CN113768989A

CN113768989A - 芍药檗皮丸在制备治疗炎症性肠病或炎症相关性结直肠癌药物中的应用

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Publication number: CN113768989A
Application number: CN202111073964.5A
Authority: CN
Inventors: 李睿岩; 蒋华; 徐英梅; 赵亚星; 栾皓帆; 张玉彬
Original assignee: China Pharmaceutical University
Current assignee: China Pharmaceutical University
Priority date: 2021-09-14
Filing date: 2021-09-14
Publication date: 2021-12-10

Abstract

本发明涉及生物医药领域，具体涉及芍药檗皮丸在制备治疗炎症性肠病或炎症相关性结直肠癌药物中的应用。本发明以小鼠为动物试验模型，通过灌胃给药治疗，考察芍药檗皮丸（SYW）对DSS诱导的溃疡性结肠炎以及AOM‑DSS诱导的炎症相关性结直肠癌的治疗作用；芍药檗皮丸（SYW）能有效地治疗AOM‑DSS诱导的小鼠炎症相关性结肠癌。本发明首次发现芍药檗皮丸对上述疾病有治疗作用，增加了芍药檗皮丸新的应用。

Description

芍药檗皮丸在制备治疗炎症性肠病或炎症相关性结直肠癌药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及芍药檗皮丸在制备治疗炎症性肠病或炎症相关性结直肠癌药物中的应用。

背景技术

炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)是一组特发性，慢性、炎症性肠道疾病状态，包括两种主要类型：克罗恩病(crohn’s disease，CD)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)。其病程迁延，易反复发作，具有癌变倾向，被WHO列为现代难治病之一。结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是世界上发病仅次于肺癌和乳腺癌的第三大恶性肿瘤，在女性易患肿瘤中位居第二，在男性易患肿瘤中位居第三，给人民的健康和社会的发展造成了沉重的负担。根据2018年全球癌症数据显示，结直肠癌新发病例超过180万，结直肠癌死亡病例88.1万人，结直肠癌发病率排名第三，死亡率排名第二。目前CRC的治疗方法主要为手术切除和化疗，两者均易复发，副作用严重。19世纪鲁道夫·魏尔啸观察到肿瘤组织中存在白细胞，这首次引出炎症和肿瘤之间的联系。时至今日，炎症和肿瘤之间的密切关系已在许多研究中被证实。炎症相关性结直肠癌(colitis-associated colorectalcancer，CAC)与结直肠炎有着密切的联系。和普通人群相比，炎症性肠病患者有较高的风险发展为结直肠癌。Eaden等的一项meta分析显示：溃疡性结肠炎患者的癌变风险是普通人群的2.6-5.4倍，UC病程10年、20年和30年的风险分别为2％，8％和18％。尽管炎症相关性结直肠癌只占结直肠癌所有病例的1-2％，但它在结直肠癌死亡病人中占据16.7％。与散发性结直肠癌的“腺瘤-腺癌”序列不同，结直肠炎症发展到肿瘤是典型的“炎症-不典型增生-癌症”序列。目前已有报道可使用5-氨基水杨酸类药物及小檗碱治疗UC以及CAC，但仍存在缺陷，且对部分患者产生严重副作用，此类药物的服用通常伴随着断药复发和并发症。因此寻找毒副作用小、功能显著的用于治疗UC和CAC的药物具有重要的应用前景。

结直肠癌发生过程中会涉及多个基因、多个步骤和多个阶段的复杂过程，单靶点药物治疗容易产生耐药性并且药物毒性较大，很难达到预期药效。低剂量药物的应用可有效降低毒副作用，多靶点的协调作用可以更好地提高药物的治疗效果，于是多靶点、低剂量药物的联合应用便成为了当前研究的重要方向。而中药因其具有多靶点、多环节、多系统治疗特点，以综合调控机体整体环境见长，在治愈复杂和慢性疾病中具有雄厚的潜在实力。因此从中药中寻求可有效治疗CAC的药物具有重要的实际应用价值。近年来的临床应用显示，我国的传统中药在治疗癌症中显示出了疗效显著、毒副作用小等一系列明显的优势，具备良好的应用前景。

芍药檗皮丸源自张子和的《张子和方》，由芍药、黄柏、当归、黄连四种中药组成，原用于治疗一切“湿热恶痢”，但尚未见现代临床有关芍药檗皮丸治疗炎症性肠病和炎症相关性结直肠癌的报道。且原古方中采用四味中药粉末直接混合制丸按需口服，存在有效剂量难以控制的缺陷。

发明内容

为了克服现有炎症性肠病和炎症相关性结直肠癌药物的不足，本发明的目的在于提供一种治疗炎症性肠病或炎症相关性结直肠癌的中药复方，特别是提供了如表(Ⅰ)所示的芍药檗皮丸(Shaoyaobopi Wan，SYW)作为治疗炎症相关性结直肠癌的药物的应用。本发明提供了芍药檗皮丸在治疗炎症性肠病和炎症相关性结直肠癌药物中的用途，并且用新的提取方法制备芍药檗皮丸，克服了有效给药剂量难以控制的问题，为UC和CAC患者的治疗提供新选择。

表1 芍药檗皮丸配方

氧化偶氮甲烷(Azoxymethane，AOM)为化学致癌剂1,2-二甲基肼(1,2-dime-thylhydrazine，DMH)代谢中间产物，具有致癌作用稳定、高效等特点，被越来越多的研究者选作化学致癌剂来诱导实验动物的结肠癌。化学致炎剂葡聚糖硫酸钠(Dextran SulfateSodium Salt，DSS)是一种人工合成的硫酸盐多糖，小鼠经饲喂含有DSS的饮水可以形成炎症性肠病模型(简称DSS模型)。其病理改变接近人类UC，会出现以血便、肠道黏膜溃疡和粒细胞浸润为特征的结肠炎症。DSS不仅可以引起小鼠急性UC，经过多个循环饲喂也可以诱发慢性UC和一定比率的CRC。本研究通过AOM-DSS联用，制备炎症相关性结直肠癌模型。

本发明所用芍药檗皮丸(SYW)产品采用常规中药复方提取法制得。将芍药、黄柏、当归、黄连粉碎均匀，分别按配方比例称取粉末，将粉末混匀后加入10倍体积75％乙醇浸泡过夜；次日83℃水浴提取3次，每次1h；而后合并滤液，50℃减压旋蒸回收乙醇，以浓缩提取液；冷冻干燥浓缩后的提取液得到芍药檗皮丸粗粉。采用高效液相色谱(HPLC)分析检测，不同批次SYW重复性高度一致。此项研究表明芍药檗皮丸(SYW)符合开展体内、外生物学活性和药理作用研究要求。将芍药檗皮丸粗粉溶于0.5％羧甲基纤维素钠溶液中以配成不同剂量的小鼠灌胃悬液。

本发明的药物组合物可根据本领域公知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将本发明药物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等。

本发明药物组合可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

例如为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

例如为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、单硬脂酸甘油脂、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂如琼脂粉、干燥粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。

例如为了将给药单元制成胶囊，将有效成份本发明芍药檗皮丸与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明芍药檗皮丸制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或香料等。这些辅料是本领域常用的。

本发明所用的无菌介质都可以通过本领域技术人员众所周知的标准技术制得。可将它们灭菌，例如通过经由细菌过虑器过滤、通过向组合物中加入灭菌剂、通过将组合物放射处理、或通过将组合物加热灭菌。

为了达到用药目的，增加治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。当然用于实施本发明芍药檗皮丸的给药途径取决于疾病和需要治疗的部位。因为本发明芍药檗皮丸的药动学和药效学特征会有某种程度的不同，因此在组织中获得治疗浓度的最优选方法是逐渐增加剂量并监测临床效果。对于这样的逐渐增加治疗剂量，初始剂量将取决于给药途径。

对于任何特定患者，本发明芍药檗皮丸药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、性格及个体反应，给药途径、给药次数、治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有较大范围的变化。根据所治疗患者的病症，可能必须对剂量作出某些改变，并且在任何情况下，都由医师决定个体患者的合适剂量。

给药剂量是指不包括载体重量(当使用载体时)在内的芍药檗皮丸的重量。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明芍药檗皮丸组合物中最后的制剂中所含有的实际药物剂量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治疗目的。可以是单一剂量形式给药或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药；这受限于给药医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。本发明的芍药檗皮丸或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用并调整剂量。

有益效果

1、本发明以小鼠为动物试验模型，通过灌胃给药治疗，考察芍药檗皮丸(SYW)对DSS诱导的溃疡性结肠炎以及AOM-DSS诱导的炎症相关性结直肠癌的治疗作用。实验结果分析表明，SYW给药组均能显著改善小鼠炎症性肠病引起的结肠增重、萎缩、充血病症，显示出SYW对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎具有明显的治疗作用。此外，与模型组相比，SYW中剂量和高剂量组的MPO水平明显降低，表明SYW具有减少结肠部位中性粒细胞浸润的作用，具有抗炎效果。在AOM-DSS诱导的炎症相关性结直肠癌模型中，结肠病理学研究结果表明：模型组小鼠结肠组织结构紊乱，隐窝及腺体缺失，炎症累及黏膜层和黏膜下层，而芍药檗皮丸高剂量组小鼠的结肠病变范围和程度较模型组小鼠明显减轻，且中剂量组小鼠的结肠病变也部分改善。这些实验结果充分地说明了芍药檗皮丸(SYW)能有效地治疗AOM-DSS诱导的小鼠炎症相关性结肠癌。

