CN113577388A - 一种脱细胞脂肪基质的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种脱细胞脂肪基质的制备方法。属于医用生物材料技术领域。包括以下步骤：脂肪组织保存处理；冻融程序处理；分离油脂；除垢；去除细胞和水解；萃取；清洗沥干，得脱细胞脂肪基质。本发明材料洁净无杂质，含有脱细胞脂肪支架的主要活性成分，无免疫反应，且物理性能优，机械性能佳，能够较好的应用于软组织损伤修复。

Description

一种脱细胞脂肪基质的制备方法
技术领域
本发明涉及医用生物材料技术领域，更具体的说是涉及一种脱细胞脂肪基质的制备方法。
背景技术
软组织缺损是临床工作中的常见疾病，组织再生是解决这一问题的关键，组织工程与再生医学技术的兴起为组织再生提供一种可行的方案。研究表明，干细胞自我更新和不断分化的特性能够实现组织代谢和创伤后缺陷的再生，是组织再生的理想细胞。随着干细胞用于组织再生的不断发展，随之而来的各种问题也不断出现：1)干细胞体外扩增端粒缩短问题。2)干细胞体外扩增功能受损问题。3)干细胞污染问题。4)干细胞不稳定、存活率低的问题。
干细胞增殖和分化的动态和特异性微环境称为生态位，生态位的变化是制约干细胞应用的关键因素。正常情况下，细胞外基质(Extracellular Matrix，ECM)是调节干细胞命运的理想环境。ECM由多种胶原、糖蛋白和生长因子组成，通过与干细胞相互作用，动态调控干细胞的行为，为干细胞识别提供细胞外线索。
在组织工程和再生医学领域中，利用干细胞实现组织再生，生物材料支架是关键。新兴的生物支架材料是未来组织工程和再生医学发展的一个重要方向。ECM可能是最理想的生物材料支架，然而，天然的ECM来源于组织，往往含有活细胞等免疫原，是阻碍ECM应用于组织工程和再生医学领域的关键因素。脱细胞技术的出现及快速发展极大地推动ECM在干细胞领域的应用。生物组织经过脱细胞处理后，去除组织中的免疫原成分，保留了完整的ECM结构，并含有干细胞生存、增殖和迁移以及特定谱系分化的生长因子和其他生化成分。不同于合成支架，脱细胞化的组织基质支架通过影响细胞分化和组织重塑的能力能够积极地与植入其上的细胞沟通，是组织工程的优越生物材料。目前，基于脱细胞组织的支架已经从真皮，肠粘膜、软骨、膀胱，心包和脂肪等组织中产生。这些支架广泛应用于在乳房重建、粘膜缺损、创面愈合、软组织填充等领域。
人同种异体组织可能是ECM的最理想来源。人脂肪组织脱细胞基质是临床应用有前途的支架，它可以作为脂肪组织移植的非免疫原性替代物，以增强或重建软组织。人脂肪组织来源丰富，与其他人体组织不同，脂肪切除，腹部整形，乳房缩小术或抽脂后获得的人体脂肪组织往往作为医疗废物丢弃。通过脱细胞技术从脂肪组织中获得ECM，变废为宝，能够极大的降低医疗资源的浪费。
因此，如何提供一种脱细胞彻底，无免疫原性，无细胞毒性，生物相容性好的脱细胞脂肪基质是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种脱细胞脂肪基质的制备方法。联合物理、化学和生物方法制备脱细胞脂肪基质。生物相容性好，免疫原性低，含有丰富的活性成分(主要为细胞因子)。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种脱细胞脂肪基质的制备方法，包括以下步骤：
1)脂肪组织保存处理：将新鲜离体的脂肪组织A置于无菌预冷的生理盐水保存液中，得脂肪组织B；
2)将脂肪组织B冻融程序处理；
3)将冻融程序处理后的脂肪组织分离油脂；
4)将分离油脂后的脂肪组织除垢，得脂肪组织C清洗沥干；
5)脂肪组织C去除细胞和水解得脂肪组织D，清洗沥干；
6)脂肪组织D萃取，得脂肪组织E；
7)脂肪组织E清洗沥干，得脱细胞脂肪基质。
进一步的，预冷温度为4℃。
进一步的：步骤4)清洗沥干为ddH2O中反复清洗，重复3次，沥干水分。
步骤5)清洗沥干为生理盐水中反复清洗，重复3次，沥干水分。
