CN113583916B - 一种芽孢杆菌保活剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及菌株保活技术领域，具体公开了一种芽孢杆菌存活剂及其应用，该芽孢杆菌存活剂主要包括海藻糖、D‑山梨糖醇、植物乳酸杆菌胞外多糖和赤藻糖酸钠组份，并且还可以添加干酪素和田箐胶。该芽孢杆菌存活剂应用芽孢杆菌保存能够降低芽孢杆菌失活的速率，提高芽孢杆菌菌体的存活周期。
Description
技术领域
本发明属于菌株保活技术领域，特别涉及一种用于芽孢杆菌保活剂及其应用。
背景技术
芽孢杆菌属，革兰氏阳性菌，需氧或兼性厌氧，产生芽孢，大多数无荚膜，以周生鞭毛运动。细胞呈直杆状，常以成对或是链状排列，具圆端或放端。芽孢杆菌菌属微生物具有共同的生物特性，都能够形成带有芽孢的生物膜，并且代谢产物相似，都能产生环肽，抗生素、酸（多聚谷氨酸、聚天冬胺酸）和聚多糖等。
芽孢杆菌在人们生产生活中有着重要的用途，在农业生产中枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌等许多芽孢杆菌类菌株用于病虫害防治、土壤改良及植物生长促进剂等；在环保工业上许多芽孢杆菌芽孢杆菌类菌株用于污水处理以及除臭用；还有在食品行业许多芽孢杆菌类菌株用于发酵生产保健品添加剂，食品调味剂等等。并且随着微生物技术的发展，芽孢杆菌应用范围及市场越来广阔，占有地位越来越重要。然而进行大范围的应用迫切需要解决菌剂应用的简便性以及易于存储运输等问题。如何维持芽孢杆菌活力，即对菌剂进行有效保藏使之在存储运输过程中稳定、不死亡、不被杂菌污染至关重要。
发明内容
本发明目的在于提供一种用于芽孢杆菌保活剂，该保活剂在用于芽孢杆菌保存，有效提高芽孢杆菌保存时间和存活率。
为实现上述目的，本发明提供了一种用于芽孢杆菌存活剂，该保活剂按质量份数计包括以下组分：海藻糖、D-山梨糖醇、赤藻糖酸钠和植物乳酸杆菌胞外多糖。
优选的，上述技术方案中，按质量份数计海藻糖4~6份、D-山梨糖醇6~7份、植物乳酸杆菌胞外多糖10~15份和赤藻糖酸钠0.02~0.03份。
优选的，上述技术方案中，所述植物乳酸杆菌胞外多糖由植物乳酸杆菌经过发酵培养制得，所用发酵培养基包括：葡萄糖15~35g/L、蛋白胨5~9g/L、酵母粉10~25g/L、磷酸氢二钠3~8g/L、红糖2~5g/L、木瓜汁20~40g/L、蛋黄粉10~15g/L、甘草浸膏10~15g/L、氯化锰0.03~0.06g/L。
优选的，上述技术方案中，所述芽孢杆菌包括多粘芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、侧龅芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌。
进一步，上述技术方案中，所述存活剂还包括干酪素和田箐胶。
进一步，上述技术方案中，所述干酪素与植物乳酸杆菌胞外多糖质量比为（1.5~2）:（10~15）,所述田箐胶与植物乳酸杆菌胞外多糖质量比为（3~4）:（10~15）。
上述技术方案中的芽孢杆菌存活剂的应用方法为，将所述保活剂和芽孢杆菌菌液按照质量比1~2:20混合均匀后冷冻干燥形成固体物。
进一步，上述技术方案中，将所述冷冻干燥温度为-50~-60℃，压强为常压以下的0.1~0.09MPa。
进一步，上述技术方案中，所述芽孢杆菌菌液中活芽孢数为109~1010cfu/ml。
与现有的技术相比，本发明具有如下有益效果：
