CN107144518A - 一种猪精液有效精子数的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种猪精液中有效精子数的检测方法。操作步骤如下：1.在计数板上设有100个小方格状的计数池，深度0.01mm、长和宽均为0.1mm；2.计数板预热至37℃，在计数池上盖上盖玻片；3.将待测猪精液滴在盖玻片和计数池之间，并自然吸入计数池；4.显微镜检测，统计分析精子密度、精子活力和有效精子数。本发明方法操作简单，只需要配备简单的仪器和部件，更适合不具备自动化精液分析仪的猪场对精液使用前的现场检测；本发明计算方法简单，精液检测时单个小计数中的精子数量除以10所得到的数即为精子密度；单个小计数池中呈直线运动的精子数量除以单个小计数池中总精子数即得到精子活力，精子活力乘以待检精液的总精子数即为有效精子数。
Description
技术领域
本发明属于猪的人工授精技术领域，具体涉及猪精液有效精子数的检测过程。
背景技术
猪的人工授精技术自20世纪20年代开始在养猪业进行尝试，经过近1个世纪的发展，该技术已基本成熟并为国内外大部分猪场所接受。我国已发布了《种猪常温精液》（GB/T23238-2009）与《猪常温精液生产与保存技术规范》(GB/T 25172-2010)的国家标准，标准中规定了种公猪常温精液的要求、抽样、试验方法、判定规则及标志、包装、贮存和运输等，对猪的人工技术的推广实施起到了重要作用。随着国家良种补贴项目的实施，一大批种公猪站建立起来，越来越多的猪场受益，降低了猪场饲养公猪的成本，目前规模化猪场基本上实现了由本交向人工授精的过渡。然而，在种公猪站和场内人工授精的实施过程中，尤其是精液的运输过程中，可能导致精液品质下降，甚至导致精液在输精前已失去活力，品质达不到国家标准（GB 23238-2009和GB/T 25172-2010）的要求，一些昂贵的检测设备（精子自动分析仪、密度仪等）在一般的猪场很难配备齐全，但常温精液在使用前仍要进行检查，判断是否可以继续使用，否则导致母猪的配种失败，延长了母猪的非生产天数，增加猪场的成本。
发明内容
为了实现快速检测猪精液中的有效精子数，本发明提供了一种猪精液有效精子数的简易检测方法。
一种猪精液有效精子数检测的操作步骤如下：
（1）准备计数板
在计数板的中部设有100个大小相同的计数池，所述计数池为小方格状，每个计数池的深度0.01mm、长和宽均为0. 1mm；
（2）检测准备
（2.1）将计数板放于显微镜载物台上，在计数板的底部设有恒温预热板，所述恒温预热板的温度为37℃；
（2.2）将一盖玻片平放于计数池上方，用移液器吸取0.05毫升的待检精液，滴于盖玻片的边缘，利用液体的毛细虹吸作用使精液吸入计数池；
（3）显微镜观察成像
首先，用10×目镜和10×物镜进行显微观察，以便找到计数池位置，然后将物镜调至25倍，观察每个计数池中的精子数量；在250倍的放大显微镜下拍摄成像；
（4）计数
（4.1）统计对角线上连续4个计数池中的精子数，精子数的平均值，记作M；
（4.2）统计所述对角线上连续4个计数池中呈直线运动的运动精子数，运动精子数的平均值，记作X；
（5）统计分析精子密度、精子活力和有效精子数
精子密度（亿/ml）：M/10；
精子活力：X/M；
有效精子总量（亿）：（M/10）×V ×精子活力；
所述V为采集的猪精液总体积。
进一步限定的技术方案如下：
所述待检精液为现采集的新鲜猪精液或稀释好的常温精液。
每份稀释好的常温精液的体积为80毫升，有效精子数为25~40亿，保存温度17℃，保存时间为5天以内。
本发明的有益技术效果体现在以下方面：
（1）本发明通过大量的实践，验证分析，整理出一套适合鲜精和常温精液中有效精子数的简易分析方法，可快速检测新鲜精液的密度，获得有效精子数，并计算出最多可稀释精液的份数；适用于大、中、小型猪场对精液的快速检测。
（2）操作简单，即可全程分析精液品质，如精子计数板、盖玻片、普通显微镜。更适合不具备自动化精液分析仪的猪场对精液使用前的现场检测。
（3）计算方法简单，精液检测时单个小方格中的精子数除以10所得到的数即为精子密度；呈直线运动的精子数除以总精子数即为精子活力；精子活力乘以总精子数即为有效精子数。
附图说明
图1为本发明计数板结构示意图。
图2为新鲜猪精液放大250倍后显微镜观察图。
图3为稀释猪精液放大250倍后显微镜观察图。
具体实施方式
下面结合附图，通过实施例对本发明作进一步地说明。
实施例1（新鲜猪精液）
（1）检测准备
参见图1，在计数板的中部设有100个大小相同的计数池，计数池为小方格状，每个计数池的深度0.01mm、长和宽均为0. 1mm。
将计数板放于显微镜载物台上的恒温预热板上，调节恒温预热板的温度为37℃；将一盖玻片平放于计数池上方；
（2）刚采集的新鲜猪精液，用采精杯测量本次采集的精液量，为260ml；
（3）取新鲜猪精液0.05ml滴于盖玻片与计数池之间，使新鲜猪精液自然虹吸进入计数池；
（4）调节显微镜的目镜和物镜放大倍数均为10倍，观察显微镜成像，找到计数池的视野，然后将显微镜的物镜放大倍数调节至25倍，观察显微镜成像，统计沿计数池对角线上连续的4个小计数池内的总精子数和呈直线运动的运动精子数，如图2(A，B,C,D)所示，统计结果如表1。
（5）统计分析精子密度、精子活力和有效精子数
由表1计算得到如下结果：
精子密度为:平均单个小计数池中总精子数/10=15/10=1.5亿/ml；
精子活力为：平均单具小计数池中呈直线运动的运动精子数/平均单个小计数池中总精子数=14.25/15=0.95；
有效精子数为：精子密度×精子活力×精液总体积=1.5亿/ml×0.95×260ml=370.5亿。
根据以上数据可以计算出可稀释的精液瓶数
每瓶稀释精液的体积为80ml，可稀释瓶数（每瓶稀释精液保证25亿个精子）=有效精子数/25=370.5/25=14.8瓶≈14瓶。
实施例2（稀释后精液）：
（1）稀释猪精液或购买的稀释猪精液，一般按照《种猪常温精液》GB 23238-2009和《猪常温精液生产与保存技术规范》GB/T 25172-2010生产和保存运输，体积均为80ml；
（2）稀释猪精液或购买的稀释猪精液在使用前，按照本发明内容进行检查；
（3）检查前准备
计数板的结构同实施例1。
将计数板放于显微镜载物台上的恒温预热板上，调节恒温预热板的温度为37℃；将一盖玻片平放于计数池上；
（4）取稀释猪精液0.05ml滴于盖玻片与精子计数池之间，使精液自然虹吸进入计数池；
（5）调节显微镜的目镜和物镜放大倍数均为10倍，观察显微镜成像，找到计数池的视野，然后将显微镜的物镜放大倍数调节至25倍，观察显微镜成像，统计沿计数池对角线上连续的4个小计数池内的总精子数和呈直线运动的运动精子数，如附图3(E，F,G,H)，统计结果如表2。显微镜下观察，如图3(E,F,G,H)所示，对图3中每个小方格中精子数量计数，并计算呈直线运动的精子数，统计结果如表2。
（6）统计分析精子密度、精子活力和有效精子数
该份稀释猪精液包含的总精子数为：(单个小计数池中总精子数/10)×80 =(6.5/10)×80=52亿；
精子密度：总精子数/该份稀释猪精液体积=52/80=0.65亿/ml；
精子活力为：单个小计数池中总精子数中呈直线运动的运动精子数/单个小计数池中总精子数总精子平均数=5.25/6.5=0.808；
有效精子数：52×0.808=42.016亿。
根据有效精子数可知，大于国家标准（GB/T 23238-2009）规定的25亿个精子/瓶，所以可以判断该精液可以使用。对于稀释的精液，显微镜下观察到小方格中只要有3个以上活力较好的精子即可判断是合格的。
Claims (3)
1.一种猪精液有效精子数的检测方法，其特征在于操作步骤如下：
（1）准备计数板
在计数板的中部设有100个大小相同的计数池，所述计数池为小方格状，每个计数池的深度0.01mm、长和宽均为0. 1mm；
（2）检测准备
（2.1）将计数板放于显微镜载物台上，在计数板的底部设有恒温预热板，所述恒温预热板的温度为37℃；
（2.2）将一盖玻片平放于计数池上，用移液器吸取0.05毫升的待检精液，滴于盖玻片的边缘，利用液体的毛细虹吸作用使精液吸入计数池；
（3）显微镜观察成像
首先，用10×目镜和10×物镜进行显微观察，以便找到计数池位置，然后将物镜调至25倍，观察每个计数池中的精子数量；在250倍的放大显微镜下拍摄成像；
（4）计数
（4.1）统计对角线上连续4个计数池中的精子数，精子数的平均值，记作M；
（4.2）统计所述对角线上连续4个计数池中呈直线运动的运动精子数，运动精子数的平均值，记作X；
（5）统计分析精子密度、精子活力和有效精子数
精子密度（亿/ml）：M/10；
精子活力：X/M；
有效精子总量（亿）：（M/10）×V ×精子活力；
所述V为采集的猪精液总体积。
2.根据权利要求1所述的一种猪精液有效精子数的检测方法，其特征在于：所述待检精液为现采集的新鲜猪精液或稀释好的常温精液。
3.根据权利要求2所述的一种猪精液有效精子数的检测方法，其特征在于：每份稀释好的常温精液的体积为80毫升，有效精子数为25~40亿，保存温度17℃，保存时间为5天以内。
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