CN112999421A - 一种球形晶煅烧骨的制备方法 - Google Patents

一种球形晶煅烧骨的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112999421A
CN112999421A CN202110245006.5A CN202110245006A CN112999421A CN 112999421 A CN112999421 A CN 112999421A CN 202110245006 A CN202110245006 A CN 202110245006A CN 112999421 A CN112999421 A CN 112999421A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bone
calcined
solution
heating
calcining
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110245006.5A
Other languages
English (en)
Inventor
侯嘉绮
赵贺凯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangxi Sikaifu Medical Technology Co ltd
Original Assignee
Jiangxi Sikaifu Medical Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangxi Sikaifu Medical Technology Co ltd filed Critical Jiangxi Sikaifu Medical Technology Co ltd
Priority to CN202110245006.5A priority Critical patent/CN112999421A/zh
Publication of CN112999421A publication Critical patent/CN112999421A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A61L27/3608—Bone, e.g. demineralised bone matrix [DBM], bone powder
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/227—Other specific proteins or polypeptides not covered by A61L27/222, A61L27/225 or A61L27/24
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/24—Collagen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3641—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the site of application in the body
    • A61L27/3645—Connective tissue
    • A61L27/365—Bones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A61L27/3687—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by the use of chemical agents in the treatment, e.g. specific enzymes, detergents, capping agents, crosslinkers, anticalcification agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
    • A61L27/3691—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by physical conditions of the treatment, e.g. applying a compressive force to the composition, pressure cycles, ultrasonic/sonication or microwave treatment, lyophilisation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
    • A61L2430/02—Materials or treatment for tissue regeneration for reconstruction of bones; weight-bearing implants

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

本发明公开了一种球形晶煅烧骨的制备方法。首先取异体骨去除软组织、粗切割，NaOH溶液和H2O2水溶液浸泡去除免疫原和部分杂质，然后一次低温煅烧，煅烧后采用三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液浸泡，最后二次高温煅烧制成。本发明制备的球形晶煅烧骨具有较高的抗压强度和抗折强度，植入体内不会产生炎症反应，生物相容性高。本发明采用二次煅烧技术，二次煅烧中间加入三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液浸泡的关键步骤，使得制备的材料强度增强，生物相容性提高，适用于骨移植。

Description

一种球形晶煅烧骨的制备方法
技术领域
本发明属于异体骨制备技术领域，具体涉及一种球形晶煅烧骨的制备方法。
背景技术
不同原因造成的骨缺损，临床医生需要选择优质的植骨材料。理想的骨移植修复材料应具备优良的成骨活性，同时还应具有良好的生物相容性。常用的移植材料包括自体骨、异体骨、异种骨和人工骨等。自体骨取骨会给伤者造成二次损伤，新的损伤会有加重失血、感染的风险，并增加术后并发症。近年来，异体骨的应用很多，但来源严重不足，并且存在免疫原性和传播疾病的风险。人工骨的成分和结构均不如天然骨，往往成骨活性较差。
异种骨与人体骨组织具有相似的结构与形态，并且来源丰富、价格低廉，便于大量的获取和加工贮存，是未来骨移植材料发展的重要方向。但是异种骨的免疫排斥反应一直以来是棘手的问题，所以去抗原降低免疫原性成为异种骨应用的关键。国内常用的骨脱蛋白方法有化学试剂浸泡脱蛋白法、酶类脱蛋白法等。酶类脱蛋白法作用较温和，但效果不太明确。化学试剂浸泡法中，次氯酸钠溶液在骨组织工程早期就被广泛用于异种骨的脱蛋白处理，去蛋白的效果也得到了确切的证实，但仍存在以下不足：①脱蛋白后的材料上往往有含氯的残留物；②渗透性较差，不能保证被处理骨块内外脱蛋白的均一性；③电子扫描显微镜下可以见到其对松质骨支架有较强的侵蚀作用。进行脱细胞处理也可以达到异种骨降低抗原的目的。有研究在氯仿与甲醇混合液脱脂的基础上，设计使用Triton X-100与脱氧胆酸钠联合脱细胞，发挥两者高效脱细胞的优势，虽然增加脱细胞的效能，而且保留原骨组织的天然孔隙结构，但最终不能将细胞及其细胞器成分完全脱去。物理脱细胞方法也随着超声技术在细胞破碎、超声洗涤等生物研究领域的应用迅速发展，很多学者开始尝试将超声技术用于异种骨的脱细胞处理。超声脱细胞主要是通过其对细胞的裂解作用完成的。单独应用超声脱细胞技术通常无法完全脱细胞且过强又可能会破坏细胞外基质(ECM)。此外，还有α-半乳糖苷酶处理、深低温冷冻、反复冻融等方法可以用来去抗原，但效果都不尽如人意。
国产的异种骨材料包括天津的金世植骨灵，上海的金骨威，西安的骼瑞、烟台海奥骨粉等，成骨性能均存在不够稳定或免疫原性不能满足临床需求的问题。而国内市场应用最为广泛的是瑞士的Geistlich Bio-Oss骨粉，其性质稳定，成骨能力良好，但是价格昂贵，其工艺的具体参数因并不明确，多年来国内外的众多研究都未能成功制出超越其性能的异种骨产品。
发明内容
本发明的目的在于提供一种球形晶煅烧骨的制备方法。
一种球形晶煅烧骨的制备方法，包括如下步骤：
(1)取异体骨去除软组织、粗切割，煮沸10-20min，降温至室温；然后在NaOH溶液中摇床室温清洗20-30min，纯化水超声清洗10-20min，重复上述清洗步骤1-3次；
(2)在H2O2水溶液清洗20-35min，然后用纯化水再次清洗15-25min，重复上述清洗步骤1-3次；
(3)将步骤(2)制备的异体骨加热干燥，放入马弗炉中煅烧，升温至600-700℃，维持5-8h，随炉冷却；
(4)将煅烧后的骨条浸入三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，60-80℃的水浴箱中浸泡60-80h；
(5)将步骤(4)制备的异体骨加热干燥，再将异体骨放入马弗炉中煅烧，升温至800-1000℃，维持5-8h，再次随炉冷却，制成。
步骤(1)所述NaOH溶液的浓度为0.6-1.2mol/L。
步骤(2)所述H2O2水溶液的体积浓度为0.8-1.5％。
所述三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，三聚磷酸钠的浓度为0.05-0.15mol/L，磷酸氢二钙的浓度为0.15-0.35mol/L，采用稀盐酸调节溶液pH5.2-6.6。
优选的，所述异体骨为牛骨。
所述球形晶煅烧骨在骨移植中的应用。
所述球形晶煅烧骨在制备仿生骨材料中的应用。
优选的，所述仿生骨为所述球形晶煅烧骨附着骨形态发生蛋白和/或胶原凝胶。
本发明的有益效果：本发明制备的球形晶煅烧骨具有较高的抗压强度和抗折强度，植入体内不会产生炎症反应，生物相容性高。本发明采用二次煅烧技术，二次煅烧中间加入三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液浸泡的关键步骤，使得制备的材料强度增强，生物相容性提高，适用于骨移植。
附图说明
图1为各煅烧骨对MC3T3-E1细胞状态的影响。
图2为各煅烧骨对MC3T3-E1细胞增殖的影响。
图3为各煅烧骨对MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活力的影响。
图4为实施例1球形煅烧骨股骨部位植入后4周成骨图像。
图5为对照Bioss煅烧骨股骨植入4周成骨图像。
