CN113755360B - 一株植物乳杆菌及应用 - Google Patents
一株植物乳杆菌及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113755360B CN113755360B CN202110474928.3A CN202110474928A CN113755360B CN 113755360 B CN113755360 B CN 113755360B CN 202110474928 A CN202110474928 A CN 202110474928A CN 113755360 B CN113755360 B CN 113755360B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lactobacillus plantarum
- strain
- fermentation
- fermentation broth
- medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 title claims abstract description 70
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 title claims abstract description 70
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 title claims abstract description 70
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 56
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 56
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 23
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 21
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 19
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 11
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 6
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 claims description 6
- 241001507673 Penicillium digitatum Species 0.000 claims 2
- 239000000022 bacteriostatic agent Substances 0.000 claims 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 12
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 abstract description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 abstract description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 9
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 8
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 4
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 4
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 4
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 2
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 description 2
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 2
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 2
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001247317 Bos mutus Species 0.000 description 1
- 108010078777 Colistin Proteins 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- -1 bacteriostats Substances 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 229960001127 colistin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- ZESIAEVDVPWEKB-ORCFLVBFSA-N n-[(2s)-4-amino-1-[[(2s,3r)-1-[[(2s)-4-amino-1-oxo-1-[[(3s,6s,9s,12s,15r,18s,21s)-6,9,18-tris(2-aminoethyl)-3-[(1r)-1-hydroxyethyl]-12,15-bis(2-methylpropyl)-2,5,8,11,14,17,20-heptaoxo-1,4,7,10,13,16,19-heptazacyclotricos-21-yl]amino]butan-2-yl]amino]-3-h Chemical compound OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.CC(C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)CN[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCN)NC1=O.CCC(C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)CN[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCN)NC1=O ZESIAEVDVPWEKB-ORCFLVBFSA-N 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000021108 sauerkraut Nutrition 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L3/00—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs
- A23L3/34—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals
- A23L3/3454—Preservation of foods or foodstuffs, in general, e.g. pasteurising, sterilising, specially adapted for foods or foodstuffs by treatment with chemicals in the form of liquids or solids
- A23L3/3463—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
- A23L3/3571—Microorganisms; Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/065—Microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/169—Plantarum
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供一株植物乳杆菌及应用。本发明提供的植物乳杆菌S2菌株(Lactobacillus plantarum S2)保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 2021340。本发明提供的植物乳杆菌可抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌，具有很强的抑菌性。
Description
技术领域
本发明属于微生物领域，具体涉及一株植物乳杆菌及应用。
背景技术
植物乳杆菌是益生菌的一类，被广泛的应用于酸奶、酸菜及饲料中。植物乳杆菌作为一种优良益生菌，可有效改善宿主的肠道环境、抑制有害菌的生长、提高免疫力、调节肠道黏膜屏障功能、降低胆固醇含量，为宿主健康生长提供保证。
植物乳杆菌可以抑制有害菌生长。现有技术中的化学防腐剂，一方面不符合国家倡导的绿色，环保，可持续发展；另外一方面，化学防腐剂的使用量对人们的健康不利。化学防腐剂虽然可以使食物防腐，但是对长远的人类健康跟环保是不利的。所以，现在急需一种新型的绿色环保并且对人体无害的防腐剂。
发明内容
本发明的目的是提供一株具有广谱抑菌的植物乳杆菌S2菌株(Lactobacillusplantarum S2)，克服现有的化学防腐剂的不足，提供了一种新型绿色、环保、安全的生物防腐剂。
第一方面，本发明提供一株广谱抑菌高海拔源植物乳杆菌S2菌株(Lactobacillusplantarum S2)，所述植物乳杆菌S2菌株(Lactobacillus plantarum S2)保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 2021340。
优选地，所述植物乳杆菌S2菌株的16S rRNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。
第二方面，本发明还提供所述的植物乳杆菌S2菌株发酵得到的发酵液。
优选地，所述发酵液的制备方法包括以下步骤，培养所述的植物乳杆菌S2菌株。
优选地，所述发酵液的制备方法包括如下步骤：
(1)所述的植物乳杆菌S2菌株进行种子培养，得到植物乳杆菌S2菌株种子培养液；
(2)将所述的植物乳杆菌S2菌株种子培养液加入到发酵培养基中进行发酵，发酵40-60h后，获得所述发酵液。
优选地，步骤(1)中所述种子培养的温度为35-37℃；
优选地，所述种子培养时间为20-30h。
优选地，所述步骤(1)或步骤(2)中的培养基为MRS培养基。
优选地，所述步骤(2)中接种量为重量比1-10％；
优选地，步骤(2)中发酵温度为35-37℃。
第三方面，本发明提供所述的发酵液的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
(1)所述的植物乳杆菌S2菌株进行种子培养，得到植物乳杆菌S2菌株种子培养液；
(2)将所述的植物乳杆菌S2菌株种子培养液加入到发酵培养基中进行发酵，发酵40-60h后，获得所述发酵液。
