CN113820197A - 胶原蛋白肠衣中羟脯氨酸含量检测的前处理方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及胶原蛋白新应用技术领域，具体涉及一种胶原蛋白肠衣中羟脯氨酸含量检测的前处理方法。本发明包括：(1)将胶原蛋白肠衣剪碎，烘干；(2)将烘干后的肠衣研磨成粉末，移入消解罐中，并用水冲洗；(3)配制硫酸溶液，移取硫酸溶液于消解罐中；(4)进行微波消解处理。本发明设计科学合理，操作简单易行，可以消解交联后的胶原蛋白肠衣，缩短了羟脯氨酸含量检测的前处理时间，使得检测数据准确度提高。
Description
技术领域
本发明涉及胶原蛋白新应用技术领域，具体涉及一种胶原蛋白肠衣中羟脯氨酸含量检测的前处理方法。
背景技术
羟脯氨酸是亚氨基酸之一，是一种非必需氨基酸，是胶原组织的主要成分之一。羟脯氨酸含量为肠衣中的一个重要物理指标，但是目前还没有一种有效的羟脯氨酸含量的检测方法。
GB中规定了多种产品中羟脯氨酸含量的检测方法，例如GB/T 9695.23-2008肉与肉制品中羟脯氨酸含量的检测、NY/T 3130-2017生乳中L-羟脯氨酸的测定、GB/T 18246-2019饲料中氨基酸的测定等。这些标准中对于样品的前处理多为酸法、碱法，在文献中有使用蛋白酶水解、微波消解等，按照此类方法对胶原蛋白肠衣进行水解，检测羟脯氨酸含量，并按照胶原蛋白中羟脯氨酸占13.4％计算总蛋白，与自动凯氏定氮仪总蛋白检测结果对比相差巨大；对未交联的胶原蛋白肠衣进行羟脯氨酸含量检测并换算总蛋白含量，与凯氏定氮仪结果接近，这说明此类方法对于常规蛋白质消解没有问题。
而肠衣由于经过交联，虽能破坏聚合物结构的规整性，但又会牵制大分子链的运动和增大大分子的相对分子质量，最终使聚合物的降解性能下降。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：克服现有技术的不足，提供一种胶原蛋白肠衣中羟脯氨酸含量检测的前处理方法，其设计科学合理，操作简单易行，可以消解交联后的胶原蛋白肠衣，缩短了羟脯氨酸含量检测的前处理时间，使得检测数据准确度提高。
本发明所述的胶原蛋白肠衣中羟脯氨酸含量检测的前处理方法，包括以下步骤：
(1)将胶原蛋白肠衣剪碎，称取2-4g剪碎的胶原蛋白肠衣，放入100-110℃烘箱中烘干2.5-3.5h；
(2)水分烘干后肠衣变脆，将烘干后的肠衣研磨成粉末，全部移入消解罐中，并用少量水冲洗；
(3)配制3-5mol/L的硫酸溶液，按照肠衣：硫酸溶液的质量体积比为1:20-25，移取硫酸溶液于消解罐中；
(4)进行微波消解处理，在175-185℃下保持35-45min。
交联的实质是醛基与氨基缩合，聚合物的规整性被破坏，相对分子质量增大，破坏该分子时需要更多的能量，相对于未交联的胶原蛋白，酸解法在同样的时间内消解速度极其缓慢。微波消解的穿透力强，能进入物料内部转化为热能，电场发生变化会使分子获得能量，当外界电场变化频率越高，分子运动越快，这个时候的聚合物在更容易被酸水解，加快水解速度。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明设计科学合理，操作简单易行，可以消解交联后的胶原蛋白肠衣，解决了难消解问题；
(2)标准中酸消解时间一般为16h-24h，而本发明缩短了羟脯氨酸含量检测的前处理的消解时间；
(3)使用本发明，明显提高了检测数据的准确度。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步说明。
取未交联的肠衣与交联后的肠衣，分别用实施例和对比例中的方法进行消解。
实施例1
一种胶原蛋白肠衣中羟脯氨酸含量检测的前处理方法，包括以下步骤：
(1)将胶原蛋白肠衣剪碎，称取3g剪碎的胶原蛋白肠衣，放入105℃烘箱中烘干3h；
(2)水分烘干后肠衣变脆，将烘干后的肠衣研磨成粉末，全部移入消解罐中，并用少量水冲洗；
(3)配制3mol/L的硫酸溶液，按照肠衣：硫酸溶液的质量体积比为1:20的量，移取硫酸溶液于消解罐中；
(4)进行微波消解处理，在180℃下保持40min。
实施例2
一种胶原蛋白肠衣中羟脯氨酸含量检测的前处理方法，包括以下步骤：
(1)将胶原蛋白肠衣剪碎，称取2g剪碎的胶原蛋白肠衣，放入100℃烘箱中烘干2.5h；
(2)水分烘干后肠衣变脆，将烘干后的肠衣研磨成粉末，全部移入消解罐中，并用少量水冲洗；
(3)配制4mol/L的硫酸溶液，按照肠衣：硫酸溶液的质量体积比为1:20的量，移取硫酸溶液于消解罐中；
(4)进行微波消解处理，在175℃下保持45min。
实施例3
一种胶原蛋白肠衣中羟脯氨酸含量检测的前处理方法，包括以下步骤：
(1)将胶原蛋白肠衣剪碎，称取4g剪碎的胶原蛋白肠衣，放入110℃烘箱中烘干3.5h；
(2)水分烘干后肠衣变脆，将烘干后的肠衣研磨成粉末，全部移入消解罐中，并用少量水冲洗；
(3)配制5mol/L的硫酸溶液，按照肠衣：硫酸溶液的质量体积比为1:20的量，移取硫酸溶液于消解罐中；
(4)进行微波消解处理，在185℃下保持35min。
对比例1
采用GB/T 9695.23-2008中的消解方法：
取2g试样a和试样b，加30mL 3mol/L硫酸溶液，在105℃下恒温16h消解。
将经过消解的实施例1-3和对比例1的样品，按胶原蛋白中羟脯氨酸含量13.4％计算：
换算胶原蛋白含量＝羟脯氨酸含量/13.4％，与自动凯氏定氮仪检测胶原蛋白含量检测结果作对比，验证结果准确性。
表1
通过对比表1中的检测数据可知，利用实施例中新的消解方法可缩短消解时间，并消解完全肠衣交联后的蛋白质，最终检测的羟脯氨酸含量准确度高。
Claims (5)
1.一种胶原蛋白肠衣中羟脯氨酸含量检测的前处理方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将胶原蛋白肠衣剪碎，烘干；
(2)将烘干后的肠衣研磨成粉末，移入消解罐中，并用水冲洗；
(3)配制硫酸溶液，移取硫酸溶液于消解罐中；
(4)进行微波消解处理。
2.根据权利要求1所述的胶原蛋白肠衣中羟脯氨酸含量检测的前处理方法，其特征在于：步骤(1)中，称取2-4g剪碎的胶原蛋白肠衣，放入100-110℃烘箱中烘干2.5-3.5h。
3.根据权利要求1所述的胶原蛋白肠衣中羟脯氨酸含量检测的前处理方法，其特征在于：步骤(3)中，配置3-5mol/L的硫酸溶液。
4.根据权利要求1所述的胶原蛋白肠衣中羟脯氨酸含量检测的前处理方法，其特征在于：步骤(3)中，按照肠衣：硫酸溶液的质量体积比为1:20-25，移取硫酸溶液于消解罐中。
5.根据权利要求1所述的胶原蛋白肠衣中羟脯氨酸含量检测的前处理方法，其特征在于：微波消解处理时，在175-185℃下保持35-45min。
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|---|---|
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Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5840849A (en) * | 1996-07-29 | 1998-11-24 | Loders Croklaan B.V. | Blends of collagen type I and collagen type III for food casings |
| US20080076112A1 (en) * | 2006-09-21 | 2008-03-27 | Villanueva Patricia A | Method for quantitation of collagen in tissue |
| CN102998275A (zh) * | 2013-01-07 | 2013-03-27 | 北京橡胶工业研究设计院 | 一种测定橡胶中硼含量的方法 |
| CN104359848A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-02-18 | 福建师范大学 | 一种胶原蛋白含量测定方法 |
| CN105929044A (zh) * | 2016-04-14 | 2016-09-07 | 宁波出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 一种快速检测乳及乳制品中羟脯氨酸含量的方法 |
| WO2017159565A1 (ja) * | 2016-03-14 | 2017-09-21 | 株式会社カネカ | 再生コラーゲン繊維の製造方法 |
| CN111024546A (zh) * | 2019-11-28 | 2020-04-17 | 山东海奥斯生物科技有限公司 | 胶原蛋白肠衣中纤维素含量的检测方法 |
| CN111693472A (zh) * | 2019-03-11 | 2020-09-22 | 广东博与再生医学有限公司 | 一种角膜羟脯氨酸检测方法 |
-
2021
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Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5840849A (en) * | 1996-07-29 | 1998-11-24 | Loders Croklaan B.V. | Blends of collagen type I and collagen type III for food casings |
| US20080076112A1 (en) * | 2006-09-21 | 2008-03-27 | Villanueva Patricia A | Method for quantitation of collagen in tissue |
| CN102998275A (zh) * | 2013-01-07 | 2013-03-27 | 北京橡胶工业研究设计院 | 一种测定橡胶中硼含量的方法 |
| CN104359848A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-02-18 | 福建师范大学 | 一种胶原蛋白含量测定方法 |
| WO2017159565A1 (ja) * | 2016-03-14 | 2017-09-21 | 株式会社カネカ | 再生コラーゲン繊維の製造方法 |
| CN105929044A (zh) * | 2016-04-14 | 2016-09-07 | 宁波出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 一种快速检测乳及乳制品中羟脯氨酸含量的方法 |
| CN111693472A (zh) * | 2019-03-11 | 2020-09-22 | 广东博与再生医学有限公司 | 一种角膜羟脯氨酸检测方法 |
| CN111024546A (zh) * | 2019-11-28 | 2020-04-17 | 山东海奥斯生物科技有限公司 | 胶原蛋白肠衣中纤维素含量的检测方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| 丁毅;王兴华;郭蔷薇;宋丹;高德江;于永;: "农产品质量安全快速检测技术――微波辅助水解比色法快速测定动物水解蛋白中羟脯氨酸的研究", 现代科学仪器, no. 01, pages 73 - 77 * |
| 夏晶: "胶原蛋白肠衣中铅含量测定前处理方法研究", 现代农业科技, no. 13, 31 December 2017 (2017-12-31), pages 246 * |
| 户业丽 等: "人工养殖施氏鲟鱼组织中羟脯氨酸含量的测定", 食品科技, no. 3, 31 March 2007 (2007-03-31), pages 227 - 229 * |
| 汪国运 等: "一种肝组织切片胶原定量分析法的实验性研究", 中华消化杂志, vol. 19, no. 6, 31 December 1999 (1999-12-31), pages 388 - 390 * |
| 黄一帆 等: "微波消解-ICP质谱法测定胶原蛋白肠衣中的重金属含量", 大众科技, vol. 17, no. 192, 31 August 2015 (2015-08-31), pages 32 - 33 * |
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