2、炎症性肠病或炎症相关性结直肠癌是常见难治疾病，目前临床用药治疗效果不明显，副作用大，本发明首次发现芍药檗皮丸对上述疾病有治疗作用，增加了芍药檗皮丸新的应用。

附图说明

图1芍药檗皮丸细胞水平的抗炎活性，其中A为IL-1β，B为TNF-α，C为NO。

图2不同浓度SYW作用于结肠癌细胞HCT116 24h对其细胞活力的影响

图3不同浓度SYW作用于结肠癌细胞HCT116 48h对其细胞活力的影响

图4不同浓度SYW作用SW480细胞24h对其细胞活力的影响

图5不同浓度SYW作用SW480细胞48h对其细胞活力的影响

图6不同浓度SYW作用NCM460细胞24h对其细胞活力的影响

图7不同浓度SYW作用NCM460细胞48h对其细胞活力的影响

图8 DSS诱导的UC小鼠的体重变化图

图9 DSS诱导的UC小鼠的疾病活动指数变化图

图10 DSS诱导的UC小鼠的结肠蛋白表达变化图

图11 AOM-DSS诱导的CAC小鼠的体重变化图

图12 SYW治疗AOM-DSS诱导的CAC小鼠结肠组织形态图

图13 SYW治疗AOM-DSS诱导的CAC小鼠结肠组织微结构形态图(x200)

A：正常小鼠结肠组织HE染色图(×200)；

B：炎症性结肠癌模型小鼠结肠组织HE染色图(×200)；

C：L-SYW 0.3g/kg组小鼠结肠组织HE染色图(×200)；

D：M-SYW 1.5g/kg组小鼠结肠组织HE染色图(×200)；

E：H-SYW 7.5g/kg组小鼠结肠组织HE染色图(×200)；

F:5-ASA 50mg/kg组小鼠结肠组织HE染色图(×200)；

G:BBR 200mg/kg组小鼠结肠组织HE染色图(×200)；

图14 SYW治疗对Notch/Wnt信号通路关键蛋白的影响

图15 SYW治疗AOM-DSS诱导的CAC小鼠结肠Ki67免疫组化图(x200)

A：正常小鼠结肠组织Ki67免疫组化图(×200)；

B：炎症性结肠癌模型小鼠结肠组织Ki67免疫组化图(×200)；

C：L-SYW 0.3g/kg组小鼠结肠组织Ki67免疫组化图(×200)；

D：M-SYW 1.5g/kg组小鼠结肠组织Ki67免疫组化图(×200)；

E：H-SYW 7.5g/kg组小鼠结肠组织Ki67免疫组化图(×200)；

F:5-ASA 50mg/kg组小鼠结肠组织Ki67免疫组化图(×200)；

G:BBR 200mg/kg组小鼠结肠组织Ki67免疫组化图(×200)。

具体实施方式

术语

SYW：芍药檗皮丸

AOM：氧化偶氮甲烷

DSS:葡萄糖硫酸钠

UC:溃疡性结肠炎

CAC:炎症相关性结直肠癌

BBR:小檗碱

5-ASA:5-氨基水杨酸

DAI：疾病活动指数

IG：灌胃

MPO：髓过氧化物酶

MDA：丙二醛

NO：一氧化氮

GSH：谷胱甘肽

DMSO:二甲基亚砜

下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

一、生物活性试验

实施例1.芍药檗皮丸(SYW)细胞水平的抗炎活性

本实施例中，以RAW264.7为研究对象，用RT-PCR法和试剂盒，从细胞水平检测SYW抗炎作用。脂多糖LPS(200ng/ml)刺激巨噬细胞株(RAW264.7)6h，即可增加促炎症因子如白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和一氧化氮(NO)表达。细胞培养液中给予芍药檗皮丸(50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml)和阳性药小檗碱(2.5μg/ml)预处理12h，利用RT-PCR法，研究SYW对促炎因子的抑制作用。采用试剂盒，检测培养液中细胞分泌的一氧化氮含量。

结果：RT-PCR法显示，SYW能显著性抑制脂多糖在RAW264.7细胞中产生的促炎因子。NO试剂盒结果表明，SYW能显著性抑制细胞在培养液中分泌的一氧化氮，BBR无显著性差异。结果如图1所示。

实施例2.芍药檗皮丸(SYW)抑制结肠癌细胞增殖

方法：采用MTT比值法。收集对数生长期结肠癌细胞HCT116和SW480调整至10⁵/ml，接种于96孔板上，每孔200μl，边缘孔用无菌PBS填充。置37℃，5％CO₂孵育24小时后，使细胞贴壁。弃去原培养液，加入含不同浓度SYW的培养液使终浓度分别为200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml和1.5625μg/ml，另设培养液对照组和药物溶解介质(DMSO)组，每浓度重复6孔。作用24或48小时后，每孔加20μl(5mg/ml)MTT溶液，继续培养4小时后，弃上清，加入100μl DMSO，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解，在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。按下式计算抑制率：存活率(％)＝实验孔A值/对照孔A值×100％。

结果：随着药物浓度的升高，芍药檗皮丸对结肠癌细胞HCT116和SW480的抑制率也越高。该药对细胞抑制作用呈浓度依赖性。同时，如图2、3、4、5所示，SYW对结肠癌细胞HCT116和SW480的增殖抑制呈现时间依赖性。