优选地，所述的制备方法步骤(1)中所述种子培养的温度为35-37℃；
优选地，所述种子培养时间为20-30h。
优选地，所述的制备方法步骤(1)或步骤(2)中的培养基为MRS培养基。
优选地，所述的制备方法步骤(2)中接种量为重量比1-10％；
优选地，步骤(2)中发酵温度为35-37℃。
第四方面，本发明提供所述的植物乳杆菌S2菌株或所述的发酵液在抑制细菌或真菌中的应用。
优选地，所述细菌为革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌中的一种或两种以上的组合；
优选地，所述革兰氏阴性菌为大肠杆菌(Escherichia coli)；
优选地，所述革兰氏阳性菌为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。
优选地，所述真菌为霉菌中的一种或两种以上的组合。
第五方面，本发明提供所述的植物乳杆菌S2菌株或所述的发酵液在防腐剂、抑菌剂、风味剂或改善肠道环境产品中的应用。
优选地，所述产品为食品、保健品或药品。
经过试验验证本发明提供的植物乳杆菌可抑制革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌，所得的试验结果证明该菌株具有很强的抑菌性。
本发明提供的植物乳杆菌S2菌株不仅可以有效的解决化学防腐剂的安全隐患，还可以改良食物的风味，改善肠道消化问题等。
菌种保藏信息
该植物乳杆菌S2菌株(Lactobacillus plantarum S2)于2021年4月8日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M2021340，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮政编码：430072；电话：027-68754052。
附图说明
图1所示为对植物乳杆菌S2菌株构建的系统发育树结果图；
图2所示为植物乳杆菌S2菌株的发酵液对大肠杆菌的抑菌圈图；
图3所示为植物乳杆菌S2菌株的发酵液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈图。
具体实施方式
为了使本领域技术人员更好的理解本发明，下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明。本领域技术人员应当理解的是，这不应被理解为对本发明权利要求范围的限定。同时需要注意的是，本发明中的试剂或仪器无特别说明的均可通过市售购买得到。
本发明所用试剂及仪器具体来源列于下面的表1中。
表1本发明所用试剂厂商
实施例1植物乳杆菌S2菌株的分离、筛选和鉴定
(1)菌株富集：将从西藏5400m高海拔地区的野生牦牛粪用生理盐水溶解定容至10ml，充分振荡混匀。取1ml样品进行梯度稀释至10-3，取2ml稀释液加入到20ml石蕊牛乳培养基中，然后放到37℃培养箱培养，待培养基酸化凝固并呈现粉红色时取出。
(2)培养单菌落：将石蕊牛乳培养基菌液稀释浓度到10-5-10-6，接种到含有10ppm放线菌酮和10ppm硫酸粘菌素的BL琼脂培养基，在37℃培养24～48h，待菌落形成。在BL琼脂培养基上，菌落圆形，中等大小，直径3mm±1mm，微白色，凸起，边缘整齐。
(3)筛选产酸菌种：将初筛得到的单菌落，在加0.6％CaCO3的BL琼脂培养基中划线培养，培养40h，结束培养后观察有无透明圈，选择透明圈大的单菌落进行纯化实验。
(4)革兰氏染色初步鉴定：对复筛菌株进行革兰氏染色，如果菌体是紫色，则为革兰氏阳性菌，留下来进行后续研究，如果染色呈现红色，该菌株是革兰氏阴性菌直接淘汰。鉴定结果显示：所得复筛菌株为革兰氏阳性菌，菌体呈短粗杆状，成对存在，无芽孢。此菌株是目标菌株。
对获得的目的菌株进行16S rRNA分子生物学鉴定：使用高保真酶对待鉴定菌株进行16SrDNA测序及菌种鉴定，并绘出系统发育树。采用的引物为：正向引物27F：5'-AGAGTTTGATCATGGCTCAG-3'；反向引物1492R：5'-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-3'。PCR反应体系是：25μlMix；1μl样品；20μl ddH2O；2μl 27F；2μl 1492R；PCR反应温度：98℃，2min；98℃，10s，58℃，10s，72℃，7s，35x；72℃，2min；4℃保存。对PCR产物测序，之后采用MEGA8.0构建系统发育树。
测序结果如SEQ ID NO.1所示。构建的系统发育树如图1。根据图1所示的系统发育树可知本发明获得的株菌为植物乳杆菌，命名为植物乳杆菌S2菌株(Lactobacillusplantarum S2)。该植物乳杆菌S2菌株(Lactobacillus plantarum S2)于2021年4月8日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2021340。
实施例2植物乳杆菌S2菌株发酵液制备
(1)活化菌株：用移液枪吸取1ml甘油管保存的植物乳杆菌S2菌液，接种到9ml MRS液体培养基中，37℃，活化培养24h。
(2)种子培养：用移液枪吸取1ml植物乳杆菌S2活化培养液，接种到9ml MRS液体培养基中，37℃，培养24h得到种子培养液。
(3)发酵：用移液枪吸取5ml植物乳杆菌S2种子培养液，接种到45ml MRS液体培养基中，37℃，培养48h。
(4)离心发酵液：将发酵48h的发酵液1000rpm离心10min，收集上清。
(5)过滤发酵液：将收集的发酵上清液，用0.45μm的滤膜过滤到无菌离心管中备用，即得到植物乳杆菌S2菌株发酵液上清。
实施例3植物乳杆菌S2菌株对大肠杆菌的抑菌性能测定