1、本发明提供一种用于芽孢杆菌保活剂，该芽孢杆菌保活剂由海藻糖、D-山梨糖醇、植物乳酸杆菌胞外多糖为主要组分。该芽孢杆菌保活剂，具有良好亲水性，可通过氢和离子键对水和细胞产生的亲和力来稳定细胞成分的构型，能够保持菌体细胞适当水分，防止受干燥、热造成的脱水对细胞的损害，从而对芽孢杆菌形成良好保存效果，芽孢杆菌存活率高及存活时间长；同时，该芽孢杆菌保活剂植物乳酸杆菌胞外多糖、海藻糖与赤藻糖酸钠能够共同对芽孢杆菌形成保护性作用，提高芽孢杆菌抗逆性，促进芽孢杆菌对环境中光照变化，温度变化，重金属等影响因素适应及抵抗能力，延长了芽孢杆菌保存时限，提高了芽孢杆菌保存的质量。
2、本发明芽孢杆菌保活剂适应范围广对多种芽孢杆菌的保存都表现出良好的效果，并且本发明的保存方法步骤简单，易操作，可用于多种环境，保存效率高、实用性强。
3、本发明保活剂通过添加田箐胶并配合干酪素进一步增强了芽孢杆菌生存力，对于芽孢杆菌在保存过程中的存活的特定影响显著，进一步提高了芽孢杆菌存活率及芽孢杆菌的存活时间，使得保活剂在芽孢杆菌保存应用效果远好于一般保活剂，从而减少了芽孢杆菌实际应用局限性条件，提高了芽孢杆菌应用效果。
具体实施方式
下面结合本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
实施例1
存活剂样品1组成：海藻糖5份、D-山梨糖醇7份、植物乳酸杆菌胞外多糖13份、干酪素1.5份、田箐胶4份、赤藻糖酸钠0.03份。
植物乳酸杆菌胞外多糖由植物乳酸杆菌在培养基中37℃发酵培养24小时制得，所用发酵培养基为：葡萄糖20g/L、蛋白胨7g/L、酵母粉15g/L、磷酸氢二钠6g/L、红糖4g/L、木瓜汁30g/L、蛋黄粉13g/L、甘草浸膏13g/L、氯化锰0.04g/L。
对比样品1-1：与存活剂样品1基本相同，不同的是保活剂不包含干酪素。
对比样品1-2：与存活剂样品1基本相同，不同的是保活剂不包含田箐胶。
对比样品1-3：与存活剂样品1基本相同，不同的是保活剂不包含田箐胶和干酪素。
将保活剂和多粘芽孢杆菌菌液（多粘芽孢杆菌菌液中活芽孢数为5×109cfu/ml）按照质量比1.5:20混合分散均匀后于温度-50~-60℃，压强为常压以下的0.1~0.09MPa冷冻干燥形成固体物于20℃保藏。并分别于第0天、第60天、第120天和第180天对保存样品的活菌数进行检测，并计算多粘芽孢杆菌存活率，结果如表1所示。
表1.多粘芽孢杆菌存活率统计结果
| 使用保活剂样品 | 60天存活率/% | 120天存活率/% | 180天存活率/% |
| 存活剂样品1 | 95.6 | 93.7 | 89.7 |
| 对比样品1-1 | 87.7 | 85.6 | 82.3 |
| 对比样品1-2 | 86.6 | 84.1 | 81.2 |
| 对比样品1-3 | 86.3 | 83.2 | 79.7 |
由表1可知，其中使用存活剂样品1在60天的存活率为95.6%，在120天的存活率为93.7%，在180天存活率89.7%，均远高于使用对比样品1-1到对比样品1-3的多粘芽孢杆菌的存活率，存活剂样品1提高多粘芽孢杆菌保存存活率效果明显。
实施例2
存活剂样品2组成：海藻糖4份、D-山梨糖醇6份、植物乳酸杆菌胞外多糖10份、干酪素2份、田箐胶4份、赤藻糖酸钠0.02份。
植物乳酸杆菌胞外多糖由植物乳酸杆菌在培养基中37℃发酵培养24小时制得，所用发酵培养基为：葡萄糖15g/L、蛋白胨5g/L、酵母粉25g/L、磷酸氢二钠8g/L、红糖5g/L、木瓜汁40g/L、蛋黄粉15g/L、氯化锰0.06g/L。