实施例3.芍药檗皮丸(SYW)对正常结肠细胞的细胞毒作用

方法：采用MTT比值法。收集对数生长期结肠细胞NCM460调整至10⁵/ml，接种于96孔板上，每孔200μl，边缘孔用无菌PBS填充。置37℃，5％CO2孵育24小时后，使细胞贴壁。弃去原培养液，加入含不同浓度SYW的培养液使终浓度分别为200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml和1.5625μg/ml，另设培养液对照组和药物溶解介质(DMSO)组，每浓度重复6孔。作用24或48小时后，每孔加20μl(5mg/ml)MTT溶液，继续培养4小时后，弃上清，加入100μl DMSO，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解，在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。按下式计算抑制率：存活率(％)＝实验孔A值/对照孔A值×100％。

结果：SYW对正常肠细胞NCM460无明显毒副作用，如图6、7所示，低剂量3.125μg/ml和1.5625μg/ml的芍药檗皮丸能促进正常肠细胞的增殖。

二、药理实验

实施例4.SYW治疗降低DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠死亡率

方法：雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组6只。第0天，模型组和给药组小鼠自由饮用5％DSS溶液，造模7天后，正常饮用双蒸水3天。空白对照组自由饮用双蒸水10天。给药组小鼠在第3天开始灌胃给药SYW，每天一次，共7天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。记录实验期间小鼠的死亡数目。在灌胃7天结束后，小鼠经脱颈法处死。

结果：模型组小鼠造模期间至实验结束，死亡1只，给药组高剂量、中剂量组和低剂量组及对照组均无小鼠死亡，如表2所示。

表2 SYW治疗对小鼠死亡率的影响

实施例5.SYW可减缓DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠体重下降

方法：雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组6只。第0天，模型组和给药组小鼠自由饮用5％DSS溶液，造模7天后，正常饮用双蒸水3天。空白对照组自由饮用双蒸水10天。给药组小鼠在第3天开始灌胃给药SYW，每天一次，共7天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。在灌胃7天结束后，小鼠经脱颈法处死。每天记录体重。

结果：空白对照组小鼠体重基本呈上升趋势，DSS模型组小鼠体重从第3天起与空白组比较有显著性差异，可能由于肠道炎症的产生，导致小鼠进食量减少的同时消耗也增多，引起小鼠体重的下降。与模型组比较，低剂量、中剂量以及高剂量SYW给药均能较明显的增加溃疡性结肠小鼠体重，使其基本维持正常水平，BBR组效果不明显，如图8所示。

实施例6.SYW能降低DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠活动指数

方法：雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组6只。第0天，模型组和给药组小鼠自由饮用5％DSS溶液，造模7天后，正常饮用双蒸水3天。空白对照组自由饮用双蒸水10天。给药组小鼠在第3天开始灌胃给药SYW，每天一次，共7天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。在灌胃7天结束后，小鼠经脱颈法处死。

DAI(disease activity index)，即疾病活动指数。实验期间，每日观察小鼠的体重、大便性状和隐血情况，将体重下降、大便性状和隐血情况的评分相加，得出每只小鼠的DAI，以评估疾病活动情况。

结果：空白对照组小鼠大便正常，毛色光泽，精神状态良好，活动自如。DSS模型组小鼠从第3天起伴随有不同程度的腹泻，稀便，懒动，竖毛，食量减少等情况。从第5天起出现了不同程度的血便，毛发无光泽，精神萎靡。与模型组比较，各给药治疗组小鼠上述情况减轻。如图9所示，模型组小鼠体重从造模第5天疾病活动指数开始明显上升，给药组各剂量组能明显减小疾病活动指数。

实施例7.SYW治疗对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠肠壁损伤具有保护作用

方法：雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组6只。第0天，模型组和给药组小鼠自由饮用5％DSS溶液，造模7天后，正常饮用双蒸水3天。空白对照组自由饮用双蒸水10天。给药组小鼠在第3天开始灌胃给药SYW，每天一次，共7天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。在灌胃7天结束后，小鼠经脱颈法处死，取其结肠组织，称量结肠净重量，测量结肠长度。

结果：如表3所示，模型组结肠组织萎缩，肠壁增厚，SYW给药组均能降低UC引起的结肠组织萎缩，肠壁增厚，BBR组效果不明显。

表3 SYW治疗对UC小鼠结肠的保护作用

(n＝6,mean±variance.^*p<0.05,^**p<0.01,***p<0.001 vs model)

实施例8.SYW对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠的脾脏肿大具有保护作用

方法：雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组6只。第0天，模型组和给药组小鼠自由饮用5％DSS溶液，造模7天后，正常饮用双蒸水3天。空白对照组自由饮用双蒸水10天。给药组小鼠在第3天开始灌胃给药SYW，每天一次，共7天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。在灌胃7天结束后，小鼠经脱颈法处死，取出小鼠的脾脏，称重。

结果：如表4所示，模型组脾脏肿大，脏器体重比上升，而SYW给药组中剂量组(M-SYW，1.5g/kg，IG)和高剂量(H-SYW，7.5g/kg，IG)组可在一定程度改善UC引起的脾脏组织肿大的现象，5-ASA及BBR组效果不明显。

表4 SYW治疗对UC小鼠脾脏与体重的比值

(n＝6,mean±variance.^*p<0.05,^**p<0.01,***p<0.001 vs model)

实施例9.SYW可降低DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠的结肠MPO水平

方法：本研究采用雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组6只。第0天，模型组和给药组小鼠自由饮用5％DSS溶液，造模7天后，正常饮用双蒸水3天。空白对照组自由饮用双蒸水10天。给药组小鼠在第3天开始灌胃给药SYW，每天一次，共7天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。在灌胃7天结束后，小鼠经脱颈法处死，取不同小鼠同一部位结肠组织，于冰浴上以生理盐水研磨制成10％的结肠匀浆液，离心后取上清，按照南京建成试剂盒说明，测定结肠组织中髓过氧化物酶MPO水平。

结果：髓过氧化物酶(MPO)一般作为评价肠炎症程度的重要指标，其活力单位定义为每10％结肠匀浆液在37℃的反应体系中分解1μmol H₂O₂的量。在DSS诱导的溃疡性结肠炎模型中，其活性反映中性粒细胞的浸润。与对照组相比，模型组小鼠的髓过氧化物酶MPO显著升高。而SYW给药组，无论是低剂量组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量组(M-SYW，1.5g/kg，IG)和高剂量(H-SYW，7.5g/kg，IG)组，均能显著降低MPO。研究结果表明SYW具有降低髓过氧化物酶MPO水平，起到抗炎的作用，如表5所示。

表5 SYW治疗对UC小鼠结肠部位MPO生成的影响

(n＝6,mean±variance.^*p<0.05,^**p<0.01,***p<0.001 vs model)

实施例10.SYW可降低DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠MDA水平

方法：本研究采用雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组6只。第0天，模型组和给药组小鼠自由饮用5％DSS溶液，造模7天后，正常饮用双蒸水3天。空白对照组自由饮用双蒸水10天。给药组小鼠在第3天开始灌胃给药SYW，每天一次，共7天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。在灌胃7天结束后，小鼠经脱颈法处死，取不同小鼠同一部位结肠组织，于冰浴上以生理盐水研磨制成10％的结肠匀浆液，离心后取上清，以测定结肠组织中MDA水平。

结果：丙二醛(MDA)是机体内的氧自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸，形成的脂质过氧化物，测试MDA的量可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。与对照组相比，模型组小鼠结肠组织中MDA水平升高。而SYW给药组，无论是低剂量组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量组(M-SYW，1.5g/kg，IG)和高剂量(H-SYW，7.5g/kg，IG)组，均能显著降低MDA并恢复至正常水平。研究结果表明SYW具有降低MDA作用，能够改善结肠细胞的氧化型损伤，如表6所示。

表6 SYW治疗对UC结肠部位MDA生成的影响

(n＝6,mean±variance.^*p<0.05,^**p<0.01,***p<0.001 vs model)

实施例11.SYW可降低DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠结肠NO水平

方法：NO化学性质活泼，在体内或水溶液中极易氧化生成NO^2-，在酸性条件下NO^2-促使Griess反应发生并生成重氮化合物，由该反应生成的重氮化合物的浓度与NO^2-浓度具有线性关系，在570nm处进行定量测定。本研究采用雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组6只。第0天，模型组和给药组小鼠自由饮用5％DSS溶液，造模7天后，正常饮用双蒸水3天。空白对照组自由饮用双蒸水10天。给药组小鼠在第3天开始灌胃给药SYW，每天一次，共7天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。在灌胃7天结束后，小鼠经脱颈法处死，取不同小鼠同一部位结肠组织，于冰浴上以生理盐水研磨制成10％的结肠匀浆液，离心后取上清，以测定结肠组织中NO水平。

结果：NO是一氧化氮合酶(NOS)催化L-Arg合成的，与急、慢性炎症的发生相关。NO在炎症和免疫应答中起着关键的调节作用。NO能够影响炎症反应的进程,如影响Cgmp,NF-κB依赖的信号转导通路，调节核转录因子抑制剂IκB的活性，影响多种炎症因子的表达等。与对照组相比，模型组小鼠结肠组织中NO水平升高，说明模型组小鼠小肠组织炎症程度比较严重。而SYW给药组中剂量组(M-SYW，1.5g/kg，IG)和高剂量(H-SYW，7.5g/kg，IG)组，均能显著降低结肠组织的NO含量并恢复至正常水平。研究结果表明SYW可降低UC小鼠NO水平，具有抗炎作用，如表7所示。

表7 SYW治疗对结直肠癌小鼠结肠部位NO生成的影响

(n＝6,mean±variance.^*p<0.05,^**p<0.01,***p<0.001 vs model)

实施例12.SYW可提高DSS诱导溃疡性结肠炎小鼠结肠GSH水平

方法：本研究采用雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组6只。第0天，模型组和给药组小鼠自由饮用5％DSS溶液，造模7天后，正常饮用双蒸水3天。空白对照组自由饮用双蒸水10天。给药组小鼠在第3天开始灌胃给药SYW，每天一次，共7天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。在灌胃7天结束后，小鼠经脱颈法处死，取不同小鼠同一部位结肠组织，于冰浴上以生理盐水研磨制成10％的结肠匀浆液，离心后取上清，按照南京建成试剂盒说明，测定结肠组织中GSH水平。

结果：GSH具有抗氧化的作用，主要用来衡量氧化性损伤。溃疡性结肠炎在发生炎症反应的同时，往往也伴随有氧化性损伤。与对照组相比，模型组小鼠结肠组织中GSH水平降低，说明DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠组织的氧化损伤比较严重。而SYW给药组中剂量组(M-SYW，1.5g/kg，IG)能显著升高结肠组织的GSH含量并恢复至正常水平。研究结果表明SYW可升高UC小鼠GSH水平，具有抗炎作用，如表8所示。

表8 SYW治疗对UC小鼠结肠部位GSH生成的影响

(n＝6,mean±variance.^*p<0.05,^**p<0.01,***p<0.001 vs model)

实施例13.SYW治疗对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠蛋白表达影响

方法：雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组6只。第0天，模型组和给药组小鼠自由饮用5％DSS溶液，造模7天后，正常饮用双蒸水3天。空白对照组自由饮用双蒸水10天。给药组小鼠在第3天开始灌胃给药SYW，每天一次，共7天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。在灌胃7天结束后，小鼠经脱颈法处死，取其结肠组织，采用蛋白质免疫印迹法，检测SYW治疗对DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠IL-1β，TNFα，COX-2以及ZO-1蛋白的影响。

结果：蛋白免疫印迹法显示，SYW可上调ZO-1蛋白表达量，ZO-1是蛋白紧密连接蛋白之一，从而保护肠黏膜的机械屏障。同样发现，在模型组中，IL-1β、TNFα高表达，说明急性溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜中免疫失衡，导致大量的细胞因子释放，从而进一步加重了炎症反应的程度。SYW可以下调IL-1β，TNFα，COX2蛋白表达，减轻炎症反应。COX-2也称环氧化酶，是花生四烯酸合成的限速酶，其表达量在正常生理条件下较低，在病理条件下，参与炎症反应，表达量升高数倍。结果如图10所示。

实施例14.AOM-DSS诱导的小鼠炎症相关性结直肠癌模型构建及小鼠死亡率检测

方法：雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、AOM-DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组8只。第0天，模型组和给药组小鼠腹腔注射10mg/kg的AOM，注射体积为10ml/kg，第7天之后连续自由饮用2.5％DSS溶液7天，再改为饮用普通水14天；第二周期小鼠连续自由饮用2.0％DSS溶液7天，再改为饮用普通水14天；第三周期小鼠连续自由饮用2.0％DSS溶液7天。给药组小鼠在第三周期饮用DSS溶液结束后，灌胃给药SYW，每天一次，共30天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。记录实验期间小鼠的死亡数目。

结果：模型组小鼠造模期间至实验结束，死亡率高达25％，给药组高剂量、中剂量组和低剂量组均无小鼠死亡，BBR组、5-ASA组死亡率为12.5％，如表2所示。

表9 SYW治疗对小鼠死亡率的影响

实施例15.SYW可减缓AOM-DSS诱导的炎症相关性结直肠癌小鼠体重下降

方法：结肠癌患者由于病情反复发作、病程长、体重下降明显。本实验观察芍药檗皮丸对AOM-DSS造模小鼠的体重下降有无减缓或抑制作用，从表观水平评价药物是否有效。雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、AOM-DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组8只。第0天，模型组和给药组小鼠腹腔注射10mg/kg的AOM，注射体积为10ml/kg，第7天之后连续自由饮用2.5％DSS溶液7天，再改为饮用普通水14天；第二周期小鼠连续自由饮用2.0％DSS溶液7天，再改为饮用普通水14天；第三周期小鼠连续自由饮用2.0％DSS溶液7天。给药组小鼠在第三周期饮用DSS溶液结束后，灌胃给药SYW，每天一次，共30天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。在灌胃30天结束后，小鼠经脱颈法处死。每天记录体重。

结果：低剂量、中剂量以及高剂量SYW给药均能较明显的增加炎症相关性结直肠癌小鼠体重，使其基本维持正常水平，5-ASA及BBR组效果不明显，如图11所示。

实施例16.SYW治疗对AOM-DSS诱导的炎症相关性结直肠癌小鼠结肠肠壁损伤具有保护作用

方法：雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、AOM-DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组8只。第0天，模型组和给药组小鼠腹腔注射10mg/kg的AOM，注射体积为10ml/kg，第7天之后连续自由饮用2.5％DSS溶液7天，再改为饮用普通水14天；第二周期小鼠连续自由饮用2.0％DSS溶液7天，再改为饮用普通水14天；第三周期小鼠连续自由饮用2.0％DSS溶液7天。给药组小鼠在第三周期饮用DSS溶液结束后，灌胃给药SYW，每天一次，共30天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。在灌胃30天结束后，小鼠经脱颈法处死，取其结肠组织，称量结肠净重量，测量结肠长度。

结果：如表10所示，与空白对照组相比，模型组小鼠肠道黏连、肠壁充血水肿、结肠糜烂、萎缩，导致结肠平均长度显著性减少。与模型组比较，各给药治疗组均有显著性差异，小鼠肠道病变明显减轻，说明SYW能明显缓解由炎症相关性结直肠癌导致的结肠缩短，且SYW的高剂量组治疗效果最好。

表10 SYW预防性治疗对结肠癌小鼠结肠的保护作用

(n＝8,mean±variance.^*p<0.05,^**p<0.01,***p<0.001 vs model)

实施例17.SYW对AOM-DSS诱导的炎症相关性结直肠癌小鼠的脾脏肿大具有保护作用

方法：雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、AOM-DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组8只。第0天，模型组和给药组小鼠腹腔注射10mg/kg的AOM，注射体积为10ml/kg，第7天之后连续自由饮用2.5％DSS溶液7天，再改为饮用普通水14天；第二周期小鼠连续自由饮用2.0％DSS溶液7天，再改为饮用普通水14天；第三周期小鼠连续自由饮用2.0％DSS溶液7天。给药组小鼠在第三周期饮用DSS溶液结束后，灌胃给药SYW，每天一次，共30天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。在灌胃30天结束后，小鼠经脱颈法处死，取出小鼠的脾脏，称重。

结果：如表11所示，模型组可能由于产生的炎症反应和免疫功能紊乱导致脾脏肿大，而SYW给药组组可在一定程度改善炎症相关性结肠癌引起的脾脏组织肿大的现象。

表11 SYW治疗对结炎症性相关结肠癌小鼠脾脏与体重的比值

(n＝8,mean±variance.^*p<0.05,^**p<0.01,***p<0.001 vs model)

实施例18.SYW可保护AOM-DSS诱导的炎症性相关结直肠癌结肠组织病理损伤

方法：雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、AOM-DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组8只。第0天，模型组和给药组小鼠腹腔注射10mg/kg的AOM，注射体积为10ml/kg，第7天之后连续自由饮用2.5％DSS溶液7天，再改为饮用普通水14天；第二周期小鼠连续自由饮用2.0％DSS溶液7天，再改为饮用普通水14天；第三周期小鼠连续自由饮用2.0％DSS溶液7天。给药组小鼠在第三周期饮用DSS溶液结束后，灌胃给药SYW，每天一次，共30天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。在灌胃30天结束后，小鼠经脱颈法处死，取不同小鼠同一部位结肠组织，以10％的中性福尔马林液固定，HE染色进行病理学检查。所有形态改变根据组织学损伤评分标准进行评分，组织学损伤程度用炎症、病变深度、隐窝破坏评分与病变范围计分的和表示，算出均分。

结果：结肠病理学研究表明，模型组各例结肠组织结构紊乱，隐窝及腺体缺失，炎症累及黏膜层和黏膜下层，而低、中、高剂量给药组小鼠的结肠病变范围和程度较模型组明显减轻，5-ASA及BBR组效果不明显。结肠组织形态图和HE染色图见图12、13所示，相关病理评分如表12所示。

表12 SYW治疗炎症性结直肠癌小鼠组织病理学评分

(n＝8,mean±variance.^*p<0.05,^**p<0.01,***p<0.001 vs model)

实施例19.SYW对AOM-DSS诱导的炎症相关性结直肠癌小鼠结肠黏膜组织Ki67水平的影响

方法：雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、AOM-DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组8只。第0天，模型组和给药组小鼠腹腔注射10mg/kg的AOM，注射体积为10ml/kg，第7天之后连续自由饮用2.5％DSS溶液7天，再改为饮用普通水14天；第二周期小鼠连续自由饮用2.0％DSS溶液7天，再改为饮用普通水14天；第三周期小鼠连续自由饮用2.0％DSS溶液7天。给药组小鼠在第三周期饮用DSS溶液结束后，灌胃给药SYW，每天一次，共30天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。在灌胃30天结束后，小鼠经脱颈法处死，取不同小鼠同一部位结肠组织，在4％多聚甲醛溶液中固定24h后，依次脱水→石蜡包埋→切片→烘片，用于后续Ki67组化实验。

结果：如图15所示，ki67是一种增殖细胞的相关抗原，其功能与有丝分裂密切相关，在细胞增殖中是不可缺少的。所以ki67主要用于标记增殖周期中的细胞，当ki67超过隐窝底部三分之一处，则说明肠细胞过度增殖，组织分化能力越差。观察切片中肿瘤组织染色发现，模型组小鼠结肠组织中Ki67高表达且超过隐窝底部三分之一处，而SYW和5-ASA给药后表达下降。BBR组效果不明显。

实施例20.SYW对AOM-DSS诱导的炎症相关性结直肠癌小鼠结肠蛋白表达影响

方法：Notch与Wnt信号通路对肠道的生长和稳态具有非常关键的作用。Notch信号通路在结肠癌肿瘤起始细胞和分泌细胞分化的抑制作用必不可少。在肠道中,Wnt信号通路对增殖和肠道干细胞及祖细胞的自我维持起主要作用,β-catenin是Wnt信号通路的关键调控分子之一。本实验采用雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、AOM-DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组8只。第0天，模型组和给药组小鼠腹腔注射10mg/kg的AOM，注射体积为10ml/kg，第7天之后连续自由饮用2.5％DSS溶液7天，再改为饮用普通水14天；第二周期小鼠连续自由饮用2.0％DSS溶液7天，再改为饮用普通水14天；第三周期小鼠连续自由饮用2.0％DSS溶液7天。给药组小鼠在第三周期饮用DSS溶液结束后，灌胃给药SYW，每天一次，共30天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。在灌胃30天结束后，小鼠经脱颈法处死，取其结肠组织，采用蛋白质免疫印迹法，检测SYW治疗对Notch/Wnt信号通路关键蛋白的影响。

结果：蛋白免疫印迹法显示，芍药檗皮丸能有效的抑制结肠癌小鼠结肠中β-catenin和MAML蛋白表达水平，并且升高ATOH蛋白表达水平，与模型组比较，差异均具有显著意义。表明SYW能够通过对Notch/Wnt这两条通路进行综合的调节来发挥保护肠道的功能。结果如图10所示。

实施例21.SYW可降低AOM-DSS诱导的炎症相关性结直肠癌小鼠的结肠MDA水平

方法：本研究采用雌性C57BL/6小鼠，体重18-22克，随机分为正常对照组(control)、AOM-DSS模型组(model)、SYW低剂量给药组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量给药组(M-SYW，1.5g/kg，IG)、高剂量给药组(H-SYW，7.5g/kg，IG)、小檗碱给药组(BBR，50mg/kg，IG)、5-氨基水杨酸给药组(5-ASA，200mg/kg，IG)，每组8只。第0天，模型组和给药组小鼠腹腔注射10mg/kg的AOM，注射体积为10ml/kg，第7天之后连续自由饮用2.5％DSS溶液7天，再改为饮用普通水14天；第二周期小鼠连续自由饮用2.0％DSS溶液7天，再改为饮用普通水14天；第三周期小鼠连续自由饮用2.0％DSS溶液7天。给药组小鼠在第三周期饮用DSS溶液结束后，灌胃给药SYW，每天一次，共30天，对照组及模型组给予同体积的赋形剂。在灌胃30天结束后，小鼠经脱颈法处死，取不同小鼠同一部位结肠组织，于冰浴上以生理盐水研磨制成10％的结肠匀浆液，离心后取上清，以测定结肠组织中MDA水平。

结果：与空白对照组比较，模型组小鼠结肠组织中MDA水平升高约5倍，说明AOM-DSS诱导的炎症性相关结肠癌小鼠结肠组织的脂质过氧化程度比较严重。而SYW给药组，无论是低剂量组(L-SYW，0.3g/kg，IG)、中剂量组(M-SYW，1.5g/kg，IG)和高剂量(H-SYW，7.5g/kg，IG)组，均能显著降低MDA并恢复至正常水平。研究结果表明SYW具有降低MDA作用，能很好地抵抗炎症相关性结肠癌引起的氧化损伤，如表13所示。

表13 SYW治疗对结直肠癌小鼠结肠部位MDA生成的影响

(n＝8,mean±variance.^*p<0.05,^**p<0.01,***p<0.001 vs model)

本发明经实验验证，芍药檗皮丸具有以下优势：

1.芍药檗皮丸能够通过保护肠黏膜、维持细胞连接、维持上皮细胞完整性，从而减轻DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠腹泻、便血等肠炎症状。治疗效果优于阳性药。

2.芍药檗皮丸能促进DSS诱导的溃疡性结肠炎小鼠体内的抗氧化活性、降低炎症水平，效果优于阳性药BBR。

3.芍药檗皮丸能够显著增加炎症相关性结直肠癌CAC小鼠体重及结肠长度，减少脾脏质量及结肠质量，改善CAC小鼠结肠黏膜的病理学形态，促进肠细胞分化，从而抑制CAC小鼠的肠细胞增生。治疗效果显示出优于阳性药的优势。细胞水平上，芍药檗皮丸也具有显著的抑制肠癌细胞增殖的活性。

Claims

1.芍药檗皮丸在制备治疗炎症性肠病或炎症相关性结直肠癌药物中的应用，其中所述的芍药檗皮丸含有芍药、黄柏、当归和黄连。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的芍药檗皮丸由芍药2重量份、黄柏2重量份、当归1重量份和黄连1重量份构成。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的芍药檗皮丸由如下步骤制备获得：将芍药、黄柏、当归、黄连粉碎均匀，分别按配方比例称取粉末，将粉末混匀后加入10倍体积75%乙醇浸泡过夜；次日83℃水浴提取3次，每次1h；而后合并滤液，50℃减压旋蒸回收乙醇，以浓缩提取液；冷冻干燥浓缩后的提取液得到芍药檗皮丸。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的应用，其特征在于，所述芍药檗皮丸制成片剂、胶囊、丸剂或缓释剂。