CN114381393B - 德氏乳杆菌乳亚种菌株及其应用 - Google Patents
德氏乳杆菌乳亚种菌株及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114381393B CN114381393B CN202111573910.5A CN202111573910A CN114381393B CN 114381393 B CN114381393 B CN 114381393B CN 202111573910 A CN202111573910 A CN 202111573910A CN 114381393 B CN114381393 B CN 114381393B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- strain
- fermentation
- lactobacillus delbrueckii
- delbrueckii subspecies
- subspecies lactis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000186673 Lactobacillus delbrueckii Species 0.000 title claims abstract description 56
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 66
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 66
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 27
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 25
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 17
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 16
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 claims description 10
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 claims description 5
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 2
- 238000012262 fermentative production Methods 0.000 claims 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 7
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract description 7
- 235000021001 fermented dairy product Nutrition 0.000 abstract description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 5
- 235000020255 yak milk Nutrition 0.000 abstract description 5
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 24
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 18
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 15
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 15
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 description 10
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 description 10
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 8
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 6
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 6
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 6
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 5
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 5
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 5
- 241001147746 Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis Species 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 3
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 3
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 2
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 150000005693 branched-chain amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 2
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 description 2
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 235000012055 fruits and vegetables Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N phenolphthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2C(=O)O1 KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 2
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 2
- KEQXNNJHMWSZHK-UHFFFAOYSA-L 1,3,2,4$l^{2}-dioxathiaplumbetane 2,2-dioxide Chemical compound [Pb+2].[O-]S([O-])(=O)=O KEQXNNJHMWSZHK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010078777 Colistin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 108010082495 Dietary Plant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 241000186866 Lactobacillus thermophilus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000863434 Myxococcales Species 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 241000235342 Saccharomycetes Species 0.000 description 1
- 244000057717 Streptococcus lactis Species 0.000 description 1
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002053 acidogenic effect Effects 0.000 description 1
- 241001148470 aerobic bacillus Species 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 229960001127 colistin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000006477 glucose yeast extract medium Substances 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- ZESIAEVDVPWEKB-ORCFLVBFSA-N n-[(2s)-4-amino-1-[[(2s,3r)-1-[[(2s)-4-amino-1-oxo-1-[[(3s,6s,9s,12s,15r,18s,21s)-6,9,18-tris(2-aminoethyl)-3-[(1r)-1-hydroxyethyl]-12,15-bis(2-methylpropyl)-2,5,8,11,14,17,20-heptaoxo-1,4,7,10,13,16,19-heptazacyclotricos-21-yl]amino]butan-2-yl]amino]-3-h Chemical compound OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.CC(C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)CN[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCN)NC1=O.CCC(C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)CN[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCN)NC1=O ZESIAEVDVPWEKB-ORCFLVBFSA-N 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 1
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 1
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 235000021568 protein beverage Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 235000019587 texture Nutrition 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/137—Delbrueckii
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明涉及微生物筛选及发酵领域，具体涉及一种德氏乳杆菌乳亚种菌株及其应用，所述菌株为德氏乳杆菌乳亚种JLACHA LD‑Ⅱ(Lactobacillus delbrueckii subsp JLACHA LD‑Ⅱ)，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20211314。所述的菌株是从藏区牧民家牦牛奶中分离得到，具有食品属性，具有高效的产酸能力和极强的耐酸能力，可广泛应用于发酵乳制品。
Description
技术领域
本发明涉及微生物筛选及发酵领域，具体涉及一种德氏乳杆菌乳亚种菌株及其应用。
背景技术
德氏乳杆菌是由Beijerinck于1901年分离得来，并用德国细菌学家M.Delbruck的名字来命名的一种革兰氏阳性菌。德氏乳杆菌在培养时对培养基的要求比较高，可利用乳糖、葡萄糖、果糖、甘露糖多种糖类为单一碳源，由于此菌不能合成大部分的氨基酸，所以需要从培养基中获得。德氏乳杆菌在发酵工业中得以广泛应用，如乳制品的发酵、肉制品发酵和啤酒发酵，而德氏乳杆菌保加利亚亚种是乳制品发酵中最为常用的菌种之一，是最具有经济价值的发酵乳酸菌之一。
德氏乳杆菌在乳制品加工业、植物蛋白饮料生产和蔬菜深加工等食品工业领域具有广泛的应用。其中，发酵乳制品是德氏乳杆菌发酵应用最多、最为成熟的领域，其主要产品有酸奶、奶油和奶酪。德氏乳杆菌不仅为发酵乳制品提供了特殊的风味、质地和营养功效，而且赋予了发酵乳制品特殊的食疗功效。因此，德氏乳杆菌作为益生菌发酵剂是乳制品工业中生产中运用最广泛的菌种之一具有极高的经济价值。
乳酸可经过聚合生成的直链或环状聚乳酸,聚乳酸是乳酸衍生物在化工领域最显著的用途。聚乳酸是一种无毒、无剌激性、强度高、可塑性好、具有良好生物可降解性的新型生物，最重要的是具有生物相容性，其分子中的长链经微生物生化代谢后，强度降低甚至脆化，变成小颗粒进入土壤，可以减少污染环境，用聚乳酸材料代替聚乙稀材料是解决当今存在的白色污染问题的途径之一。因此，通过微生物发酵生产乳酸己引起世界各国浓厚的兴趣，产乳酸能力最强的乳杆菌拥有巨大的潜在市场。
专利申请CN 110144309 A公开了一株低温高产酸乳酸菌，其为屎肠球菌(Enterococcus faecium)Ef0518，适合北方低温秸秆微贮发酵条件且产酸量高。
专利申请CN 109749962 A公开了一株耐受性强、产酸高的山西老陈醋优势土著风味植物乳杆菌及应用，在采用宏基因组高通量和传统菌种分离手段研究山西老陈醋发酵过程微生物群落变化的数据基础上，确认植物乳杆菌是陈醋发酵过程中的优势乳酸菌，从中分离筛选出一株耐受性强、产酸高、风味佳的植物乳杆菌，并将其高密度培养，干燥制成直投式发酵剂，多阶段强化传统固态食醋生产。
专利申请CN 111733095 A公开了一株高产γ-氨基丁酸的德氏乳杆菌保加利亚亚种，其是一株从大理特产乳扇中筛选的德氏乳杆菌保加利亚亚种LSR-L-L4；在发酵液中LSR-L-L4作为唯一发酵剂，γ-氨基丁酸产量达473.200-490.594mg/L，为已报道天然菌单株菌最高产率。
专利CN 109666600 B公开了一株产功能氨基酸的德氏乳杆菌乳亚种及其用途，其具有高效水解乳蛋白能力，并能通过发酵显著提高游离氨基酸和支链氨基酸等功能氨基酸含量的德氏乳杆菌新菌株。该菌株可复配嗜热乳杆菌、乳酸乳球菌乳酸亚种、植物乳杆菌等菌株，应用于乳用发酵剂的开发。在乳基中发酵可产生良好的发酵乳特色风味，同时总游离氨基酸以及支链氨基酸、γ-氨基丁酸等功能氨基酸含量都得到明显提升，有助于拓展发酵乳制品的品类，丰富其营养特性与功能特性。
专利申请CN 110024850 A公开了一种德氏乳杆菌的应用，本发明通过德氏乳杆菌活化过程中产生细菌素，能够显著抑制果蔬表面的嗜溫需氧菌、酵母菌和霉菌以及大肠型细菌，提高果蔬的保鲜效果。
因此，现有技术中并没有高产酸并且强耐酸的德氏乳杆菌的报道。
发明内容
针对现有技术的问题，本发明提供了一种德氏乳杆菌乳亚种菌株及其应用，所述菌株具有高效的产酸能力以及较强的耐酸能力，能够用于发酵乳制品。
具体来说，本发明提出了如下技术方案：
本发明提供了一种德氏乳杆菌乳亚种菌株，其中，所述菌株为德氏乳杆菌乳亚种JLACHA LD-Ⅱ(Lactobacillus delbrueckii subsp JLACHA LD-Ⅱ)，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20211314。
优选的，对于上述所述的德氏乳杆菌乳亚种菌株，其16S rDNA的序列如SEQ IDNO:3所示。
本发明提供了上述所述的菌株在发酵领域中的应用，优选在发酵生产乳制品中的应用。
本发明提供了一种菌剂，其含有上述所述的德氏乳杆菌乳亚种菌株。
本发明提供了一种发酵组合物，其包含上述所述的德氏乳杆菌乳亚种菌株。
优选的，对于上述所述的发酵组合物，其中，所述发酵组合物通过发酵培养所述菌株得到。
优选的，对于上述所述的发酵组合物，其中，在25-40℃下发酵培养所述菌株。
优选的，对于上述所述的发酵组合物，其中，发酵培养的时间为15-30h。
本发明提供了一种制备发酵组合物的方法，其包括：发酵培养上述所述的德氏乳杆菌乳亚种菌株得到。
优选的，对于上述所述的方法，其中，在25-40℃下发酵培养所述菌株。
优选的，对于上述所述的方法，其中，发酵培养的时间为15-30h。
本发明提供了上述所述的菌剂或者上述所述的发酵组合物或者上述所述的方法制备得到的发酵组合物在生产乳制品中的应用。
本发明提供了一种乳制品，其包括上述所述的菌剂或者上述所述的发酵组合物或者上述所述的方法制备得到的发酵组合物。
本发明所取得的有益效果是：
本发明所得到的菌株是从藏区牧民家牦牛奶中分离得到，具有食品属性，具有高效的产酸能力和极强的耐酸能力，可广泛应用于发酵乳制品。
菌株保藏信息
本发明所用的菌种德氏乳杆菌乳亚种JLACHA LD-Ⅱ(Lactobacillusdelbrueckii subsp JLACHA LD-Ⅱ)JLACHA LD-Ⅱ，于2021年10月25日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 20211314，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮政编码：430072；电话：027-6875 4052。
附图说明
图1A是使用革兰氏阳性液进行染色后所述菌株的形态特征示意图。
图1B是所述菌株的菌落形态示意图。
图1C是所述菌株进行划线培养后菌落形态示意图。
图2是不同的菌株在培养基初始pH＝3.0条件下的生长曲线示意图。
图3是本发明所述的菌株在脱脂乳中的产酸能力示意图。
具体实施方式
如上所述，本发明提供了一种德氏乳杆菌乳亚种菌株，其中，所述菌株为德氏乳杆菌乳亚种JLACHA LD-Ⅱ(Lactobacillus delbrueckii subsp JLACHA LD-Ⅱ)，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20211314。
所述的菌株是从藏区牧民家牦牛奶中分离得到，具有食品属性，具有高效的产酸能力和极强的耐酸能力。
在一个实施方案中，所述菌株的16S rDNA如SEQ ID NO:3所示，其核苷酸序列如下：
CAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGAGCTGAATTCAAAGATCCCTTCGGGGTGATTTGTTG
GACGCTAGCGGCGGATGGGTGAGTAACACGTGGGCAATCTGCCCTAAAGACTGGGATACCACTTGGAAACAGGTGCTAAT
ACCGGATAACAACATGAATCGCATGATTCAAGTTTGAAAGGCGGCGCAAGCTGTCACTTTAGGATGAGCCCGCGGCGCAT
TAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCAATGATGCGTAGCCGAGTTGAGAGACTGATCGGCCACATTGGGACTG
AGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCG
TGAGTGAAGAAGGTCTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTGGTGAAGAAGGATAGAGGCAGTAACTGGTCTTTATTTGACG
GTAATCAACCAGAAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTAT
TGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGAATGATAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAACTGCATCGGAAACT
GTCATTCTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTG
GCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGT
CCATGCCGTAAACGATGAGCGCTAGGTGTTGGGGACTTTCCGGTCCTCAGTGCCGCAGCAAACGCATTAAGCGCTCCGCC
TGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCG
AAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTGCGCTACACCTAGAGATAGGTGGTTCCCTTCGGGGACGCAGAG
ACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCTTTA
GTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAAAGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCA
TGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGGCAGTACAACGAGAAGCGAACCCGCGAGGGTAAGCGGATCTC
TTAAAGCTGCTCTCAGTTCGGACTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCACGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCAC
GCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGT
本发明提供了上述所述的菌株在发酵领域中的应用，优选在发酵生产乳制品中的应用。
本发明所述的菌株具有较高的产酸能力和较强的耐酸能力，并且属于食品级微生物，因此，可以用于各种发酵乳制品。
本发明提供了一种菌剂，其包含上述所述的德氏乳杆菌乳亚种菌株。
对于制备菌剂的方法，本发明不做任何限制，其可以通过本领域常规的方法进行制备得到，例如所述菌剂通过发明菌株经过高密度培养，分离浓缩后与保护剂混匀，经真空冷冻干燥获得。
本发明提供了一种发酵组合物，其包含上述所述的德氏乳杆菌乳亚种菌株。
所述的发酵组合物通过发酵培养上述所述的德氏乳杆菌乳亚种菌株得到。
在一个实施方案中，在25-40℃下发酵培养所述菌株。
例如，温度可以为25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃、40℃等。
在一个实施方案中，发酵培养的时间为15-30h，例如发酵培养的时间可以为15h、16h、17h、18h、19h、20h、21h、22h、23h、24h、25h、26h、27h、28h、29h、30h等。
对于发酵培养使用的培养基，本发明不作任何限制，只要其能够实现相应的功能即可，例如，发酵培养的培养基可以为MRS培养基、改良MRS培养基、M17培养基、LBS培养基、葡萄糖酵母膏培养基等。
本发明提供了一种制备发酵组合物的方法，其包括：发酵培养上述所述的德氏乳杆菌乳亚种菌株得到。在一个实施方案中，在25-40℃下发酵培养所述菌株。在一个实施方案中，发酵培养的时间为15-30h。
本发明提供了上述所述的菌剂或者上述所述的发酵组合物或者上述所述的方法制备得到的发酵组合物在生产乳制品中的应用。
在一个实施方案中，在乳制品的生产过程中，发酵液中的乳酸含量在25.01g/L以上。
本发明提供了一种乳制品，其包括上述所述的菌剂或者上述所述的发酵组合物或者上述所述的方法制备得到的发酵组合物。
本发明的发明人在实验过程中从藏区牧民家牦牛奶中分离出一种菌株，其是从横跨西藏大部分地区的55份样品中分离筛选功能微生物菌种，并从其中筛选出能高产乳酸、并且是极耐酸的1株德氏乳杆菌，经验证其属于德氏乳杆菌乳亚种，并且该菌株具有高效的产酸能力和极强的耐酸能力，并且，由于德氏乳杆菌乳亚种属于卫生部在2010年颁布的《可用于食品的菌种名单》的食品级微生物，因此，可以用于发酵乳制品。
下面对本实施例所用的原料及设备的生产厂家，以及产品分析使用的设备和分析方法进行说明如下，其中所述的化学物质没有标明的均为常规试剂的化学纯级别。实施例所用到的原料的信息及实验设备如表1和表2所示
表1实施例中所用到的原料的信息
| 试剂 | 纯度 | 生产厂商 |
| 酵母浸粉 | 99％ | 安琪酵母股份有限公司 |
| 葡萄糖 | 99％ | 沂水大地药业有限公司 |
| 石蕊牛乳培养基 | BR | 北京索莱宝生物科技有限公司 |
| MRS肉汤培养基 | BR | 北京奥博星生物技术有限公司 |
| BL琼脂培养基 | BR | 北京索莱宝生物科技有限公司 |
| 革兰氏染色液 | 99％ | 北京索莱宝生物科技有限公司 |
| Super PCR Mix | 99.8％ | 北京擎科新业生物技术有限公司 |
| 细菌基因组提取试剂盒 | —— | 天根生化科技有限公司 |
| 放线菌酮 | ＞94％ | 湖南合众生物科技有限公司 |
| 硫酸粘菌素 | BR | 湖南合众生物科技有限公司 |
表2实施例所用到的实验设备信息表
| 仪器 | 型号 | 品牌 |
| 紫外分光光度计 | SP-754 | 上海光谱仪器有限公司 |
| 高速离心机 | Minispin | eppendorf |
| PCR仪 | C1000Touch | Bio-rad |
| 电泳仪 | DYY-8C | 北京六一仪器厂 |
| 生化培养箱 | SPX250BSH-II | 上海新苗医疗器械制造有限公司 |
| 西尔曼生化分析仪 | M-900 | 深圳市西尔曼科技有限公司 |
| 全自动生长曲线测定仪 | FP-1100C | OY Growth Curves |
实施例1菌株的富集、分离、纯化
菌株富集：取3ml藏区牧民家牦牛牛奶样品加入到30ml石蕊牛乳培养基中，然后放到35℃培养箱，培养24h，培养液酸化凝固并呈现粉红色。
培养单菌落：将培养24h的菌液按10倍梯度稀释到10-6，接种到含10ppm的放线菌酮和10ppm的硫酸粘菌的BL琼脂培养基，在35℃培养24h，待菌落形成，在BL培养基上，菌落呈乳白色凸起，圆形，边缘整齐，不透明，菌落直径为1.8mm±0.3mm。
筛选产酸菌种：将初筛得到的单菌落，在含0.2％CaCO3的BL琼脂培养基中划线培养，培养24h，结束培养后观察有无透明圈，选择透明圈大的单菌落进行划线培养，重复划线培养纯化3次，划线培养后的菌落形态如图1B所示，得到纯化后的菌株。
革兰氏染色初步鉴定：对所纯化后的产酸菌株进行革兰氏染色，100倍油镜镜检观察，如果菌体是紫色杆状，则为革兰氏阳性杆菌，留下来进行后续研究，如果染色不是呈现紫色杆状，该菌株直接淘汰。鉴定结果显示：所得复筛菌株为革兰氏阳性杆菌，不运动，无芽孢，无鞭毛，无荚膜，菌体呈细长杆状，其染色后的形态特征如图1A所示，该菌株的菌落如图1B所示，在BL培养基上，其菌落呈乳白色凸起，圆形，边缘整齐，不透明，菌落直径为1.8mm±0.3mm，将所得到的菌落进行划线培养后的菌落形态如图1C所示。
实施例2菌株的分子生物学鉴定
1.基因组DNA提取
(1)取1.5ml离心管，加入200μL细菌基因组提取试剂盒中的预处理液和三颗玻璃珠，然后加入适量实施例1所得到的菌样品，放入研磨仪中研磨至充分。
(2)加入20μL Proteinase K溶液，混匀，37℃放置30～60min。
(3)加入200μL裂解液，充分颠倒混匀，70℃放置10min。
(4)加200μL无水乙醇，充分颠倒混匀，短离心以去除管盖内壁液滴。
(5)过吸附柱，洗涤液洗1次，漂洗液洗2次。
(6)吸附柱室温放置5～10分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
(7)将吸附转入一个新离心管，向吸附膜中间位置悬空滴加50～100μL ddH2O，室温放置5～10min，12,000rpm离心2min，将溶液收集到离心管中。
2. 16S rDNA扩增
(1)引物序列：正向引物27F，SEQ ID NO:1序列为：5'-AGAGTT TGATCC TGGCTCAG-3'；反向引物1492R，其SEQ ID NO:2序列为：5'-TACGGCTACCTTGTTACGACTT-3'。
(2)PCR扩增反应体系和条件
表3 PCR扩增反应体系和条件
3.PCR产物测序
PCR产物送去测序，测序结果16S rDNA的序列如SEQ ID NO:3所示，其核苷酸序列如下：
CAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGAGCTGAATTCAAAGATCCCTTCGGGGTGATTTGTTG
GACGCTAGCGGCGGATGGGTGAGTAACACGTGGGCAATCTGCCCTAAAGACTGGGATACCACTTGGAAACAGGTGCTAAT
ACCGGATAACAACATGAATCGCATGATTCAAGTTTGAAAGGCGGCGCAAGCTGTCACTTTAGGATGAGCCCGCGGCGCAT
TAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCAATGATGCGTAGCCGAGTTGAGAGACTGATCGGCCACATTGGGACTG
AGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCG
TGAGTGAAGAAGGTCTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTGGTGAAGAAGGATAGAGGCAGTAACTGGTCTTTATTTGACG
GTAATCAACCAGAAAGTCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTAT
TGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGAATGATAAGTCTGATGTGAAAGCCCACGGCTCAACCGTGGAACTGCATCGGAAACT
GTCATTCTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGGAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTG
GCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGCAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGT
CCATGCCGTAAACGATGAGCGCTAGGTGTTGGGGACTTTCCGGTCCTCAGTGCCGCAGCAAACGCATTAAGCGCTCCGCC
TGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCG
AAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTGCGCTACACCTAGAGATAGGTGGTTCCCTTCGGGGACGCAGAG
ACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCTTTA
GTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAAAGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCA
TGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGGCAGTACAACGAGAAGCGAACCCGCGAGGGTAAGCGGATCTC
TTAAAGCTGCTCTCAGTTCGGACTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCACGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCAC
GCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGT
4.测序结果进行NCBI-BLAST比对。
NCBI链接：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/
将测序结果进行NCBI-BLAST比对，根据blast结果显示：菌株JLACHA LD-Ⅱ与德氏乳杆菌乳亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.lactis)亲缘关系最近，相似性达到99％，即鉴定所得到的菌株为德氏乳杆菌乳亚种(Lactobacillus delbrueckiisubsp.lactis)，命名为JLACHA LD-Ⅱ，其于2021年10月25日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M 20211314。
实验例1不同菌株产酸能力的比较
1.活化菌株：用移液枪吸取1ml甘油管保存的实施例1所示的JLACHA LD-Ⅱ的菌液，接种到9mlMRS液体培养基中，35℃，活化培养24h得到活化培养液。
2.培养种子液：用移液枪吸取1ml活化培养液，接种到9mlMRS液体培养基中，35℃，培养24h得到种子培养液。
3.发酵：用移液枪吸取2.5ml种子培养液，接种到47.5mlMRS液体培养基中，35℃，培养24h，每6h测定发酵液的pH值，其结果如表3所示，其中，植物乳杆菌S2(Lactobacillusplantarum S2,其于2021年4月8日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号CCTCC NO.:M2021340)和德氏乳杆菌CK(其从市售的乳酸发酵剂中分离得到，其中，CK表示对照)的培养方法参照JLACHA LD-Ⅱ的培养方法。
表3 JLACHA LD-Ⅱ与对照菌株发酵过程发酵液pH变化情况
| 0h | 6h | 12h | 18h | 24h | |
| JLACHA LD-Ⅱ | 6.40 | 4.98 | 3.12 | 2.52 | 2.04 |
| 植物乳杆菌S2 | 6.40 | 5.60 | 4.56 | 3.71 | 3.52 |
| 德氏乳杆菌CK | 6.40 | 6.17 | 5.83 | 4.94 | 4.67 |
从表3可以看出JLACHA LD-Ⅱ产酸能力最强，说明本发明所述的菌株具有较强的产酸能力。
实验例2不同菌株发酵产乳酸能力的比较
1.活化菌株：用移液枪吸取1ml甘油管保存的实施例1所得到的菌株的菌液，接种到9mlMRS液体培养基中，35℃，活化培养24h，得到活化培养液。
2.培养种子液：用移液枪吸取1ml活化培养液，接种到9mlMRS液体培养基中，35℃，培养24h得到种子培养液。
3.发酵：用移液枪吸取2.5ml种子培养液，接种到47.5mlMRS液体培养基中，35℃，培养24h。
4.发酵液中乳酸含量测定：每6h取1.5ml发酵液于12000rpm，离心5min，取上清，采用西尔曼生物传感器检测乳酸含量，其结果如表4所示，其中，植物乳杆菌S2和德氏乳杆菌CK的培养方法参照JLACHA LD-Ⅱ的培养方法。
表4 JLACHA LD-Ⅱ与对照菌株发酵过程中产乳酸含量的变化
从表4可以看出，JLACHA LD-Ⅱ发酵24h，发酵液中乳酸含量达25.01mg/mL，产乳酸能力最强，说明本发明所述的菌株具有较强的产乳酸能力。
实验例3不同菌株的耐酸性评价
①活化菌株：用移液枪吸取1ml甘油管保存的实施例1所得到的菌液，接种到9mlMRS液体培养基中，35℃，活化培养24h。
②培养种子液：用移液枪吸取1ml活化培养液，接种到9mlMRS液体培养基中，35℃，培养24h。
③耐酸曲线的测定：使用1M的HCL调节MRS肉汤培养基的终pH＝3.0，灭菌后装入微孔板(100孔)。将每株乳酸菌的种子液按5％的接种量接入装该微孔板(100孔)中，将微孔板置于Bioscreen仪器中，于35℃培养，期间每0.5h测定OD600nm，测定不同菌株在培养基初始pH＝3.0条件下的生长曲线，其结果如图2所示，其中，植物乳杆菌S2和德氏乳杆菌CK的培养方法参照JLACHA LD-Ⅱ的培养方法。
从图2可以看出，本发明菌株德氏乳杆菌乳亚种(Lactobacillus delbrueckiisubsp.lactis)JLACHA LD-Ⅱ在发酵培养基初始pH＝3.0的条件下，生长速度明显比植物乳杆菌S2和德氏乳杆菌CK菌株快，耐酸性最强。
实验例4德氏乳杆菌乳亚种JLACHA LD-Ⅱ在脱脂乳中的产酸能力
1.活化菌株：用移液枪吸取0.2ml甘油管保存的实施例1所得到的菌株的菌液，接种到10mlMRS液体培养基中，35℃，厌氧培养24h，得到活化培养液，连续活化3代。
2.取活化菌液按照2％的接种量接种到无菌脱脂乳中培养14h，从接种开始每2h取10ml发酵液，加入20ml无菌水稀释混匀，然后加入2-3滴2％酚酞经0.1M NaOH滴定至不变色且30min不褪色，平行3次，记录滴定体积并计算酸度值，结果如图3所示。
从图3可以看出，本发明所述的菌株在脱脂乳中具有较强的产酸能力，其在脱脂乳中培养14h后，酸度将近达到160°T。
综上所述，本发明得到的菌株具有较强的产酸能力，并具有较强的耐酸能力，并且由于所述菌株属于卫生部2010年颁布的《可用于食品的菌种名单》的食品级微生物，因此可以用于乳制品的发酵。
以上所述，仅是本发明实施的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡在本发明的精神和原则之内所做的修改、等同替换和改进等，均需要包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 西藏安琪生物科技有限公司
<120> 德氏乳杆菌乳亚种菌株及其应用
<130> OICN210174
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
agagtttgat cctggctcag 20
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
tacggctacc ttgttacgac tt 22
<210> 3
<211> 1402
<212> DNA
<213> 德氏乳杆菌乳亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis)
<400> 3
caggacgaac gctggcggcg tgcctaatac atgcaagtcg agcgagctga attcaaagat 60
cccttcgggg tgatttgttg gacgctagcg gcggatgggt gagtaacacg tgggcaatct 120
gccctaaaga ctgggatacc acttggaaac aggtgctaat accggataac aacatgaatc 180
gcatgattca agtttgaaag gcggcgcaag ctgtcacttt aggatgagcc cgcggcgcat 240
tagctagttg gtggggtaaa ggcctaccaa ggcaatgatg cgtagccgag ttgagagact 300
gatcggccac attgggactg agacacggcc caaactccta cgggaggcag cagtagggaa 360
tcttccacaa tggacgcaag tctgatggag caacgccgcg tgagtgaaga aggtcttcgg 420
atcgtaaagc tctgttgttg gtgaagaagg atagaggcag taactggtct ttatttgacg 480
gtaatcaacc agaaagtcac ggctaactac gtgccagcag ccgcggtaat acgtaggtgg 540
caagcgttgt ccggatttat tgggcgtaaa gcgagcgcag gcggaatgat aagtctgatg 600
tgaaagccca cggctcaacc gtggaactgc atcggaaact gtcattcttg agtgcagaag 660
aggagagtgg aactccatgt gtagcggtgg aatgcgtaga tatatggaag aacaccagtg 720
gcgaaggcgg ctctctggtc tgcaactgac gctgaggctc gaaagcatgg gtagcgaaca 780
ggattagata ccctggtagt ccatgccgta aacgatgagc gctaggtgtt ggggactttc 840
cggtcctcag tgccgcagca aacgcattaa gcgctccgcc tggggagtac gaccgcaagg 900
ttgaaactca aaggaattga cgggggcccg cacaagcggt ggagcatgtg gtttaattcg 960
aagcaacgcg aagaacctta ccaggtcttg acatcctgcg ctacacctag agataggtgg 1020
ttcccttcgg ggacgcagag acaggtggtg catggctgtc gtcagctcgt gtcgtgagat 1080
gttgggttaa gtcccgcaac gagcgcaacc cttgtcttta gttgccatca ttaagttggg 1140
cactctaaag agactgccgg tgacaaaccg gaggaaggtg gggatgacgt caagtcatca 1200
tgccccttat gacctgggct acacacgtgc tacaatgggc agtacaacga gaagcgaacc 1260
cgcgagggta agcggatctc ttaaagctgc tctcagttcg gactgcaggc tgcaactcgc 1320
ctgcacgaag ctggaatcgc tagtaatcgc ggatcagcac gccgcggtga atacgttccc 1380
gggccttgta cacaccgccc gt 1402
Claims (14)
1.一种德氏乳杆菌乳亚种菌株，其中，所述菌株为德氏乳杆菌乳亚种JLACHA LD-Ⅱ(Lactobacillus delbrueckii subsp JLACHA LD-Ⅱ)，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20211314。
2.根据权利要求1所述的德氏乳杆菌乳亚种菌株，其16S rDNA的序列如SEQ ID NO:3所示。
3.根据权利要求1或2所述的德氏乳杆菌乳亚种菌株，其特征在于，所述菌株为耐酸性菌株。
4.权利要求1-3任一项所述的菌株在发酵领域中的应用，所述应用包括在发酵生产乳制品中的应用。
5.一种菌剂，其含有权利要求1-3任一项所述的德氏乳杆菌乳亚种菌株。
6.一种发酵组合物，其包含权利要求1-3任一项所述的德氏乳杆菌乳亚种菌株。
7.根据权利要求6所述的发酵组合物，其中，所述发酵组合物通过发酵培养所述菌株得到。
8.根据权利要求7所述的发酵组合物，其中，在25-40℃下发酵培养所述菌株。
9.根据权利要求7或8所述的发酵组合物，其中，发酵培养的时间为15-30h。
10.一种制备发酵组合物的方法，其包括：发酵培养权利要求1-3任一项所述的德氏乳杆菌乳亚种菌株得到。
11.根据权利要求10所述的方法，其中，在25-40℃下发酵培养所述菌株。
12.根据权利要求10或11所述的方法，其中，发酵培养的时间为15-30h。
13.权利要求5所述的菌剂或者权利要求6-9中任一项所述的发酵组合物或者权利要求10-12中任一项所述的方法制备得到的发酵组合物在生产乳制品中的应用。
14.一种乳制品，其包括权利要求5所述的菌剂或者权利要求6-9中任一项所述的发酵组合物或者权利要求10-12中任一项所述的方法制备得到的发酵组合物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111573910.5A CN114381393B (zh) | 2021-12-21 | 2021-12-21 | 德氏乳杆菌乳亚种菌株及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202111573910.5A CN114381393B (zh) | 2021-12-21 | 2021-12-21 | 德氏乳杆菌乳亚种菌株及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114381393A CN114381393A (zh) | 2022-04-22 |
| CN114381393B true CN114381393B (zh) | 2024-03-29 |
Family
ID=81197262
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202111573910.5A Active CN114381393B (zh) | 2021-12-21 | 2021-12-21 | 德氏乳杆菌乳亚种菌株及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114381393B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010143323A1 (ja) * | 2009-06-08 | 2010-12-16 | 国立大学法人 九州大学 | 新規なｄ－乳酸生産菌及びｄ－乳酸を生産する方法 |
| CN108740014A (zh) * | 2018-06-15 | 2018-11-06 | 光明乳业股份有限公司 | 一种高果香酸奶及其制备方法 |
-
2021
- 2021-12-21 CN CN202111573910.5A patent/CN114381393B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010143323A1 (ja) * | 2009-06-08 | 2010-12-16 | 国立大学法人 九州大学 | 新規なｄ－乳酸生産菌及びｄ－乳酸を生産する方法 |
| CN108740014A (zh) * | 2018-06-15 | 2018-11-06 | 光明乳业股份有限公司 | 一种高果香酸奶及其制备方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Enhanced production of lactic acid by an adapted strain of Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis;KiBeom Lee;《World J Microbiol Biotechnol》;第23卷;第1317-1320页 * |
| Optimization of lactic acid production from beet molasses by Lactobacillus delbrueckii NCIMB 8130;Ch. Kotzamanidis 等;《World Journal of Microbiology & Biotechnology》;第18卷;第441-448页 * |
| Strain improvement of Lactobacillus delbrueckii NCIM 2365 for lactic acid production;Sachin R. Kadam 等;《Process Biochemistry》;第41卷;第120-126页 * |
| 德氏乳杆菌发酵生产乳酸工艺条件优化;刘鹏 等;《化工进展》;第30卷(第6期);第1332-1340页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114381393A (zh) | 2022-04-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110257285B (zh) | 一株具有高效降解亚硝酸盐及强产酸功能的植物乳杆菌及其应用 | |
| CN109536406B (zh) | 弱后酸化的嗜热链球菌jmcc16、分离纯化方法及应用 | |
| CN106010997B (zh) | 一种植物乳杆菌及其培养分离方法、筛选方法和应用 | |
| Kim et al. | Development of a novel selective medium for the isolation and enumeration of acetic acid bacteria from various foods | |
| CN107058161B (zh) | 具有抗氧化功能的高加索酸奶乳杆菌jmcc0101、其筛选方法及应用 | |
| CN110257302B (zh) | 具有抗氧化能力的乳酸菌菌株的筛选方法及应用 | |
| CN112251383A (zh) | 一株产苯乳酸的干酪乳杆菌及其应用 | |
| CN113980853B (zh) | 一株产乳酸的格氏乳球菌wbt0008及其应用 | |
| CN107058159B (zh) | 在乳饮料中有良好存活性的植物乳杆菌jmcc0017、其筛选方法及应用 | |
| CN115261262A (zh) | 一株植物乳杆菌hsf-lab-1303及其用途 | |
| CN109136129B (zh) | 一株嗜酸乳杆菌ncu426 | |
| CN112251388B (zh) | 一种植物乳杆菌及其乳酸菌发酵剂的应用 | |
| Cueto et al. | Preliminary studies on the microbiological characterization of lactic acid bacteria in suero costeño, a Colombian traditional fermented milk product | |
| CN113308408A (zh) | 一种产细菌素的肠膜明串珠菌及其应用 | |
| CN113755360A (zh) | 一株广谱抑菌高海拔源植物乳杆菌及应用 | |
| CN116024133B (zh) | 一株耐高浓度苹果酸的植物乳杆菌及其应用 | |
| CN108902601B (zh) | 一株荔枝内生乳酸菌及其发酵果汁饮料 | |
| CN114381393B (zh) | 德氏乳杆菌乳亚种菌株及其应用 | |
| CN107012222A (zh) | 一种基于16S rDNA测序的泡菜发酵剂定向制备方法 | |
| CN112553124B (zh) | 一种植物乳杆菌菌株及其应用 | |
| CN1793325A (zh) | 芳香型直投式酸奶发酵剂 | |
| CN113308419B (zh) | 一株发酵用的谷糠乳杆菌及其应用 | |
| CN112458003B (zh) | 一株产双乙酰植物乳杆菌及其在泡菜中的应用 | |
| CN112899194B (zh) | 一株短双歧杆菌及其培养方法和用途 | |
| CN110938566B (zh) | 一株嗜热链球菌及其在发酵乳中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |