CN113795483A - 作为shp2拮抗剂的甲酰胺-嘧啶衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及通式I所示的甲酰胺‑嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐，本发明的化合物用于治疗哺乳动物(尤其是人类)的过度增殖性疾病和病症的用途，以及含有这种化合物的药物组合物，

Description

作为SHP2拮抗剂的甲酰胺-嘧啶衍生物
本发明涉及通式I所示的甲酰胺-嘧啶衍生物，
Figure BDA0003339594180000011
以及本发明的化合物在治疗和/或预防哺乳动物(尤其人类)中的过度增殖性疾病及病症中的用途，以及含有此类化合物的药物组合物。
发明背景
含有蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)的Src同源区2(SH2)是促成多种细胞功能(包括增殖、分化、细胞循环维持及迁移)的PTPN11基因编码的非受体蛋白酪胺酸磷酸酶。SHP2参与通过Ras有丝分裂原活化的蛋白激酶、JAK-STAT或磷酸肌醇3-激酶-AKT路径信号传导。SHP2具有两个N端Src同源2结构域(N-SH2及C-SH2)：一个是催化结构域(PTP)及一个是C端尾。这两个SH2结构域控制SHP2的次细胞定位及功能调节。分子以非活性、自抑制构型存在，所述构型由涉及来自N-SH2及PTP结构域的残基的结合网状物稳定。举例而言，由细胞因子或生长因子刺激引起催化位点暴露，导致SHP2的酶活化。
SHP2广泛表达在各种组织及细胞类型中。它在各种信号传导路径中起着调节细胞生物过程的重要作用，且参与各种生长因子及细胞因子的信号传导路径。在单个信号传导路径内，SHP2可同时在细胞内信号传导过程中起积极(信号增强)作用及消极(信号衰减)作用。已相信，SHP2藉由使其相关信号传导分子去磷酸化起作用，从而使局部信号传导流衰减。然而，SHP2活动在大部分信号传导路径(例如，生长因子、细胞因子及细胞外基质受体)中的主要作用为增强信号转导。举例而言，SHP2是ERK/MAPK信号传导路径的正向调节剂，其在调节细胞增殖及存活中起关键作用(K.S.Grossman等人，Adv.Cancer Res.，2010，106，53-89及其中所引用的参考文献)。
PTPN11基因中影响SHP2的基础抑制所涉及的N-SH2或PTP结构域残基的突变产生SHP2蛋白的更易活化形式，其会引起不受调控或增加的SHP2活性。SHP2的此类活化突变体与诸如努南综合征(Noonan syndrome)的发育障碍有关，其中几乎SHP2的所有突变形式显示PTP活性增加。亦已在幼年型粒单核细胞白血病(例如Q506P)、慢性骨髓单核细胞性白血病(例如Y63C)、神经母细胞瘤(例如T507K)、黑色素瘤(例如RI38Q)、急性骨髓白血病(例如G503V)、乳癌、肺癌(例如E76V)及结肠直肠癌(例如E76G)中检测到活化SHP2突变(M.Bentires-Alj等人，于Cancer Res.2004，64，8816-8820中；及其中所引用的参考文献)。与癌症相关的其他PTPN1突变揭示于WO 2015/107495及其中所引用的参考文献中。
已在数种人类疾病中鉴别出PTPN11基因的突变，随后也发现SHP2突变，所述人类疾病诸如努南综合征(NS)、豹皮综合征、糖尿病、嗜中性白血球减少症(科斯特曼综合征(Kostmann′s syndrome))、全身性红斑性狼疮症、神经母细胞瘤、黑色素瘤、幼年型粒单核细胞白血病、急性骨髓白血病、青少年白血病、慢性骨髓单核细胞白血病以及与SHP2失调有关的其他癌症，诸如肺癌、结肠癌及乳癌，诸如HER2阳性乳癌、三阴性乳癌、乳房导管癌、乳房浸润性乳腺管癌、非小细胞肺癌(包括肺腺癌)、食道癌、胃癌、头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)及结肠癌(N.Aceto等人Nature Medicine，2012，28，529-538；C.M.Furcht等人Oncogene，2013，32，2346-2355；V.E.Schneeberger等人Oncotarget，2015，6，6191-6202；P.Cai等人，Biomedicine&Pharmacotherapy2014，6，285-290；及其中所引用的参考文献)。
因此，SHP2代表研发治疗各种疾病的新颖疗法的高度有吸引力的目标。本发明化合物满足抑制SHP2活性的小分子的需要。
SHP2磷酸酶抑制剂揭示于例如WO 2015/107493、WO 2015/107494、WO 2015/107495、WO 2016/203404、WO 2016/203405、WO 2016/203406、WO2017/216706、WO2018/013597、WO2018/136264、WO2018/136265、WO2018/057884、WO2018/081091及J.G.Fortanet等人，J.Med.Chem.2016，doi：10.1021/acs.jmedchem.6b00600及其中所引用的参考文献中。SHP2磷酸酶抑制的作用描述于例如Y.-N.P.Chen等人，Nature，2016，doi.10.1038/nature/18621；J.Wang等人，J.Clin.Invest.，2016，126，2077-2092；以及其中所引用的参考文献中。SHP2磷酸酶抑制剂包括例如8-羟基-7-[(6-磺基-2-萘基)偶氮]-5-喹啉磺酸(NSC 87077)及SHP-099。
然而，诸如SHP-099(或WO2015/107493公开的化合物)和/或RMC-4550(WO2018/013597公开的化合物)的已知化合物没有展示针对hErg的高选择性，该选择性对于化合物用于预防或治疗疾病的安全性极其重要。
此外，与诸如SHP-099(或WO2015/107493公开的化合物)或RMC-4550(WO2018/013597公开的化合物)的已知化合物相比，本发明的化合物展示优良的药物动力学特性(例如低清除率及/或高暴露)。
因此，仍有需要不展示上述缺点的高度有效的SHP2抑制剂。本发明的具体目标是提供能预防或治疗宿主中过度增殖性疾病及病症的改良方法，尤其提供用于治疗及预防此类疾病的有效的SHP2拮抗剂。
发明内容
出人意料地，已发现，根据本发明的甲酰胺-嘧啶衍生物是高度有效的SHP2抑制剂，因此其可用于治疗过度增殖性疾病及病症，诸如癌症。
另外，本发明化合物是高度有效的ERK12抑制剂，ERK12是信号传导路径中的目标下游形式SHP2(如上文所提及，SHP2为ERK/MAPK信号传导路径的正向调节剂，ERK磷酸化取决于SHP2活化)，其在调控细胞增殖及存活中起关键作用。此亦确认本发明化合物可用于治疗过度增殖性疾病及病症，诸如癌症。
同时，与已知的SHP2拮抗剂SHP-099、RMC-4550及类似嘧啶衍生物相比，本发明化合物出人意料地具有针对hErg(离子通道Kv11.1)非常高的选择性。SHP-099、RMC-4550及类似嘧啶衍生物的高hErg抑制活性明显指向潜在心脏毒性风险，本发明化合物能避免该风险。本发明化合物的所述改良的安全性与更合乎需要的药物动力学特性及增强的靶接合(较低IC50)组合。本发明化合物的出人意料的特性展示了所需要的SHP2抑制剂领域中的显着进展。
本发明涉及通式I*所示的甲酰胺-嘧啶衍生物，
Figure BDA0003339594180000031
式中，
R1’是含有3至14个碳原子和0至4个独立地选自N、O及S的杂原子的单环或双环烷基、杂环基、杂芳基或者双环烷基芳基，所述基团未经取代或经CH2)nNH2，(CH2)nOH，(CH2)nCH3或Hal单取代、双取代或三取代，
X是单键，-NH-或-N(CH3)-，(CH2)n或O，
R2是芳基或杂芳基、S-芳基或S-杂芳基，所述基团未经取代或经(CH2)nNH2，(CH2)nOH，COOH，CONH2，烷基，＝S，＝O，＝NH，CN或Hal单取代、双取代或三取代，
R3是H，NH2，OH，Hal或烷基，
Y是N或O，
R4，R5二者都是H，或者R4和R5中之一者是OH，COOH，NH2，CONH2或者甲基或乙基，所述基团未经取代或经＝S，＝O，OH，COOH，＝NH，NH2，CONH2取代，
Hal是F，Cl，Br或I，
n是0，1，2或3，
及其生理学上可接受的盐、衍生物、溶剂化物、前药、立体异构体和阻转异构体，包括它们的各种比例混合物。
本发明优选涉及以通式I所示的甲酰胺-嘧啶衍生物，
Figure BDA0003339594180000041
或其药学上可接受的盐，式中，
R1’是单环烷基、双环烷基、单杂环基或双杂环基，所述基团中任一个任选地与单环烷基、双环烷基、单杂环基或双杂环基螺接，其中所述单环烷基或双环烷基以及单杂环基或双杂环基中的每一个可以各自任选地且独立地经1-3个选自以下的基团取代：C1-C6烷基，-F，-Cl，-CF3，-NH2，C1-C3氨基烷基，-OH，C1-C3烷氧基，C1-C3羟基烷基和苯基；
X是键，-NH-或-N(Me)-；
R2是芳基或杂芳基，所述基团经1-3个选自以下的基团取代：-F，-Cl，-CF3，C1-C3烷氧基和C1-C3烷基；
R3是-H，-NH2，-OH，-Cl，-F，-Br或-CH3；
Y是-N-；以及
R4和R5独立地是-H，-NH2，-OH，C1-C3烷基或C1-C3羟基烷基。
本发明优选涉及以通式Ia所示的甲酰胺-嘧啶衍生物，
Figure BDA0003339594180000051
或其药学上可接受的盐，式中R6、R7和R8各自独立地选自-H，-F，-Cl，-CF3，C1-C3烷氧基和C1-C3烷基，其余变量如通式I化合物所定义。
本发明优选涉及以通式Ib所示的甲酰胺-嘧啶衍生物，
Figure BDA0003339594180000052
或其药学上可接受的盐，式中，
当A是连接至通式Ib所示的嘧啶环的连接点时，R1是
Figure BDA0003339594180000053
R6，R7和R8各自独立地选自-H，-F，-Cl，-CF3，C1-C3烷氧基和C1-C3烷基；
n是0，1，2或3；以及
R9，R10，R11，R12，R13，R14，R15和R16，若存在时，各自独立地选自-H，C1-C3烷基，-NH2，-OH，-Cl，-F，-Br，C1-C3氨基烷基，C1-C3羟基烷基，C1-C3烷氧基和苯基；或者
R9，R11，R13和R16中之二者一起形成桥接双环杂环系统，该系统任选地经1-3个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基，-NH2，-OH，-Cl，-F，-Br，C1-C3氨基烷基，C1-C3羟基烷基，C1-C3烷氧基和苯基；或者
连接至同一个碳原子的R9，R10，R11，R12，R13，R14，R15和R16中之二者一起形成单环或双环螺接环基，该单环或双环螺接环基任选地经1-3个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基，-NH2，-OH，-Cl，-F，-Br，C1-C3氨基烷基，C1-C3羟基烷基，C1-C3烷氧基和苯基；或者
连接至相邻碳原子的R9，R10，R11，R12，R13，R14，R15和R16中之二者一起形成稠合的碳环基或杂环基，该稠合的碳环基或杂环基任选地经1-3个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基，-NH2，-OH，-Cl，-F，-Br，C1-C3氨基烷基，C1-C3羟基烷基，C1-C3烷氧基和苯基；
其余变量具有上述通式I中所述的定义。
本发明优选涉及以通式Ic所示的甲酰胺-嘧啶衍生物，
Figure BDA0003339594180000061
式中其余变量具有上述通式I中所述的定义。
本发明优选涉及以通式Id所示的甲酰胺-嘧啶衍生物，
Figure BDA0003339594180000062
式中其余变量具有上述通式I中所述的定义。
本发明优选涉及以通式Ie所示的甲酰胺-嘧啶衍生物，
Figure BDA0003339594180000071
式中其余变量具有上述通式I中所述的定义。
本发明优选涉及以通式If所示的甲酰胺-嘧啶衍生物，
Figure BDA0003339594180000072
式中其余变量具有上述通式I中所述的定义。
本发明优选涉及通式I或通式Ia的化合物，其中R1是以下结构式之一：
Figure BDA0003339594180000073
Figure BDA0003339594180000081
Figure BDA0003339594180000082
以及
Figure BDA0003339594180000083
所述结构式未经取代或经以下基团单取代、双取代或三取代：C1-C6烷基，-F，-Cl，-CF3，-NH2，C1-C3氨基烷基，-OH，C1-C3烷氧基或C1-C3羟基烷基，
并且其中X、R2、R3、Y、R4和R5具有如上所公开的定义。
本发明优选涉及通式I或通式Ia的化合物，其中X-R1是以下结构式之一：
Figure BDA0003339594180000084
Figure BDA0003339594180000091
Figure BDA0003339594180000101
Figure BDA0003339594180000102
以及
Figure BDA0003339594180000103
其中A表示连接至嘧啶环的连接点，并且其余变量具有上述通式中所述的定义。
在本发明的一方面，通式I或通式Ia中的X-R1选自由以下组成的组：
Figure BDA0003339594180000104
其中A表示连接至嘧啶环的连接点。
在本发明的一方面，通式I或通式Ia中的X-R1选自由以下组成的组：
Figure BDA0003339594180000105
Figure BDA0003339594180000111
以及
Figure BDA0003339594180000112
其中A表示连接至嘧啶环的连接点。
在本发明的一方面，通式I或通式Ia中的X-R1选自由以下组成的组：
Figure BDA0003339594180000113
其中A表示连接至嘧啶环的连接点。
本发明优选地涉及根据通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是苯基，该苯基未经取代或经-F、-Cl和/或-Br单取代、二取代或三取代，并且X、R1、R3、Y、R4和R5具有如上所公开的定义。
本发明优选地涉及根据通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2是以下结构式之一：
Figure BDA0003339594180000114
其中X、R1、R3、Y、R4和R5具有如上所公开的定义。
本发明优选地涉及根据通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是-NH2，并且X、R1、R2、Y、R4和R5具有如上所公开的定义。
本发明优选地涉及根据通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是-CH3，并且X、R1、R2、Y、R4和R5具有如上所公开的定义。
本发明优选地涉及根据通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是-H，并且X、R1、R2、Y、R4和R5具有如上所公开的定义。
本发明优选地涉及根据通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中R3是-Cl，并且X、R1、R2、Y、R4和R5具有如上所公开的定义。
本发明优选地涉及根据通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中X是单键、-NH-或-N(CH３)-，并且其中Y、R1、R2、R3、R4和R5具有如上所公开的定义。
本发明的一个方面是根据通式Ib所示的化合物或其药学上可接受的盐，其中
当A是连接至通式Ib所示的嘧啶环的连接点时，R1是
Figure BDA0003339594180000121
R6，R7和R8各自独立地选自-H，-F，-Cl，-CF3，C1-C3烷氧基和C1-C3烷基；
n是0，1，2或3；以及
R9，R10，R11，R12，R13，R14，R15和R16，若存在时，各自独立地选自-H，C1-C3烷基，-NH2，-OH，-Cl，-F，-Br，C1-C3氨基烷基，C1-C3羟基烷基，C1-C3烷氧基和苯基；或者
R9，R11，R13和R16中之二者一起形成桥接双环杂环系统，该系统任选地经1-3个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基，-NH2，-OH，-Cl，-F，-Br，C1-C3氨基烷基，C1-C3羟基烷基，C1-C3烷氧基和苯基；或者
连接至同一个碳原子的R9，R10，R11，R12，R13，R14，R15和R16中之二者一起形成单环或双环螺接环基，该单环或双环螺接环基任选地经1-3个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基，-NH2，-OH，-Cl，-F，-Br，C1-C3氨基烷基，C1-C3羟基烷基，C1-C3烷氧基和苯基；或者
连接至相邻碳原子的R9，R10，R11，R12，R13，R14，R15和R16中之二者一起形成稠合的碳环基或杂环基，该稠合的碳环基或杂环基任选地经1-3个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基，-NH2，-OH，-Cl，-F，-Br，C1-C3氨基烷基，C1-C3羟基烷基，C1-C3烷氧基和苯基。
本发明特别优选地涉及选自下组内的化合物：
Figure BDA0003339594180000131
Figure BDA0003339594180000141
Figure BDA0003339594180000151
Figure BDA0003339594180000161
Figure BDA0003339594180000171
Figure BDA0003339594180000181
Figure BDA0003339594180000191
Figure BDA0003339594180000201
Figure BDA0003339594180000211
Figure BDA0003339594180000221
Figure BDA0003339594180000231
Figure BDA0003339594180000241
Figure BDA0003339594180000251
Figure BDA0003339594180000261
Figure BDA0003339594180000271
Figure BDA0003339594180000281
Figure BDA0003339594180000291
Figure BDA0003339594180000301
Figure BDA0003339594180000311
Figure BDA0003339594180000321
Figure BDA0003339594180000331
Figure BDA0003339594180000341
Figure BDA0003339594180000351
及其药学上可接受的盐和阻转异构体，包括它们的各种比例混合物。
通式I、Ia、Ib、Ic、Id、Ie和If中任一者的变量(若存在的话)之上述含义的所有上述实施例应当以如下方式理解，即这些具体实施例中任一者可与任一可能的实施例彼此结合，得到本发明的化合物。
烷基是饱和直链或支链烃链且具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个C原子。“烷基”的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基或叔丁基等等。
氨基烷基是如上所描述的烷基，其中所述烷基经-NH2基团取代。
羟基烷基是如上文所描述的烷基，其中所述烷基经-OH基团取代。
烷氧基指根据通式-O(CH2)nCH，中饱和的、无支链或有分支的烃链，其含有至少1-10个碳原子，其中所述通式中的n是0-9。烷氧基的例子包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基等。
环状烷基或环烷基指具有3-15个碳原子且呈桥接环系统、单环系统、双环系统及/或螺接环系统形式的饱和环烃链。单环环烷基较佳为3-7个C原子，较佳地表示环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基。环烷基亦可表示部分不饱和环状烷基，诸如环己烯基或环己炔基。当环烷基为双环系统之一部分时，所述环中至少一个是3-7元环烷基，其可与5元或6元杂芳基、苯基、5-7元杂环基或5-7元环烷基稠合。符合环烷基定义的双环系统的实例包括例如2，3-二氢-1H-茚基，4H，5H，6H-环戊二烯并[d][1，3]噻唑基，1，2，3，4-四氢萘基，5，6，7，8-四氢喹啉基，5，6，7，8-四氢异喹啉基，5H，6H，7H-环戊二烯并(b)吡啶基，5H，6H，7H-环戊二烯并(c)吡啶基等。
芳基、Ar或芳族环表示单环或多环芳族或完全不饱和环烃链，例如未经取代的苯基、萘基或联二苯，此外更佳的是苯基、萘基或联二苯，上述每一个基团经例如以下取代基单取代、双取代或三取代：氟、氯、溴、碘、羟基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、己氧基、硝基、氰基、甲酰基、乙酰基、丙酰基、三氟甲基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、苯甲氧基、磺酰氨基、甲基磺酰氨基、乙基磺酰氨基、丙基磺酰氨基、丁基磺酰氨基、二甲基磺酰氨基、苯基磺酰氨基、羧基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、和/或酰胺基。
杂环和杂环基指饱和或不饱和非芳族单环，或者可经桥接、双环(“稠合”)和/或螺连接的部分或完全非芳族环系统。杂环基含有至少一个选自O、S及N的杂原子，进一步可包括硫的氧化形式，即SO及SO2。单环杂环基较佳为3-7个原子，包括氮杂环丁基、四氢呋喃(THF)、二氢呋喃、1，4-二噁烷、吗啉、1，4-二噻烷、哌嗪、哌啶、1，3-二氧戊环、咪唑烷、咪唑啉、吡咯啉、吡咯烷、四氢吡喃、二氢吡喃、氧硫环戊烷、二硫戊环、1，3-二噁烷、1，3-二噻烷、氧硫杂环己烷、硫代吗啉、氧杂环戊烷、噁烷、氮杂环庚烷等。当杂环基为双环系统的一部分时，至少一个环是可与以下基团稠合的3-7元杂环基：5元或6元杂芳基、苯基、5-7元杂环基或5-7元环烷基。符合杂环基定义的双环系统之实例包括例如2H，3H-呋喃并[2，3-b]吡啶，2H，3H-呋喃并[2，3-c]吡啶，2H，3H-呋喃并[2，3-d]吡啶，2，3-二氢苯并呋喃，八氢-1H-异吲哚，八氢环戊二烯并[c]吡咯，八氢吡咯并[3，4-c]吡咯，3-氮杂双环[3.1.0]己烷，3，9-二氮杂双环[4.2.1]壬-3-基等。
杂芳基指含有至少一个选自O、S及N的环杂原子的芳族或部分芳族杂环。杂芳基由此包括与其他类型的环(诸如芳基、环烷基及不属于芳族的杂环)稠合的杂芳基。杂芳基的实例包括：吡咯基、异噁唑基、异噻唑基、吡唑基、吡啶基、噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、噻唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、三嗪基、噻吩基、嘧啶基、苯并异噁唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并噻二唑基、二氢苯并呋喃基、吲哚啉基、哒嗪基、吲唑基、异噁唑基、异吲哚基、二氢苯并噻吩基、吲哚嗪基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、
Figure BDA0003339594180000372
啶基、咔唑基、苯并二氧杂环己烯基、苯并二氧杂环戊烯基、喹唑啉基、嘌呤基、呋呫基、噻吩基、异苯甲基呋喃基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、喹啉基、吲哚基、异喹啉基、二苯并呋喃基等。杂环基和杂芳基包括含有3-15个原子的环及环系统，形成1-3个环。
螺接的环部分表示其中两个环或环系统经由单一共同碳原子连接而成的那些。螺化合物可以是完全碳环(全部是碳原子)或杂环(具有一或多个非碳原子)。将包括两个环的螺接环状部分视为双环；将单环与双环部分连接的螺接环状部分视为三环部分。螺接的双环部分的实例包括8-氮杂螺[4.5]癸烷，2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷，2-氮杂螺[3.4]辛烷，6-氮杂螺[3.4]辛烷，2-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷，2-氮杂螺[4.4]壬烷，1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷，5-氮杂螺[2.4]庚烷，1，3-二氢螺-[茚-2，4′-哌啶]，5，7-二氢螺[环戊二烯并[b]吡啶-6，4′-哌啶]，3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]，3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]，4，6-二氢螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑-5，4′-哌啶]等。
本发明化合物可形成阻转异构体，其为与存在于通式I、Ia、Ib、Ic、Id、Ie和If中嘧啶部分有关的构象异构体。阻转异构体是由于围绕单键的旋转受阻而产生的立体异构体，其中因立体应变或其他促成因素所致的能量差异产生对旋转足够高阻碍，以允许个别构象异构体分离。在本发明化合物中观察到两种不同阻转异构体，例如当R2是经R6，R7和R8取代的苯基时，如下所示：
Figure BDA0003339594180000371
取决于芳基或杂芳基的定向以及嘧啶环上取代基R3，这些形式以化合物命名法表示为M或P形式。M及P形式的实例提供于实施例部分中。特别优选的化合物为具有以下定向的那些：
Figure BDA0003339594180000381
本发明还涉及包含根据本发明的化合物和/或其生理学上可接受的盐之一的药物制剂。
本发明还涉及本发明的这类药物制剂，其包含其他赋形剂和/或佐剂。
此外，本发明涉及根据本发明的上述药物制剂，其进一步包含一种或多种另外的治疗剂。
本发明的化合物可以以其游离碱形式使用。另一方面，本发明还包括本发明化合物以其药学上可接受的盐形式的用途，所述盐可以通过以下本领域已知的方法衍生自各种有机碱和无机碱。术语药学上的盐用于指已与抗衡离子结合形成中性络合物的可电离的药物。通过这个过程将药物转化为盐可以增加其化学稳定性，使络合物更容易给药，并允许控制药剂的药物动力学特性。盐的选择现在是药物开发过程中用可电离的小分子进行的常见标准操作，在许多情况下，与母体分子相比，药物盐显示出较佳特性。本发明化合物的药学上可接受的盐形式大部分是通过常规方法制备的。
在一个实施方案中，本发明化合物的药学上可接受的盐可以选自盐酸盐、醋酸盐、钠盐、硫酸盐、磷酸盐或二磷酸盐、氯化物、钾、马来酸盐、钙、柠檬酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、酒石酸盐、铝、葡萄糖酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐和乙二磺酸盐。在该实施方案的一方面，药学上可接受的盐是苯甲酸盐、苯磺酸盐或乙二磺酸盐。
本发明化合物在药学上可接受的盐包括所述盐的溶剂化物。术语溶剂化物是指本发明化合物的惰性溶剂分子由于它们的相互吸引力而形成的加合。溶剂化物是例如水合物，诸如单水合物或二水合物或醇盐，亦即与醇(诸如与甲醇或乙醇)的加成化合物。
通式I化合物可以具有一个或多个手性中心，以致于本发明也要求保护通式I所示化合物的所有立体异构体、对映异构体、非对映异构体等。因此本发明还涉及这些化合物的旋光体(立体异构体)、对映异构体、外消旋物、非对映异构体和水合物及溶剂化物。
具有通式I的化合物还应包括其同位素标记形式。具有通式I的化合物的同位素标记形式与所述化合物的区别仅在于所述化合物的一个或多个原子被原子量或质量数与通常是天然存在的原子的原子量或质量数不同的一个或多个原子取代。市场上容易买到且可通过已知方法被结合到具有通式I的化合物中的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯，例如分别为2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36CI。含有一或多个上述同位素和/或其他原子的同位素的通式I化合物、其前药或它们中任一个的药学上可接受的盐都应理解为本发明的一部分。可以多种有利的方式使用同位素标记的通式I化合物。例如，结合了诸如3H或14C的放射性同位素的同位素标记的通式1化合物可用于药物和/或底物组织分布试验。由于其制备简单及可检测性良好而尤其优选这两种放射性同位素，即氚(3H)和碳-14(14C)。由于诸如氘(2H)的较重的同位素具有较高的代谢稳定性，将这种同位素标记化合物结合到通式I化合物中在治疗上是有好处的。较高的代谢稳定性直接导致体内半衰期延长或剂量减少，这在多数情况下代表了本发明的优选实施例。通常可通过进行本文本的实施例部分和制备部分中的合成方案和相关描述中公开的步骤来制备同位素标记的通式I化合物，用容易得到的同位素标记反应物代替非同位素标记反应物。
为了通过一级动力学同位素效应控制化合物的氧化代谢，可将氘(2H)结合到具有通式I的化合物中。一级动力学同位素效应是由于同位素核的替换而导致化学反应速率发生变化，这是由于所述同位素替换之后形成共价键所需的基态能量的变化而引起的。较重的同位素的替换通常导致化学键的基态能量降低，从而引起速率限制的键断裂反应的速率降低。如果键断裂发生在沿着多产物反应的坐标的鞍点区中或其附近，产物分布比率可被显着改变。解释如下：如果氘被键合到碳原子的非可替换位置上，通常速率差异km/kd＝2-7。如果该速率差异被成功地应用于易于氧化的通式I化合物，则该化合物在体内的性质可被显着地改变，从而改善药物动力学特性。
具有通式I的化合物中的氘-氢替换也可被用来有利地改变起始化合物的代谢物谱，以减少或消除不良有毒代谢物。例如，如果通过氧化性碳-氢(C-H)键断裂产生了有毒代谢物，可以合理地认为，含氘类似物将会显着地减少或消除不良代谢物的产生，即使该具体的氧化反应并不是速率决定步骤。更多现有技术中关于氘-氢替换的信息可参见例如Hanzlik等，J.Org.Chem.55，3992-3997，1990，Reider等，J.Org.Chem.52，3326-3334，1987，FosteR，Adv.Drug Res.14，1-40，1985，Gillette等，Biochemistry 33(10)2927-2937，1994，和Jarman等Carcinogenesis 16(4)，683-688，1993。
本发明还涉及具有通式I的化合物的混合物，例如两种阻转异构体和/或两种或更多种非对映异构体的混合物，例如比例为1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶10、1∶100或1∶1000。这些特别优选是两种立体异构体化合物的混合物。在本发明的一个实施方案中，阻转异构体和/或非对映异构体的混合物包含至少80％所希望的构象。在该实施方案的一方面，阻转异构体和/或非对映异构体的混合物包含至少85％所希望的构象。在该实施方案的另一方面，阻转异构体和/或非对映异构体的混合物包含至少90％所希望的构象。在该实施方案的一方面，阻转异构体和/或非对映异构体的混合物包含至少95％所希望的构象。在该实施方案的一方面，阻转异构体和/或非对映异构体的混合物包含至少98％所希望的构象。
若需要，原位形成起始材料，采用的方法是不使起始材料与反应混合物分离，但马上将其进一步转化成具有通式I的化合物。
优选地，通过溶剂分解，尤其水解或氢解进行处理以便从其功能衍生物中释放出通式I的化合物而获得。用于溶剂分解或氢解的优选起始物是含有相应的经保护的氨基、羧基和/或羟基而不是一个或多个游离氨基、羧基和/或羟基的化合物，优选具有氨基保护基而不是键合到N原子的H原子的化合物。其他较佳的起始物是携带经保护的羧基而非游离羧基。多个相同或不同的经保护氨基和/或羟基也可以存在于起始物的分子中。如果所存在的保护基彼此不同，那么可以选择性地将它们裂解去除。
术语“氨基保护基”表示一般的含义，涉及适合于保护(阻止)氨基发生化学反应但在该分子的其他部位已发生期望的化学反应后易于去除的基团。典型的这种基团特别是：未取代或取代的酰基、未取代或取代的芳基(例如2，4-二硝基苯基)或芳烷基(例如苯甲基、4-硝基苯甲基、三苯甲基)。因为在期望的反应或者反应序列后去除氨基保护基，所以它们的类型和大小并不重要；然而，优选的是具有1-20个特别是1-8个碳原子的保护基。术语“酰基”应被理解成与本方法有关的最广义的含义。其包含从脂肪族、芳香脂肪族、芳香族或杂环羧酸或者磺酸类衍生的酰基，特别是烷氧基羰基、芳基氧基羰基，特别是芳烷氧基羰基。这种酰基的例子是：烷基酰基(例如乙酰基、丙酰基和丁酰基)；芳烷基酰基(例如苯基乙酰基)；芳酰基(例如苯甲酰基和甲苯酰基)；芳氧基烷酰基(例如苯氧基乙酰基)；烷氧基羰基(例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、2，2，2-三氯乙氧基羰基、BOC、2-碘乙氧基羰基；芳烷氧基羰基，(例如CBZ、4-甲氧基苄氧基羰基和FMOC)。优选的氨基保护基是CBZ、FMOC、苄基和乙酰基。
术语“酸保护基”或“羧基保护基”同样表示一般的含义，涉及适合于保护-COOH基团发生化学反应但在该分子的其他部位已发生期望的化学反应后易于去除的基团。典型地使用酯而非游离酸，例如经取代及未经取代的烷基酯(例如甲基、乙基、叔丁基及其经取代的衍生物)、经取代及未经取代的苯甲基酯或甲硅烷基酯。酸保护基的类型和大小并不重要；然而，优选的是具有1-20个特别是1-10个碳原子的保护基。