进一步的，步骤7)清洗沥干为置于生理盐水中反复清洗3～6次，沥干水分。
优选的：步骤1)所述生理盐水保存液为含5％血清白蛋白的无菌0.9％wt生理盐水。
优选的：步骤2)所述冻融程序：液氮冷冻10～15min，再升温至25～37℃，重复3次。
有益效果在于：使组织融化变软。
优选的：步骤3)分离油脂：先将脂肪组织制备成小块：4℃环境下，利用手术刀片将脂肪组织切成2cm×2cm×1cm的小块；再机械分离：将分离成块的脂肪组织置于破壁机中加入预冷ddH2O搅拌10～20min。
有益效果在于:更易去除油脂，此过程在4℃冷库中进行。
优选的：步骤4)所述除垢：加入TritonX-100溶液，不断搅拌过夜，离心；所述分离油脂后的脂肪组织和TritonX-100溶液按照体积比为0.5～1：2～4；所述TritonX-100的浓度：1～3％wt；所述搅拌：温度25～30℃，500～800rp m，期间更换溶液2～3次；所述离心：2～4℃环境下，转速3000～5000rpm，时间10～20min。
有益效果在于：TritonX-100是一种较温和的非离子除垢剂，不改变组织的天然结构，
优选的：步骤5)所述去除细胞和水解：将脂肪组织C按体积比0.5～1：2～4加入Trypsin–EDTA溶液和脂肪分解酶混合液，不断搅拌，消化过夜；所述Trypsin–EDTA溶液：0.25％trypsin–0.05％EDTA溶液；所述脂肪分解酶液：2.5～5mg/ml脂肪酶溶液；所述搅拌，消化过夜：温度25～37℃，500～800rpm，期间更换溶液2～3次。
有益效果在于：进一步去除细胞和脂肪组织中的脂肪。
优选的：步骤6)所述萃取加入异丙醇萃取；所述脂肪组织D和异丙醇按照体积比为0.5～1：2～3；所述萃取需不断搅拌，期间更换溶液2～3次。
本发明还提供了上述一种脱细胞脂肪基质的制备方法制备得到的脱细胞脂肪基质。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种脱细胞脂肪基质的制备方法，相较于现有技术本发明材料洁净无杂质，含有脱细胞脂肪支架的主要活性成分，无免疫反应，且物理性能优，机械性能佳，能够较好的应用于软组织损伤修复。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明提供的脱细胞脂肪基质观察图，其中，左图为脂肪组织，右图为脱细胞脂肪基质。
图2附图为本发明提供的DAPI染色观察脱细胞效果图，其中，左图为脂肪组织，右图为脱细胞基质。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例公开了一种脱细胞脂肪基质的制备方法。
实施例1
一种脱细胞脂肪基质的制备方法，包括以下步骤：
1)脂肪组织保存处理：将新鲜离体的脂肪组织A置于无菌预冷的生理盐水保存液中，得脂肪组织B；
2)将脂肪组织B冻融程序处理；
3)将冻融程序处理后的脂肪组织分离油脂；
4)将分离油脂后的脂肪组织除垢，得脂肪组织C清洗沥干；
5)脂肪组织C去除细胞和水解得脂肪组织D，清洗沥干；
6)脂肪组织D萃取，得脂肪组织E；
7)脂肪组织E清洗沥干，得脱细胞脂肪基质。
为进一步优化技术方案：步骤1)生理盐水保存液为含5％血清白蛋白的无菌0.9％wt生理盐水。
为进一步优化技术方案：步骤2)冻融程序：液氮冷冻10min，再升温至25℃，重复3次。
为进一步优化技术方案：步骤3)分离油脂：先将脂肪组织制备成小块：4℃环境下，利用手术刀片将脂肪组织切成2cm×2cm×1cm的小块；再机械分离：将分离成块的脂肪组织置于破壁机中加入预冷ddH2O搅拌10min。
为进一步优化技术方案：步骤4)除垢：加入TritonX-100溶液，不断搅拌过夜，离心；分离油脂后的脂肪组织和TritonX-100溶液按照体积比为0.5：2；TritonX-100的浓度：1％wt；搅拌：温度25℃，500rpm，期间更换溶液2次；离心：2℃环境下，转速3000rpm，时间10min。
为进一步优化技术方案：步骤5)去除细胞和水解：将脂肪组织C按体积比0.5：2加入Trypsin–EDTA溶液和脂肪分解酶混合液，不断搅拌，消化过夜；Trypsin–EDTA溶液：0.25％trypsin–0.05％EDTA溶液；脂肪分解酶液：2.5mg/ml脂肪酶溶液；搅拌，消化过夜：温度25℃，500rpm，期间更换溶液2次。
为进一步优化技术方案：步骤6)萃取加入异丙醇萃取；脂肪组织D和异丙醇按照体积比为0.5：2；萃取需不断搅拌，期间更换溶液2次。
实施例2
一种脱细胞脂肪基质的制备方法，包括以下步骤：
1)脂肪组织保存处理：将新鲜离体的脂肪组织A置于无菌预冷的生理盐水保存液中，得脂肪组织B；
2)将脂肪组织B冻融程序处理；
3)将冻融程序处理后的脂肪组织分离油脂；
4)将分离油脂后的脂肪组织除垢，得脂肪组织C清洗沥干；
5)脂肪组织C去除细胞和水解得脂肪组织D，清洗沥干；
6)脂肪组织D萃取，得脂肪组织E；
7)脂肪组织E清洗沥干，得脱细胞脂肪基质。
为进一步优化技术方案：步骤1)生理盐水保存液为含5％血清白蛋白的无菌0.9％wt生理盐水。
为进一步优化技术方案：步骤2)冻融程序：液氮冷冻13min，再升温至30℃，重复3次。
为进一步优化技术方案：步骤3)分离油脂：先将脂肪组织制备成小块：4℃环境下，利用手术刀片将脂肪组织切成2cm×2cm×1cm的小块；再机械分离：将分离成块的脂肪组织置于破壁机中加入预冷ddH2O搅拌15min。
为进一步优化技术方案：步骤4)除垢：加入TritonX-100溶液，不断搅拌过夜，离心；分离油脂后的脂肪组织和TritonX-100溶液按照体积比为0.75：3；TritonX-100的浓度：2％wt；搅拌：温度28℃，700rpm，期间更换溶液2次；离心：3℃环境下，转速4000rpm，时间15min。
为进一步优化技术方案：步骤5)去除细胞和水解：将脂肪组织C按体积比0.75：3加入Trypsin–EDTA溶液和脂肪分解酶混合液，不断搅拌，消化过夜；Trypsin–EDTA溶液：0.25％trypsin–0.05％EDTA溶液；脂肪分解酶液：4mg/ml脂肪酶溶液；搅拌，消化过夜：温度30℃，600rpm，期间更换溶液3次。
为进一步优化技术方案：步骤6)萃取加入异丙醇萃取；脂肪组织D和异丙醇按照体积比为0.75：3；萃取需不断搅拌，期间更换溶液3次。
实施例3
一种脱细胞脂肪基质的制备方法，包括以下步骤：
1)脂肪组织保存处理：将新鲜离体的脂肪组织A置于无菌预冷的生理盐水保存液中，得脂肪组织B；
2)将脂肪组织B冻融程序处理；
3)将冻融程序处理后的脂肪组织分离油脂；
4)将分离油脂后的脂肪组织除垢，得脂肪组织C清洗沥干；
5)脂肪组织C去除细胞和水解得脂肪组织D，清洗沥干；
6)脂肪组织D萃取，得脂肪组织E；
7)脂肪组织E清洗沥干，得脱细胞脂肪基质。
为进一步优化技术方案：步骤1)生理盐水保存液为含5％血清白蛋白的无菌0.9％wt生理盐水。
为进一步优化技术方案：步骤2)冻融程序：液氮冷冻15min，再升温至37℃，重复3次。
为进一步优化技术方案：步骤3)分离油脂：先将脂肪组织制备成小块：4℃环境下，利用手术刀片将脂肪组织切成2cm×2cm×1cm的小块；再机械分离：将分离成块的脂肪组织置于破壁机中加入预冷ddH2O搅拌20min。
为进一步优化技术方案：步骤4)除垢：加入TritonX-100溶液，不断搅拌过夜，离心；分离油脂后的脂肪组织和TritonX-100溶液按照体积比为1：4；TritonX-100的浓度：3％wt；搅拌：温度30℃，800rpm，期间更换溶液3次；离心：4℃环境下，转速5000rpm，时间20min。
为进一步优化技术方案：步骤5)去除细胞和水解：将脂肪组织C按体积比1：4加入Trypsin–EDTA溶液和脂肪分解酶混合液，不断搅拌，消化过夜；Trypsin–EDTA溶液：0.25％trypsin–0.05％EDTA溶液；脂肪分解酶液：5mg/ml脂肪酶溶液；搅拌，消化过夜：温度37℃，800rpm，期间更换溶液3次。
为进一步优化技术方案：步骤6)萃取加入异丙醇萃取；脂肪组织D和异丙醇按照体积比为1：3；萃取需不断搅拌，期间更换溶液3次。
技术效果：
利用实施例提供的方法制备获得脱细胞脂肪基质，是一种组织工程生物支架。不仅能够实现基本的软组织损伤修复，更能够与种子细胞联合实现组织再生。脱细胞脂肪基质观察图和DAPI染色观察脱细胞效果图参见图1、图2。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (8)

1.一种脱细胞脂肪基质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)脂肪组织保存处理：将新鲜离体的脂肪组织A置于无菌预冷的生理盐水保存液中，得脂肪组织B；
2)将脂肪组织B冻融程序处理；
3)将冻融程序处理后的脂肪组织分离油脂；
4)将分离油脂后的脂肪组织除垢，得脂肪组织C清洗沥干；
5)脂肪组织C去除细胞和水解得脂肪组织D，清洗沥干；
6)脂肪组织D萃取，得脂肪组织E；
7)脂肪组织E清洗沥干，得脱细胞脂肪基质。
2.根据权利要求1所述的一种脱细胞脂肪基质的制备方法，其特征在于：步骤1)所述生理盐水保存液为含5％血清白蛋白的无菌0.9％wt生理盐水。
3.如权利要求1所述的一种脱细胞脂肪基质的制备方法，其特征在于，步骤2)所述冻融程序：液氮冷冻10～15min，再升温至25～37℃，重复3次。
4.根据权利要求1所述的一种脱细胞脂肪基质的制备方法，其特征在于：步骤3)分离油脂：先将脂肪组织制备成小块：4℃环境下，利用手术刀片将脂肪组织切成2cm×2cm×1cm的小块；再机械分离：将分离成块的脂肪组织置于破壁机中加入预冷ddH2O搅拌10～20min。
5.根据权利要求1所述的一种脱细胞脂肪基质的制备方法，其特征在于：步骤4)所述除垢：加入TritonX-100溶液，不断搅拌过夜，离心；所述分离油脂后的脂肪组织和TritonX-100溶液按照体积比为0.5～1：2～4；所述TritonX-100的浓度：1～3％wt；所述搅拌：温度25～30℃，500～800rpm，期间更换溶液2～3次；所述离心：2～4℃环境下，转速3000～5000rpm，时间10～20min。
6.根据权利要求1所述的一种脱细胞脂肪基质的制备方法，其特征在于：步骤5)所述去除细胞和水解：将脂肪组织C按体积比0.5～1：2～4加入Trypsin–EDTA溶液和脂肪分解酶混合液，不断搅拌，消化过夜；所述Trypsin–EDTA溶液：0.25％trypsin–0.05％EDTA溶液；所述脂肪分解酶液：2.5～5mg/ml脂肪酶溶液；所述搅拌，消化过夜：温度25～37℃，500～800rpm，期间更换溶液2～3次。
7.根据权利要求1所述的一种脱细胞脂肪基质的制备方法，其特征在于：步骤6)所述萃取加入异丙醇萃取；所述脂肪组织D和异丙醇按照体积比为0.5～1：2～3；所述萃取需不断搅拌，期间更换溶液2～3次。
8.权利要求1～7任一所述一种脱细胞脂肪基质的制备方法制备得到的脱细胞脂肪基质。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103776667A (zh) * 2012-10-19 2014-05-07 中国科学院大连化学物理研究所 一种可保持蛋白质活性的软骨组织分级处理方法
CN112516058A (zh) * 2020-11-25 2021-03-19 郑楠 一种载氨基酸的改性羊膜面膜及其制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103776667A (zh) * 2012-10-19 2014-05-07 中国科学院大连化学物理研究所 一种可保持蛋白质活性的软骨组织分级处理方法
CN112516058A (zh) * 2020-11-25 2021-03-19 郑楠 一种载氨基酸的改性羊膜面膜及其制备方法

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