甘油管保存的大肠杆菌(菌株编号：ATCC25922)菌液按5％接种LB培养基37℃180rpm震荡培养活化12h，按相同方式进行大肠杆菌种子液培养，至大肠杆菌种子液OD600为2.5。取100μl的大肠杆菌的种子液涂布到LB培养基上，使用灭过菌并且烘干的牛津杯立在表面，加入100μl的实施例2中制备的植物乳杆菌S2菌株发酵液；空白对照加入100μl的灭过菌的MRS液体培养基，48h观察并测量抑菌圈的大小。结果如图2所示。测量显示：植物乳杆菌S2发酵液对大肠杆菌的抑菌圈直径为26.4mm。
根据抑菌圈的大小可以看出本发明提供的植物乳杆菌S2菌株的发酵液对大肠杆菌有明显的抑菌作用。
实施例4植物乳杆菌S2菌株对金黄色葡萄球菌的抑菌性能测定
甘油管保存的金黄色葡萄球菌(菌株编号：ATCC 6538)菌液按5％接种LB培养基37℃180rpm震荡培养活化12h，按相同方式进行金黄色葡萄球菌种子液培养，至金黄色葡萄球菌种子液OD600为2.5。取100μl的金黄色葡萄球菌的种子液涂布到LB培养基上，使用灭过菌并且烘干的牛津杯立在表面，加入100μl的实施例2中制备的植物乳杆菌S2菌株发酵液；空白对照加入100μl的灭过菌的MRS液体培养基，48h观察并测量抑菌圈的大小。结果如图3所示。测量显示：植物乳杆菌S2发酵液对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为25.6mm。
根据抑菌圈的大小可以看出本发明提供的植物乳杆菌S2菌株的发酵液对金黄色葡萄球菌有明显的抑菌作用。
实施例5植物乳杆菌S2菌株对霉菌的抑菌性能测定
(1)霉菌孢子活化：甘油管保存的霉菌(Enicillium digitatum)(菌株编号：ATCC48113)孢子液在PDA培养基上涂布，30℃，倒置培养72h，待茄瓶培养基表面长满菌丝。
(2)霉菌孢子液制备：向茄瓶内加入20ml无菌水，用接种环将霉菌孢子刮到无菌水中，测霉菌孢子液浓度105个/mL。
(3)抑菌实验：在无菌试管中加入4ml PDB培养基、2ml实施例2中制备的植物乳杆菌S2菌株发酵液和1ml步骤(2)所得霉菌孢子指示菌悬液，在30℃条件下培养48h后，测定580nm波长下的吸光值，以2ml MRS培养基代替乳酸菌无菌发酵液作为对照组。
(4)抑菌率计算：
抑菌率(％)＝(1-OD580实验组/OD580对照组)*100％
结果显示：本发明提供的植物乳杆菌S2菌株的发酵液对霉菌有显著的抑菌作用，抑菌率达到60.7％。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 湖北安琪生物集团有限公司
<120> 一株广谱抑菌高海拔源植物乳杆菌及应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1458
<212> DNA
<213> 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)
<400> 1
acgtccttag gcggctggtt cctaaaaggt taccccaccg actttgggtg ttacaaactc 60
tcatggtgtg acgggcggtg tgtacaaggc ccgggaacgt attcaccgcg gcatgctgat 120
ccgcgattac tagcgattcc gacttcatgt aggcgagttg cagcctacaa tccgaactga 180
gaatggcttt aagagattag cttactctcg cgagttcgca actcgttgta ccatccattg 240
tagcacgtgt gtagcccagg tcataagggg catgatgatt tgacgtcatc cccaccttcc 300
tccggtttgt caccggcagt ctcaccagag tgcccaactt aatgctggca actgataata 360
agggttgcgc tcgttgcggg acttaaccca acatctcacg acacgagctg acgacaacca 420
tgcaccacct gtatccatgt ccccgaaggg aacgtctaat ctcttagatt tgcatagtat 480
gtcaagacct ggtaaggttc ttcgcgtagc ttcgaattaa accacatgct ccaccgcttg 540
tgcgggcccc cgtcaattcc tttgagtttc agccttgcgg ccgtactccc caggcggaat 600
gcttaatgcg ttagctgcag cactgaaggg cggaaaccct ccaacactta gcattcatcg 660
tttacggtat ggactaccag ggtatctaat cctgtttgct acccatactt tcgagcctca 720
gcgtcagtta cagaccagac agccgccttc gccactggtg ttcttccata tatctacgca 780
tttcaccgct acacatggag ttccactgtc ctcttctgca ctcaagtttc ccagtttccg 840
atgcacttct tcggttgagc cgaaggcttt cacatcagac ttaaaaaacc gcctgcgctc 900
gctttacgcc caataaatcc ggacaacgct tgccacctac gtattaccgc ggctgctggc 960
acgtagttag ccgtggcttt ctggttaaat accgtcaata cctgaacagt tactctcaga 1020
tatgttcttc tttaacaaca gagttttacg agccgaaacc cttcttcact cacgcggcgt 1080