术语“羟基保护基”同样是指一般含义，涉及适合于保护羟基发生化学反应但易于已在分子其它部位完成期望的化学反应后去除的基团。典型的这种基团是上述未取代或取代的芳基、芳烷基或酰基，以及烷基。羟基保护基的类型和大小并不重要，因为在期望的化学反应或反应序列后将它们除去；优选具有1-20个特别是1-10个碳原子的基团。羟基保护基的例子尤其是：苄基、4-甲氧基苄基、对硝基苯甲酰基、对甲苯磺酰基、叔丁基和乙酰基，其中特别优选的是苄基和叔丁基。
氨基保护基、酸保护基及羟基保护基的其他典型实例见于例如“Greene’sProtective Groups in Organic Synthesis”，第四版，Wiley-Interscience，2007中。
根据本发明的所得化合物可以从制备它们的相应溶液中分离(例如通过离心和洗涤)，并且可以在分离后储存在另一种组合物中，或者它们可以直接保留在制备溶液。根据本发明所得的化合物也可以溶解在用于特定用途的所需溶剂中。
常规的后处理步骤，例如向反应混合物中加入水和萃取，能够在除去溶剂后获得化合物。为了进一步纯化产物，随后进行蒸馏或结晶或进行色谱法纯化可能是有利的。
令人惊讶地发现，与现有技术化合物相比，通式I化合物可具有有利的功效、选择性、药代动力学特性、给药方案、较低的毒性和/或物理特性。
本发明还涉及根据本发明的化合物在制备用于治疗由SHP2或其激动剂引起、促进和/或传播的疾病的药物中的用途。
因此，本发明还特别涉及用于治疗和/或预防生理和/或病理生理状况的药物，该药物包含至少一种本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐之一。具体而言，特别优选与SHP2关连的生理和/或病理生理状况。生理和/或病理生理状况应认为指医学相关的生理和/或病理生理状况，例如疾病或病和医学障碍、病痛、症状或并发症等，特别是疾病。
本发明还涉及用于治疗选自过度增生性疾病和障碍的生理和/或病理生理状况的药物，该药物包含至少一种本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐之一，在一个实施例中，过度增生性疾病或障碍为癌症。
因此，本发明特别优选涉及一种药物，该药物包含至少一种本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐之一，其中癌症选自急性和慢性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、肾上腺皮质癌、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、子宫癌、子宫增生、绒毛膜癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、原发性血小板增多症、泌尿生殖器癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、毛细胞白血病、头颈癌、霍奇金氏病、卡波西肉瘤、肺癌、淋巴瘤、恶性类癌瘤、恶性高钙血症、恶性黑色素瘤、恶性胰腺胰岛素瘤、甲状腺髓样癌、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、蕈样肉芽肿病、髓性和淋巴细胞性白血病、成神经细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、非小细胞肺癌、成骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、真性红细胞增多症、原发性脑癌、原发性巨球蛋白血症、前列腺癌、肾细胞癌、横纹肌肉瘤、皮肤癌、小细胞肺癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌和维尔姆氏瘤。在本发明的一个实施方案中，所述癌症是非小细胞肺癌、小细胞肺癌、头颈癌、乳腺癌、食道癌、胃癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤、胰腺癌、成骨肉瘤、黑色素瘤和肾癌。在该实施方案的一方面，癌症是头颈癌。在该实施方案的另一方面，癌症是肺癌。在该实施方案的一方面，肺癌是非小细胞肺癌。在该实施方案的另一方面，肺癌是小细胞肺癌。在该实施方案的另一方面，癌症是结直肠癌。在该实施方案的另一方面，癌症是食道癌。在该实施方案的另一方面，癌症是胃癌。
本发明还优选涉及用于治疗选自过度增生性和感染性疾病和障碍的生理和/或病理生理状况的药物，该药物包含至少一种本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐之一，其中过度增生性疾病或障碍选自年龄相关性黄斑变性、克罗恩氏病、肝硬化、慢性炎症相关性障碍、增生性糖尿病视网膜病变、增生性玻璃体视网膜病变、早产儿视网膜病变、肉芽肿病、与器官或组织移植相关的免疫过度增生以及选自炎性肠病、牛皮癣、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(SLE)、继发于视网膜缺氧的血管过度增生和血管炎的免疫增生性疾病或障碍。
以上公开的药物旨在包括本发明的化合物制备用于治疗以上生理和/或病理生理状况的药物的相应用途。
另外，以上公开的药物旨在包括用于治疗以上生理和/或病理生理状况的相应方法，其中将至少一种本发明的化合物施用至需要这种治疗的患者。
如实施例中所述，本发明的化合物优选显示可在酶测定和动物试验中容易得到证明的有利生物学活性。在这样的酶基测定中，本发明的化合物优选展示和引起抑制作用，这通常由在适合的范围内的IC50值证明，优选在微摩尔范围内，更优选在纳摩尔范围内。
本发明的化合物可施用至人或动物，特别是哺乳动物，例如猿、狗、猫、大鼠或小鼠，并可用于人体或动物体的治疗性治疗，也可用于对抗上述疾病。它们还可用作诊断剂或试剂。
此外，本发明的化合物可用于分离SHP2和研究其活性或表达。另外，它们特别适用于与受干扰SHP2活性相关的疾病的诊断方法。因此，本发明还涉及本发明的化合物用于分离SHP2和研究其活性或表达或用作SHP2的结合剂和抑制剂的用途。
为了诊断目的，可例如放射性标记本发明的化合物。放射性标记的实例为3H、14C、231I和125I。优选的标记方法为indogen法(Fraker等人，1978)。另外，本发明的化合物可由酶、荧光团和发色团(chemophore)标记。酶的实例为碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和葡萄糖氧化酶，荧光团的实例为荧光素，发色团的实例为鲁米诺，并且例如用于例如荧光着色的自动检测系统例如描述于US 4,125,828和US 4,207,554。
本发明还涉及包含至少一种式I化合物和/或其药学上可接受的盐的药物制剂。具体地，本发明还涉及包含其他赋形剂和/或辅剂的药物制剂，以及包含至少一种其他药物活性化合物的药物制剂。
具体地讲，本发明还涉及制备药物制剂的方法，其特征在于使式I的化合物和/或其其药学上可接受的盐之一与固体、液体或半液体赋形剂或辅剂并任选与一种或多种附加治疗剂一起形成适合的剂型。
本发明的药物制剂可在人或兽医学中用作药物。患者或宿主可属于任何哺乳动物物种，例如灵长类物种，特别是人；啮齿类，包括小鼠、大鼠和仓鼠；兔；马、牛、狗、猫等。动物模型对试验研究有意义，其中它们提供治疗人疾病的模型。
适合的载体物质为有机或无机物质，它们适用于肠内(例如口服)、肠胃外或局部施用，且不与新化合物反应，例如水、植物油(如葵花油或鱼肝油)、苯甲醇、聚乙二醇、明胶、碳水化合物(例如乳糖或淀粉)、硬脂酸镁、滑石、羊毛脂或凡士林。由于有专业知识，本领域的技术人员熟悉哪种辅剂适用于所需的药物制剂。除溶剂(例如水、生理盐水溶液或醇(例如乙醇、丙醇或甘油)、糖溶液(例如葡萄糖或甘露醇溶液))或所述溶剂、成胶剂、片剂助剂和其它活性成分载体的混合物外，也可使用例如润滑剂、稳定剂和/或湿润剂、乳化剂、影响渗透压的盐、抗氧化剂、分散剂、防沫剂、缓冲物质、调味剂和/或香料或矫味剂、防腐剂、增溶剂或染料。如果需要，本发明的制剂或药物可包含一种或多种其它活性化合物，例如一种或多种维生素。
如果需要，本发明的制剂或药物可包含一种或多种其它活性化合物和/或一种或多种作用增强剂(辅剂)。
出于本发明的目的，术语“药物配方”和“药物制剂”用作同义词。
本文所用“药学上可接受的”指有利于将自其得到的药物制剂施用至哺乳动物而没有不希望的生理学副作用如噁心、头晕、消化问题等的药物、沉淀试剂、赋形剂、辅剂、稳定剂、溶剂和其它试剂。
在用于肠胃外施用的药物制剂中，要求制剂(低毒性)、所用辅剂和初级包装的等渗性、水合正常和耐受性以及安全性。令人惊讶的是，本发明的化合物优选具有以下优点：可直接使用，因此，在本发明的化合物用于药物配制之前，不必用于去除毒理学上不可接受的试剂(例如高浓度有机溶剂或其它毒理学上不可接受的辅剂)的进一步纯化步骤。
本发明特别优选还涉及药物制剂，该药物制剂包含至少一种呈沉淀非晶、沉淀结晶或溶解或悬浮形式的本发明的化合物，以及任选的赋形剂和/或辅剂和/或其它药物活性化合物。
本发明的化合物优选能够制备高度浓缩制剂，而不会发生本发明化合物的不利、不期望聚集。因此，可借助于本发明的化合物与水性溶剂或在水性介质中制备具有高活性成分含量的即用溶液。
所述化合物和/或其生理学上可接受的盐和溶剂化物也可以冻干，所得冻干物例如用于制备注射制剂。
本发明的药物制剂也可包含多种本发明化合物的混合物。
本发明的制剂在生理学上耐受良好，易于制备，可精确分配，并且优选在整个储存和运输过程中以及在多次冷冻和解冻过程期间就测定、分解产物和聚集体而言是稳定的。它们可优选以稳定方式在冰箱温度(2-8℃)和室温(23-27℃)及60％相对大气湿度(R.H.)下储存至少三个月至两年的时间。
例如，本发明的化合物可通过干燥以稳定的方式储存，并且在必要时通过溶解或悬浮转化成即用型药物制剂。可能的干燥方法为例如但不限于以下这些实例：氮气干燥、真空烘箱干燥、冻干、用有机溶剂洗涤且随后空气干燥、液床干燥、流化床干燥、喷雾干燥、辊筒干燥、层干、室温空气干燥和其它方法。
术语“有效量”指引起例如研究人员或医师寻求或希望的组织、系统、动物或人的生物或医学反应的通式I所示的化合物或其药学上可接受的盐的量。
另外，术语“治疗有效量”指与未接受这种量的相应受试者比较，具有以下结果的量：一种或多种症状的改善、治愈或消除疾病、综合征、疾病状况、病痛、障碍或防止副作用。“治疗有效量”还包括减少疾病、病痛或障碍的进展。对于癌症治疗，“治疗有效量”可以减轻受试者的肿瘤负担，延缓疾病的进展(“无进展生存”)，延长受试者的预期寿命(提高总体生存率)，减缓或预防原发肿瘤向其他组织的转移和/或改善接受治疗的受试者的生活质量。术语“治疗有效量”也包括有效提高正常生理功能的量。
本发明的一个实施方案是使用根据本发明的化合物和/或其药学上可接受的盐组成的制剂或药物，制剂以每个使用单位在0.1和500mg之间的剂量，特别是在1和300mg之间。日剂量优选在0.001和250mg/kg体重之间，特别在0.01和100mg/kg体重之间。该制剂可每天施用一次或多次，例如每天二、三或四次。然而，患者的个体剂量取决于许多个体因素，例如取决于所用特定化合物的功效、年龄、体重、总体健康状况、性别、营养、施用时间和方法、排泄速率、与其它药物的组合以及特定疾病的严重程度和持续时间。
在生物体内药物活性化合物吸收的量度为其生物利用度。如果药物活性化合物以注射溶液的形式静脉内递送到生物体，则其绝对生物利用度，即，以不变的形式达到全身血液即主要循环的药物比例，为100％。在口服施用治疗性活性化合物的情况下，活性化合物通常在制剂中为固体形式，因此必须首先溶解，以便能够克服进入屏障，例如胃肠道、口腔粘膜、鼻膜或皮肤，特别是角质层，或者可由身体吸收。可类似于J.Shaffer等人，J.Pharm.ScienceS，88(1999)，313-318的方法获得关于药代动力学的数据，即，生物利用度的数据。
另外，这种类型的药物可通过制药领域中通常已知的方法之一来制备。
药物可适应于通过任何所需的适合途径施用，例如，通过口服(包括颊或舌下)、直肠、肺、鼻、局部(包括颊、舌下或透皮)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、皮内，尤其是关节内)途径。这种类型的药物可通过在制药领域已知的所有方法来制备，例如，通过使活性化合物与赋形剂或辅剂组合。
适于肠内施用(口服或直肠)的特别为片剂、糖衣丸、胶囊剂、糖浆、果汁、滴剂或栓剂，适合局部使用的为软膏剂、乳膏剂、糊剂、洗剂、凝胶剂、喷雾剂、泡沫剂、气雾剂、溶液(例如在醇(如乙醇或异丙醇)、乙腈、DMF、二甲基乙酰胺、1，2-丙二醇或它们相互和/或与水的混合物中的溶液)或粉剂。脂质体制剂也特别适合局部使用。
当然，除了以上特别提到的成分外，本发明的药物也可包含在本领域与特定药物制剂类型相关常用的其它试剂。
本发明还涉及由下列单独包装组成的套装(试剂盒)：
a)有效量的通式I所示的化合物和/或其生理学上可接受的盐、衍生物、溶剂化物、前药、立体异构体和阻转异构体，包括它们的各种比例混合物，和
b)有效量的其他药物活性化合物。
套装包括适合的容器，例如盒或纸箱、单个瓶、袋或安瓿。套装可例如包括分开的安瓿，各安瓿包含溶解或冻干形式的有效量的通式I所示的化合物和/或其药学上可接受的盐和有效量的一种或多种附加治疗剂。
另外，可使用本发明的药物以便在某些已知疗法中提供加和或协同作用，和/或以便恢复某些现有疗法的功效。
除了本发明的化合物外，本发明的药物制剂还可包含一种或多种附加治疗剂，例如用于治疗癌症的其它抗肿瘤药物。为了治疗提及的其它疾病，除了本发明的化合物外，本发明的药物制剂还可包含本领域的技术人员在其治疗中已知的其它药物活性化合物。
在一个实施方案中，本发明的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种附加治疗剂组合施用。在本发明的一方面，一种或多种附加治疗剂是EGFR抑制剂、MET抑制剂、PD-L1抑制剂、MEK 1/2抑制剂、TGF-βR路径抑制剂或其组合。在该实施方案的另一方面，一种或多种附加治疗剂是是爱必妥(Erbitux)、特普替尼(tepotinib)、阿维鲁单抗(avelumab)、Muc1-TGFβR2 Nb、EGFR-Muc1-ADC、匹马赛替尼(pimasertib)、派姆单抗(pembrolizumab)、纳武利尤单抗(nivolumab)、西米单抗(cemiplimab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、度伐利尤单抗(durvalumab)或其组合。在该实施方案的一个方面，一种或多种附加治疗剂是爱必妥、特普替尼、阿维鲁单抗、匹马赛替尼或其组合。
在一个主要的实施方案中，提供用于增强有需要的宿主的免疫应答的方法。通过减小T细胞耐受性，包括通过增加IFN-γ释放，通过减少调节性T细胞产生或激活，或通过增加宿主中的抗原特异性记忆T细胞产生，可增强免疫应答。在一个实施方案中，所述方法包括与抗体组合或交替施用本发明的化合物至宿主。在该实施方案的一方面中，抗体为治疗性抗体。在一个具体实施方案中，提供一种增强被动抗体疗法功效的方法，所述方法包括与一种或多种被动抗体组合或交替施用本发明的化合物。这种方法可提高用于治疗异常细胞增生性障碍(例如癌症)的抗体疗法的功效，或者可在治疗或预防感染性疾病中提高疗法的功效。本发明的化合物可与抗体例如利妥昔单抗、赫赛汀或爱必妥组合或交替施用。
在另一个主要的实施方案中，提供一种治疗或预防异常细胞增生的方法，所述方法包括基本在没有另一种抗癌剂的存在下施用本发明的化合物至需要其的宿主。
在另一个主要的实施方案中，提供一种治疗或预防有需要的宿主的异常细胞增生的方法，所述方法包括首先基本上与第一抗癌剂组合施用本发明的化合物至宿主，随后施用第二SHP2拮抗剂。在该实施方案的一方面中，基本在没有另一种抗癌剂的存在下施用第二拮抗剂。在另一个主要的实施方案中，提供一种治疗或预防有需要的宿主的异常细胞增生的方法，所述方法包括基本上与第一抗癌剂组合施用本发明的化合物至宿主，随后在没有拮抗剂的存在下施用第二抗癌剂。
因此，本文公开的癌症治疗可作为利用本发明的化合物的疗法或与手术、照射或化疗的组合来进行。这种类型的化疗可包括使用选自以下组内的一种或多种附加治疗剂：
(i)用于医学肿瘤学的抗增生/抗肿瘤/破坏DNA的活性化合物及其组合，例如烷基化活性化合物(例如顺铂、parboplatin、环磷酰胺、氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安和亚硝基脲)；抗代谢药(例如抗叶酸剂，例如氟嘧啶，例如5-氟尿嘧啶和替加氟、雷替曲塞、甲氨蝶呤、胞嘧啶阿拉伯糖苷、羟基脲和吉西他滨)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环霉素，例如阿霉素、博来霉素、多柔比星、道诺霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C、放线菌素和光神霉素)；抗有丝分裂活性化合物(例如长春花生物碱，例如长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨，和紫杉烷类，例如紫杉醇和泰索帝)；拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素，例如依托泊苷和替尼泊苷、安吖啶、托泊替康、伊立替康和喜树碱)和细胞分化活性化合物(例如全反式维甲酸、13-顺式-维甲酸和维甲酰酚胺)；
(ii)细胞生长抑制活性化合物，例如抗雌激素剂(例如他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬和碘多芬(iod氧基fene))、雌激素受体调节剂(例如氟维司群)、抗雄激素剂(例如比卡鲁胺、氟他胺、尼鲁米特和醋酸环丙孕酮)、LHRH拮抗剂或LHRH激动剂(例如戈舍瑞林、亮丙瑞林和布舍瑞林)、孕酮(例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如阿那曲唑、来曲唑、伏氯唑和依西美坦)和5α-还原酶的抑制剂(例如，如非那雄胺)；
(iii)抑制癌症侵袭的活性化合物，包括例如金属蛋白酶抑制剂(如马立马司他)和尿激酶纤溶酶原激活剂受体功能抑制剂；
(iv)生长因子功能的抑制剂，例如生长因子抗体，生长因子受体抗体，例如抗erbb2抗体曲妥珠单抗[HerceptinTM]和抗erbbl抗体西妥昔单抗[C225]，法呢基转移酶抑制剂，酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸/苏糖酸激酶抑制剂，例如表皮生长因子家族的抑制剂(例如EGFR家族酪氨酸激酶抑制剂，例如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(吉非替尼，AZD1839)，N-(3-乙炔基苯基)-6，7-双(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(厄洛替尼，OSI-774)和6-丙烯酰氨基-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-吗啉代丙氧基)-喹唑啉-4-胺(CI 1033)，例如血小板衍生生长因子家族的抑制剂，和例如肝细胞生长因子家族的抑制剂；
(v)抗血管生成活性化合物，例如贝伐单抗、血管抑素、内皮抑素、利诺胺、巴马司他、卡托普利、软骨衍生的抑制剂、染料木黄酮、白介素12、熏草菌素、醋酸甲羟孕酮、重组人血小板因子4、替可加兰、血小板反应蛋白、TNP-470、抗VEGF单克隆抗体、可溶性VEGF受体嵌合蛋白、抗VEGF受体抗体、抗PDGF受体、整联蛋白抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂、反义寡核苷酸、反义寡脱氧核苷酸、siRNAs、抗VEGF适配体、色素上皮衍生因子和已在国际专利申请WO 97/22596、WO 97/30035、WO 97/32856和WO 98/13354中公开的化合物；
(vi)血管破坏剂，例如考布他汀A4和已在国际专利申请WO 99/02166、WO 00/40529、WO00/41669、WO 01/92224、WO02/04434和WO 02/08213中公开的化合物；
(vii)反义疗法，例如针对上述靶标的那些，例如ISIS 2503(一种抗Ras反义物)；
(viii)基因治疗方法，包括例如置换异常、修饰的基因(例如异常p53或异常BRCA1或BRCA2)的方法，GDEPT方法(基因导向酶前药治疗)，例如使用胞嘧啶脱氨酶、胸苷激酶或细菌硝基还原酶的那些方法，以及提高患者对化疗或放疗耐受性的方法，例如多药耐受治疗；和
(ix)免疫治疗方法，包括例如提高患者肿瘤细胞免疫原性的离体和体内方法，例如用细胞因子如白介素2、白介素4或粒细胞巨噬细胞集落刺激因子进行转染，降低T细胞无反应性的方法，使用经转染免疫细胞例如细胞因子转染的树突状细胞的方法，使用细胞因子转染的肿瘤细胞的方法，以及使用抗独特型抗体的方法；
(x)化疗剂，包括例如阿巴瑞克、阿地白介素、阿仑珠单抗、阿利维甲酸、别嘌呤醇、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、三氧化二砷、天冬酰胺酶、BCG live、贝伐珠单抗、贝沙罗汀、博来霉素、硼替佐米、白消安、卡鲁睾酮、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、塞来考昔、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、西那卡塞特、顺铂、克拉屈滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素、达贝泊汀α、柔红霉素、地尼白介素、右雷佐生、多西他赛、多柔比星、屈他雄酮、表柔比星、依伯汀α、雌莫司汀、依托泊苷、依西美坦、非格司亭、氟尿苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟维司群和吉西他滨。
来自表1的附加治疗剂可优选但非排它性与通式I所示的化合物组合。
Figure BDA0003339594180000491
Figure BDA0003339594180000501
Figure BDA0003339594180000511
Figure BDA0003339594180000521
Figure BDA0003339594180000531
Figure BDA0003339594180000532
Figure BDA0003339594180000541
Figure BDA0003339594180000551
Figure BDA0003339594180000561
即使没有进一步的实施方案，也假定本领域技术人员将能够在最广泛的范围内使用以上描述。因此，优选的实施方案应只被视为绝对不以任何方式限制的描述性公开。
因此，以下实施例旨在解释本发明，而不限制本发明。除非另外指明，百分数数据表示重量百分数。所有温度均以摄氏度表示。“常规后处理”：如果必要，加入水，如果必要，根据最终产物的组成将pH调节到2和10之间的值，用乙酸乙酯或二氯甲烷萃取混合物，使相分离，使有机相经硫酸钠干燥，过滤，并蒸发，并且通过在硅胶上色谱和/或通过结晶来纯化产物。
缩略语列表
AUC 血浆药物浓度-时间曲线下的面积
Cmax 最大血浆浓度
CL 清除率
CV 变异系数
CYP 细胞色素P450
DMSO 二甲亚砜
％F 生物利用度
fa 吸收的馏分
iv 静脉内
LC-MS/MS 液相色谱串联质谱
LLOQ 定量下限
NC 未计算
NT 未测试
PEG 聚乙二醇
Pgp 渗透性糖蛋白
PK 药代动力学
po 经口(口服)
t1/2 半衰期
tmax 达到药物最大血浆浓度时的时间
UPLC 超高效液相色谱
Vss 分布体积(稳态下)
v/v 体积/体积
实施例1：本发明化合物的实例
本发明尤其涉及表2的化合物及其生理学上可接受的盐、衍生物、溶剂化物、前药、立体异构体和阻转异构体，包括它们的各种比例混合物。
表2-本发明化合物的实例
Figure BDA0003339594180000581
Figure BDA0003339594180000591
Figure BDA0003339594180000601
Figure BDA0003339594180000611
Figure BDA0003339594180000621
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Figure BDA0003339594180000641
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Figure BDA0003339594180000661
Figure BDA0003339594180000671
Figure BDA0003339594180000681
Figure BDA0003339594180000691
Figure BDA0003339594180000701
Figure BDA0003339594180000711
Figure BDA0003339594180000721
Figure BDA0003339594180000731
Figure BDA0003339594180000741
Figure BDA0003339594180000751
Figure BDA0003339594180000761
Figure BDA0003339594180000771
Figure BDA0003339594180000781
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Figure BDA0003339594180000811
Figure BDA0003339594180000821
Figure BDA0003339594180000831
Figure BDA0003339594180000841
Figure BDA0003339594180000851
Figure BDA0003339594180000861
Figure BDA0003339594180000871
Figure BDA0003339594180000881
Figure BDA0003339594180000891
Figure BDA0003339594180000901
实施例2：本发明化合物的制备和分析方法
以下缩写的含义如下：
Boc 叔丁氧基羰基
CBZ 苄氧基羰基
DNP 2，4-二硝基苯基
FMOC 9-芴基甲氧基羰基
imi-DNP 位于咪唑环1位的2，4-二硝基苯基
OMe 甲酯
POA 苯氧基乙酰基
DCCI 二环己基碳二亚胺
HOBt 1-羟基苯并三唑
一般而言，根据本发明的通式(I)及相关式的化合物可以从容易获得的起始物质制备。如果这种起始物质无法从市场上买到，则可利用标准合成技术制备。一般而言，用于通式(I)或相关式的任何单个化合物的合成路径将取决于各分子的具体取代基，此类因子正如本领域普通技术人员所理解的。可采用下文实施例中所描述的以下一般方法和步骤来制备通式(I)及相关式的化合物。这些方法是说明性的，并不意味着限制本领域技术人员可以用来制备本文公开的化合物的可能方法。下面流程中所描述的反应条件(例如温度、溶剂、或共试剂)只是作为例子给出而并不是限制性的。应当理解的是，在给出典型的或优选的实验条件(即反应温度、时间、试剂的摩尔数、溶剂等)的情况下，除非另有说明也可以采用其他实验条件。最佳反应条件可视所使用的具体反应剂或溶剂而变化，但这种条件可以由本领域技术人员利用常规的优化步骤来确定。对于所有的保护和脱保护方法，参见PhilipJ.Kocienski的“保护基(Protecting Groups)，Georg Thieme Verlag Stuttgart，纽约(1994年)、以及Theodora W.Greene和Peter G.M.Wuts“有机合成中的保护基(Protective Groups in Organic Synthesis)，Wiley Interscience，第三版(1999年)。
根据R1、R2、R3、R4、R5、X和Y的性质，对于通式(I)的化合物的合成可选择不同的合成方案。在以下方案中所示的步骤中，除非另有说明，否则R1、R2、R3、R4、R5、X和Y是如在上面说明中所定义的。
根据一种方法，根据通式4的嘧啶衍生物，其中R2和R3如上所述，R20和R21是H、取代的烷基、杂烷基，或者能够结合形成单环或多环的烷基或杂烷基，其可以或不可以经取代，并且R8是COYR4R5，其中Y、R4和R5如上所述，或者CN可以按照方案1中描述的反应方案制备。
Figure BDA0003339594180000911
方案1
嘧啶1，其中R3和R8如上所述，LG1是离去基团(例如卤素或OMs、OTs、OTf)，与胺NHR20R21(其中R20和R21如上所述)在溶剂中加热，在碱存在或不存在下发生取代反应，得到通式2所示的嘧啶(其中R3、R20、R21和R8如上所定义)，所述溶剂例如但不限于甲醇、乙醇、DMF、DMSO，所述碱例如是TEA、DIEA、Cs2CO3或K2CO3。然后使用例如NBS、NCS或NIS使吡啶2经受卤化条件，得到通式3所示的中间体(其中R3、R20、R21和R8如上所述并且Hal是卤素原子，例如Cl、Br或I)。最后，使用本领域技术人员公知的标准条件，使嘧啶3进行交叉偶联反应，得到嘧啶4。在一些实施例中，交叉偶联反应是Suzuki反应，但可以采用其他交叉偶联反应。
替换地，可以按照方案2中描述的反应方案制备根据通式4所示的嘧啶衍生物，其中R2、R3、R20、R21、R8如上所定义。
Figure BDA0003339594180000921
方案2
在该反应顺序中，硫甲基化合物5(其中R3和R8如上定义)首先经历卤化反应，然后被置于交叉偶联条件下，得到中间体化合物7(其中R2、R3、R8如上定义)。然后使用本领域技术人员熟知的标准条件，例如采用mCPBA或H2O2，将硫甲基基团氧化为SO2Me，得到中间体8(其中R2、R3和R8如上所定义)。最后，中间体8与NHR20R21(其中R20和R21如上所定义)发生取代反应。
为了获得通式Ia的最终化合物，可能需要对R8作最后转化。
当R8为COOR19时，其中R19为H、烷基、环烷基，当COOR19与胺HNR4R5(其中R4和R5如上文所述)在本领域技术人员熟知的从胺和羧酸或羧酸衍生物制备酰胺的条件下反应，就会生成通式I的最终化合物，所述熟知的条件例如是使用标准偶联剂(例如DIC、EDC、TBTU、DECP)，或者如方案3中所述的其他条件。
Figure BDA0003339594180000931
方案3
当R8是CN时，通式I的最终化合物(其中R2、R3、R4、R20和R21如上所定义)可以通过以下方法而获得：使通式4b化合物(其中R2、R3、R5和R7如上所定义)水解，生成通式9所示的酸(其中R、R3、R5、R7如上所定义)，随后使通式9所示的酸进行如方案4描述酰胺偶联反应。替换地，可以使用本领域技术人员公知的条件，例如在NaOH和H2O2存在下在DMF或DMSO中加热，使通式4b所示的化合物直接水解(其中R2、R3、R5和R7如上所定义)，获得通式Ib所示的化合物。
Figure BDA0003339594180000932
方案4
对于通式I的其他化合物的合成，应当采用类似的合成方案，针对每个分子的具体取代基作适当修改，这些因素是本领域普通技术人员能够理解的。
根据进一步的一般方法，采用合适的互变技术，例如下文实施例中描述的技术。可将通式I所示的化合物可以转化为替代的通式I化合物。
在Bruker Avance III 400 NMR光谱仪或者Bruker DPX-300MHz光谱仪上记录全部NMR实验结果，该Bruker Avance III 400 NMR光谱仪配置了Bruker PABBO BB-1H/DZGRD探针，在400MHz处进行质子NMR，该Bruker Mercury Plus 300 NMRR光谱仪配置了Bruker 300 BBFO探针，在300MHz处进行质子NMR。大部分氘化溶剂通常含有0.03％至0.05％v/v四甲基硅烷，其用作参考信号(1H和13C均设置为d 0.00)。在氘化溶剂不含四烷基硅烷的情况下，根据公布的指南(J.Org.Chem.，Vol.62，No.21，1997)，将残留的非氘化溶剂峰用作参考信号。化学位移以在每百万份(ppm，δ单位)表示。偶合常数以赫兹为单位(Hz)。分裂模式描述明显的多重性，表示如下：s(单峰)，d(双峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，m(多重峰)，qt(五重峰)或brs(宽单峰)。
以下缩写是指下文中所使用的缩写：
Ac(乙酰基)；ACN(乙腈)；atm(大气压)；DIEA(二异丙基乙胺)；℃(摄氏度)；DMF(二甲基甲酰胺)；DMSO(二甲基亚砜)；dppf(1，1′-双(二苯基膦)二茂铁)；EtOAc(乙酸乙酯)；g(克)；h(小时)；HATU(六氟磷酸N-[(二甲基氨基)(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶-3-基氧基)亚甲基]-N-甲基甲铵)；HOBt(羟基苯并三唑)；HPLC(高效液相色谱法)；LC(液相色谱法)；LDA(二异丙基氨基锂)；MeOH(甲醇)；min(分钟)；mL(毫升)；mmol(毫摩尔)；MS(质谱法)；NBS(溴代琥珀酰亚胺)；NMR(核磁共振)；O/N(过夜)；PE(石油醚)；RT(室温)；TBDMS(叔丁基二甲基甲硅烷基)；TEA(三乙胺)；TFA(三氟乙酸)；THF(四氢呋喃)；TMS(三甲基硅烷基)。
在配备有SQ检测器(ESI)的Waters AquityH进行UPLC/MS分析，以及在Agilent1200系列质谱仪上或SHIMADZU LC-MS仪器进行LC-MS分析，其中该Agilent 1200系列配备有四极检测器，该SHIMADZU LC-MS仪器由UFLC 20-AD系统和LCMS 2020 MS检测器组成。
使用Biotage Initiator Microwave Synthesizer按照本领域已知的标准协议进行微波反应。
本发明的化合物可以利用若干合成方法由容易得到的起始物而制备。在下面的实施例中描述了合成路径的例子。除非另有说明，可以通过将作为外消旋混合物所获得的本发明的化合物分离，以提供富含对映异构体的混合物或者纯对映异构体。
除非另有说明，以下实验说明中所使用的市售起始物是从Sigma-Aldrich或Fisher公司购得。
中间体1：(1-(5-溴-4-氰基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
步骤1：(1-(4-氰基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180000941
