CN113791204A - 采用计算机辅助分析系统检测哺乳动物精液品质的方法 - Google Patents

采用计算机辅助分析系统检测哺乳动物精液品质的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113791204A
CN113791204A CN202111078446.2A CN202111078446A CN113791204A CN 113791204 A CN113791204 A CN 113791204A CN 202111078446 A CN202111078446 A CN 202111078446A CN 113791204 A CN113791204 A CN 113791204A
Authority
CN
China
Prior art keywords
semen
sperm
quality
detecting
analysis system
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111078446.2A
Other languages
English (en)
Inventor
蒙利洁
安军
刘兰
陆玉安
龚婷
杨艺
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Agricultural And Rural Bureau Of Libo County
Original Assignee
Agricultural And Rural Bureau Of Libo County
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Agricultural And Rural Bureau Of Libo County filed Critical Agricultural And Rural Bureau Of Libo County
Priority to CN202111078446.2A priority Critical patent/CN113791204A/zh
Publication of CN113791204A publication Critical patent/CN113791204A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483Physical analysis of biological material
    • G01N33/487Physical analysis of biological material of liquid biological material

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种采用计算机辅助分析系统检测哺乳动物精液品质的方法,包括如下步骤:(1)常规精液品质检测;(2)精子品质的显微镜检查;(3)精子畸形率检查;(4)精液标本的处理;(5)利用全自动精液质量计算机辅助分析系统(CASA)对哺乳动物精液的精子密度、活力、存活率、畸形率、运动轨迹进行检测。本发明具有操作简便、快速高效、并且获得大量参数、有效解决在短期内检测精液品质问题、实现量的自动化分析特点,比采用常规精液品质检测法更快速、便于统计、对比性强、效果更好,且本发明简单易懂,便于操作。

Description

采用计算机辅助分析系统检测哺乳动物精液品质的方法
技术领域
本发明涉及生物科学技术领域,特别涉及到采用全自动精液质量计算机辅助分析系统(CASA)检测哺乳动物精液品质的方法。
背景技术
哺乳动物精液品质是影响动物繁殖力的一项重要因素,具有良好受精能力的精子是受精成功的首要条件。精子产生于睾丸生精上皮,上皮生精细胞通过自身增殖、减数分裂和精子细胞变形等一系列复杂活动形成精子,随后在附睾中进行成熟。射精后,精子进入雌性生殖道后获能,最终完成受精过程。为了最大限度发挥公畜的种用价值,现代化养殖场越来越多的采用人工授精技术。人工授精技术相对自然交配而言有着节约生产成本、提高种公猪的利用、提高配种效益和防止交叉污染等优点而受到人们的注视。公猪精液品质的好坏关系到人工授精的成败和实际利用效果。通过精液品质检测和精液的冷冻保存的技术对建立优良的品种资源库,保存优良品种起着不可替代作用。
目前对于哺乳动物精液品质测定及评价采用的精液常规检查法、有外观检查法、显微镜检查法、生物化学检查法、精子活力检查法和流式细胞仪检查等五种,有文献报道以上几种方法所测定的结果不能完全评价精液品质的标准,且本发明人前期通过以上几种方法的预实验时,发现以上几种方法所得精液参数较少,且受主观因素影响较大,费时费力,长时间的观察导致大量精子活性降低,而流式细胞术虽然可以快速高效检测精子某些指标但对于精子运动轨迹无法收集到有效数据。
全自动精液质量计算机辅助分析系统(CASA)是一种利用计算机技术,通过一台与显微镜相连接的录像机,确定和跟踪个体精子细胞的活动和计算精子活动的一系列“运动学”参数的检测方法。随着计算机技术和图像处理技术的快速发展,全自动精液质量计算机辅助分析系统(CASA)作为一种新型的精液分析技术方法得到了国内外的广泛关注和研究,其可以快速、准确、客观的评定精子的密度、精子活力分级、精子活率、精子活力、精子各项微细性能运动等参数进行分析。
与传统的精液常规检测技术相比全自动精液质量计算机辅助分析系统(CASA)有效地解决了传统检测的局限性,实现量的自动化分析、高效快速收集评价精子质量的标准参数,并结合显微镜收集精子运动轨迹检测多方面的参数,例如,精子的直线速度(VSL)、曲线速度(VCL)、平均路径速度(VAP)、直线性(LIN)、前向性(STR)、摆动性(WOB)、鞭打频率(BCF)、侧摆幅度(ALH)等精子微细运动参数路线。
与普通显微镜相比,其具有快速方便、对比性强,便于交流等优点。其动态指标的测定及应用使精液的检测更加全面化、更加标准化,同时消除了人为主观因素对试验结果造成的影响。前人的研究已经表明,全自动精液质量计算机辅助分析系统(CASA)利用先进的图像采集设备对精子的运动轨迹进行定位跟踪,同时将精子的各项微细运动性能参数传送到计算机,然后利用各种图像分析软件对采集到的精子视频文件进行分析处理,最终计算出精子的各种微细运动性能参数,并可储存、显示、打印输出所需图像及其分析丈量的数据。因此,采用全自动精液质量计算机辅助分析系统(CASA)检测哺乳动物精液品质,对评价精子质量的标准具有重要的作用。
发明内容
针对现有发明材料的不足,本发明提供了一种采用全自动精液质量计算机辅助分析系统(CASA)检测哺乳动物精液品质的方法,它具有操作简便、快速高效、特异性强、并且获得大量参数、有效解决在短期内检测精液品质等问题、实现量的自动化分析等特点,比采用常规精液品质检测法更快速、便于统计、对比性强、效果更好等优点。
为实现以上目的,本发明通过以下技术方案予以实现:
一种采用计算机辅助分析系统检测哺乳动物精液品质的方法,包括如下步骤:
(1)常规精液品质检测实验步骤:
即精液品质肉眼外观检查:用干净的集精杯收集新鲜精液后置于37 ℃孵育箱,观察精液的颜色、气味、射精量、云雾状;
射精量:用干净烧杯测其容量;
感官:肉眼观察,未经稀释哺乳动物的正常精液密度低,透明度较多,呈淡乳色或浅灰白色;
气味:无味或略带腥味;
pH:取新鲜精液滴一滴在pH试纸上,数秒变色后,与标准比色卡进行比较,确定其pH;
(2)精子品质的显微镜检查:
精子活力评定:采集好的新鲜精液用生理盐水稀释,滴一滴于载玻片上放显微镜下观察,用计数器来数视野中呈直线前进运动精子数目,精子活力=(直线运动精子数/总精子数)*100 %;
精子密度:用3 %氯化钠溶液将精液稀释10倍,充分混匀后用移液枪吸取一滴滴在血细胞计数板与盖玻片之间的间隙边缘,静置几分钟后放在显微镜下观察;找到计数室中的中方格,对五个中方格中的精子进行计数,精子密度=5个计数格精子总数*5*10*1000*10倍;
重复3次;
(3)精子畸形率检查:采集的新鲜精液用0.9 %氯化钠溶液稀释后,滴在载玻片上做成精子抹片,用95%的酒精进行固定;然后滴5~10滴红墨水,静置5 min后,洗去染色剂,将水分甩干晾干后,放在显微镜下进行肉眼观察,一般观察3~5个视野,分别记录每个视野中精子总数和畸形精子数;
(4)精液标本的处理:
根据全自动精液质量计算机辅助分析系统(CASA)检测精子密度,取1 mL精液于EP管中,按1:10加入0.9% NaCl,加热至37 ℃,轻轻混匀;
(5)精液品质检测:
利用全自动精液质量计算机辅助分析系统(CASA)对哺乳动物精液的精子密度、活力、存活率、畸形率、运动轨迹进行检测,具体步骤如下:
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE002
打开总电源,调试显微镜的灯光处于最小状态,然后依次打开显微镜的开关、恒温载物台的开关,进行预热37 ℃、30 min,以及电脑的开关;
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE004
用经过37 ℃的0.9% NaCl稀释的新鲜精液滴4 μL在精液计数板上按置于恒温载物台上,每个样品重复3次,调试显微镜进行观察,直到出现清晰画面;
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE006
选取合适的、密度较大的某一画面进行微调,调至清晰后,进行连续帧采集,至少采集3组;
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE008
未标记上的精子点击“遗漏补进”进行手动标记→“自动跟踪”,进入下一组操作,步骤相同,确认后点击“完成”;
⑤接着找到一个密度适中、没有精子交叉重叠画面进行单帧采集,至少采集3组,确认后点击“完成”。
⑥如果想将结果导出到“Excel”,则点击左上角的“历史”进行查询,找到想要导出的文件,点击“导出Excel”就可以进行保存了。
进一步地,所述步骤中染液的配制:
0.9% NaCl:量取80 mL灭菌水,加入0.9g NaCl固体,搅拌至完全溶解后,定容至100 mL;
3% NaCl:量取80 mL灭菌水,加入3g NaCl固体,搅拌至完全溶解后,定容至100mL。
进一步地,所述步骤(5)中采集画面一定将灰度值比例调试到最佳状态,即进行连续帧采集和单帧采集时,画面中精子尽可能都被标记,且精子不重叠,每组采集至少3组。
进一步地,所述步骤从稀释精液到采集画面完成整个过程在2分钟之内完成。
进一步地,所述哺乳动物为从江香猪。
本发明同现有技术相比,它具有操作简便、快速高效、特异性强、并且获得大量参数、有效解决在短期内检测精液品质等问题、实现量的自动化分析等特点,比采用其它方法适应性更强、效果更好,且本发明简单易懂,便于操作。
附图说明
图1是连续帧采集三组的图片。
图2是单帧采集三组的图片。
具体实施方式
实施例:一种采用计算机辅助分析系统检测哺乳动物精液品质的方法,实验和步骤如下:
全自动精液质量计算机辅助分析系统(ML-210JZ型号)购自南宁松景天伦生物科技有限公司;光学显微镜、载玻片和盖玻片购自江苏世泰实验器材有限公司;NaCl粉末购自北京索莱宝科技有限公司。
一、试剂配制:
0.9% NaCl:量取80 mL灭菌水,加入0.9g NaCl固体,搅拌至完全溶解后,定容至100 mL。
3% NaCl:量取80 mL灭菌水,加入3g NaCl固体,搅拌至完全溶解后,定容至100mL。
二、通过手握法采集从江香猪公猪新鲜精液后一部分现场做精液常规检测,另一部分新鲜精液用恒温箱(37 ℃)固定好带回实验室用全自动精液质量计算机辅助分析系统(CASA)尽快进行相关检测及分析。严格按照GB/T25172-2010所示方法对精液进行采集、稀释、保存和检查。
三、常规精液品质检测
即精液品质肉眼外观检查:用干净的集精杯收集新鲜精液后置于37 ℃孵育箱,观察精液的颜色、气味、射精量、云雾状等。
射精量:用干净烧杯测其容量。
感官:肉眼观察,未经稀释的猪的正常精液密度低,透明度较多,呈淡乳色或浅灰白色。
气味:无味或略带腥味。
pH:取新鲜精液滴一滴在pH试纸上,数秒变色后,与标准比色卡进行比较,确定其pH。
(2)精子品质的显微镜检查
精子活力评定:采集好的新鲜精液用生理盐水稀释,滴一滴于载玻片上放显微镜下观察,用计数器来数视野中呈直线前进运动精子数目。精子活力=(直线运动精子数/总精子数)*100 %。
精子密度:用3 %氯化钠溶液将精液稀释10倍,充分混匀后用移液枪吸取一滴滴在血细胞计数板与盖玻片之间的间隙边缘,静置几分钟后放在显微镜下观察。找到计数室中的中方格,对五个中方格中的精子进行计数。精子密度=5个计数格精子总数*5*10*1000*10倍。
重复3次。
(3)精子畸形率检查:采集的新鲜精液用0.9 %氯化钠溶液稀释后,滴在载玻片上做成精子抹片,然后用95%的酒精进行固定。然后滴5~10滴红墨水,静置5 min后,洗去染色剂,将水分甩干晾干后,放在显微镜下进行肉眼观察,一般观察3~5个视野,分别记录每个视野中精子总数和畸形精子数。
四、精液标本的处理
根据全自动精液质量计算机辅助分析系统(CASA)检测精子密度,取适量精液于EP管中,按1:10加入0.9% NaCl(加热至37 ℃)轻轻混匀。
五、精液品质检测
利用全自动精液质量计算机辅助分析系统(CASA)对香猪精液的精子密度、活力、存活率、畸形率、运动轨迹等进行检测(使用全自动精液质量计算机辅助分析系统能够精准地跟踪识别精子的运动轨迹,提高数据的精确性)。具体步骤如下:
①打开总电源,调试显微镜的灯光处于最小状态,然后依次打开显微镜的开关、恒温载物台的开关,进行预热(37 ℃)30 min,以及电脑的开关。
②用经过0.9% NaCl(37 ℃)稀释的新鲜精液滴(4 μL)在精液计数板上按置于恒温载物台上(每个样品重复3次),调试显微镜进行观察,直到出现清晰画面。
③选取合适的、密度较大的某一画面进行微调,调至清晰后,进行连续帧采集(至少采集3组)。参见图1。
④未标记上的精子点击“遗漏补进”进行手动标记→“自动跟踪”,进入下一组操作,步骤相同,确认后点击“完成”。
⑤接着找到一个密度适中、没有精子交叉重叠画面进行单帧采集(至少采集3组),参见图2,确认后点击“完成”。(从稀释精液到采集画面完成整个过程在2分钟之内完成)。
⑥如果想将结果导出到“Excel”,则点击左上角的“历史”进行查询,找到想要导出的文件,点击“导出Excel”就可以进行保存了。
本发明具有操作简便、快速高效、并且获得大量参数、有效解决在短期内检测精液品质等问题、实现量的自动化分析等特点,比采用常规精液品质检测法更快速、便于统计、对比性强、效果更好,且本发明简单易懂,便于操作。
本发明不局限于上述最佳实施方式,任何人在本发明的启示下可得到其他形式的产品。但是,无论在精液标本处理试剂配制、精液稀释比、精液重浓度和操作顺序先后方面作任何的变化,凡是具有和本申请相同或相似的技术方案,均属于本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种采用计算机辅助分析系统检测哺乳动物精液品质的方法,包括如下步骤:
(1)常规精液品质检测实验步骤:
即精液品质肉眼外观检查:用干净的集精杯收集新鲜精液后置于37 ℃孵育箱,观察精液的颜色、气味、射精量、云雾状;
射精量:用干净烧杯测其容量;
感官:肉眼观察,未经稀释哺乳动物的正常精液密度低,透明度较多,呈淡乳色或浅灰白色;
气味:无味或略带腥味;
pH:取新鲜精液滴一滴在pH试纸上,数秒变色后,与标准比色卡进行比较,确定其pH;
其特征在于:(2)精子品质的显微镜检查:
精子活力评定:采集好的新鲜精液用生理盐水稀释,滴一滴于载玻片上放显微镜下观察,用计数器来数视野中呈直线前进运动精子数目,精子活力=(直线运动精子数/总精子数)*100 %;
精子密度:用3 %氯化钠溶液将精液稀释10倍,充分混匀后用移液枪吸取一滴滴在血细胞计数板与盖玻片之间的间隙边缘,静置几分钟后放在显微镜下观察;找到计数室中的中方格,对五个中方格中的精子进行计数,精子密度=5个计数格精子总数*5*10*1000*10倍;
重复3次;
(3)精子畸形率检查:采集的新鲜精液用0.9 %氯化钠溶液稀释后,滴在载玻片上做成精子抹片,用95%的酒精进行固定;然后滴5~10滴红墨水,静置5 min后,洗去染色剂,将水分甩干晾干后,放在显微镜下进行肉眼观察,一般观察3~5个视野,分别记录每个视野中精子总数和畸形精子数;
(4)精液标本的处理:
根据全自动精液质量计算机辅助分析系统检测精子密度,取1 mL精液于EP管中,按1:10加入0.9% NaCl,加热至37 ℃,轻轻混匀;
(5)精液品质检测:
利用全自动精液质量计算机辅助分析系统(CASA)对哺乳动物精液的精子密度、活力、存活率、畸形率、运动轨迹进行检测,具体步骤如下:
Figure DEST_PATH_IMAGE002
打开总电源,调试显微镜的灯光处于最小状态,然后依次打开显微镜的开关、恒温载物台的开关,进行预热37 ℃、30 min,以及电脑的开关;
Figure DEST_PATH_IMAGE004
用经过37 ℃的0.9% NaCl稀释的新鲜精液滴4 μL在精液计数板上按置于恒温载物台上,每个样品重复3次,调试显微镜进行观察,直到出现清晰画面;
Figure DEST_PATH_IMAGE006
选取合适的、密度较大的某一画面进行微调,调至清晰后,进行连续帧采集,至少采集3组;
Figure DEST_PATH_IMAGE008
未标记上的精子点击“遗漏补进”进行手动标记→“自动跟踪”,进入下一组操作,步骤相同,确认后点击“完成”;
⑤接着找到一个密度适中、没有精子交叉重叠画面进行单帧采集,至少采集3组,确认后点击“完成”;
⑥如果想将结果导出到“Excel”,则点击左上角的“历史”进行查询,找到想要导出的文件,点击“导出Excel”就可以进行保存了。
2.根据权利要求1所述的采用计算机辅助分析系统检测哺乳动物精液品质的方法,其特征在于:所述步骤中染液的配制:
0.9% NaCl:量取80 mL灭菌水,加入0.9g NaCl固体,搅拌至完全溶解后,定容至100mL;
3% NaCl:量取80 mL灭菌水,加入3g NaCl固体,搅拌至完全溶解后,定容至100 mL。
3.根据权利要求1所述的采用计算机辅助分析系统检测哺乳动物精液品质的方法,其特征在于:所述步骤(5)中采集画面一定将灰度值比例调试到最佳状态,即进行连续帧采集和单帧采集时,画面中精子尽可能都被标记,且精子不重叠,每组采集至少3组。
4.根据权利要求1所述的采用计算机辅助分析系统检测哺乳动物精液品质的方法,其特征在于:所述步骤从稀释精液到采集画面完成整个过程在2分钟之内完成。
5.根据权利要求1所述的采用计算机辅助分析系统检测哺乳动物精液品质的方法,其特征在于:所述哺乳动物为从江香猪。
CN202111078446.2A 2021-09-15 2021-09-15 采用计算机辅助分析系统检测哺乳动物精液品质的方法 Pending CN113791204A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111078446.2A CN113791204A (zh) 2021-09-15 2021-09-15 采用计算机辅助分析系统检测哺乳动物精液品质的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111078446.2A CN113791204A (zh) 2021-09-15 2021-09-15 采用计算机辅助分析系统检测哺乳动物精液品质的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113791204A true CN113791204A (zh) 2021-12-14

Family

ID=79183404

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111078446.2A Pending CN113791204A (zh) 2021-09-15 2021-09-15 采用计算机辅助分析系统检测哺乳动物精液品质的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113791204A (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105154516A (zh) * 2015-10-15 2015-12-16 中国农业大学 一种灵长类实验动物精子质量检测方法
CN107144518A (zh) * 2017-05-03 2017-09-08 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所 一种猪精液有效精子数的检测方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105154516A (zh) * 2015-10-15 2015-12-16 中国农业大学 一种灵长类实验动物精子质量检测方法
CN107144518A (zh) * 2017-05-03 2017-09-08 安徽省农业科学院畜牧兽医研究所 一种猪精液有效精子数的检测方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘安娜等: "SQA-V全自动精子质量分析仪与计算机辅助精液分析系统结果比较", 《职业与健康》, vol. 25, no. 20, pages 2161 - 2162 *
刘少华等: "两种检测方法对大河乌猪精液品质比较分析研究", 《云南畜牧兽医》, no. 01, pages 7 - 8 *
吴志平等: "高精子密度精液标本质量分析方法探讨", 《临床输血与检验》, vol. 08, no. 04, pages 288 - 290 *
黎宗强: "计算机辅助精液分析系统对食蟹猴精液的分析", 《安徽农业科学》, vol. 39, no. 32, pages 19893 - 19895 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101149327B (zh) 基于细胞显微图像信息的抗肿瘤药物评价和筛选方法
DE3853254T2 (de) Ausrüstungssatz und Verfahren für Analysen von biologischen Proben.
WO2020133635A1 (zh) 全自动精子细胞检测仪
CN101560544A (zh) 一种细胞综合检测方法
CN102662048B (zh) 一种尿液分析方法及尿液分析装置
CN202770842U (zh) 一种尿液分析装置
TWI746984B (zh) 一種骨髓塗片數位化的流程方法
WO2021240914A1 (ja) 尿沈渣用染色液
CN105466921A (zh) 一种多样品同时检测的方法
CN110082265A (zh) 基于线粒体膜电位变化检测网织红细胞的方法
Singh et al. Computer-assisted sperm analysis (CASA) in veterinary science: A review
Szabo et al. Evaluation of an automated instrument for viability and concentration measurements of cryopreserved hematopoietic cells
Kouri et al. ISLH recommended reference procedure for the enumeration of particles in urine
CN109852664B (zh) 一种用于检测水华或赤潮水体中单一藻类生物量的方法
Johnson et al. Staining sperm for viability assessment
CN113791204A (zh) 采用计算机辅助分析系统检测哺乳动物精液品质的方法
CN111879686A (zh) 一种采用流式细胞术检测哺乳动物精液品质的方法
Pan et al. A sperm quality detection system based on microfluidic chip and micro-imaging system
CN104897630B (zh) 一种检测人精子活力的方法
Farrell et al. Motility and other characteristics of human sperm can be measured by computer-assisted sperm analysis of samples stained with Hoechst 33342
CN114778419B (zh) 一种高倍率光学放大成像流式细胞仪
CN109540888B (zh) 一种新型精子质量评价方法
CENARIU et al. Advanced Techniques of Bovine Semen Analysis.
Randall “This stud’sa dud!”-Canine semen evaluation protocols and pitfalls
CN109540889B (zh) 一种新型精子质量评价系统

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20211214