tgctccatca gactttcgtc cattgtggaa gattccctac tgctgcctcc cgtaggagtt 1140
tgggccgtgt ctcagtccca atgtggccga ttaccctctc aggtcggcta cgtatcattg 1200
ccatggtgag ccgttacccc accatctagc taatacgccg cgggaccatc caaaagtgat 1260
agccgaagcc atctttcaag ctcggaccat gcggtccaag ttgttatgcg gtattagcat 1320
ctgtttccag gtgttatccc ccgcttctgg gcaggtttcc cacgtgttac tcaccagttc 1380
gccactcact caaatgtaaa tcatgatgca agcaccaatc aataccagag ttcgttcgac 1440
tgcatgtata gccgcgcc 1458
Claims (21)
1.一株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)S2菌株，其特征在于，所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)S2菌株保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 2021340。
2.权利要求1所述的植物乳杆菌S2菌株发酵得到的发酵液。
3.根据权利要求2所述的发酵液，其特征在于，所述发酵液的制备方法包括以下步骤，培养权利要求1所述的植物乳杆菌S2菌株。
4.根据权利要求2或3所述的发酵液，其特征在于，所述发酵液的制备方法包括如下步骤：
(1)权利要求1所述的植物乳杆菌S2菌株进行种子培养，得到植物乳杆菌S2菌株种子培养液；
(2)将所述的植物乳杆菌S2菌株种子培养液加入到发酵培养基中进行发酵，发酵40-60h后，获得所述发酵液。
5.根据权利要求4所述的发酵液，其特征在于，步骤(1)中所述种子培养的温度为35-37℃。
6.根据权利要求4所述的发酵液，其特征在于，步骤(1)中所述种子培养时间为20-30h。
7.根据权利要求4所述的发酵液，其特征在于，所述步骤(1)或步骤(2)中的培养基为MRS培养基。
8.根据权利要求5所述的发酵液，其特征在于，所述步骤(1)或步骤(2)中的培养基为MRS培养基。
9.根据权利要求6所述的发酵液，其特征在于，所述步骤(1)或步骤(2)中的培养基为MRS培养基。
10.根据权利要求4所述的发酵液，其特征在于，所述步骤(2)中接种量为重量百分数1-10％。
11.根据权利要求5-9任意一项所述的发酵液，其特征在于，所述步骤(2)中接种量为重量百分数1-10％。
12.根据权利要求4所述的发酵液，其特征在于，步骤(2)中发酵温度为35-37℃。
13.根据权利要求5-9任意一项所述的发酵液，其特征在于，步骤(2)中发酵温度为35-37℃。
14.权利要求2或3所述的发酵液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
(1)权利要求1所述的植物乳杆菌S2菌株进行种子培养，得到植物乳杆菌S2菌株种子培养液；
(2)将所述的植物乳杆菌S2菌株种子培养液加入到发酵培养基中进行发酵，发酵40-60h后，获得所述发酵液。
15.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述种子培养的温度为35-37℃。
16.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述种子培养时间为20-30h。
17.根据权利要求14-16任意一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)或步骤(2)中的培养基为MRS培养基。
18.根据权利要求14-16任意一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中接种量为重量百分数1-10％。
19.根据权利要求14-16任意一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中发酵温度为35-37℃。
20.权利要求1所述的植物乳杆菌S2菌株或权利要求2-13任意一项所述的发酵液在制备抑菌剂中的应用。
21.根据权利要求20所述的应用，其特征在于，在制备抑制大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)或指状青霉菌(Enicillium digitatum)产品中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110474928.3A CN113755360B (zh) | 2021-04-29 | 2021-04-29 | 一株植物乳杆菌及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110474928.3A CN113755360B (zh) | 2021-04-29 | 2021-04-29 | 一株植物乳杆菌及应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113755360A CN113755360A (zh) | 2021-12-07 |
| CN113755360B true CN113755360B (zh) | 2022-09-27 |
Family
ID=78786963