将2-氯嘧啶-4-腈(2g，14.3mmol)、碳酸铯(11.62g，35.7mol)和(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(3.38g，15.8mmol)在DMF(30mL)中的溶液在110℃下搅拌过夜。反应混合物通过硅藻±垫过滤。该垫用乙酸乙酯(50mL)洗涤，滤液用盐水洗涤。有机层用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，100∶0至50∶50的梯度)，得到标题化合物，为白色固体(2g，66％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：8.61(S，1H)，7.10(S，1H)，6.60(brS，1H)，4.06(m，2H)，3.38(m，2H)，2.07(m，2H)，1.42(m，2H)，1.39(S，9H)，1.25(S，3H)。
步骤2：(1-(5-溴-4-氰基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180000951
向(1-(4-氰基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(2g，6.31mmol)在无水乙腈(30mL)中的溶液在0℃下分批加入N-溴-琥珀酰亚胺(1.2g，6.93mmol)。反应混合物在室温下搅拌1小时，然后用冰淬灭反应，用乙酸乙酯(50mL)萃取。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，100∶0至85∶15的梯度)，得到标题化合物，为为白色固体(2g，80％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：8.75(S，1H)，6.66(brS，1H)，4.01(m，2H)，3.35(m，2H)，2.08(m，2H)，1.43(m，2H)，1.39(S，9H)，1.22(S，3H)。
中间体2：N-[1-(4-氨基-5-溴-6-氨基甲酰基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯
步骤1：N-[1-(4-氨基-6-氨基甲酰基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180000952
将6-氨基-2-氯嘧啶-4-甲酰胺(700mg，3.20mmol)、N-(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.3g，5.76mmol)、TEA(822mg，7.72mmol)在乙腈(11mL)中的混合物在密封管中于80℃加热18小时。减压除去溶剂，粗产物直接通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，90∶10)，得到标题化合物，为黄色固体(1.2g，100％)。LC/MS(M+1)：35l.2。
步骤2：N-[1-(4-氨基-5-溴-6-氨基甲酰基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180000961
保持在0℃下将NBS(243mg，1.30mmol)分批加入至N-[1-(4-氨基-6-氨基甲酰基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(400mg，1.14mmol)在DMF(6mL)中的溶液中。反应混合物在室温下搅拌1小时，然后用冰淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取。有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，为黄色固体(420mg，80％)。LC/MS(M+1)：429.2。
中间体3：5-溴-2-(4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-4-甲基哌啶-1-基)嘧啶-4-羧酸甲酯
Figure BDA0003339594180000962
将5-溴-2-氯嘧啶-4-羧酸甲酯(300mg，1.13mmol)、N-(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(307mg，1.36mmol)和TEA(0.2mL)在ACN(3mL)中的混合物在密封管中于80℃加热2小时。减压除去溶剂，粗产物直接通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，73∶27)，得到标题化合物，为黄色固体(495mg，96％)。LC/MS(M+1)：429.2。
中间体4：6-氨基-5-(2，3-二氯-苯基)-2-甲磺酰基-嘧啶-4-腈
步骤1：6-氨基-2-(甲基硫烷基)嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180000963
6-氯-2-(甲基硫烷基)嘧啶-4-胺(50g，285mmol)、KCN(37.1g，569mmol)、Pd2(dba)3(15.6g，17.1mmol)、DPPF(12.6g，22.8mmol)和三丁基(氯)锡烷(5.56g，17.1mmol)在ACN(500mL)中的混合物在15℃下搅拌30分钟，然后加热至80℃保持16小时。混合物冷却至室温，倒入水(2.0L)中，用乙酸乙酯(1.5L)萃取。有机层用水(1.5L)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯/DCM，8/1/0至4/1/1的梯度，含有0.1％NH4OH)，得到标题化合物，为乳白色固体(28.6g，53％)。1H NMR(400MHz DMSO-d6)：7.62(brS，2H)，6.63(S，1H)，2.40(S，3H)。
步骤2：6-氨基-5-溴-2-(甲基硫烷基)嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180000971
保持在5℃下将NBS(11.2g，62.9mmol)分批加入至6-氨基-2-(甲基硫烷基)嘧啶-4-腈(10.0g，60.2mmol)在DMF(90mL)中的溶液中。反应混合物在同一温度下搅拌1小时。将该混合物倒入水(300mL)中，用乙酸乙酯(300mL)萃取。有机层用0.5M NaHCO3溶液(300mLx2)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，为黄色固体(7.78g，52.7％)。
步骤3：6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-2-(甲基硫烷基)嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180000972
将6-氨基-5-溴-2-(甲基硫烷基)嘧啶-4-腈(1.55g，6.32mmol)、2，3-(二氯苯基)硼酸(3.02g，15.8mmol)、XPhos Palladacycle Gen 3(267mg，316umol)和K3PO4(4.03g，18.9mmol)在1，4-二噁烷(15mL)和水(3mL)中的混合物在氮气气氛和95℃下搅拌16小时。混合物冷却至室温，用DCM(20mL)稀释并过滤。真空浓缩滤液并通过RP-MPLC(TFA条件)纯化，得到标题化合物，为黄色固体(1.01g，48％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)：7.65(dd，J＝1.2，8.0Hz，1H)，7.41(t，J＝7.6Hz，1H)，7.29(dd，J＝7.6，8.0Hz，1H)，5.04(bR，2H)，2.57(S，3H)。LC/MS(M+1)：311.1。
步骤4：6-氨基-5-(2，3-二氯-苯基)-2-甲磺酰基-嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180000973
保持在0℃下，将mCPBA(2.83g；12.65mmol)在DCM(40mL)中的溶液加入至6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-2-(甲基硫烷基)嘧啶-4-腈(1.97g；6.32mmol)在DCM(40mL)中的溶液中。反应混合物在室温下搅拌2小时，冷却至0℃，然后加入另一种mCPBA(1.42g；6.32mmol)在DCM(20mL)中的溶液，实现完全转化。
反应混合物在室温下再搅拌2小时。然后过滤除去白色沉淀。滤液浓缩，再次溶解在DCM中，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(己烷∶乙酸乙酯，60∶40至80∶20的梯度)，得到标题化合物，为白色固体(1.5g，69％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)d8.73(S，1H)，7.85(dd，J＝6.1，3.5Hz，1H)，7.70(S，1H)，7.63-7.55(m，2H)，3.37(S，3H)。LC/MS(M+1)：342.9。
中间体5：{1-[4-氨基-6-氰基-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-2-基]-4-甲基-哌啶-4-基}-氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180000981
(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(Synthonix；62mg；0.29mmol)和碳酸钾(101mg；0.73mmol)在ACN(0.50mL)和DMF(0.50mL)中的溶液在室温搅拌10分钟，然后加入6-氨基-5-(2，3-二氯-苯基)-2-甲磺酰基-嘧啶-4-腈(中间体4；50mg；0.15mmol)。然后将反应混合物在100℃加热66小时。用乙酸乙酯(40mL)稀释并用水(2x10mL)和盐水(10mL)洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速纯化(己烷∶乙酸乙酯，95∶5至40∶60的梯度)，得到标题化合物，为白色泡沫。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)7.72(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.45(t，J＝7.8Hz，1H)，7.38(dd，J＝7.7，1.6Hz，1H)，6.56(S，2H)，4.08-3.93(m，2H)，3.40-3.24(m，2H)，2.04(d，J＝13.5Hz，2H)，1.46-1.32(m，11H)，1.26(S，3H)。
中间体6：6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸
Figure BDA0003339594180000982
N-[1-[4-氨基-6-氰基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(中间体5；370mg，0.628mmol)和NaOH(132mg，3.139mmol)在水(5mL)中的溶液在100℃油浴中搅拌16h。加入1M HCl溶液将pH值调节至4，并将溶液减压浓缩。将残留物溶解在甲醇(10mL)中并通过C18硅胶快速色谱法纯化(ACN：水-0.5％HCl，10min内10％至50％的梯度)，得到标题化合物，为黄色固体(250mg，94％)。熔点：179-181℃。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)8.18(S，3H)，7.63-7.57(m，1H)，7.39-7.31(m，2H)，7.22(S，1H)，7.15(d，J＝7.5Hz，1H)，7.09(S，1H)，4.27(d，J＝13.9Hz，1H)，2.55(S，0H)，1.71(S，4H)，1.39(S，3H)。LC/MS(M+1)：396.1。
中间体7：6-氨基-2-(4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-羧酸
Figure BDA0003339594180000991
N-[1-[4-氨基-6-氰基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(中间体5，200mg，0.34mmol)在NaOH水溶液(1N溶液，4mL)和乙醇(2mL)中的溶液在100℃加热16小时。然后用水稀释，乙酸乙酯(3x20mL)萃取。有机层合并，用盐水洗涤，硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(乙酸乙酯∶甲醇，70∶30)，得到标题化合物，为白色固体(140mg，69％)。LC/MS(M+1)：496.1。
中间体8：N-[1-(5-溴-4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯
步骤1：N-[1-(4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180000992
2-氯-6-甲基嘧啶-4-腈(1g，6.2mmol)、N-(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(1.7g，7.4mmol)和TEA(0.1mL)在ACN(15mL)中的溶液在80℃加热2小时。减压除去溶剂，粗产物通过快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，0∶0至50∶50的梯度)，得到标题化合物，为黄色固体(1.9g，92％)。LC/MS(M+1)：332.2。
步骤2：N-[1-(5-溴-4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001001
N-[1-(4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(1.9g，5.7mmol)和NBS(1.6g，8.5mmol)在DMF(10mL)中的溶液在室温搅拌1小时。然后将反应混合物用水(200mL)稀释并用乙酸乙酯(3x200mL)萃取。有机层合并，用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，为黄色固体(2.3g，96％)。LC/MS(M+1)：410.2。
中间体9：7-氯-6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊烷-2-基)-1H-吲唑
Figure BDA0003339594180001002
6-溴-7-氯-1H-吲唑(300mg，1.23mmol)、Pd(dppf)Cl2.DCM(53mg，0.062mmol)、BPD(497mg，1.859mmol)和乙酸钾(381mg，3.7mmol)在二噁烷(5mL)的混合物用氮气冲洗，放置在密封管中于120℃加热2小时。减压除去溶剂，残留物通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，50∶50)，得到标题化合物，为一种黄色油(300mg，44％)。LC/MS (M+1)：279.2。
中间体10：6-氨基-5-(7-氯-1H-吲唑-6-基)-2-甲磺酰基-嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180001003
采用7-氯-6-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼戊烷-2-基)-1H-吲唑(中间体9)为起始材料，依据中间体4描述的程序制备标题化合物，为一种黄色油。LC/MS(M+1)：349.0。
中间体11：N-[(3S，4S)-8-(5-溴-4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯
步骤1：N-[(3S，4S)-8-(4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001011
将2-氯-6-甲基嘧啶-4-腈(106mg；0.69mmol)、N-[(3S，4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯(125mg；0.46mmol)和DIEA(0.4mL，2.31mmol)在无水DMSO(2.5mL)中的溶液在70℃搅拌24小时。反应混合物用(10mL)和乙酸乙酯(25mL)稀释。有机层用水(2x)和盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(己烷∶乙酸乙酯，95∶5至20∶80的梯度)，获得标题化合物，为黄色泡沫(175mg，98％)。1H NMR(Bruker400MHz，DMSO-d6)：7.03(S，1H)，6.98(d，J＝10.4Hz，1H)，4.23-4.11(m，1H)，3.88(dd，J＝10.5，5.1Hz，1H)，3.85-3.78(m，1H)，3.78-3.63(m，3H)，3.63-3.53(m，1H)，3.50(d，J＝8.4Hz，1H)，2.34(S，3H)，1.69-1.51(m，3H)，1.51-1.42(m，1H)，1.39(S，9H)，1.02(d，J＝6.3Hz，3H)；LC/MS(M+1)：388.2。
步骤2：N-[(3S，4S)-8-(5-溴-4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001012
保持在0℃下，将N-溴琥珀酰亚胺(121mg；0.68mmol)在DMF(1.75mL)中的溶液缓慢加入N-[(3S，4S)-8-(4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯(175mg；0.45mmol)在DMF(1.75mL)中的溶液中。反应混合物在室温搅拌2小时。然后用乙酸乙酯(50mL)稀释并用水(2x25mL)和盐水(25mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(己烷∶乙酸乙酯，95∶5至50∶50的梯度)，获得标题化合物，为白色泡沫(158mg，75％)。1H NMR(Bruker 400MHz，DMSO-d6)：6.99(d，J＝10.5Hz，1H)，4.22-4.12(m，1H)，3.88(dd，J＝10.5，5.1Hz，1H)，3.85-3.76(m，1H)，3.76-3.63(m，3H)，3.60-3.47(m，2H)，2.48(S，3H)，1.69-1.52(m，3H)，1.52-1.43(m，1H)，1.40(S，9H)，1.03(d，J＝6.3Hz，3H)；LC/MS(M+1)：466.1，468.1。
中间体12：N-[(1R)-8-(4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-3，3-二氟-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯
步骤1：N-[(1R)-8-(4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-3，3-二氟-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001021
采用2-氯-6-甲基嘧啶-4-腈(99mg；0.65mmol)和N-[(1R)-3，3-二氟-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(125mg；0.43mmol)为起始材料，依据中间体12步骤1描述的程序制备标题化合物，为黄色泡沫(172mg，98％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：7.09-7.00(m，2H)，4.51-4.26(m，2H)，3.85(q，J＝9.3Hz，1H)，3.18-2.94(m，2H)，2.48-2.36(m，2H)，2.34(S，3H)，2.31-1.95(m，2H)，1.62-1.38(m，4H)，1.34(S，9H)，LC/MS(M+1)：408.1。
步骤2：N-[(1R)-8-(5-溴-4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-3，3-二氟-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001022
采用N-[(1R)-8-(4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-3，3-二氟-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(170.00mg；0.42mmol)为起始材料，依据中间体12步骤2描述的程序制备标题化合物，为黄色固体(150mg，74％)。LC/MS(M+1)：486.1，488.1。
中间体13：N-[(1R)-8-(5-溴-4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯
步骤1：N-[(1R)-8-(4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001031
采用2-氯-6-甲基嘧啶-4-腈(258mg；1.68mmol)和N-[(1R)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(214mg；0.84mmol)为起始材料，依据中间体12步骤1描述的程序制备标题化合物，为黄色泡沫(295mg，94％)。1H NMR(Bruker400MHz，DMSO-d6)：7.00(S，1H)，6.73(d，J＝9.3Hz，1H)，4.45-4.13(m，2H)，3.57(q，J＝8.3Hz，1H)，3.24-3.06(m，2H)，2.34(S，3H)，1.93-1.78(m，1H)，1.78-1.58(m，2H)，1.58-1.40(m，4H)，1.41-1.20(m，12H)。LC/MS(M+1)：372.0。
步骤2：N-[(1R)-8-(5-溴-4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001032
采用N-[(1R)-8-(4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(295mg；0.79mmol)为起始材料，依据中间体12步骤2描述的程序制备标题化合物，为黄色泡沫(270mg，75％)。LC/MS：450.0，452.0。
中间体14：(3R)-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-3-胺盐酸盐
步骤1：2-(2-氟苯基)-1，3-二噻烷
Figure BDA0003339594180001033
在25℃下将BF3·Et2O(25mL，197mmol)加入2-氟-苯甲醛(10.0g，76.5mmol)和1，3-丙二硫醇(17.4g，153.1mmol)在DCM(100mL)中的溶液中。将所得混合物在25℃搅拌16小时。然后将其真空浓缩，并通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，5∶1)，获得标题化合物，为乳白色固体(16.0g，95％)。LC/MS(M+1)：215。
步骤2：4-(2-氟苯甲酰基)哌啶-4-醇
Figure BDA0003339594180001041
保持在-78℃和氮气气氛下，将2-(2-氟苯基)-1，3-二噻烷(10.0g，40.7mmol)在THF(5mL)中的溶液添加到LDA在THF(41mL，2M)中的溶液中。所得混合物在-20℃搅拌30分钟。然后在-78℃下滴加入4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(12.8g，61.1mmol)在THF(5mL)中的溶液。在-78℃搅拌1小时后，将反应混合物倒入NH4Cl饱和溶液(100mL)中，用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。有机层合并，用盐水(1x100ml)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶1)，获得4-[2-(2-氟苯基)-1，3-二噻烷-2-基]-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯，为乳白色固体(15.0g，78％)，LC/MS(M+1)：314。
将4-[2-(2-氟苯基)-1，3-二噻烷-2-基]-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(15.0g，47.9mmol)、TBAB(4.63g，14.4mmol)、吡啶氢溴酸盐(15.3g，95.8mmol)和吡啶(7.7mL，95.8mmol)在DCM(200mL)和H2O(40mL)中的溶液在25℃搅拌16小时。将所得混合物在减压下浓缩并通过硅胶快速色谱法纯化(DCM∶甲醇，1；1)，得到标题化合物，为一种褐色油(10.4g，97％)。LC/MS(M+1)：224。
步骤3：螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-3-酮
Figure BDA0003339594180001042
将2-氟苯甲4-(2-氟苯甲酰胺)(10.0g，40.3mmol)、t-BuOK(9.52g，80.6mmol)和二噁烷(100mL)中的溶液在120℃搅拌2小时。反应混合物冷却至室温，过滤并真空浓缩。通过硅胶快速色谱法(DCM∶甲醇，1∶1)纯化残留物，得到标题化合物，为褐色固体(8.0g，96％)。LC/MS(M1)：204。
步骤4：(S)-2-甲基-N-[1′-[(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-3-亚基]丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BDA0003339594180001051
将Ti(OEt)4(50mL)、(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(18.0g，140.7mmol)和螺[1-苯并呋喃-2，4-哌啶]-3-酮(5.00g，23.4mmol)的混合物在90℃搅拌16小时。然后用水(120mL)稀释并用乙酸乙酯(3x120mL)萃取。有机层合并，用盐水(1x100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶1)，获得标题化合物，为黄色固体(6.0g，60％)。LC/MS(M+1)：411。
步骤5：(S)-2-甲基-N-[(3S)-1′-[(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-3-基]丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BDA0003339594180001052
在-50℃下将NaBH4(1.87g，46.9mmol)加入到(S)-2-甲基-N-[1-[(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]螺[1-苯并呋喃-2，4-哌啶]-3-亚基]丙烷-2-亚磺酰胺(4.00g，9.38mmol)在THF(100mL)和H2O(2.00mL)中的溶液中。所得混合物在25℃搅拌2小时。然后在0℃下用饱和NH4Cl水溶液淬灭，并用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。有机层合并，用盐水(1x100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶1)，获得标题化合物，为黄色固体(2g，52％)。LC/MS(M+1)：413。
步骤6：(3R)-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-3-胺盐酸盐
Figure BDA0003339594180001053
将HCl/甲醇(10mL，6M)和(S)-2-甲基-N-[(3S)-1-[(S)一2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4-哌啶]-3-基]丙烷-2-亚磺酰胺(700mg，1.70mmol)的混合物在25℃搅拌2小时。所得混合物减压浓缩。过滤收集固体，并用乙醚(3x10mL)洗涤，得到标题化合物，为乳白色固体(300mg，85％)。LC/MS(M+1)：205。
中间体15：3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-3-胺
步骤1：3-(1，3-二噻烷-2-基)-2-氟吡啶
Figure BDA0003339594180001061
室温下向2-氟吡啶-3-甲醛(46.0g，349.3mmol)和1，3-丙二硫醇(43.8g，384.2mmol)在DCM(500mL)中的溶液中滴加入BF3·Et2O(29mL，107.6mmol，0.31当量，47％)。所得混合物在室温搅拌16小时。反应用饱和碳酸氢钠(200mL)淬灭并用乙酸乙酯(3x200mL)萃取。有机层合并，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，10∶1)，获得标题化合物，为白色固体(59g，63％)。LC/MS(M+1)：216。
步骤2：4-[2-(2-氟吡啶-3-基)-1，3-二噻烷-2-基]-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001062
保持在-78℃下，将LDA溶液(240mL，2M在THF中的溶液)滴加到3-(1，3-二噻烷-2-基)-2-氟吡啶(59.0g，220.3mmol)在THF(150mL)中的溶液中。所得混合物在-20℃搅拌60分钟，然后在-78℃下加入4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(92.4g，440.6mmol)在THF(30mL)中的溶液。将所得混合物在-78℃再搅拌1小时，并在0℃下用饱和NH4Cl溶液(500mL)淬灭。用乙酸乙酯(3x300mL)萃取。有机层合并，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，5∶1)，获得标题化合物，为白色固体(80g，87％)。LC/MS：359(M+H-56)。
步骤3：4-(2-氟吡啶-3-羰基)-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001063
把4-[2-(2-氟吡啶-3-基)-1，3-二噻烷-2-基]-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(90.0g，213.6mmol)、TBAB(21.7g，64.1mmol)、2l^[2]-三溴烷.吡啶(143.8g，427.2mmol)和吡啶(27.2mL，320.4mmol，1.50当量)在DCM(1L)和H2O(200mL)中的溶液在室温搅拌10小时。然后用DCM(3x300mL)萃取反应混合物。有机层合并，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，2∶1)，获得标题化合物，为黄色固体(50.0g，71％)。LC/MS：269(M+H-56)。
步骤4：3-氧代螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4-哌啶]-1-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001071
在室温下将叔丁醇钾(6.51g，55.1mmol)加入到4-(2-氟吡啶-3-羰基)-4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯(17.0g，50.1mmol)在二噁烷(170mL)中的溶液中。搅拌2小时后，将所得混合物倒入水(200mL)中并用乙酸乙酯(3x200mL)萃取。有机层合并，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯 5∶1)，获得标题化合物，为白色固体(8.5g，53％)。LC/MS：249(M+H-56)。
步骤5∶3-[[(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]亚氨基]螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001072
将3-氧代螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4-哌啶]-1-羧酸叔丁酯(8.50g，26.8mmol)、(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(20.5g，160.7mmol)和Ti(OEt)4(60mL)的混合物在90℃搅拌2小时。所得混合物冷却至室温，将其倒入水(150mL)中。过滤，滤液用乙酸乙酯(3x150mL)萃取。有机层合并，经无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，5∶1)，获得标题化合物，为黄色固体(11g，96％)。LC/MS(M+1)：408.0。
步骤6：3-[[(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]氨基]-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001073
在-50℃下边搅拌边将硼氢化钠(4.66g，117mmol)分批加入到3-[[(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]亚氨基]螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4-哌啶]-1-羧酸叔丁酯(10.0g，23.4mmol)在THF(100mL)和甲醇(100mL)中的溶液中。所得混合物在-50℃下搅拌1小时，并用水(10mL)淬灭。减压除去溶剂，将混合物用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。有机层合并，用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，为黄色固体(10g，62％)。LC/MS(M+1)：410.0。
步骤7：3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-3-胺
Figure BDA0003339594180001081
保持在0℃下，将HCl(气态)在1，4-二噁烷(100mL)中的溶液滴加到3-[[(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]氨基]-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-羧酸叔丁酯(10.0g，24.4mmol)在DCM(60mL)中的溶液中。在室温下搅拌1小时后，将所得混合物减压浓缩。把获得的盐酸盐加载到已用甲醇预润湿的SiliaBond丙磺酸(SCX-2)树脂上，用甲醇洗脱直至检测不到HCl。然后用在甲醇中的7M氨水溶液洗掉游离胺。真空浓缩洗脱液，得到标题化合物，为一种橙色油(4.0g，77.7％)。LC/MS(M+1)：206。
中间体16：(4S)-4，6-二氢螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑-5，4′-哌啶]-4-胺
步骤1：(4Z)-2-氯-4-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]亚氨基}-4，6-二氢螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑-5，4′-哌啶]-1′-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001082
2-氯-4-氧代-6H-螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑-5，4-哌啶]-1-羧酸叔丁酯(300mg，0.845mmol)和(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(647mg，5.07mmol)在Ti(OEt)4(3.39g，14.1)中的混合物在90℃和氮气气氛下搅拌19小时。然后加入水(50mL)淬灭反应并过滤。滤液用乙酸乙酯(3x150mL)萃取。有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶0至1∶1的梯度)，获得标题化合物，为黄色固体(280mg，74％)。LC/MS(M+1)：446.1。
步骤2：(4S)-2-氯-4-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]氨基}-4，6-二氢螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑-5，4′-哌啶]-1′-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001091
保持在-50℃和氩气气氛下，将硼氢化钠(70mg，1.78mmol)分批加入(4Z)-2-氯-4-[[(R)-2-乙基丙烷-2-亚磺酰基]亚氨基]-6H-螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑-5，4-哌啶]-1-羧酸叔丁酯(400mg，0.892mmol)在THF(4.4mL)和水(1.3mL)中的溶液中。所得混合物在-50℃和氩气气氛下搅拌2小时，加入水(50mL)淬灭并过滤。滤液用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶0至0∶1的梯度)，获得标题化合物，为黄色固体(200mg，50％)，LC/MS (M+1)：448.1。
步骤3：(4S)-4-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]氨基}-4，6-二氢螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑-5，4′-哌啶]-1′-羧酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001092
保持在100℃和氢气气氛下，(4S)-2-氯-4-[[(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]氨基]-4，6-二氢螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑-5，4-哌啶]-1-羧酸叔丁酯(0.20g，0.446mmol)、Pd/C(0.10g，0.094mmol，10％)在甲醇(10mL)中的悬浮液搅拌12小时。混合物通过硅藻土垫过滤，滤液浓缩，得到标题化合物，为黄色固体(130mg，66％)。LC/MS(M+1)：414.2。
步骤4：(4S)-4，6-二氢螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑-5，4′-哌啶]-4-胺
Figure BDA0003339594180001093
将(4S)-4-[[(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]氨基]-4，6-二氢螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑-5，4-哌啶]-1-羧酸叔丁酯(150mg，0.337mmol)在甲醇/HCl(4mL，26mmol，20％)中的溶液在室温搅拌30分钟。减压除去溶剂，将残留物加载到已用甲醇预润湿的SiliaBond丙磺酸(SCX-2)树脂上，用甲醇洗脱树脂并用甲醇/NH3(7M)洗掉游离胺。减压除去甲醇后得到标题化合物，为乳白色固体(65mg，89％)。LC/MS(M+1)：210.1。
化合物1：2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺
步骤1：(1-(4-氰基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001101
(1-(5-溴-4-氰基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(中间体1，2g，5.06mmol)、2，3-二氯苯基硼酸(0.967g，5.06mmol)和碳酸铯(4.1g，12.6mmol)在二噁烷/水混合物(15∶5mL)中的溶液用氮气脱气3分钟。加入Pd(PPh3)4(0.58g，0.51mmol)，将反应混合物在惰性气氛和100℃下加热过夜。将反应混合物溶解在乙酸乙酯(50mL)中并用水(30mL)和盐水(30mL)洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，100∶0至80∶20的梯度)，获得标题化合物，为白色固体(1.6g，70％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：8.68(S，1H)，8.80(dd，J＝2.0，7.6Hz，1H)，4.56(m，2H)，6.69(brS，1H)，4.06(m，2H)，3.45(m，2H)，2.12(m，2H)，1.48(m.2H)，1.40(S，9H)，1.27(S，3H)。
步骤2：N-{1-[4-氨基甲酰基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001102
在0℃下向(1-(4-氰基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(0.2g，0.432mmol)在DMSO(8mL)中的溶液加入过氧化氢(0.4mL，30％水溶液)和碳酸钾(0.119g，0.86mmol)。反应混合物在室温搅拌1小时，然后用水淬灭并用乙酸乙酯(2x20mL)萃取。有机层合并，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物(0.18g，87％)。LC/MS(M+1)：480.2。
步骤3：2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺盐酸盐
Figure BDA0003339594180001111
保持在0℃下，将HCl溶液(2mL，4M在二噁烷中的溶液)加入N-{1-[4-氨基甲酰基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯(180mg，0.375mmol)在无水二氯甲烷(5mL)中的溶液中。反应混合物在室温搅拌l小时。然后在减压下浓缩，得到标题化合物，为白色固体(75mg，50％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：8.36(S，1H)，8.14(m，4H)，7.59(m，2H)，7.37(t，J＝9.2Hz，1H)，7.26(d，J＝7.2Hz，1H)，4.40(m，2H)，3.52(m，2H)，1.76(m，4H)，1.41(S，3H)。
化合物2：6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(3-氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺
步骤1：N-{1-[4-氨基-6-氨基甲酰基-5-(3-氯苯基)嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001112
在惰性气氛下，将N-[1-(4-氨基-5-溴-6-氨基甲酰基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(中间体2，250mg，0.41mmol)、(3-氯苯基)硼酸(137mg，0.83mmol)、Pd(PPh3)4(34mg，0.03mmol)和碳酸钠(84mg，0.75mmol)在水(2mL)和二噁烷(6mL)中的溶液在130℃加热30分钟。减压除去溶剂，粗产物通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，50∶50)，得到标题化合物，为黄色固体(110mg，47％)。LC/MS(M+1)：461.2。
步骤2：6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(3-氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺
Figure BDA0003339594180001113
N-[1-[4-氨基-6-氨基甲酰基-5-(3-氯苯基)嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.37mmol)和HCl(0.6mL，1.25M在甲醇中的溶液)在甲醇(6mL)中的溶液在室温搅拌2小时。减压除去溶剂，粗产物通过制备型HPLC纯化HPLC(XBridge Prep C18OBD柱，5μm，19*150mm；流动相：水(10mM NH4HCO3+0.1％NH4OH)和ACN(8分钟梯度：18％ACN升至48％)，得到标题化合物，为白色固体(31mg，23％)。熔点：118-120℃。1H NMR(300MHz，CD3OD)；7.43-7.27(m，2H)，7.28-7.20(m，1H)，7.16(m，1H)，4.07-3.95(m，2H)，3.70(m，2H)，1.58(m，4H)，1.25(d，J＝1.3Hz，3H)。LC/MS(M+1)：361.3。
化合物3：6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺
步骤1：6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-腈双三氟乙酸酯
Figure BDA0003339594180001121
{1-[4-氨基-6-氰基-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-2-基]-4-甲基-哌啶-4-基}-氨基甲酸叔丁酯(中间体5；34mg；0.07mmol)和TFA(0.34mL)在DCM(0.68mL)中的溶液在室温搅拌1小时。然后减压除去溶剂，通过与甲苯共蒸发除去过量的TFA，得到标题化合物，为白色泡沫(42mg，97％)。LC/MS(M+1)：377.1。
步骤2：6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺
Figure BDA0003339594180001122
6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-腈双三氟乙酸酯(35mg；0.06mmol)、氢氧化钠(0.1mL，6M水溶液，0.58mmol)和过氧化氢(30％重量，70ul；0.58mmol)在DMF(1.40mL)中的溶液在微波反应器中于100℃加热1小时。两次加入过氧化氢和氢氧化钠(等量)，将反应混合物再次在100℃加热至获得完全转化。反应混合物通过硅藻土垫过滤，然后通过制备型HPLC纯化(XBridge Prep C-18 OBD 10uM，30x250，水(0.1％氢氧化铵)和ACN，15分钟梯度：30至80％)，得到标题化合物，为白色无定形泡沫(两种阻转异构体的混合物，12mg，48％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)7.70(S，1H)，7.51(dd，J＝8.1，1.6Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.14(S，1H)，7.10(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，6.05(S，2H)，3.99-3.87(m，2H)，3.68-3.54(m，2H)，1.47-1.31(m，4H)，1.08(S，3H)。LC/MS(M+1)：395.2。
化合物26和27：(4M)-6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺和(4P)-6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺
Figure BDA0003339594180001131
通过SFC((R，R)WHELK-01 4.6x150mm，5um，乙醇+0.1％DEA：CO2，10-50％)分离阻转异构体3(200mg)的混合物。
第一洗脱异构体(化合物26)：白色固体，76mg，RT＝3.42min，ed＝99.7％，1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：7.75-7.68(m，1H)，7.49(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.27(t，J＝7.8Hz，1H)，7.15(S，1H)，7.08(dd，J＝7.7，1.6Hz，1H)，6.07(S，2H)，3.96-3.85(m，2H)，3.68-3.53(m，2H)，1.59(brS，1H)，1.37(q，J＝4.9，4.4Hz，4H)，1.07(S，3H)，熔点：126-128℃。
第二洗脱异构体(化合物27)：白色固体，76mg，RT＝3.79min，ed＝98.2％，1H NMR(300MHz，DMSO-d6)7.71(S，1H)，7.49(dd，J＝8.1，1.5Hz，1H)，7.27(t，J＝7.8Hz，1H)，7.16(S，1H)，7.08(dd，J＝7.7，1.6Hz，1H)，3.91(d，J＝13.6Hz，2H)，3.61(dt，J＝13.1，6.4Hz，2H)，1.61(brS，2H)，1.46-1.34(m，4H)，1.07(S，3H)，熔点：130-132℃。
化合物4：6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(3-氟-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺
Figure BDA0003339594180001132
采用N-[1-(4-氨基-5-溴-6-氨基甲酰基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(中间体2，500mg，1.1mmol)和(3-氟苯基)硼酸(243mg，1.7mmol)为起始材料，依据以上描述的程序制备标题化合物，为乳白色固体。1H NMR(400Mz，DMSO-d6)7.61(S，1H)，7.37(q，J＝7.6Hz，1H)，7.16(S，1H)，7.09(t，J＝8.6Hz，1H)，7.03-6.94(m，2H)，6.00(brS，2H)，3.90-3.90(m，2H)，3.62-3.45(m，2H)，1.75(brS，1H)，1.39-1.36(m，4H)，1.09(S，3H)。LC/MS(M+1)：345.2。
化合物5：6-氨基-2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001141
采用((3S，4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸-4-基)-氨基甲酸叔丁酯(WUXI，130mg，0.5mmol)和6-氨基-5-(2，3-二氯-苯基)-2-甲磺酰基-嘧啶-4-腈(中间体5，110mg，0.3mmol)为起始材料，依据以上描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(30mg，20％，3步骤s)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)7.71(S，1H)，7.51(dd，J＝8.0，1.5Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.15(S，1H)，7.10(dd，J＝7.6，1.5Hz，1H)，6.08(S，2H)，4.12(m，3H)，3.68(d，J＝8.4Hz，1H)，3.49(d，J＝8.4Hz，1H)，3.47-3.32(m，2H)，2.89(d，J＝5.2Hz，1H)，1.75-1.63(m，1H)，1.63-1.52(m，1H)，1.52-1.38(m，2H)，1.38-1.20(m，2H)，1.08(d，J＝6.4Hz，3H)。LC/MS(M+1)：451.1。
化合物6：6-氨基-2-{9-氨基-3-氮杂双环[3.3.1]壬烷-3-基}-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001142
采用N-(3-氮杂双环[3.3.1]壬烷-9-基)氨基甲酸叔丁酯(Achemblock)和6-氨基-5-(2，3-二氯-苯基)-2-甲磺酰基-嘧啶-4-腈(中间体4)为起始材料，依据以上描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(异构体混合物-1：1)。LC/MS(M+1)：421.3。
化合物7：6-氨基-2-[(1R)-1-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001151
采用(R)-(8-氮杂-螺[4.5]癸-1-基)-氨基甲酸叔丁酯(WUXI)和6-氨基-5-(2，3-二氯-苯基)-2-甲磺酰基-嘧啶-4-腈(中间体4)为起始材料，依据以上描述的程序制备标题化合物，为白色粉末。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)7.50(dd，J＝8.1，1.6Hz，1H)，7.28(t，J＝7.9Hz，1H)，7.09(dd，J＝7.6，1.5Hz，1H)，4.44(t，J＝12.2Hz，2H)，3.00(q，J＝10.4Hz，2H)，2.65(t，J＝7.3Hz，1H)，1.91-1.71(m，2H)，1.69-1.56(m，1H)，1.56-1.42(m，3H)，1.42-1.25(m，2H)，1.25-1.08(m，2H)。LC/MS(M+1)：435.1。
化合物8：6-氨基-2-[(1R)-1-氨基-3，3-二氟-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001152
采用((R)-3，3-二氟-8-氮杂-螺[4.5]癸-1-基)-氨基甲酸叔丁酯(WUXI)和6-氨基-5-(2，3-二氯-苯基)-2-甲磺酰基-嘧啶-4-腈(中间体4)为起始材料，依据以上描述的程序制备标题化合物，为白色粉末。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)d7.72(S，1H)，7.51(dd，J＝8.0，1.5Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.20-7.13(m，1H)，7.10(dt，J＝7.6，1.4Hz，1H)，6.09(S，2H)，4.54(t，J＝16.4Hz，2H)，3.13-2.84(m，3H)，2.47-2.28(m，2H)，2.14-1.85(m，2H)，1.74-1.43(m，4H)，1.30(dd，J＝27.6，13.3Hz，2H)。LC/MS(M+1)：471.1。
化合物9：6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸甲基酰胺
Figure BDA0003339594180001161
在氮气气氛下，将6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-羧酸(中间体6，110mg，0.27mmol)和SO2Cl2(0.5mL)在甲醇(5mL)中的溶液在80℃加热4小时。减压除去溶剂，将残留物重新溶解在2M甲胺在THF(2mL)中的溶液中，并置于密封反应器中在90℃加热16小时。减压除去溶剂，粗产物通过制备型HPLC纯化(XBridge ShieldRP18 OBD柱，5μm，19*150mm；水(10mM NH4HCO3)：ACN，8分钟梯度：38％至68％)，得到标题化合物，为白色固体(12mg，24％)。熔点：147-149℃；δ1H NMR(300MHz，DMSO-d6)8.32(d，J＝5.0Hz，1H)，7.49(dd，J＝8.1，1.5Hz，1H)，7.26(t，J＝7.9Hz，1H)，7.05(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，6.07(S，2H)，4.02-3.92(m，2H)，3.64-3.53(m，2H)，2.71(d，J＝1.5Hz，3H)，1.44-1.39(m，6H)，1.07(S，3H)。LC/MS(M+1)：409.1。
化合物10：6-氨基-2-[6-氨基-7-羟基-1-(丙烷-2-基)-2-氮杂螺[3.4]辛烷-2-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001162
采用外消旋-n-[(6R，7r)-7-羟基-1-(丙烷-2-基)-2-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基]氨基甲酸叔丁酯盐酸盐(烯胺)和6-氨基-5-(2，3-二氯-苯基)-2-甲磺酰基-嘧啶-4-腈(中间体4)为起始材料，依据以上描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(两种非对映异构体的混合物)。LC/MS(M+1)：465.2。
化合物11：6-氨基-2-[8-(氨基甲基)-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001171
采用n-((6-氮杂螺[3.4]辛烷-8-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(烯胺)和6-氨基-5-(2，3-二氯-苯基)-2-甲磺酰基-嘧啶-4-腈(中间体4)为起始材料，依据以上描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(异构体的混合物)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)d7.70(S，1H)，7.54-7.47(m，1H)，7.32-7.23(m，1H)，7.17(S，1H)，7.13-7.05(m，1H)，6.03(S，2H)，3.76-3.38(m，4H)，2.84(d，J＝12.0Hz，1H)，2.41-2.29(m，1H)，2.28-1.64(m，7H)。LC/MS(M+1)：421.2。
化合物12：6-氨基-2-[3-(氨基甲基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001172
采用n-((8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(烯胺)和6-氨基-5-(2，3-二氯-苯基)-2-甲磺酰基-嘧啶-4-腈(中间体4)为起始材料，依据以上描述的程序制备标题化合物，为白色粉末。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)d 7.49(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.29(t，J＝7.8Hz，1H)，7.16(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，4.80-4.74(m，2H)，2.48(d，J＝6.7Hz，2H)，2.15-1.95(m，3H)，1.84(d，J＝7.5Hz，2H)，1.73-1.62(m，2H)，1.48(td，J＝13.5，2.9Hz，2H)。LC/MS(M+1)：421.2。
化合物13和14：6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-2-[(1R，7S，11s)-11-氨基-9-氮杂双环[5.3.1]十一烷-9-基]嘧啶-4-甲酰胺和6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-2-[(1R，7S，11r)-11-氨基-9-氮杂双环[5.3.1]十一烷-9-基]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001181
采用n-(9-氮杂双环[5.3.1]十一烷-11-基)氨基甲酸叔丁酯草酸(烯胺)和6-氨基-5-(2，3-二氯-苯基)-2-甲磺酰基-嘧啶-4-腈(中间体4)为起始材料，依据以上描述的程序制备标题化合物，为两种非对映异构体的混合物。通过制备型HPLC(XBridge Prep C-18OBD 10uM，30x250.30-80％ACN/水/(0.1％氢氧化铵)/ACN，15分钟梯度：30％至80％)分离两种异构体。
第一洗脱异构体(任意分配)：6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-2-[(1R，7S，11s)-11-氨基-9-氮杂双环[5.3.1]十一烷-9-基]嘧啶-4-甲酰胺；白色粉末(8.2mg，17％)，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)7.66(S，1H)，7.51(dd，J＝8.0，1.5Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.23-7.08(m，2H)，6.10(S，2H)，4.81(dd，J＝13.3，6.3Hz，2H)，3.09(t，J＝6.0Hz，1H)，2.85(dd，J＝13.5，4.5Hz，2H)，2.02(d，J＝3.1Hz，1H)，1.95-1.73(m，3H)，1.73-1.56(m，3H)，1.51(dt，J＝14.9，7.5Hz，2H)，1.29(q，J＝12.9，12.5Hz，2H)，1.19-1.00(m，1H)。LC/MS(M+1)：449.5。
第二洗脱异构体(任意分配)：6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-2-[(1R，7S，11r)-11-氨基-9-氮杂双环[5.3.1]十一烷-9-基]嘧啶-4-甲酰胺，白色粉末(4.7mg，10％)，1H NMR(400MHz，甲醇-d4)7.48(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.29(t，J＝7.8Hz，1H)，7.17(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，4.59-4.52(m，2H)，3.47-3.42(m，1H)，3.28-3.24(m，1H)，2.01-1.90(m，2H)，1.88-1.71(m，4H)，1.61-1.39(m，4H)，1.37-1.19(m，2H)。LC/MS：449.2。
化合物15：2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)-6-羟基嘧啶-4-甲酰胺
步骤1：N-{1-[4-氨基-6-氨基甲酰基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001182
将N-[1-[4-氨基-6-氰基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸酯(中间体5，371mg，0.78mmol)在乙醇(5mL)和NaOH水溶液(0.8mL，2.2M溶液)在100℃加热16小时。反应混合物冷却至室温，并加入3M HCl溶液将pH值调至7。所得溶液用乙酸乙酯(30mL)萃取，有机层合并，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(乙酸乙酯∶甲醇，100∶0至80∶20的梯度)，获得标题化合物，为乳白色固体(180mg，49％)。LC/MS：495.1。
步骤2：2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)-6-羟基嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001191
将N-[1-[4-氨基-6-氨基甲酰基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(60mg，0.122mmol)和NaNO2(88mg，1.3mmol)在THF(5mL)、水(3mL)和浓HCl(1mL)中的溶液在0℃搅拌4小时。减压除去溶剂，残留物用HCl水溶液(5M，2mL)稀释，并在室温下搅拌30分钟。然后将其倒入冰中并用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。有机层合并，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过制备型HPLC纯化(XBridge OBD C18柱，19*250mm，5um；水(10mM NH4HCO3)和ACN，8分钟梯度：58％至80％)，得到标题化合物，为黄色固体(4mg，8％)。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)7.48-7.47(m，1H)，7.45-7.44(m，1H)，7.28-7.23(m，1H)，4.41-4.20(m，2H)，3.51-3.38(m，2H)，1.92-1.81(m，4H)，1.54-1.50(m，3H)，.LC/MS(M+1)：396.1。
化合物16：2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-6-氯-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺
Figure BDA0003339594180001192
保持在0℃下，将NaNO2(197mg，2.7mmol)在水(1mL)中的溶液加入到N-[1-[4-氨基-6-氰基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(中间体5，440mg，0.90mmol)在HCl水溶液(6M solution，5mL，29.6mmol)。反应混合物在0℃搅拌30分钟，然后在室温搅拌4小时。将反应混合物倒入冰中，加入NaOH水溶液(2M)将pH值调至9。用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。有机层合并，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，50∶50))，获得黄色固体(210mg)，将该固体重新溶解在ACN(4mL)和NaOH水溶液(0.5M，4mL)中。反应混合物在70℃加热1小时。用水(15mL)稀释，然后用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。有机层合并，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，50∶50)，得到标题化合物，为黄色固体(80mg，51％)。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)7.53(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.30(t，J＝7.9Hz，1H)，7.17(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，4.09-4.01(m，2H)，3.89(d，J＝5.5Hz，2H)，1.65(qdd，J＝13.2，7.5，4.3Hz，4H)，1.27(S，3H)。LC/MS(M+1)：415.0。
化合物17：6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸(2-羟基-乙基)-酰胺
Figure BDA0003339594180001201
采用6-氨基-2-(4-[[(叔丁氧基)羰基]氨基]-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-羧酸(中间体7)和2-氨基乙-1-醇为起始材料，依据以上描述的程序制备标题化合物，为白色固体。熔点：125-127℃.1H NMR(400MHz，甲醇-d4)7.54-7.47(m，1H)，7.31(t，J＝7.8Hz，1H)，7.18-7.12(m，1H)，4.08-3.97(m，2H)，3.82-3.71(m，2H)，3.62-3.55(m，2H)，3.30(d，J＝5.6Hz，2H)，1.68-1.53(m，3H)，1.25(S，3H)。LC/MS(M+1)：439.2。
化合物18：2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺
步骤1：N-{1-[4-氰基-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001202
在氮气气氛下，将N-[1-(5-溴-4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(中间体8，2.3g，5.5mmol)、(2，3-二氯苯基)硼酸(2.2g，11mmol)、Pd(PPh3)4(1.34g，1.1mmol)和NaHCO3(2.43g，27.4mmol)在二噁烷(9mL)和水(3mL)中的混合物置于密封反应器中，在110℃加热2小时。减压除去溶剂，粗产物通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，100∶0至50∶50的梯度)，得到标题化合物，为黄色固体(3g，100％)。LC/MS(M+1)：476.4。
步骤2：2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺
Figure BDA0003339594180001211
在氮气气氛下，将N-[1-[4-氰基-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.199mmol)在浓HCl(3mL)中的溶液在室温搅拌16小时。粗的混合物直接通过制备型HPLC纯化(XBridge Prep OBD C18柱，30*150mm 5um；水(10mM NH4HCO3)和ACN，8分钟梯度：32％至62％)。分离标题化合物，为黄色固体(25mg，31％)。熔点：103-105℃。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)9.38(S，1H)，8.07(d，J＝1.5Hz，1H)，7.77(d，J＝3.1Hz，1H)，7.72(d，J＝3.1Hz，1H)，7.64(d，J＝1.8Hz，1H)，4.46(d，J＝12.7Hz，2H)，3.67(S，2H)，2.03(d，J＝13.7Hz，4H)，1.58(S，3H)。LC/MS(M+1)：394.1。
化合物30和31：(4M)-2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺和(4P)-2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001212
通过制备型HPLC(柱：CHIRALPAK IG，2x25cm，5um，己烷+8mmol/L NH3.甲醇：乙醇-50％)从化合物18(250mg)分离阻转异构体的混合物。
第一洗脱异构体(化合物30)：白色固体，60mg，RT＝6.96min，1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：7.91(S，1H)，7.56(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.40-7.28(m，2H)，7.18(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，4.01(d，J＝13.7Hz，2H)，3.70(dt，J＝12.8，6.3Hz，2H)，1.98(S，4H)，1.42(d，J＝5.4Hz，4H)，1.10(S，3H)；LC/MS(M+1)：394.1，熔点：160-162℃。
第二洗脱异构构体(化合物31)：白色固体，40mg，RT＝14.5min，1H NMR(300MHz，DMSO-d6)：7.91(S，1H)，7.56(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.40-7.29(m，2H)，7.18(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，4.03(d，J＝13.4Hz，2H)，3.68(dt，J＝13.1，6.4Hz，2H)，1.98(S，3H)，1.78(d，J＝9.2Hz，2H)，1.41(d，J＝5.3Hz，4H)，1.09(S，4H)。LC/MS(M+1)：394.1，熔点：190-192℃。
化合物19：2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-6-氯-5-(3-氟-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺
步骤1：N-{1-[4-氨基-6-氨基甲酰基-5-(3-氟苯基)嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001221
采用N-[1-(4-氨基-5-溴-6-氨基甲酰基嘧啶-2-基)-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(中间体2)和(3-氟苯基)硼酸为起始材料，依据化合物2描述的程序制备标题化合物，为褐色固体。LC/MS(M+1)：445.2。
步骤2：2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-6-氯-5-(3-氟-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺
Figure BDA0003339594180001222
采用N-[1-[4-氨基-6-氨基甲酰基-5-(3-氟苯基)嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯为起始材料，依据化合物16描述的程序制备标题化合物。分离标题化合物，为白色固体。熔点：110-112℃.1H NMR(400MHz，甲醇-d4)7.53-7.39(m，1H)，7.42-7.36(m，1H)，7.16-6.99(m，5H)，4.55-4.45(m，3H)，3.54(ddd，J＝14.1，9.7，3.9Hz，3H)，2.05(S，1H)，2.00-1.87(m，1H)，1.85(ddd，J＝18.0，8.3，3.8Hz，5H)，1.54(S，4H)。LC/MS(M+1)：364.0。
化合物20：6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸羟基酰胺
步骤1：甲基6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-羧酸酯
Figure BDA0003339594180001231
将6-氨基-2-(4-[[(叔丁氧基)羰基]氨基]-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-羧酸(中间体7，40mg，0.073mmol)和SOCl2(1mL，13.1mmol)在甲醇(4mL)中的溶液在70℃搅拌2小时。然后减压除去溶剂，得到标题化合物，为褐色固体(38mg，96％)。LC/MS(M+1)：410.2。
步骤2：6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸羟基酰胺
Figure BDA0003339594180001232
将6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-羧酸甲酯(33mg，0.1mmol)和NH2OH(20μl，50％水溶液)在甲醇(1mL)中在溶液在室温搅拌16小时。减压除去溶剂，粗产物通过制备型HPLC纯化(XBridge Shield RP18 OBD柱，5um，19*150mm：水(10mM NH4HCO3)和ACN，8分钟梯度：25％至55％)，得到标题化合物，为白色固体(9mg，33％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)7.56-7.49(m，2H)，7.29(t，J＝7.9Hz，2H)，7.12(S，1H)，7.12(d，J＝7.8Hz，1H)，6.10(S，4H)，3.91(d，J＝12.6Hz，4H)，3.64(S，5H)，1.39(d，J＝9.5Hz，10H)，1.24(S，1H)，1.09(S，6H)。LC/MS(M+1)：411.1。
化合物21：6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰肼
步骤1：N-{1-[4-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-6-(肼羰基)-嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基}氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001241
将6-氨基-2-(4-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-羧酸(中间体7，50mg，0.084mmol)、HATU(50mg，0.126mmol)、DIEA(34mg，0.25mmol)和肼(6ul)在DMF(5.0mL)中的溶液在80℃搅拌24小时。反应混合物用水/冰(25mL)稀释并用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。有机层合并，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，90∶10)，获得标题化合物，为黄色固体(40mg，88％)。
步骤2：6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰肼
Figure BDA0003339594180001242
将N-[1-[4-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-6-(肼羰基)-嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(40mg，0.074mmol)在HCl(2mL，4N在二噁烷中的溶液)中的溶液在室温搅拌4小时。然后减压除去溶剂，粗产物通过制备型HPLC纯化(XBridge Prep OBD C18柱，30x150mm 5um；水(10mM NH4HCO3)和ACN，8分钟梯度：30％至60％)。分离标题化合物，为白色固体(4.3mg，13％)。熔点：171-173℃。1H NMR(300MHz，甲醇-d4)7.50(d，J＝7.8Hz，1H)，7.30(t，J＝7.8Hz，1H)，7.15(d，J＝7.5Hz，1H)，4.05(dt，J＝13.9，5.2Hz，2H)，3.69(ddd，J＝13.1，7.7，4.3Hz，2H)，1.69-1.50(m，4H)，1.26(S，3H)。LC/MS(M+1)：410.1。
化合物22：2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-6-氟-5-(3-氟-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺
Figure BDA0003339594180001243
将N-[1-[4-氨基-6-氨基甲酰基-5-(3-氟苯基)嘧啶-2-基]-4-甲基哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯(在步骤1用化合物4制备，179mg，0.396mmol)、苯基硼酸(3.0mL)、NaNO2(139mg，1.9mmol)和KF(117mg，1.9mmol)的混合物在0℃搅拌1小时。然后加入NH4Cl水溶液(10mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。有机层合并，用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤并浓缩。粗产物(50mg)通过制备型HPLC纯化(XBridge Prep OBD C18柱，19x250mm，5um；水(10mM NH4HCO3)和ACN，8分钟梯度：30％至45％)，获得标题化合物，为白色固体(8mg，5％)。熔点：90-92℃。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)7.45-7.35(m，1H)，7.17-7.05(m，3H)，4.03(S，2H)，3.85(S，2H)，1.72-1.55(m，4H)，1.28(S，3H)。LC/MS(M+1)：348.1。
化合物23：6-氨基-2-[4-(氨基甲基)-8-氧杂-2-氮杂螺[4.5]癸烷-2-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001251
采用6-氨基-5-(2，3-二氯-苯基)-2-甲磺酰基-嘧啶-4-腈(中间体4)和叔丁基n-((8-氧杂-2-氮杂螺[4.5]癸烷-4-基)甲基)氨基甲酸酯(烯胺)为起始材料，依据以上描述的程序制备标题化合物，为白色粉末。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)7.78(S，1H)，7.51(dd，J＝8.1，1.6Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.18(S，1H)，7.10(dt，J＝7.6，1.5Hz，1H)，6.04(S，2H)，3.84-3.64(m，4H)，2.72-2.61(m，2H)，1.98-1.84(m，2H)，1.77(dd，J＝18.1，6.4Hz，2H)，1.55(t，J＝10.6Hz，2H)，1.36(t，J＝16.2Hz，3H)。LC/MS(M+1)：451.3。
化合物24：2-[3a-(氨基甲基)-八氢-1H-异吲哚-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001252
采用6-氨基-5-(2，3-二氯-苯基)-2-甲磺酰基-嘧啶-4-腈(中间体4)和叔丁基n-(八氢-1h-异吲哚-3a-基甲基)-氨基甲酸酯(烯胺)为起始材料，依据以上描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(异构体的混合物)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)7.68(S，1H)，7.51(dd，J＝8.1，1.6Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.16(S，1H)，7.13-7.07(m，1H)，6.00(S，2H)，3.71-3.35(m，4H)，2.64(S，1H)，2.10-1.99(m，1H)，1.66-1.22(m，9H)。LC/MS(M+1)：435。
化合物25：2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(3-氟苯基)-6-羟基嘧啶-4-甲酰胺盐酸盐
Figure BDA0003339594180001261
将2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-6-氟-5-(3-氟苯基)-嘧啶-4-甲酰胺(实施例36，50mg，0.072mmol)在浓HCl(1.0mL)和水(2.0mL)中的融入在50℃搅拌2小时。所得混合物在减压下浓缩，并通过制备型HPLC直接纯化(XBridge Prep OBD C18柱，19*250mm，5um；水(10mM NH4HCO3和ACN，8分钟梯度：58％至80％)，得到标题化合物，为白色固体(8.6mg，31％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)7.63(S，1H)，7.33-7.23(m，2H)，7.12-7.02(m，2H)，7.04-6.96(m，1H)，4.06(S，1H)，3.81(S，2H)，3.61(S，2H)，1.48(S，4H)，1.17(S，3H)。LC/MS(M+1)：346.1。
化合物66和67：(5P)-6-氨基-2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺和(5M)-6-氨基-2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
步骤1：N-[(3S，4S)-8-[4-氨基-6-氰基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-2-基]-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001262
将6-氨基-5-(2，3-二氯-苯基)-2-甲磺酰基-嘧啶-4-腈(中间体4，1.50g；4.37mmol)、N-[(3S，4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯(WUXI；1.77g；6.56mmol)、DIEA(2.27mL)在无水DMSO(60mL)中的溶液在70℃搅拌6小时。然后将反应混合物用水(300mL)和乙酸乙酯(800mL)稀释。有机层用水(2x300mL)和盐水(300mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩。用快速色谱法纯化(己烷∶乙酸乙酯，梯度：95∶5至20∶80)，获得标题化合物，为白色固体(2.07g，89％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：7.72(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.45(t，J＝7.8Hz，1H)，7.39(dd，J＝7.7，1.7Hz，1H)，6.97(d，J＝10.5Hz，1H)，4.17(p，J＝6.2Hz，1H)，3.89(dd，J＝10.6，5.1Hz，1H)，3.86-3.75(m，1H)，3.75-3.61(m，3H)，3.57-3.43(m，2H)，1.68-1.50(m，3H)，1.50-1.31(m，10H)，1.03(d，J＝6.3Hz，3H)；LC/MS(M+1)：533.1。
步骤2：N-[(3S，4S)-8-[4-氨基-6-氨基甲酰基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-2-基]-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-基]氨基甲酸酯
Figure BDA0003339594180001271
将N-[(3S，4S)-8-[4-氨基-6-氰基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-2-基]-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯(中间体4；2.0g；3.75mmol)、碳酸钾(2.59g；18.75mmol)和过氧化氢30％重量(7.65ml；67.49mmol)在DMSO(50mL)中的溶液在50℃搅拌4.5小时。反应混合物用乙酸乙酯(800mL)稀释，并用硫代硫酸钠五水合物(50.25g；202.46mmol)在水(500mL)中的溶液洗涤。有机层用水(2x400mL)和盐水(400mL)，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，为白色固体(2.2g，95.8％)。1H NMR(Bruker 400MHz，DMSO-d6)：7.73(S，1H)，7.51(dd，J＝8.0，1.5Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.14(S，1H)，7.10(dd，J＝7.4，1.2Hz，1H)，6.97(d，J＝10.5Hz，1H)，6.08(S，2H)，4.22-4.11(m，1H)，3.96-3.78(m，2H)，3.78-3.64(m，3H)，3.61-3.47(m，2H)，1.69-1.50(m，4H)，1.40(S，9H)，1.03(d，J＝6.3Hz，3H)。LC/MS(M+1)：551.2。
步骤3：(5P)-6-氨基-2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺和(5M)-6-氨基-2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001281
将N-[(3S，4S)-8-[4-氨基-6-氨基甲酰基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-2-基]-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯(2.20g；3.59mmol；1.00eq.)在二氯甲烷(44mL)和TFA(22mL)中的溶液浓度在室温搅拌1小时。加入甲苯，混合物减压浓缩。重复操作两次。粗残留物(3.3g)通过制备型SFC纯化(柱：Amylose2，250x21mm，5微米，甲醇+20mMNH4OH：CO2；45-55)。
第一洗脱馏分(化合物67)(5M)-6-氨基-2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺：白色无定形固体；637mg(40％)。RT＝4.04min；ed＝100％；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：7.71(S，1H)，7.51(dd，J＝8.1，1.5Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.15(S，1H)，7.10(dd，J＝7.6，1.5Hz，1H)，6.08(S，2H)，4.16-3.99(m，3H)，3.68(d，J＝8.4Hz，1H)，3.50(d，J＝8.4Hz，1H)，3.48-3.25(m，4H)，2.91(d，J＝5.1Hz，1H)，1.77-1.34(m，6H)，1.09(d，J＝6.4Hz，3H)；LC/MS(M+1)：451.0。
第一洗脱馏分(化合物66)(5P)-6-氨基-2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺：白色固体；603mg(37％)。RT＝4.53min；ed＝95％；1H NMR(Bruker 400MHz，DMSO-d6)：7.72(S，1H)，7.51(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.15(S，1H)，7.10(dd，J＝7.7，1.6Hz，1H)，6.08(S，2H)，4.15-3.99(m，3H)，3.68(d，J＝8.4Hz，1H)，3.50(d，J＝8.4Hz，1H)，3.48-3.34(m，4H)，2.90(d，J＝5.2Hz，1H)，1.75-1.63(m，1H)，1.63-1.53(m，1H)，1.53-1.29(m，4H)，1.08(d，J＝6.4Hz，3H)。LC/MS(M+1)：451.0。
化合物85：2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺
步骤1：N-[(3S，4S)-8-[4-氰基-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-2-基]-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001291
在氮气气氛和大气压下，N-[(3S，4S)-8-(5-溴-4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯(108mg；0.23mmol)与2，3-二氯苯基硼酸(66mg；0.35mmol)和碳酸铯(151mg；0.46mmol)在1，4-二噁烷(2.2mL)和水(0.54mL)中的溶液混合。将该混合物脱气10分钟，然后加入四(三苯基膦)钯(0)(53mg；0.05mmol)，并在100℃搅拌2小时。反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(10mL)稀释。通过硅藻±垫过滤，用乙酸乙酯(10mL)冲洗。滤液浓缩，通过硅胶快速色谱法纯化(己烷∶乙酸乙酯，95∶5至20∶80的梯度)，获得标题化合物，为白色固体(72mg，58％)。1H NMR(Bruker 400MHz，DMSO-d6)：7.80(dd，J＝6.4，3.2Hz，1H)，7.60-7.47(m，2H)，7.01(d，J＝10.5Hz，1H)，4.18(p，J＝6.2Hz，1H)，3.96-3.84(m，2H)，3.84-3.73(m，2H)，3.70(d，J＝8.5Hz，1H)，3.66-3.58(m，1H)，3.54(d，J＝8.2Hz，1H)，2.12(S，3H)，1.75-1.44(m，4H)，1.40(S，9H)，1.03(d，J＝6.3Hz，3H)。LC/MS(M+1)：532.2。
步骤2：N-[(3S，4S)-8-[4-氨基甲酰基-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-2-基]-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0003339594180001292
将N-[(3S，4S)-8-[4-氰基-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-2-基]-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯(100mg；0.19mmol)、碳酸钾(130mg；0.94mmol)和过氧化氢30％重量(0.38mL；3.38mmol)在DMSO(2.5mL)中的溶液在50℃搅拌6小时。反应混合物用乙酸乙酯(50mL)稀释，并用硫代硫酸钠五水合物(2.52g；10.1mmol)在水(25mL)中的溶液洗涤。有机层用水(2x25mL)和盐水(25mL)，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，为白色固体(103mg，94％)。LC/MS(M+1)：550.2。
步骤3：2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001301
将N-[(3S，4S)-8-[4-氨基甲酰基-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-2-基]-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-4-基]氨基甲酸叔丁酯(100.00mg；0.18mmol；1.00eq.)在二氯甲烷(2mL)和TFA(1mL)中的溶液在室温搅拌1小时。加入甲苯，混合物减压浓缩。重复操作两次。然后粗产物通过制备型HPLC纯化(XBridge Prep C-18 OBD 10uM，30x250；ACN：水(含0.1％氢氧化铵)，15分钟梯度：20％至60％)，得到标题化合物，为白色粉末(70mg，86％)。1H NMR(Bruker 400MHz，DMSO-d6)：7.93(S，1H)，7.58(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.43-7.29(m，2H)，7.20(dd，J＝7.7，1.6Hz，1H)，4.23-4.10(m，2H)，4.08(dd，J＝6.5，5.2Hz，1H)，3.70(d，J＝8.4Hz，1H)，3.61-3.42(m，3H)，2.93(d，J＝5.2Hz，1H)，2.00(S，3H)，1.77-1.68(m，1H)，1.68-1.42(m，5H)，1.09(d，J＝6.4Hz，3H)；LC/MS (M+1)：450.1。
化合物94和95：(5P)-2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺和(5M)-2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001302
通过SFC(柱IA，250x21mm，5微米，甲醇+20mM NH4OH：CO2，30-70)从化合物85分离两种阻转异构体。
第一洗脱异构体(化合物94)：白色无定形固体，24mg，RT＝3.32min，ed＝100％，1HNMR(Bruker 400MHz，DMSO-d6)：7.93(S，1H)，7.58(dd，J＝8.0，1.5Hz，1H)，7.42-7.29(m，2H)，7.20(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，4.24-4.02(m，3H)，3.70(d，J＝8.4Hz，1H)，3.62-3.41(m，3H)，2.92(d，J＝5.2Hz，1H)，2.00(S，3H)，1.80-1.33(m，6H)，1.09(d，J＝6.4Hz，3H)。LC/MS(M+1)：450.2。
第二洗脱异构体(化合物95)：白色固体，22mg，RT＝3.67min，ed＝100％，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：7.93(S，1H)，7.58(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.41-7.30(m，2H)，7.20(dd，J＝7.7，1.6Hz，1H)，4.27-3.99(m，3H)，3.71(d，J＝8.5Hz，1H)，3.65-3.39(m，3H)，2.94(d，J＝5.2Hz，1H)，2.00(S，3H)，1.81-1.35(m，5H)，1.35-1.17(m，1H)，1.09(d，J＝6.4Hz，3H)，LC/MS(M+1)：450.2。
化合物96和97：(5M)-2-[(1R)-1-氨基-3，3-二氟-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺和(5P)-2-[(1R)-1-氨基-3，3-二氟-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001311
采用N-[(1R)-8-(5-溴-4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-3，3-二氟-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(150.00mg；0.31mmol)和2，3-二氯苯基硼酸(88.28mg；0.46mmol)为起始材料，依据化合物85描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(65mg，三步骤共44％，两种阻转异构体的混合物)。
通过制备型SFC(柱Cel4，250x21mm，5微米，甲醇+20mM NH4OH：CO2)分离两种阻转异构体。
第一洗脱异构体(化合物96)：白色固体，31mg，RT＝，ed＝，1H NMR(Bruker400MHz，DMSO-d6)：7.93(S，1H)，7.58(d，J＝8.0Hz，1H)，7.42-7.28(m，2H)，7.20(d，J＝7.6Hz，1H)，4.61(dd，J＝17.5，13.3Hz，2H)，3.18-2.94(m，3H)，2.46-2.29(m，2H)，2.12-1.91(m，5H)，1.78-1.54(m，4H)，1.36(dd，J＝26.1，13.4Hz，2H)，LC/MS (M+1)：470.2。
第二洗脱异构体(化合物97)：白色固体，25mg，RT＝，ed＝，1H NMR(Bruker400MHz，DMSO-d6)：7.93(S，1H)，7.58(dd，J＝8.0，1.5Hz，1H)，7.41-7.29(m，2H)，7.20(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，4.61(dd，J＝19.0，14.6Hz，2H)，3.17-2.95(m，3H)，2.47-2.29(m，2H)，2.12-1.92(m，5H)，1.86-1.51(m，4H)，1.44-1.28(m，2H)，LC/MS (M+1)：470.2。
化合物98，104，99，105：(5P)-2-[(3aR，6aS)-3a-(氨基甲基)-八氢环戊二烯并[c]吡咯-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺，(5P)-2-[(3aS，6aR)-3a-(氨基甲基)-八氢环戊二烯并[c]吡咯-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺，(5M)-2-[(3aR，6aS)-3a-(氨基甲基)-八氢环戊二烯并[c]吡咯-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺，(5M)-2-[(3aS，6aR)-3a-(氨基甲基)-八氢环戊二烯并[c]吡咯-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
步骤1：外消旋-2-[(3aS，6aR)-3a-(氨基甲基)-八氢环戊二烯并[c]吡咯-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001321
采用6-氨基-2-氯嘧啶-4-腈(250mg，1.6mmol)和外消旋-n-([(3aR，6ar)-八氢环戊二烯并[c]吡咯-3a-基]甲基)氨基甲酸叔丁酯盐酸盐(烯胺，895mg，3.2mmol)为起始材料，依据化合物85描述的程序制备标题化合物，为白色无定形固体(179mg，25％，5步骤s)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)d 7.69(S，1H)，7.51(d，J＝8.0Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.21-7.04(m，2H)，6.02(S，2H)，3.80-3.36(m，4H)，3.06(d，J＝6.1Hz，2H)，2.56(S，2H)，2.35(ddq，J＝12.8，8.4，4.6，4.1Hz，1H)，1.95-1.37(m，6H)；LC/MS(M+1)：421.1。
步骤2：四种异构体的分离
Figure BDA0003339594180001331
通过制备型SFC(柱：IG，250x21mm，5微米，甲醇+20mM NH4OH∶CO2，30∶70％)分离外消旋-2-[(3aS，6aR)-3a-(氨基甲基)-八氢环戊二烯并[c]吡咯-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺的异构体。
任意分配立体化学。通过SFC评估对映体纯度，使用手性柱IC(甲醇+20mM NH4OH)。
第一洗脱馏分(化合物98)：白色无定形固体，26mg，RT＝3.76min，ed＝95.9％，1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.68(S，1H)，7.51(dd，J＝8.1，1.6Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.21-7.04(m，2H)，6.03(S，2H)，3.65(ddd，J＝35.0，11.5，6.8Hz，2H)，3.26-3.19(m，1H)，2.42-2.26(m，1H)，1.93-1.40(m，8H)，1.24(d，J＝3.0Hz，2H)，0.87(dt，J＝13.4，7.2Hz，1H)，LC/MS(M+1)：421.1。
第二洗脱馏分(化合物104)：白色无定形固体，35mg，RT＝3.82min，ed＝97.3％，1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.69(S，1H)，7.51(dd，J＝8.1，1.6Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.16(S，1H)，7.09(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，6.02(S，2H)，3.81-3.54(m，2H)，2.56(S，2H)，2.43-2.19(m，2H)，1.95-1.36(m，8H)，1.36-1.13(m，1H)；LC/MS(M+1)：421.0。
第三洗脱馏分(化合物99)：白色无定形固体，46mg，RT＝4.14min，ed＝95.1％，1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.69(S，1H)，7.51(dd，J＝8.1，1.6Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.16(S，1H)，7.09(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，6.02(S，2H)，3.81-3.54(m，2H)，2.56(S，2H)，2.43-2.19(m，2H)，1.95-1.36(m，8H)，1.36-1.13(m，1H)；LC/MS(M+1)：421.0。
第四洗脱馏分(化合物105)：白色无定形固体，29mg，RT＝4.2min，ed＝95.4％，1HNMR(400MHz，DMSO-d6)d7.69(S，1H)，7.51(dd，J＝8.1，1.5Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.16(S，1H)，7.10(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，6.02(S，2H)，3.77-3.54(m，2H)，2.56(S，2H)，2.43-2.22(m，2H)，1.94-1.41(m，8H)，1.24(S，1H)。)；LC/MS(M+1)：421.1。
化合物100，101，102，103：(5P)-2-[(3aR，7aS)-3a-(氨基甲基)-八氢-1H-异吲哚-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺，(5P)-2-[(3aS，7aR)-3a-(氨基甲基)-八氢-1H-异吲哚-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺，(5M)-2-[(3aR，7aS)-3a-(氨基甲基)-八氢-1H-异吲哚-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺，(5M)-2-[(3aS，7aR)-3a-(氨基甲基)-八氢-1H-异吲哚-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
步骤1：2-[3a-(氨基甲基)-八氢-1H-异吲哚-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001341
采用6-氨基-2-氯嘧啶-4-腈(250mg，1.6mmol)和n-(八氢-1h-异吲哚-3a-基甲基)氨基甲酸叔丁酯(烯胺，823mg，3.2mmol)为起始材料，依据化合物85描述的程序制备标题化合物，为白色无定形固体(128mg，五步骤共19％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)d7.68(S，1H)，7.50(d，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.23-7.04(m，2H)，6.00(S，2H)，3.70-3.34(m，4H)，2.63(q，J＝5.8Hz，1H)，2.05(dd，J＝11.5，5.8Hz，2H)，1.72-1.20(m，8H)；LC/MS(M+1)：435.1。
步骤2：四种异构体的分离
Figure BDA0003339594180001342
Figure BDA0003339594180001351
通过制备型SFC(柱：IG，250x21mm，5微米，甲醇+20mM NH4OH∶CO2，30∶70％)分离2-[3a-(氨基甲基)-八氢-1H-异吲哚-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺的异构体。
任意分配立体化学。通过SFC评估对映体纯度，使用手性柱IG(甲醇+20mMNH4OH)。
第一洗脱馏分(化合物100)：白色无定形固体，20mg，RT＝3.67min，ed＝95.0％，1HNMR(400MHz，DMSO-d6)：7.68(S，1H)，7.51(dd，J＝8.0，1.5Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.22-7.05(m，2H)，6.00(S，2H)，3.77-3.48(m，2H)，2.62(d，J＝14.0Hz，2H)，2.04(S，2H)，1.69-1.17(m，10H)，0.95-0.74(m，1H)。LC/MS(M+1)：435.0。
第二洗脱馏分(化合物101)：白色无定形固体，19mg，RT＝3.59min，ed＝93.4％，1HNMR(400MHz，DMSO-d6)：7.76-7.59(m，1H)，7.51(dd，J＝8.1，1.6Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.22-7.04(m，2H)，6.00(S，2H)，3.73-3.43(m，2H)，2.64(d，J＝14.3Hz，1H)，2.15-1.89(m，2H)，1.40(t，J＝56.6Hz，9H)，0.96-0.72(m，1H)；LC/MS(M+1)：435.0。
第三洗脱馏分(化合物102)：白色无定形固体，20mg，RT＝3.85min，ed＝91.3％，1HNMR(400MHz，DMSO-d6)：7.68(S，1H)，7.51(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.28(t，J＝7.8Hz，1H)，7.22-7.01(m，2H)，6.00(S，2H)，3.73-3.43(m，2H)，2.64(S，2H)，2.03(dt，J＝15.3，7.2Hz，2H)，1.78-0.97(m，10H)，0.97-0.68(m，1H)。LC/MS(M+1)：435.0。
第四洗脱馏分(化合物103)：白色无定形固体，16mg，RT＝4.02min，ed＝94.2％，1HNMR(400MHz，DMSO-d6)：7.68(S，1H)，7.51(d，J＝7.8Hz，1H)，7.28(q，J＝7.0，6.3Hz，1H)，7.22-7.00(m，2H)，6.00(S，2H)，3.51(S，2H)，2.04(S，2H)，1.34(d，J＝77.2Hz，11H)，0.85(S，2H)；LC/MS(M+1)：435.1。
化合物113和114：(5P)-2-[(1R)-1-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺和(5M)-2-[(1R)-1-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001361
采用N-[(1R)-8-(5-溴-4-氰基-6-甲基嘧啶-2-基)-8-氮杂螺[4.5]癸烷-1-基]氨基甲酸叔丁酯(中间体13，100mg；0.22mmol)和2，3-二氯苯基硼酸(64mg；0.33mmol)为起始材料，依据化合物85描述的程序制备标题化合物，为白色粉末(43mg，三步骤共31％，两种阻转异构体的混合物)。
通过制备型SFC(柱Whelk-O，250x21mm，5微米，甲醇+20mM NH4OH：CO2，5-45)分离两种阻转异构体。
第一洗脱异构体(化合物113)：白色固体，9mg，RT＝3.51min，ed＝100％，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：7.91(S，1H)，7.58(dd，J＝8.0，1.5Hz，1H)，7.43-7.29(m，2H)，7.20(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，4.55(t，J＝13.0Hz，2H)，3.15-3.05(m，2H)，2.78(t，J＝7.4Hz，1H)，2.00(S，3H)，1.96-1.72(m，3H)，1.73-1.29(m，7H)，1.29-1.14(m，2H)，LC/MS(M+1)：434.0。
第二洗脱异构体(化合物114)：白色固体，9mg，RT＝4.03min，ed＝94.3％，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：7.90(S，1H)，7.58(dd，J＝8.1，1.6Hz，1H)，7.40-7.30(m，2H)，7.20(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，4.54(td，J＝9.5，5.1Hz，2H)，3.20-3.05(m，2H)，2.73(t，J＝7.4Hz，1H)，2.00(S，3H)，1.94-1.76(m，2H)，1.75-1.47(m，5H)，1.46-1.31(m，2H)，1.31-1.13(m，3H)，LC/MS(M+1)：434.0。
化合物117和118：(5P)-6-氨基-2-[(1S)-1-氨基-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺和(5M)-6-氨基-2-[(1S)-1-氨基-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
步骤1：6-氨基-2-[(1S)-1-氨基-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180001371
将6-氨基-5-(2，3-二氯-苯基)-2-甲磺酰基-嘧啶-4-腈(75mg；0.22mmol；1.00eq.)、(3S)-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-3-胺二盐酸盐(Pharmablock，90mg；0.33mmol；1.50eq.)和碳酸钾(151mg；1.09mmol；5.00eq.)在乙腈(1.50ml；20.00V)和N，N-二甲基甲酰胺(0.75ml；10.00V)中的溶液在100℃搅拌18小时。反应混合物用乙酸乙酯(40mL)稀释并用水(2x10mL)和盐水(10mL)洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(乙酸乙酯∶甲醇，99∶1至90∶10的梯度)，获得标题化合物，为白色固体(76mg，75％)。
1H NMR(Bruker 400MHz，DMSO-d6)：7.72(dd，J＝8.0，1.7Hz，1H)，7.45(t，J＝7.8Hz，1H)，7.39(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，7.30(dd，J＝6.6，1.7Hz，1H)，7.22-7.10(m，3H)，7.00-6.57(m，2H)，4.44(t，J＝14.2Hz，2H)，3.83(S，1H)，3.21-3.02(m，3H)，2.62(d，J＝15.6Hz，1H)，1.93-1.78(m，2H)，1.78-1.67(m，1H)，1.59(td，J＝12.6，4.3Hz，1H)，1.48(d，J＝13.2Hz，1H)，1.07(d，J＝13.3Hz，1H)。LC/MS(M+1)：465.2。
步骤2：(5P)-6-氨基-2-[(1S)-1-氨基-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺和(5M)-6-氨基-2-[(1S)-1-氨基-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001372
将6-氨基-2-[(1S)-1-氨基-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-腈(936mg；2.01mmol)、碳酸钾(1.39g；10.1mmol)和过氧化氢30％重量(4.1ml；36.2mmol)在DMSO(23mL)中的溶液在50℃搅拌4小时。反应混合物用乙酸乙酯(800mL)稀释，并用硫代硫酸钠五水合物(27g；109mmol)在水(230mL)中的溶液洗涤。有机层用水(2x400mL)和盐水(400mL)，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，为白色固体(970mg)。
通过制备型SFC(柱IC，250x21mm，5微米；甲醇+20mM NH4OH：CO2，45-55)分离两种阻转异构体。
第一洗脱异构体(化合物117)：白色固体，309mg，RT＝6.62min，ed＝100％，LC/MS(M+1)483.1。
第二洗脱异构体(化合物118)：白色固体，328mg，RT＝7.98min，ed＝99.4％，1HNMR(400MHz，DMSO-d6)：7.74(S，1H)，7.53-7.50(m，1H)，7.37-7.25(m，2H)，7.25-7.15(m，4H)，7.12-7.10(m，1H)，6.12(S，2H)，4.54(d，J＝13.7Hz，2H)，3.90(S，1H)，3.16-3.01(m，3H)，2.67(d，J＝15.6Hz，1H)，1.79-1.68(m，1H)，1.64？1.58(m，1H)，1.47(d，J＝13.0Hz，1H)，1.12(d，J＝13.0Hz，1H)；LC/MS(M+1)483.1。
化合物119和120：(M)-2-[(1S)-1-氨基-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺和(P)-2-[(1S)-1-氨基-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺
步骤1：6-甲基-2-{1-氧代-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基}嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180001381
在氮气气氛下，将2-氯-6-甲基嘧啶-4-腈(120mg，0.742mmol)，1H-螺[茚-2，4-哌啶]-3-酮盐酸盐(Pharmablock，279mg，1.114mmol)和DIEA(303mg，2.23mmol)在乙腈(5.0mL)中的溶液在80℃搅拌2小时。所得混合物真空浓缩，通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶1)，获得标题化合物，为白色固体(200mg，84％)；LC/MS(M+1)：319.0。
步骤2：5-溴-6-甲基-2-{1-氧代-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基}嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180001382
将6-甲基-2-[3-氧代-1H-螺[茚-2，4-哌啶]-1-基]嘧啶-4-腈(180mg，0.565mmol)和NBS(158mg，0.847)在DMF(5.0mL)中的溶液在室温搅拌1小时。反应用水淬灭，用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。有机层合并，用盐水(1x30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，5∶1)，获得标题化合物，为黄色固体(220mg，96.38％)。LC/MS(M+1)：396.9。
步骤3：5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基-2-{3-氧代-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基}嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180001391
在氮气气氛下，将5-溴-6-甲基-2-[3-氧代-1H-螺[茚-2，4-哌啶]-1-基]嘧啶-4-腈(590mg，1.46mmol)、2，3-二氯苯基硼酸(880mg，4.38mmol)、K3PO4(978mg，4.38mmol)、XPhos Pd G3(130mg，0.146mmol)和XPhos(73mg，0.146mmol)在1，4-二噁烷(5mL)和水(3mL)中的混合物在100℃搅拌2小时。所得混合物减压浓缩，通过硅胶Prep-TLC纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶1)，得到标题化合物，为黄色固体(820mg，81％)。LC/MS(M+1)：463.2。
步骤4：(R)-N-{1′-[4-氰基-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-2-基]-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-3-亚基}-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BDA0003339594180001392
在氮气气氛下，将5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基-2-[3-氧代-1H-螺[茚-2，4-哌啶]-1-基]嘧啶-4-腈(780mg，1.34mmol)和(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(681mg，5.340mmol)在Ti(OEt)4(12.3g，53.5mmol)中的混合物在90℃搅拌2小时。反应混合物用水和乙酸乙酯稀释，过滤。滤饼用乙酸乙酯(100mL)洗涤，滤液减压浓缩。水层用乙酸乙酯(3x120mL)萃取。有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶1)，获得标题化合物，为黄色固体(800mg，64％)。LC/MS(M+1)：566.2。
步骤5：(R)-N-[(3S)-1′-[4-氰基-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-2-基]-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BDA0003339594180001401
保持在-50℃下，将NaBH4(93mg，2.34mmol)在水(1.3mL)中的溶液缓慢加入(R)-N-[1-[4-氰基-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-2-基]-1H-螺[茚-2，4-哌啶]-3-亚基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(440mg，0.468mmol)在THF(8.8mL)中的溶液中。所得混合物在氮气气氛和25℃下搅拌1小时。加入水/冰(30mL)淬灭反应，水层用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，为一种黄色油(320mg，63％)。LC/MS(M+1)：568.2。
步骤6：5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基-2-[(3S)-3-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]氨基}-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001402
将(R)-N-[(3S)-1-[4-氰基-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-2-基]-1，3-二氢螺[茚-2，4-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(300mg，0.275mmol)和NaOH(200mg，4.750mmol)在乙醇(5.00mL)和水(5mL)中的混合物置于30mL密封管中，在氮气气氛和70℃下搅拌1小时。反应混合物用乙酸乙酯(3x30mL)萃取。有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，为黄色固体(400mg，88％)。LC/MS(M+1)：586.2。
步骤7：2-[(1S)-1-氨基-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001411
将1，3-二氢螺[茚-2，4-哌啶]-1-基]嘧啶-4-甲酰胺(100mg，0.17mmol)和HCl(气态)在1，4-二噁烷(2.00mL，7.9mmol，12％)中的溶液在氮气气氛和70℃下搅拌1小时。减压除去溶剂，残留物通过C18硅胶反相快速色谱法纯化(ACN：水+NH4OH，梯度：0∶100至50∶50)，得到标题化合物，为白色固体(50mg，60％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：7.94(S，1H)，7.58(d，J＝7.9Hz，1H)，7.41-7.29(m，3H)，7.24-7.14(m，4H)，4.62(t，J＝15.0Hz，2H)，3.86(S，1H)，3.17(S，1H)，3.10(d，J＝15.7Hz，1H)，2.66(d，J＝15.5Hz，1H)，2.01(S，3H)，1.82-1.71(m，1H)，1.64(dd，J＝13.7，9.4Hz，1H)，1.52(d，J＝13.1Hz，1H)，1.13(d，J＝13.4Hz，1H)。LC/MS(M+1)：482.2。
步骤8：阻转异构体的分离：(5M)-2-[(1S)-1-氨基-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺和(5P)-2-[(1S)-1-氨基-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001412
通过制备型HPLC(柱(R，R)whelk-O1，4.6*50mm，3.5um，己烷+0.1％DEA∶乙醇，50∶50)从2-[(1S)-1-氨基-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺分离阻转异构体。
第一洗脱异构体(化合物119)：29mg，RT＝1.1min，ed＝97.9；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：7.94(S，1H)，7.58(dd，J＝8.1，1.5Hz，1H)，7.41-7.29(m，3H)，7.19(ddd，J＝15.5，7.2，2.8Hz，4H)，4.62(t，J＝16.3Hz，2H)，3.86(S，1H)，3.25-3.15(m，1H)，3.11(d，J＝15.7Hz，1H)，2.66(d，J＝15.4Hz，1H)，2.01(S，3H)，1.77(t，J＝11.3Hz，1H)，1.62(d，J＝11.9Hz，1H)，1.52(d，J＝12.9Hz，1H)，1.13(d，J＝13.0Hz，1H)。LC/MS(M+1)：481.2，熔点：114-115℃。
第二洗脱异构体(化合物120)：19mg，RT＝6.9min，ed＝98.5，LC/MS(M+1)：481.2，熔点：121-123℃。
化合物121：6-氨基-2-[(4S)-4-氨基-4，6-二氢螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑-5，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
步骤1：6-氨基-2-[(4S)-4-氨基-4，6-二氢螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑-5，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180001421
将(4S)-4，6-二氢螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑-5，4-哌啶]-4-胺(中间体16，100mg，0.430mmol)、6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-2-甲磺酰基嘧啶-4-腈(220mg，0.439mmol)和K2CO3(10mg，0.069mmol)在ACN(4.0mL)中的混合物在氮气气氛和室温下搅拌12小时。减压除去溶剂，残留物通过硅胶色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶9)，得到标题化合物，为黄色固体(60mg，24％)。LC/MS(M+1)：472.1。
步骤2：6-氨基-2-[(4S)-4-氨基-4，6-二氢螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑-5，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001422
将6-氨基-2-[(4S)-4-氨基-4，6-二氢螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑-5，4-哌啶]-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-腈(40mg，0.070mmol)、NaOH(73mg，1.73mmol)在水(1mL)和乙醇(1mL)中的溶液在50℃搅拌1小时。减压除去溶剂，残留物通过制备型HPLC纯化(柱XBridge，Prep C18 OBD，19x150mm，5um，水+10mmol NH4HCO3)：ACN；8分钟梯度：70∶30至50∶50)，获得将标题化合物，为乳白色固体(5.6mg，16％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：8.96(S，1H)，7.74(S，1H)，7.52(dd，J＝8.0，1.5Hz，1H)，7.29(t，J＝7.8Hz，1H)，7.16(S，1H)，7.11(d，J＝7.5Hz，1H)，6.11(S，1H)，4.44(dd，J＝21.6，14.3Hz，2H)，3.98(S，1H)，3.25？3.17(m，2H)，2.87(d，J＝15.3Hz，1H)，2.75(d，J＝15.3Hz，1H)，1.82-1.71(m，1H)，1.68-1.50(m，3H)，1.24(S，1H)，LC/MS(M+1)：490.1。
化合物122：2-((S)-3-氨基-3H-螺[苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺
步骤1：6-甲基-2-[3-氧代螺[1-苯并呋喃-2，4-哌啶]-1-基]嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180001431
将2-氯-6-甲基嘧啶-4-腈(100mg，0.619mmol)，螺[1-苯并呋喃-2，4-哌啶]-3-酮(140mg，0.682mmol)和DIEA(0.215mL，1.24mmol，2当量)在ACN(4.0mL)中的溶液在80℃搅拌2小时。所得混合物冷却至室温，并真空浓缩。残留物通过硅胶柱色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯，1∶1)，得到标题化合物，为黄色固体(120mg，54％)。LC/MS(M+1)：321。
步骤2：5-溴-6-甲基-2-[3-氧代螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基]嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180001432
在25℃下将NBS(105mg，0.563mmol)添加至6-甲基-2-[3-氧代螺[1-苯并呋喃-2，4-哌啶]-1-基]嘧啶-4-腈(100mg，0.281mmol)在DMF(5.0mL)中的溶液中。所得混合物在25℃搅拌2小时。然后将该混合物用水水(40mL)稀释，并乙酸乙酯(3x45mL)萃取。有机层合并，用盐水(1x100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，为黄色固体(110mg，85％产率)。LC/MS(M+1)：399，401。
步骤3：5-(2，3-di氯苯基)-6-甲基-2-{3-氧代-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-yl}嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180001441
将5-溴-6-甲基-2-[3-氧代螺[1-苯并呋喃-2，4-哌啶]-1-基]嘧啶-4-腈(100mg，0.216mmol)、2，3-二氯苯基硼酸(87mg，0.432mmol)、K3PO4(145mg，0.648mmol)、XPhos(22mg，0.043mmol)和XPhos Pd G3(39mg，0.043mmol)在1，4-二噁烷(2mL)和水(0.5mL)中的溶液在100℃搅拌2小时。所得混合物冷却至室温，然后减压浓缩。残留物用DCM(5mL)稀释，过滤，滤液真空浓缩。残留物通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯，1∶1)，得到标题化合物，为黄色固体(95mg，78％)。LC/MS(M+1)：465。
步骤4：(S)-N-((E)-1′-(4-氰基-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-2-基)-3H-螺[苯并呋喃-2，4′-哌啶]-3-亚基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
Figure BDA0003339594180001442
将5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基-2-[3-氧代螺[1-苯并呋喃-2，4-哌啶]-1-基]嘧啶-4-腈(90mg，0.18mmol)、(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(138mg，1.08mmol)和Ti(OEt)4(1mL)的混合物在90℃搅拌4小时。所得混合物冷却至室温，倒入水(20mL)和乙酸乙酯(20mL)的混合物中，过滤。从滤液中分离两层，水相用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。有机层合并，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶1)，获得标题化合物，为乳白色固体(180mg，100％产率)。LC/MS(M+1)：568.2。
步骤5：2-((S)-3-((叔丁基硫代)氨基)-3H-螺[苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180001443
保持在-50℃和氮气气氛下，将NaBH4(31mg，0.782mmol)加入(S)-N-[1-[4-氰基-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-2-基]螺[1-苯并呋喃-2，4-哌啶]-3-亚基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(160mg，0.156mmol)在THF(4.0mL)和H2O(1.0mL)中的溶液中。所得混合物在25℃搅拌1小时。将该混合物倒入水(10mL)中，用乙酸乙酯(3x10mL)萃取。有机层合并，用盐水(1x30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到标题化合物，为黄色固体(130mg，94％产率)。LC/MS(M+1)：554，556。
步骤6：2-((S)-3-((叔丁基硫代)氨基)-3H-螺[苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001451
将(S)-N-[(3S)-1-[4-氰基-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-2-基]-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4-哌啶]-3-基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(130mg，0.142mmol)、NaOH水溶液(1.5mL，2M)和乙醇(3.0mL)的混合物在70℃搅拌1小时。反应混合物冷却至室温，减压除去溶剂，残留的水层用乙酸乙酯(3x5mL)萃取。有机层合并，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶1)，获得标题化合物，为黄色固体(120mg，94％产率)。LC/MS(M+1)：572，574。
步骤7：2-((S)-3-氨基-3H-螺[苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001452
将5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基-2-[(3S)-3-[[(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰基]氨基]-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4-哌啶]-1-基]嘧啶-4-甲酰胺(70mg，0.113mmol)和HCl/1，4-二噁烷(7mL，4M溶液)的混合物在25℃搅拌1小时。所得混合物真空浓缩，并通过通过反相色谱法纯化(柱：C18硅胶；水+10mmol/L NH4HCO3：ACN，40分钟梯度：0％至70％)，得到标题化合物，为乳白色固体(45.7mg，84％)1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：8.00(brS，1H)，7.59(dd，J＝8.0，1.2Hz，1H)，7.41-7.33(m，3H)，7.22-7.14(m，2H)，6.88(t，J＝7.2Hz，1H)，6.80(d，J＝7.6Hz，1H)，4.68-4.57(m，2H)，4.13(S，1H)，3.49-3.33(m，2H)，2.03(S，3H)，1.94-1.70(m，4H)。LC/MS(M+1)：m/z＝484.1。
化合物123：6-氨基-2-((R)-3-氨基-3H-螺[苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺二盐酸盐
步骤1：6-氨基-2-[(3S)-3-氨基-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180001461
将6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-2-甲磺酰基嘧啶-4-腈(192mg，0.492mmol)，(3R)-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-3-胺(中间体14，204mg，0.985mmol)和K2CO3(143mg，0.985mmol)在DMF(10mL)中的溶液在100℃搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，倒入水(50mL)中并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。有机层合并，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。通过硅胶快速色谱法(DCM∶甲醇，10∶1)纯化，得到标题化合物，为黄色固体(100mg，29％产率)。LC/MS：467。
步骤2：6-氨基-2-((R)-3-氨基-3H-螺[苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基)-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺二盐酸盐
Figure BDA0003339594180001462
将6-氨基-2-[(3R)-3-氨基-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4-哌啶]-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-腈(30mg，0.043mmol)、NaOH水溶液(0.5mL，2M)和乙醇(0.50mL)的混合物在70℃搅拌30分钟。所得混合物冷却至室温，通过反相色谱法纯化(柱：C18硅胶；水+0.05％HCl：CH3CN，40分钟梯度：0％至70％)，得到标题化合物，为乳白色固体(6.6mg，26％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：7.78(S，1H)，7.52(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.33-7.27(m，2H)，7.18-7.10(m，3H)，6.86(t，J＝7.6Hz，1H)，6.78(d，J＝8.0Hz，1H)，6.16(br S，2H)，4.57-4.47(m，2H)，4.08(S，1H)，3.25-3.20(m，2H)，1.90-1.80(m，1H)，1.78-1.68(m，3H)，LC/MS(M+1)：485.2。
化合物124，125，126，127：(4M)-2-[(3R)-3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺，(4M)-2-[(3S)-3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺，(4P)-2-[(3R)-3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺，(4P)-2-[(3S)-3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺`
步骤1：2-[3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180001471
将2-氯-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-腈(1.10g，3.65mmol)、3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4-哌啶]-3-胺(中间体15，1.15g，5.47mmol)和DIEA(1.81mL，11.0mmol)在ACN(12mL)中的溶液在80℃搅拌0.5小时。所得混合物减压浓缩，通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶1)，获得标题化合物，为黄色固体(1.4g，81％)。LC/MS(M+1)：467.1。
步骤2：2-[3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺
Figure BDA0003339594180001472
将2-[3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4-哌啶]-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-腈(0.80g，1.70mmol)、NaOH(0.16g，3.80mmol)、乙醇(4mL)和H2O(4mL)的混合物在70℃搅拌0.5小时。混合物冷却至室温，添加6M HCl中和混合物调至pH 7。所得混合物减压浓缩，通过反相色谱法纯化(柱：C18硅胶；水+含有10mmol/L NH4HCO3：ACN，30分钟梯度：10％至50％)，得到2-[3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4-哌啶]-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺(700mg，79％)，为白色固体。LC/MS(M+1)：485。
步骤3：异构体分离
Figure BDA0003339594180001481
通过制备型(柱CHIRALPAK IC，3x25cm，5um，己烷+8mmol/LNH3.甲醇∶乙醇；50％)进行第一次分离，得到两种馏分：馏分A(130mg)(RT：9.6min)和馏分B(300mg)(RT：14.64min)。
通过制备型HPLC(柱CHIRALPAK IA，3x25cm，5um，MTBE+10mM NH3-甲醇：乙醇，20％)从馏分A分离异构体。
第一洗脱异构体（124)：56mg，RT：11min，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.00(S，2H)，7.72(d，J＝7.2，1H)，7.59(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.43-7.33(m，2H)，7.21(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，6.92(dd，J＝7.2，5.2Hz，1H)，4.71-4.61(m，2H)，4.14(S，1H)，3.51-3.39(m，2H)，2.20(brS，2H)，2.03(S，3H)，1.94-1.77(m，4H)；LC/MS(M+1)：485.1；RT＝1.82min(分析柱-手性pack IA，MtBE+0.1％DEA∶乙醇，80∶20)，纯度：100％。
第二洗脱异构体(125)：60mg，RT：12.9min，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：8.01-8.00(m，2H)，7.72(d，J＝6.8Hz，1H)，7.59(dd，J＝8.0，1.2Hz，1H)，7.40-7.34(m，2H)，7.22(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，6.92(dd，J＝7.2，5.2Hz，1H)，4.72-4.61(m，2H)，4.14(S，1H)，3.51-3.39(m，2H)，2.20(brS，2H)，2.03(S，3H)，1.96-1.76(m，4H)；LC/MS(M+1)：485.1；RT＝2.26min(分析柱-手性pack IA，MtBE+0.1％DEA∶乙醇，80∶20)；纯度：99.5％。
通过制备型HPLC(CHIRALPAK ID，3x25cm，5um，MTBE+10mM NH3-甲醇∶乙醇，15％)从馏分B分离异构体。
第一洗脱异构体(126)：92mg，RT：12.0min；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：8.01-8.00(m，2H)，7.72(d，J＝6.4，1H)，7.59(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.41-7.34(m，2H)，7.22(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，6.91(dd，J＝7.2，5.2Hz，1H)，4.72-4.61(m，2H)，4.14(S，1H)，3.49-3.39(m，2H)，2.15(brS，2H)，2.03(S，3H)，1.93-1.77(m，4H)，RT＝2.33min(分析柱-手性packAD，MtBE+0.1％DEA∶乙醇，85∶15)；纯度：100％。
第二洗脱异构体(127)：111mg，RT：15.5min，ed＝99.1％，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：8.01-8.00(m，2H)，7.71(d，J＝6.8Hz，1H)，7.59(dd，J＝8.0，1.2Hz，1H)，7.40-7.34(m，2H)，7.22(dd，J＝7.6，1.2Hz，1H)，6.92(dd，J＝6.8，4.8Hz，1H)，4.71-4.61(m，2H)，4.14(S，1H)，3.49-3.39(m，2H)，2.19(br S，2H)，2.03(S，3H)，1.91-1.77(m，4H)；LC/MS(M+1)：485.1；RT＝3.17min(分析柱Chiralpak ID，MtB+0.1％DEA∶乙醇，85∶15)。纯度：99.1。
化合物128，129，130，131：(4P)-6-氨基-2-[(3R)-3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4-哌啶]-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺，(4P)-6-氨基-2-[(3S)-3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4-哌啶]-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺，(4M)-6-氨基-2-[(3R)-3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4-哌啶]-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；(4M)-6-氨基-2-[(3S)-3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4-哌啶]-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
步骤1：6-氨基-2-[3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4-哌啶]-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-腈
Figure BDA0003339594180001491
将DIEA(1.06mL，6.13mmol，2.00当量)，6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-2-甲磺酰基嘧啶-4-腈(中间体4，1.04g，3.06mmol)和3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4-哌啶]-3-胺(0.84g，3.89mmol)在乙醇(12mL)中的溶液在60℃搅拌4小时。所得混合物中真空浓缩，通过硅胶快速色谱法纯化(石油醚∶乙酸乙酯，1∶9)，获得标题化合物，为黄色固体(900mg，47％产率)。LC/MS(M+1)：468。
步骤2：6-氨基-2-[3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4-哌啶]-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺
采用6-氨基-2-[3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4-哌啶]-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-腈(0.90g，1.47mmol)为起始材料，依据化合物124-127步骤2描述的程序制备标题化合物，为乳白色固体(600mg，83％)。LC/MS(M+1)；486。
步骤3：异构体分离
Figure BDA0003339594180001501
通过制备型HPLC(柱：CHIRALPAK IA，3x25cm，5um；MTBE+10mM NH3-甲醇)：乙醇，15％)进行第一次分离，得到三种馏分：
第一洗脱馏分：150mg两种异构体的混合物。
第二洗脱馏分(128)：白色固体，68mg，RT＝7.22min，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：8.00(dd，J＝4.8，1.2Hz，1H)，7.78(S，1H)，7.71(d，J＝6.8Hz，1H)，7.52(dd，J＝8.0，1.2Hz，1H)，7.29(t，J＝7.6Hz，1H)，7.18(S，1H)，7.12(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，6.91(dd，J＝7.2，5.2Hz，1H)，6.17(br S，2H)，4.58-4.52(m，2H)，4.13(S，1H)，3.40-3.31(m，2H)，2.32(br S，2H)，1.95-1.85(m，1H)，1.79-1.72(m，3H)。RT(分析柱-手性pack IA，MtBE+0.1％DEA∶乙醇＝85∶15)＝1.98min；纯度：95.1％。
第三洗脱馏分(129)：白色固体，62mg，RT＝9.57min，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.00(dd，J＝4.8，1.2Hz，1H)，7.78(S，1H)，7.70(d，J＝6.8Hz，1H)，7.52(dd，J＝8.0，1.2Hz，1H)，7.29(t，J＝8.0Hz，1H)，7.18(S，1H)，7.12(dd，J＝7.6，1.6Hz，1H)，6.91(dd，J＝7.2，5.2Hz，1H)，6.17(brS，2H)，4.58-4.51(m，2H)，4.12(S，1H)，3.40-3.31(m，2H)，2.32(brS，1H)，1.95-1.85(m，1H)，1.79-1.72(m，3H)。RT(分析柱-手性pack IA，MtBE+0.1％DEA：乙醇＝85∶15)＝2.45min；纯度：92.7％。
通过制备型HPL(CHIRALPAK IA，3x25cm，5um∶Hex∶DCM＝3∶1+10mM NH3-甲醇)∶乙醇，15％)从第一洗脱馏分分离异构体。
第一洗脱异构体（130)：白色固体，46mg，RT＝7.22min，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.99(d，J＝5.6Hz，1H)，7.78(S，1H)，7.70(d，J＝6.8Hz，1H)，7.52(dd，J＝8.0，1.6Hz，1H)，7.29(t，J＝8.0Hz，1H)，7.18(S，1H)，7.11(dd，J＝7.0，1.6Hz，1H)，6.90(dd，J＝7.2，5.2Hz，1H)，6.17(br S，1H)，4.62-4.51(m，2H)，4.12(S，1H)，3.39-3.31(m，2H)，1.95-1.86(m，1H)，1.79-1.74(m，3H)。RT＝2.81min(分析柱-手性pack IA，Hex∶DCM＝3∶1+0.1％DEA∶乙醇＝85∶15)；纯度：92.3％。
第二洗脱异构体(131)：白色固体，39mg，Rt＝13.8min，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：7.99(d，J＝3.6Hz，1H)，7.78(S，1H)，7.70(d，J＝7.6Hz，1H)，7.52(dd，J＝8.0，1.2Hz，1H)，7.29(t，J＝8.0Hz，1H)，7.18(S，1H)，7.11(d，J＝7.6，1H)，6.90(dd，J＝7.2，5.2Hz，1H)，6.17(brS，1H)，4.62-4.51(m，2H)，4.11(S，1H)，3.35-3.31(m，2H)，2.10(brS，1H)，1.95-1.86(m，1H)，1.78-1.71(m，3H)。RT＝2.42min(分析柱-手性pack IA，Hex∶DCM＝3∶1+0.1％DEA∶乙醇＝85∶15)；纯度：99.9％。
按照上述类似的合成路线已经制备表3中的化合物：
表3
Figure BDA0003339594180001511
Figure BDA0003339594180001521
Figure BDA0003339594180001531
Figure BDA0003339594180001541
Figure BDA0003339594180001551
Figure BDA0003339594180001561
Figure BDA0003339594180001571
Figure BDA0003339594180001581
Figure BDA0003339594180001591
Figure BDA0003339594180001601
Figure BDA0003339594180001611
Figure BDA0003339594180001621
实施例3：测试本发明化合物针对SHP2和ERK1 2的抑制活性
SHP2生物化学测定：
在蛋白质被带有两个适当间隔开的磷酸酪氨酸的肽激活后，使用替代底物DiFMUP监测本发明的化合物对SHP2的抑制。全长SHP2蛋白(重组人SHP-2，大肠杆菌衍生的Ser2Arg593，来自R&D系统的N端6His标记；0.0.24nM)与激活肽IRSI_2pY(New EnglandPeptide，140nM)和DiFMUP(分子探针，80uM))在化合物(10个浓度范围，最高浓度50μM)存在下于缓冲液(HEPES pH 7.2 60mM，DDT 5mM，KCl 75mM，NaCl 75mM，EDTA 1mM，吐温200.05％)中一起室温孵育60分钟。通过使用PerkinElmer Envision读板器测量荧光来监测由激活SHP2产生的DiFMU产物。使用Genedata Screener分析抑制剂剂量反应曲线。本发明化合物的IC50范围显示在下表3中。
在MDA-MB-468和KYSE520中的p-Erk的细胞测定：
使用Mesoscale量化平台以磷酸化特异性抗体评估SHP2抑制剂对pERK水平的影响。为了使用中尺度测量pERK水平的变化，将30,000个MDA-MB-468和KYSE520细胞接种在96孔组织培养板中，所述孔板被置于体积为175μl的培养基中。在37℃下孵育过夜后，将不同浓度的各种SHP2抑制剂添加到每个孔中，在孔板上保持重复孔，并在37℃下与化合物一起孵育2小时，再用冰冻的PBS缓冲液洗涤。然后将细胞在裂解缓冲液中裂解并按照制造商的指示(Mesoscale discovery，cat No.K15107D-3)处理和分析p-ERK/ERK。本发明化合物的IC50范围显示在下表4中。
表4
Figure BDA0003339594180001631
Figure BDA0003339594180001641
Figure BDA0003339594180001651
Figure BDA0003339594180001661
Figure BDA0003339594180001671
实施例4：体外安全性-测试对hErg的选择性
抑制离子通道hErg(或Kv11.1)电流会导致QT间期延长，从而导致潜在的致命性心室性快速性心律失常，称为尖端扭转型室性心动快速(torsade-de-point)。这是心脏毒性的主要原因之一，通常在药物开发过程的早期评估hErg通道活性，以减轻心脏毒性风险。
使用膜片钳技术在稳定的Kv11.1(hERG)转染的人胚胎肾细胞系(HEK293)中评估hERG离子通道活性。按照制造商的建议，使用来自慕尼黑的Nanion Technologies的自动膜片钳装置PatchlinerTM进行全细胞记录。将不同浓度的测试化合物或参考物奎纳定(quinidine)施加至全细胞悬浮液中，并使用具有固定幅度的脉冲模式测量电流。根据尾电流强度和Kv11.1(hERG)离子通道活性在对照值(定义为100％)和测试化合物之间的变化来判断对Kv11.1(hERG)离子通道活性的影响，并表示为COI对照值的百分比变化。
表5-体外安全性概况
Figure BDA0003339594180001681
Figure BDA0003339594180001691
结果
与已知的SHP2抑制剂SHP-099和RMC-4550相比，本发明的化合物在hErg活性(膜片钳试验中的Ki值)和细胞活性(KYSE中的IC50值)之间表现出更好的分裂。当对受试者给药时，这应该转化为降低心脏毒性的可能性。
实施例5：测试小鼠中本发明化合物的药代动力学性质
雌性CD1小鼠(n＝3)接受化合物的单次口服施用(通过管饲法)或静脉内(推注)注射。通常通过口服或静脉内施用给予给药媒介物，对口服给药作为在柠檬酸钠缓冲液中的0.5％Methocel K4M/0.25％吐温20，0.1M，pH 3.0；对静脉内施用作为在乙酸钠缓冲液中的10％Kolliphor HS15溶液，0.01M，pH 4.5。在0.083(静脉注射)、0.25、0.5、1、2、4、6和24小时后，从动物在吸入异氟烷的舌下获得连续血样，并进一步处理得到血浆。通过LC/MS/MS对样品进行蛋白质沉淀和分析。
表6-小鼠的PK数据
Figure BDA0003339594180001692
结果
在小鼠PK中，与参考化合物SHP-099相比，本发明的化合物(编号27和95)显示出较低的清除率和较高的暴露量。
实施例6：测试本发明化合物在存在和不存在活化肽时对SHP2活性突变体E76K的抑制活性
使用与实施例3中所述相同的条件，在添加和不添加激活肽IRSI_2pY(NewEngland Peptide，140nM)的情况下在生物化学测定中使用自动激活突变蛋白SHP2 E76K测试了一系列化合物。
表7
Figure BDA0003339594180001701
*来自LaRochelle J.R.et al.，Nature comm.，2018，9：4508，1-10。
在强SHP2激活条件下，本发明的化合物保持nM范围的效力，而已知抑制剂SHP099在类似条件下的效力失去几个log。这可能是通过强激活SHP2突变治疗癌症的优势。
实施例6：U937细胞中的活性
在细胞因子释放测定中使用单核细胞(U937)测试了选定的化合物，以测试它们的抗炎特性。使用无血清培养基将细胞接种在96孔细胞培养板中。将细胞用指定浓度的SHP-2抑制剂处理30分钟，然后用重组IL-6(50ng/mL)刺激过夜。使用MCP-1 AlphaLISA试剂盒(Perkin Elmer)测量培养上清液中的MCP-1产量。
化合物(117+118)的混合物抑制了在用IL-6刺激了的U937细胞中产生MCP-1，IC50＝67nM(见图1)。该结果表明本发明的化合物应当可用于治疗本文所描述的与免疫系统相关的过度增生性病症。
实施例7：注射液瓶
将100g本发明化合物与5g磷酸二氢钠在3L再蒸馏水中的溶液用2N盐酸调它的pH至6.5，无菌过滤，转移到注射瓶中，无菌条件下冻干，并在无菌条件下密封。每个注射液瓶含有5mg本发明化合物。
实施例8：溶液制剂
由1g本发明化合物、9.38g NaH2PO4·2H2O、28.48g Na2HPO4·12H2O和0.1g苯扎氯铵在940mL再蒸馏水中制成一种溶液。将该溶液的pH调至6.8，再将该溶液配至1L，放射灭菌。
实施例9：安瓿剂
将1kg本发明化合物在60L再蒸馏水中的溶液无菌过滤，转移到安瓿中，无菌条件下冻干，并在无菌条件下密封。每个安瓿含有10mg本发明化合物。

Claims (45)

1.根据通式(I)所示的化合物：
Figure FDA0003339594170000011
或其药学上可接受的盐，式中，
R1’是单环烷基、双环烷基、单杂环基或双杂环基，所述基团中任一个任选地与单环烷基、双环烷基、单杂环基或双杂环基螺接，其中所述单环烷基或双环烷基以及单杂环基或双杂环基中的每一个可以各自任选地且独立地经1-3个选自以下的基团取代：C1-C6烷基，-F，-Cl，-CF3，-NH2，C1-C3氨基烷基，-OH，C1-C3烷氧基，C1-C3羟基烷基和苯基；
X是键，-NH-或-N(Me)-；
R2是芳基或杂芳基，所述基团经1-3个选自以下的基团取代：-F，-Cl，-CF3，C1-C3烷氧基和C1-C3烷基；
R3是-H，-NH2，-OH，-Cl，-F，-Br或-CH3；
Y是-N-；以及
R4和R5独立地是-H，-NH2，-OH，C1-C3烷基或C1-C3羟基烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自甲苯，吡啶，吲哚，2，1，3-苯并恶二唑和1，3-苯并二唑，上述每个基团任选地和独立地经1至3个选自以下的基团取代：-F，-Cl，-CF3，-OCH3和-CH3。
3.根据权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R2选自苯基和吡啶，上述每个基团任选地和独立地经1至3个选自以下的基团取代：-Cl，-F，-CF3和-OCH3。
4.根据上述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4中之一是-H，另一个是-OH。
5.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物以通式(Ia)表示：
Figure FDA0003339594170000021
或其药学上可接受的盐，式中R6、R7和R8各自独立地选自-H，-F，-Cl，-CF3，C1-C3烷氧基和C1-C3烷基。
6.根据上述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中X是键。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中X是-NCH3-。
8.根据权利要求7所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中当A是连接至嘧啶环的连接点时，X-R1是
Figure FDA0003339594170000022
9.根据权利要求8所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中当A是连接至嘧啶环的连接点时，X-R1是
Figure FDA0003339594170000023
10.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中X是-N-。
11.根据权利要求10所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是环己基，环戊基或哌啶基，上述每个基团任选地经1或2个选自以下的基团取代：-F、-NH2和-CH2NH2。
12.根据权利要求11所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1是经一个-CH2NH2取代的环戊基，经一个-NH2取代的环己基，或者经一个-F取代的哌啶。
13.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，所述化合物以通式(Ib)表示：
Figure FDA0003339594170000031
或其药学上可接受的盐，式中，
当A是连接至通式Ib所示的嘧啶环的连接点时，R1是
Figure FDA0003339594170000032
R6，R7和R8各自独立地选自-H，-F，-Cl，-CF3，C1-C3烷氧基和C1-C3烷基；
n是0，1，2或3；以及
R9，R10，R11，R12，R13，R14，R15和R16，若存在时，各自独立地选自-H，C1-C3烷基，-NH2，-OH，-Cl，-F，-Br，C1-C3氨基烷基，C1-C3羟基烷基，C1-C3烷氧基和苯基；或者
R9，R11，R13和R16中之二者一起形成桥接双环杂环系统，该系统任选地经1-3个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基，-NH2，-OH，-Cl，-F，-Br，C1-C3氨基烷基，C1-C3羟基烷基，C1-C3烷氧基和苯基；或者
连接至同一个碳原子的R9，R10，R11，R12，R13，R14，R15和R16中之二者一起形成单环或双环螺接环基，该单环或双环螺接环基任选地经1-3个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基，-NH2，-OH，-Cl，-F，-Br，C1-C3氨基烷基，C1-C3羟基烷基，C1-C3烷氧基和苯基；或者
连接至相邻碳原子的R9，R10，R11，R12，R13，R14，R15和R16中之二者一起形成稠合的碳环基或杂环基，该稠合的碳环基或杂环基任选地经1-3个选自以下的取代基取代：C1-C3烷基，-NH2，-OH，-Cl，-F，-Br，C1-C3氨基烷基，C1-C3羟基烷基，C1-C3烷氧基和苯基。
14.根据权利要求13所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1选自以下组内：
Figure FDA0003339594170000041
Figure FDA0003339594170000051
其中A是连接至嘧啶环的连接点。
15.根据权利要求13所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物以通式(Ic)表示：
Figure FDA0003339594170000061
16.根据权利要求13所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物以通式(Id)表示：
Figure FDA0003339594170000062
17.根据权利要求16所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
Figure FDA0003339594170000063
取代基选自以下组内：
Figure FDA0003339594170000064
其中A是连接至嘧啶环的连接点。
18.根据权利要求13所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物以通式(Ie)表示：
Figure FDA0003339594170000071
19.根据权利要求18所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
Figure FDA0003339594170000072
取代基选自以下组内：
Figure FDA0003339594170000073
Figure FDA0003339594170000074
其中A是连接至嘧啶环的连接点。
20.根据权利要求13所述的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物以通式(If)表示：
Figure FDA0003339594170000075
21.根据权利要求20所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中
Figure FDA0003339594170000081
取代基选自以下组内：
Figure FDA0003339594170000082
其中A是连接至嘧啶环的连接点。
22.根据上述权利要求中任一项所述的化合物，其中R3是-CH3。
23.根据权利要求1至21中任一项所述的化合物，其中R3是-NH2。
24.根据权利要求1至21中任一项所述的化合物，其中R3是-H。
25.根据权利要求1至21中任一项所述的化合物，其中R3是-Cl。
26.根据权利要求13至25中任一项所述的化合物，其中R8是-H且R6和R7二者都是-Cl。
27.根据权利要求1所述的化合物，选自以下组内：
2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(3-氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺；
6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺；
6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(3-氟-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺；
6-氨基-2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺-[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-{9-氨基-3-氮杂双环[3.3.1]壬烷-3-基}-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-[(1R)-1-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-[(1R)-1-氨基-3，3-二氟-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸甲基酰胺；
6-氨基-2-[6-氨基-7-羟基-1-(丙烷-2-基)-2-氮杂螺[3.4]辛烷-2-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-[8-(氨基甲基)-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-[3-(氨基甲基)-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-2-[(1R，7S，11s)-11-氨基-1，7-二甲基-9-氮杂双环[5.3.1]十一烷-9-基]嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-2-[(1R，7S，11r)-11-氨基-1，7-二甲基-9-氮杂双环[5.3.1]十一烷-9-基]嘧啶-4-甲酰胺；
2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-羟基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-6-氯-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺；
6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸(2-羟基-乙基)-酰胺；
2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-6-氯-5-(3-氟-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺；
6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸羟基酰胺；
6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰肼；
2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-6-氟-5-(3-氟-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺；
6-氨基-2-[4-(氨基甲基)-8-氧杂-2-氮杂螺[4.5]癸烷-2-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
2-[3a-(氨基甲基)-八氢-1H-异吲哚-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(3-氟-苯基)-6-羟基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
(4P)-6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
(4M)-6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
2-(3-氨基-环己基氨基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
6-氨基-2-[4-氨基-4-(羟基甲基)哌啶-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
(4M)-2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(4P)-2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
2-[(4-氨基-环己基)-甲基-氨基]-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-(7-氨基-3-氧杂-9-氮杂-双环[3.3.1]壬-9-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
6-氨基-2-[8-(氨基甲基)-2-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷-6-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
2-((R)-6-氨基-2-氮杂-螺[4.4]壬-2-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-(3-氨基甲基-环戊基氨基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-((S)-6-氨基-2-氮杂-螺[4.4]壬-2-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
6-氨基-2-{4-氨基-1-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基}-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-[4-(3-氨基恶烷-2-基)哌啶-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-[3-(氨基甲基)-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-[4-(氨基甲基)-4-甲基哌啶-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
2-(4-氨基-六氢-环戊二烯并[c]吡咯-2-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺盐酸盐；
2-(2-氨基甲基-环戊基氨基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-(3-氨基甲基-3-氟-氮杂环丁烷-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-(4-氨基-4-甲基-氮杂环庚烷-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-(2-氨基甲基-氮杂环丁烷-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
(4P)-2-[(3R)-3-(氨基甲基)吗啉-4-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺盐酸盐；
(4P)-2-[(3S)-3-(氨基甲基)吗啉-4-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺盐酸盐；
6-氨基-2-(4-氨基氮杂环庚烷-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-(4-氨基-八氢-1H-异吲哚-2-基)-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-[(3R，4R)-3-(氨基甲基)-4-苯基吡咯烷-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-({4-氮杂螺[双环[2.2.2]辛烷-2，2′-恶烷]-4′-基}氨基)-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-(4-氨基-4-丙基哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-[3-(氨基甲基)-3-羟基氮杂环丁烷-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-[3-(氨基甲基)-3-甲基氮杂环丁烷-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-2-(5-甲基-六氢-吡咯并[3，4-c]吡咯-2-基)-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-(3-氨基-3-羟基甲基-氮杂环丁烷-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-(1-氨基-5-氮杂-螺[2.4]庚-5-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(1H-苯并咪唑-4-基)-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-苯并[1，2，5]-恶二唑-4-基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(7-氯-1H-吲唑-6-基)-嘧啶-4-羧酸酰胺；
5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-2-(5-甲基-六氢-吡咯并[3，4-c]吡咯-2-基)-嘧啶-4-羧酸酰胺；
(5M)-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-2-{[(3S，4R)-3-氟哌啶-4-基]氨基}-嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-{[(1R，2S)-2-氨基环己基]氨基}-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
(5P)-6-氨基-2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
(5M)-6-氨基-2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
2-(3，9-二氮杂-双环[4.2.1]-壬-3-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
6-氨基-2-(3-氨基氮杂环丁烷-1-基)-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-[(1R，5S，6R)-6-(氨基甲基)-3-氮杂双环-[3.1.0]己烷-3-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-[2-(氨基甲基)-氮杂环丁烷-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
2-((3aR，4R，6aS)-4-氨基-六氢-环戊二烯并-[c]吡咯-2-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-((3aS，6aS)-4-氨基-六氢-环戊二烯并-[c]吡咯-2-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-((3aS，4S，6aR)-4-氨基-六氢-环戊二烯并-[c]吡咯-2-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-((3aS，4R，6aR)-4-氨基-六氢-环戊二烯并[c]吡咯-2-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-((3aR，6aR)-4-氨基-六氢-环戊二烯并-[c]吡咯-2-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-((3aR，4S，6aS)-4-氨基-六氢-环戊二烯并-[c]吡咯-2-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
(4M)-2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-6-氯-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
(4P)-2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-6-氯-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
2-((3R，4S)-3-氨基-4-羟基-吡咯烷-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2，3-二氯-吡啶-4-基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2-氯-4-氟-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(4-氯-吡啶-3-基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-((3S，4S)-3-氨基-4-羟基-吡咯烷-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-6-甲基-5-吡啶-4-基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
(4M)-2-{[(1S，3R)-3-氨基环己基]氨基}-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(4M)-2-{[(1R，3S)-3-氨基环己基]氨基}-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(4P)-2-{[(1R，3S)-3-氨基环己基]氨基}-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(4P)-2-{[(1S，3R)-3-氨基环己基]氨基}-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-(4-氨基-4-甲基-氮杂环庚烷-1-基)-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(1H-吲哚-3-基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
2-(4-氨基-环己基-氨基)-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
(5M)-2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]-癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(5P)-2-[(3S，4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]-癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(5M)-2-[(1R)-1-氨基-3，3-二氟-8-氮杂螺[4.5]-癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯-苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(5P)-2-[(1R)-1-氨基-3，3-二氟-8-氮杂螺[4.5]-癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(5P)-2-[(3aR，6aS)-3a-(氨基甲基)-八氢-环戊二烯并[c]吡咯-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
(5M)-2-[(3aR，6aS)-3a-(氨基甲基)-八氢-环戊二烯并[c]吡咯-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
(5P)-2-[(3aR，7aS)-3a-(氨基甲基)-八氢-1H-异吲哚-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
(5P)-2-[(3aS，7aR)-3a-(氨基甲基)-八氢-1H-异吲哚-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
(5M)-2-[(3aR，7aS)-3a-(氨基甲基)-八氢-1H-异吲哚-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
(5M)-2-[(3aS，7aR)-3a-(氨基甲基)-八氢-1H-异吲哚-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
(5P)-2-[(3aS，6aR)-3a-(氨基甲基)-八氢-环戊二烯并[c]吡咯-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
(5M)-2-[(3aS，6aR)-3a-(氨基甲基)-八氢-环戊二烯并[c]吡咯-2-基]-6-氨基-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
(5P)-6-氨基-2-[4-氨基-4-(二氟甲基)哌啶-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
(5M)-6-氨基-2-[4-氨基-4-(二氟甲基)哌啶-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
(5P)-6-氨基-2-[(4S)-4-氨基-4-甲基氮杂环庚烷-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
(5P)-6-氨基-2-[(4R)-4-氨基-4-甲基氮杂环庚烷-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
(5M)-6-氨基-2-[(4S)-4-氨基-4-甲基氮杂环庚烷-1-基]-5-(2，3-二氯苯基)-嘧啶-4-甲酰胺；
2-(4-氨基-4-甲基-哌啶-1-基)-5-(2-氯-3-三氟甲基-苯基)-6-甲基-嘧啶-4-羧酸酰胺；
6-氨基-2-[(4-氨基-环己基)-甲基-氨基]-5-(2，3-二氯-苯基)-嘧啶-4-羧酸酰胺；
(5M)-2-[(1R)-1-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(5P)-2-[(1R)-1-氨基-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(4M)-2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2-氯-4-氟-3-甲氧基苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(4P)-2-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)-5-(2-氯-4-氟-3-甲氧基苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(5P)-6-氨基-2-[(1S)-1-氨基-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
(5M)-6-氨基-2-[(1S)-1-氨基-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
(5M)-2-[(1S)-1-氨基-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(5P)-2-[(1S)-1-氨基-1，3-二氢螺[茚-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-[(4S)-4-氨基-4，6-二氢螺[环戊二烯并[d][1，3]噻唑-5，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
2-[(3R)-3-氨基-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
6-氨基-2-[(3R)-3-氨基-3H-螺[1-苯并呋喃-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
(4M)-2-[(3R)-3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(4M)-2-[(3S)-3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(4P)-2-[(3R)-3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(4P)-2-[(3S)-3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)-6-甲基嘧啶-4-甲酰胺；
(4P)-6-氨基-2-[(3R)-3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
(4P)-6-氨基-2-[(3S)-3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
(4M)-6-氨基-2-[(3R)-3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；and
(4M)-6-氨基-2-[(3S)-3-氨基-3H-螺[呋喃并[2，3-b]吡啶-2，4′-哌啶]-1′-基]-5-(2，3-二氯苯基)嘧啶-4-甲酰胺；
或其药学上可接受的盐。
28.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据上述权利要求中任一项所述的化合物，以及药学上可接受的载体、辅剂和/或赋形剂。
29.根据上述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在用于治疗癌症中的用途。
30.根据权利要求29所述的用途，其中所述癌症选自急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、肾上腺皮质癌、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、子宫癌、子宫增生、绒毛膜癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、原发性血小板增多症、胃癌、泌尿生殖器癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、神经纤维瘤病、毛细胞白血病、头颈癌、霍奇金氏病、卡波西肉瘤、肾癌、肺癌、淋巴瘤、恶性类癌瘤、恶性高钙血症、恶性黑色素瘤、恶性胰腺胰岛素瘤、甲状腺髓样癌、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、蕈样肉芽肿病、髓细胞白血病、淋巴细胞白血病、成神经细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、非小细胞肺癌、成骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、真性红细胞增多症、原发性脑癌、原发性巨球蛋白血症、前列腺癌、肾细胞癌、横纹肌肉瘤、皮肤癌、小细胞肺癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌和维尔姆氏瘤。
31.根据权利要求29或30所述的用途，其中所述癌症选自非小细胞肺癌、小细胞肺癌、头颈癌、乳腺癌、食道癌、胃癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤、胰腺癌、成骨肉瘤、黑色素瘤和肾癌。
32.根据权利要求29至31中任一项所述的用途，其中所述化合物与一或多种附加治疗剂联合给药。
33.根据权利要求32所述的用途，其中所述一或多种附加治疗剂是EGFR抑制剂、MET抑制剂、PD-L1抑制剂、MEK 1/2抑制剂、TGF-βR路径抑制剂或其组合。
34.根据权利要求33所述的用途，其中所述一或多种附加治疗剂是爱必妥、特普替尼、阿维鲁单抗、Muc1-TGFβR2 Nb、EGFR-Muc1-ADC、匹马赛替尼、派姆单抗、纳武利尤单抗、西米单抗、阿特珠单抗、度伐利尤单抗或其组合。
35.根据权利要求34所述的用途，其中所述一或多种附加治疗剂是爱必妥、特普替尼、阿维鲁单抗、匹马赛替尼或其组合。
36.根据权利要求1至19中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在用于治疗选自以下组内的疾病或病症中的用途：年龄相关性黄斑变性、克罗恩病、肝硬化、慢性炎症相关疾病、增殖性糖尿病视网膜病变、增殖性玻璃体视网膜病变、早产儿视网膜病变、肉芽肿、与器官或组织移植相关的免疫过度增殖、炎症性肠病、银屑病、类风湿性关节炎、系统性狼疮红斑病(SLE)，继发于视网膜缺氧和血管炎的血管过度增生。
37.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至27中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述癌症选自急性淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、肾上腺皮质癌、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、子宫癌、子宫增生、绒毛膜癌、结肠癌、子宫内膜癌、食道癌、原发性血小板增多症、胃癌、泌尿生殖器癌、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、神经纤维瘤病、毛细胞白血病、头颈癌、霍奇金氏病、卡波西肉瘤、肾癌、肺癌、淋巴瘤、恶性类癌瘤、恶性高钙血症、恶性黑色素瘤、恶性胰腺胰岛素瘤、甲状腺髓样癌、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、蕈样肉芽肿病、髓细胞白血病、淋巴细胞白血病、成神经细胞瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、非小细胞肺癌、成骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、真性红细胞增多症、原发性脑癌、原发性巨球蛋白血症、前列腺癌、肾细胞癌、横纹肌肉瘤、皮肤癌、小细胞肺癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌和维尔姆氏瘤。
39.根据权利要求37或38所述的方法，其中所述癌症选自非小细胞肺癌、小细胞肺癌、乳癌、食道癌、胃癌、结肠直肠癌、神经胶母细胞瘤、胰腺癌、骨肉瘤、黑色素瘤及肾癌。
40.根据权利要求37至39中任一项所述的方法，包括向所述受试者施用一或多种附加治疗剂。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述一或多种附加治疗剂是EGFR抑制剂、MET抑制剂、PD-L1抑制剂、MEK 1/2抑制剂、TGF-βR路径抑制剂或其组合。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述一或多种附加治疗剂是爱必妥、特普替尼、阿维鲁单抗、匹马赛替尼或其组合。
43.一种治疗有需要的受试者的增殖性疾病或病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据权利要求1至27中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述增殖性疾病或病症选自以下组内：年龄相关性黄斑变性、克罗恩病、肝硬化、慢性炎症相关疾病、增殖性糖尿病视网膜病变、增殖性玻璃体视网膜病变、早产儿视网膜病变、肉芽肿、与器官或组织移植相关的免疫过度增殖、炎症性肠病、银屑病、类风湿性关节炎、系统性狼疮红斑病(SLE)，继发于视网膜缺氧和血管炎的血管过度增生。
45.根据权利要求43至44中任一项所述的方法，包括向所述受试者施用有效量的一或多种附加治疗剂。
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