对比样品2-1：与存活剂样品2基本相同，不同的是保活剂不包含干酪素。
对比样品2-2：与存活剂样品2基本相同，不同的是保活剂不包含田箐胶。
对比样品2-3：与存活剂样品2基本相同，不同的是保活剂不包含田箐胶和干酪素。
将保活剂和胶冻样芽孢杆菌菌液（胶冻样芽孢杆菌菌液中活芽孢数为10×109cfu/ml）按照质量比1:10混合分散均匀后于温度-50~-60℃，压强为常压以下的0.1~0.09MPa冷冻干燥形成固体物于20℃保藏。分别于在第0天、第60天、第120天和第180天对保存样品的对活菌数数进行检测，并计算胶冻样芽孢杆菌存活率，结果如表2所示。
表2.胶冻样芽孢杆菌存活率统计结果
| 使用保活剂样品 | 60天存活率/% | 120天存活率/% | 180天存活率/% |
| 存活剂样品2 | 96.7 | 94.5 | 90.1 |
| 对比样品2-1 | 88.4 | 86.3 | 81.9 |
| 对比样品2-2 | 87.2 | 85.4 | 80.7 |
| 对比样品2-3 | 85.9 | 82.7 | 80.6 |
由表2可知，其中使用存活剂样品2在60天的存活率为96.7%，在120天的存活率为91.4%，在180天存活率90.1%，均远高于使用对比样品2-1到对比样品2-3的胶冻样芽孢杆菌的存活率，存活剂样品2提高胶冻样芽孢杆菌保存存活率效果明显。
实施例3
存活剂样品3组成：海藻糖6份、D-山梨糖醇7份、植物乳酸杆菌胞外多糖15份、干酪素1.5份、田箐胶3份、赤藻糖酸钠0.02份。
植物乳酸杆菌胞外多糖由植物乳酸杆菌在培养基中37℃发酵培养24小时制得，所用发酵培养基为：葡萄糖35g/L、蛋白胨9g/L、酵母粉10g/L、磷酸氢二钠3g/L、红糖2g/L、木瓜汁20g/L、蛋黄粉10g/L、甘草浸膏15g/L、氯化锰0.03g/L。
对比样品3-1：与存活剂样品3基本相同，不同的是保活剂不包含干酪素。
对比样品3-2：与存活剂样品3基本相同，不同的是保活剂不包含田箐胶。
对比样品3-3：与存活剂样品3基本相同，不同的是保活剂不包含田箐胶和干酪素。
将保活剂和解淀粉芽孢杆菌菌液（解淀粉芽孢杆菌菌液中活芽孢数为1×109cfu/ml）按照质量比1:20混合分散均匀后于温度-50~-60℃，压强为常压以下的0.1~0.09MPa冷冻干燥形成固体物于20℃保藏。分别于在第0天、第60天、第120天和第180天对保存样品的对活菌数数进行检测，并计算解淀粉芽孢杆菌存活率，结果如表3所示。
表3.解淀粉芽孢杆菌存活率统计结果
| 使用保活剂样品 | 60天存活率/% | 120天存活率/% | 180天存活率/% |
| 存活剂样品3 | 92.6 | 90.3 | 87.2 |
| 对比样品3-1 | 85.9 | 82.5 | 78.7 |
| 对比样品3-2 | 85.2 | 82.9 | 77.6 |
| 对比样品3-3 | 84.8 | 82.3 | 78.8 |
由表3可知，其中使用存活剂样品3在60天的存活率为92.6%，在120天的存活率为90.3%，在180天存活率87.2%，均远高于使用对比样品3-1到对比样品3-3的解淀粉芽孢杆菌的存活率，存活剂样品3提高解淀粉芽孢杆菌保存存活率效果明显。
实施例4
存活剂样品4组成：海藻糖5份、D-山梨糖醇6份、植物乳酸杆菌胞外多糖15份、干酪素2份、田箐胶3份、赤藻糖酸钠0.03份。
植物乳酸杆菌胞外多糖由植物乳酸杆菌在培养基中37℃发酵培养24小时制得，所用发酵培养基为：葡萄糖35g/L、蛋白胨5g/L、酵母粉10g/L、磷酸氢二钠7g/L、红糖5g/L、木瓜汁20g/L、蛋黄粉15g/L、甘草浸膏10g/L、氯化锰0.05g/L。
对比样品4-1：与存活剂样品4基本相同，不同的是保活剂不包含干酪素。
对比样品4-2：与存活剂样品4基本相同，不同的是保活剂不包含田箐胶。
对比样品4-3：与存活剂样品4基本相同，不同的是保活剂不包含田箐胶和干酪素。
将保活剂和地衣芽孢杆菌菌液（地衣芽孢杆菌菌液中活芽孢数为8×109cfu/ml）按照质量比1.5:20混合分散均匀后于温度-50~-60℃，压强为常压以下的0.1~0.09MPa冷冻干燥形成固体物于20℃保藏。分别于在第0天、第60天、第120天和第180天对保存样品的对活菌数数进行检测，并计算地衣芽孢杆菌存活率，结果如表4所示。
表4.地衣芽孢杆菌存活率统计结果
| 使用保活剂样品 | 60天存活率/% | 120天存活率/% | 180天存活率/% |
| 存活剂样品4 | 93.9 | 89.7 | 84.2 |
| 对比样品4-1 | 86.3 | 81.5 | 77.8 |
| 对比样品4-2 | 85.1 | 80.9 | 76.5 |
| 对比样品4-3 | 84.6 | 81.3 | 76.2 |
由表4可知其中使用存活剂样品4在60天的存活率为93.9%，在120天的存活率为89.7%，在180天存活率84.2%，均远高于使用对比样品4-1到对比样品4-3的地衣芽孢杆菌的存活率，存活剂样品4提高地衣芽孢杆菌保存存活率效果明显。
实施例5
存活剂样品5组成：海藻糖4份、D-山梨糖醇7份、植物乳酸杆菌胞外多糖10份、干酪素2份、田箐胶4份、赤藻糖酸钠0.03份。
植物乳酸杆菌胞外多糖由植物乳酸杆菌在培养基中37℃发酵培养24小时制得，所用发酵培养基为：葡萄糖30g/L、蛋白胨8g/L、酵母粉20g/L、磷酸氢二钠6g/L、红糖3g/L、木瓜汁35g/L、蛋黄粉15g/L、甘草浸膏12g/L、氯化锰0.05g/L。
对比样品5-1：与存活剂样品5基本相同，不同的是保活剂不包含干酪素。
对比样品5-2：与存活剂样品5基本相同，不同的是保活剂不包含田箐胶。
对比样品5-3：与存活剂样品5基本相同，不同的是保活剂不包含田箐胶和干酪素。
将保活剂和枯草芽孢杆菌菌液（枯草芽孢杆菌菌液中活芽孢数为5×109cfu/ml）按照质量比1:20混合分散均匀后于温度-50~-60℃，压强为常压以下的0.1~0.09MPa冷冻干燥形成固体物于20℃保藏。分别于在第0天、第60天、第120天和第180天对保存样品的对活菌数数进行检测，并计算枯草芽孢杆菌存活率，结果如表5所示。
表5.多粘芽孢杆菌存活率统计结果
| 使用保活剂样品 | 60天存活率/% | 120天存活率/% | 180天存活率/% |
| 存活剂样品5 | 96.7 | 92.4 | 88.3 |
| 对比样品5-1 | 88.2 | 84.8 | 80.6 |
| 对比样品5-2 | 87.5 | 83.6 | 78.5 |
| 对比样品5-3 | 86.8 | 82.1 | 77.6 |
由表5可知，其中使用存活剂样品5在60天的存活率为95.6%，在120天的存活率为93.7%，在180天存活率89.7%，均远高于使用对比样品5-1到对比样品5-3的枯草芽孢杆菌的存活率，存活剂样品5提高枯草芽孢杆菌保存存活率效果明显。
实施例6
存活剂样品6组成：海藻糖5份、D-山梨糖醇7份、植物乳酸杆菌胞外多糖13份、干酪素1.5份、田箐胶3份、赤藻糖酸钠0.02份。
植物乳酸杆菌胞外多糖由植物乳酸杆菌在培养基中37℃发酵培养24小时制得，所用发酵培养基为：葡萄糖30g/L、蛋白胨8g/L、酵母粉10g/L、磷酸氢二钠6g/L、红糖2g/L、木瓜汁30g/L、蛋黄粉10g/L、甘草浸膏14g/L、氯化锰0.03g/L。
对比样品6-1：与存活剂样品6基本相同，不同的是保活剂不包含干酪素。
对比样品6-2：与存活剂样品6基本相同，不同的是保活剂不包含田箐胶。
对比样品6-3：与存活剂样品6基本相同，不同的是保活剂不包含田箐胶和干酪素。
将保活剂和侧龅芽孢杆菌菌液（侧龅芽孢杆菌菌液中活芽孢数8×109cfu/ml）按照质量比1:10混合分散均匀后于温度-50~-60℃，压强为常压以下的0.1~0.09MPa冷冻干燥形成固体物于20℃保藏。分别于在第0天、第60天、第120天和第180天对保存样品的对活菌数数进行检测，并计算侧龅芽孢杆菌存活率，结果如表6所示。
表6.侧龅芽孢杆菌存活率统计结果
| 使用保活剂样品 | 60天存活率/% | 120天存活率/% | 180天存活率/% |
| 存活剂样品6 | 91.8 | 88.4 | 83.5 |
| 对比样品6-1 | 85.7 | 81.6 | 76.4 |
| 对比样品6-2 | 83.9 | 80.2 | 76.1 |
| 对比样品6-3 | 82.7 | 79.3 | 75.7 |
由表6可知，其中使用存活剂样品6在60天的存活率为95.6%，在120天的存活率为93.7%，在180天存活率89.7%，均远高于使用对比样品6-1到对比样品6-3的侧龅芽孢杆菌的存活率，存活剂样品6提高侧龅芽孢杆菌保存存活率效果明显。
实施例7
存活剂样品7组成：海藻糖6份、D-山梨糖醇6份、植物乳酸杆菌胞外多糖12份、干酪素2份、田箐胶3.5份、赤藻糖酸钠0.025份。
植物乳酸杆菌胞外多糖由植物乳酸杆菌在培养基中37℃发酵培养24小时制得，所用发酵培养基为：葡萄糖28g/L、蛋白胨8g/L、酵母粉20g/L、磷酸氢二钠5g/L、红糖4g/L、木瓜汁26g/L、蛋黄粉13g/L、甘草浸膏12g/L、氯化锰0.06g/L。
对比样品7-1：与存活剂样品7基本相同，不同的是保活剂不包含干酪素。
对比样品7-2：与存活剂样品7基本相同，不同的是保活剂不包含田箐胶。
对比样品7-3：与存活剂样品7基本相同，不同的是保活剂不包含田箐胶和干酪素。
将保活剂和巨大芽孢杆菌（巨大芽孢杆菌中活芽孢数为6×109cfu/ml）按照质量比1:15混合分散均匀后于温度-50~-60℃，压强为常压以下的0.1~0.09MPa冷冻干燥形成固体物于20℃保藏。分别于在第0天、第60天、第120天和第180天对保存样品的对活菌数数进行检测，并计算巨大芽孢杆菌存活率，结果如表7所示。
表7.巨大芽孢杆菌存活率统计结果
| 使用保活剂样品 | 60天存活率/% | 120天存活率/% | 180天存活率/% |
| 存活剂样品7 | 94.5 | 91.4 | 86.7 |
| 对比样品7-1 | 87.3 | 83.7 | 80.1 |
| 对比样品7-2 | 86.1 | 82.4 | 77.8 |
| 对比样品7-3 | 85.6 | 81.7 | 76.2 |
由表7可知，其中使用存活剂样品7在60天的存活率为95.6%，在120天的存活率为93.7%，在180天存活率89.7%，均远高于使用对比样品7-1到对比样品7-3的枯巨大芽孢杆菌的存活率，存活剂样品7提高巨大芽孢杆菌保存存活率效果明显。
综上述本发明芽孢杆菌存活剂保存能够降低芽孢杆菌失活的速率，提高芽孢杆菌菌体的保藏存活周期。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。
Claims (6)
1.一种芽孢杆菌存活剂，其特征在于，其按质量份数计包括以下组分：海藻糖4～6份、D-山梨糖醇6～7份、植物乳酸杆菌胞外多糖10～15份和赤藻糖酸钠0.02～0.03份；
还包括干酪素和田箐胶，所述干酪素与植物乳酸杆菌胞外多糖质量比为(1.5～2):(10～15),所述田箐胶与植物乳酸杆菌胞外多糖质量比为(3～4):(10～15)。
2.根据权利要求1所述的芽孢杆菌存活剂，其特征在于，所述植物乳酸杆菌胞外多糖由植物乳酸杆菌经过发酵培养制得，所用发酵培养基包括：葡萄糖15～35g/L、蛋白胨5～9g/L、酵母粉10～25g/L、磷酸氢二钠3～8g/L、红糖2～5g/L、木瓜汁20～40g/L、蛋黄粉10～15g/L、甘草浸膏10～15g/L、氯化锰0.03～0.06g/L。
3.根据权利要求1所述的芽孢杆菌存活剂，其特征在于，所述芽孢杆菌包括多粘芽孢杆菌、胶冻样芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、侧龅芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌。
4.一种如权利要求1所述的芽孢杆菌存活剂的应用，其特征在于，将所述存活剂和芽孢杆菌菌液按照质量比1～2:20混合均匀后冷冻干燥形成固体物。
5.根据权利要求4所述的芽孢杆菌存活剂的应用，其特征在于，将所述冷冻干燥温度为-50～-60℃，压强为常压以下的0.1～0.09MPa。
6.根据权利要求4所述的芽孢杆菌存活剂的应用，其特征在于，所述芽孢杆菌菌液中活芽孢数为109～1010cfu/ml。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103911314A (zh) * | 2013-10-31 | 2014-07-09 | 领绿生物镇江有限公司 | 一种枯草芽孢杆菌芽孢保护剂及使用方法 |
| CN109517752A (zh) * | 2018-09-30 | 2019-03-26 | 江南大学 | 一种胞外多糖及其应用 |
| CN111621461A (zh) * | 2020-05-28 | 2020-09-04 | 武汉微康益生菌研究院有限公司 | 一种提高凝结芽孢杆菌bc99活性和耐受性的方法及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Effect of hydrocolloids on physical, thermal and microstructure properties of par-baked baguette during frozen storage;Yixuan Liu等;International Journal of Biological Macromolecules;第163卷;1866-1874 * |
| Polysaccharides can improve the survival of Lactiplantibacillus plantarum subjected to freeze-drying;Guangqiang Wang等;J Dairy Sci;第104卷(第3期);2606-2614 * |
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