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110474928.3A Active CN113755360B (zh) | 2021-04-29 | 2021-04-29 | 一株植物乳杆菌及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113755360B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114107087A (zh) * | 2021-09-29 | 2022-03-01 | 西藏安琪生物科技有限公司 | 一种耗牛奶酪发酵剂及其制备方法和应用 |
| CN115093990B (zh) * | 2022-06-01 | 2023-08-25 | 江南大学 | 一株可广谱抑制食品腐败菌的乳酸菌及其应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104789511B (zh) * | 2015-05-08 | 2016-02-03 | 内蒙古农业大学 | 一株具有广谱抑菌特性的植物乳杆菌ab-2及其应用 |
| CN108220212B (zh) * | 2018-04-11 | 2019-11-26 | 湖南农业大学 | 一株广谱抑菌植物乳杆菌 |
| KR102155849B1 (ko) * | 2019-06-28 | 2020-09-14 | 재단법인 발효미생물산업진흥원 | 유해 미생물에 대한 항균 활성과 유산 생성능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 srcm102369 균주 및 이의 용도 |
-
2021
- 2021-04-29 CN CN202110474928.3A patent/CN113755360B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113755360A (zh) | 2021-12-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108102959B (zh) | 人源性降胆固醇植物乳杆菌zy08及其应用 | |
| CN113755360B (zh) | 一株植物乳杆菌及应用 | |
| CN111849810B (zh) | 拮抗幽门螺旋杆菌的乳酸菌zjuids03及其应用 | |
| CN105175518B (zh) | 凝结芽孢杆菌fm603产生的细菌素及其制备方法 | |
| CN111197015B (zh) | 直投式乳酸菌发酵剂和制备方法 | |
| CN108004177B (zh) | 一种可降解亚硝酸盐的副干酪乳杆菌及其特性研究 | |
| CN115044505B (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌产抗菌脂肽及其在化妆品和食品的应用 | |
| CN103404939B (zh) | 一种抗菌肽混合液及其用于食品保鲜的方法 | |
| CN113980853B (zh) | 一株产乳酸的格氏乳球菌wbt0008及其应用 | |
| CN106635916B (zh) | 东方醋酸菌yzd-09及其应用 | |
| CN107937316B (zh) | 空间罗伊氏乳杆菌Fullarton-9-71及应用 | |
| CN117264854B (zh) | 一种植物乳杆菌及其应用 | |
| CN107699526B (zh) | 一株防治灰霉病的放线菌菌株及其应用 | |
| CN107974424B (zh) | 空间罗伊氏乳杆菌Fullarton-9-25及应用 | |
| CN112251388B (zh) | 一种植物乳杆菌及其乳酸菌发酵剂的应用 | |
| CN111264817B (zh) | 直投式乳酸菌发酵剂在榨菜腌制中的应用 | |
| CN114717150B (zh) | 一种植物乳杆菌crs33及其应用 | |
| CN107828703A (zh) | 空间罗伊氏乳杆菌Fullarton‑9‑35及应用 | |
| CN109679881B (zh) | 一种菠萝泛菌及其菌剂和应用 | |
| CN107974425B (zh) | 空间罗伊氏乳杆菌Fullarton-9-79及应用 | |
| CN114540249B (zh) | 拮抗菌株1x1y及其应用 | |
| CN112708577B (zh) | 一种具有高肠道粘附力和免疫调节功能的发酵乳杆菌dali02及其应用 | |
| CN111944729B (zh) | 一种耐高温植物乳杆菌菌剂及其制备方法与应用 | |
| CN106967630B (zh) | 一种发酵乳杆菌及其应用 | |
| CN108094527A (zh) | 空间罗伊氏乳杆菌Fullarton-9-87及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20220406 Address after: 443000 No. 168, Chengdong Avenue, Yichang City, Hubei Province Applicant after: Angel Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 443000 No. 168, Chengdong Avenue, Yichang City, Hubei Province Applicant before: Hubei Anqi Biology Group Co.,Ltd. |
|
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |