传感器，向荧光传感器中加入上述不同浓度的草甘膦溶液，在435nm激发光作用下，测量荧光传感器在550nm处荧光发射峰强度值，并将其带入如下方程式，计算得到待测草甘膦溶液的浓度。检测结果如表1所示。
Y＝15.65×X－2.05
其中，X为草甘膦浓度，Y为荧光发射峰强度值。
表1荧光传感器在实际水样中检测草甘膦
Figure BDA0003293810810000091
Figure BDA0003293810810000101
通过表1可以看出，实际水样中草甘膦的回收率为96.8％～103.6％，相对标准偏差为0.49％～2.98％，测得的草甘膦浓度与相应的加标浓度误差很小，这些结果表明本发明制备的荧光传感器检测实际水样中的草甘膦具有较好的准确性，能够在0～2.7μg/mL范围内定量检测草甘膦，具有良好的实用性能。

Claims (10)

1.一种用于检测草甘膦的荧光传感器的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
将荧光探针L溶于HEPES缓冲溶剂中，配制成1.0×10-4～1.0×10-6mol/L溶液，加入硝酸铜，孵育时间为2～5min，即得到荧光传感器；
所述荧光探针L的分子结构为：
Figure FDA0003293810800000011
2.根据权利要求1所述的一种用于检测草甘膦的荧光传感器的制备方法，其特征在于所述HEPES缓冲溶剂中DMSO与水的体积比为7:3。
3.根据权利要求2所述的一种用于检测草甘膦的荧光传感器的制备方法，其特征在于所述HEPES缓冲溶液中HEPES浓度为10mM；pH为5～10。
4.根据权利要求1或3所述的一种用于检测草甘膦的荧光传感器的制备方法，其特征在于荧光探针L与Cu2+的摩尔比为1:(1～2)。
5.根据权利要求1所述的一种用于检测草甘膦的荧光传感器的制备方法，其特征在于所述荧光探针L的制备方法，包括以下步骤：
一、将7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酸乙酯、水合肼和四氢呋喃回流反应2～6h；脱除溶剂后重结晶，得7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酰肼；
二、在催化剂存在下，将7-(4-甲氧基苯基乙炔基)香豆素-3-甲酰肼和4-二乙氨基水杨醛在乙醇中回流反应10～20h；反应产物过滤干燥得粗品，粗品经重结晶提纯，即得荧光探针L。
6.根据权利要求5所述的一种用于检测草甘膦的荧光传感器的制备方法，其特征在于步骤一中所述重结晶溶剂为甲醇、乙醇、丙醇或异丙醇。
7.根据权利要求5或6所述的一种用于检测草甘膦的荧光传感器的制备方法，其特征在于步骤二中催化剂为盐酸、乙酸或丙酸。
8.根据权利要求7所述的一种用于检测草甘膦的荧光传感器的制备方法，其特征在于步骤二中重结晶溶剂为THF、DMF、DMSO或NMP。
9.如权利要求1所述的荧光传感器在检测草甘膦中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于利用荧光传感器检测草甘膦的具体方法为：
向荧光传感器中加入待测浓度的草甘膦样品，在435nm激发光作用下，测量荧光传感器在550nm处荧光发射峰强度值，并按如下方程式得到待测草甘膦溶液的浓度X：
Y＝15.65×X－2.05
其中，X为草甘膦浓度，Y为荧光发射峰强度值。
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