图6为实施例1制备的球形晶煅烧骨材料内部形态。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
下述实施例子采用的异体骨为新鲜牛松质骨。
实施例1
一种球形晶煅烧骨的制备方法，包括如下步骤：
(1)取异体骨去除软组织、粗切割，煮沸15min，降温至室温；然后在1.0mol/L NaOH溶液中摇床室温清洗25min，纯化水超声清洗15min，重复上述清洗步骤2次；
(2)在1.2％H2O2水溶液清洗25min，然后用纯化水再次清洗20min，重复上述清洗步骤2次；
(3)将步骤(2)制备的异体骨加热干燥，放入马弗炉中煅烧，升温至650℃，维持6h，随炉冷却；
(4)将煅烧后的骨条浸入三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，70℃的水浴箱中浸泡70h；所述三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，三聚磷酸钠的浓度为0.10mol/L，磷酸氢二钙的浓度为0.25mol/L，采用稀盐酸调节溶液pH5.8；
(5)将步骤(4)制备的异体骨加热干燥，再将异体骨放入马弗炉中煅烧，升温至900℃，维持6h，再次随炉冷却，制成。
实施例2
一种球形晶煅烧骨的制备方法，包括如下步骤：
(1)取异体骨去除软组织、粗切割，煮沸12min，降温至室温；然后在0.7mol/L NaOH溶液中摇床室温清洗22min，纯化水超声清洗18min，重复上述清洗步骤3次；
(2)在0.9％H2O2水溶液清洗28min，然后用纯化水再次清洗18min，重复上述清洗步骤3次；
(3)将步骤(2)制备的异体骨加热干燥，放入马弗炉中煅烧，升温至610℃，维持8h，随炉冷却；
(4)将煅烧后的骨条浸入三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，60℃的水浴箱中浸泡80h；所述三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，三聚磷酸钠的浓度为0.05mol/L，磷酸氢二钙的浓度为0.15mol/L，采用稀盐酸调节溶液pH6.2；
(5)将步骤(4)制备的异体骨加热干燥，再将异体骨放入马弗炉中煅烧，升温至800℃，维持8h，再次随炉冷却，制成。
实施例3
一种球形晶煅烧骨的制备方法，包括如下步骤：
(1)取异体骨去除软组织、粗切割，煮沸18min，降温至室温；然后在1.2mol/L NaOH溶液中摇床室温清洗20min，纯化水超声清洗20min，重复上述清洗步骤1次；
(2)在1.4％H2O2水溶液清洗20min，然后用纯化水再次清洗25min，重复上述清洗步骤1次；
(3)将步骤(2)制备的异体骨加热干燥，放入马弗炉中煅烧，升温至700℃，维持5h，随炉冷却；
(4)将煅烧后的骨条浸入三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，78℃的水浴箱中浸泡65h；所述三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，三聚磷酸钠的浓度为0.13mol/L，磷酸氢二钙的浓度为0.33mol/L，采用稀盐酸调节溶液pH5.4；
(5)将步骤(4)制备的异体骨加热干燥，再将异体骨放入马弗炉中煅烧，升温至1000℃，维持5h，再次随炉冷却，制成。
实施例4
一种球形晶煅烧骨的制备方法，包括如下步骤：
(1)取异体骨去除软组织、粗切割，煮沸15min，降温至室温；然后在1.0mol/L NaOH溶液中摇床室温清洗25min，纯化水超声清洗15min，重复上述清洗步骤2次；
(2)在1.2％H2O2水溶液清洗25min，然后用纯化水再次清洗20min，重复上述清洗步骤2次；
(3)将步骤(2)制备的异体骨加热干燥，放入马弗炉中煅烧，升温至650℃，维持6h，随炉冷却；
(4)将煅烧后的骨条浸入三聚磷酸钠溶液中，70℃的水浴箱中浸泡70h；所述三聚磷酸钠溶液中三聚磷酸钠的浓度为0.10mol/L，采用稀盐酸调节溶液pH5.8；
(5)将步骤(4)制备的异体骨加热干燥，再将异体骨放入马弗炉中煅烧，升温至900℃，维持6h，再次随炉冷却，制成。
实施例5
一种球形晶煅烧骨的制备方法，包括如下步骤：
(1)取异体骨去除软组织、粗切割，煮沸15min，降温至室温；然后在1.0mol/L NaOH溶液中摇床室温清洗25min，纯化水超声清洗15min，重复上述清洗步骤2次；
(2)在1.2％H2O2水溶液清洗25min，然后用纯化水再次清洗20min，重复上述清洗步骤2次；
(3)将步骤(2)制备的异体骨加热干燥，放入马弗炉中煅烧，升温至650℃，维持6h，随炉冷却；
(4)将煅烧后的骨条浸入磷酸氢二钙溶液中，70℃的水浴箱中浸泡70h；所述磷酸氢二钙溶液中磷酸氢二钙的浓度为0.25mol/L，采用稀盐酸调节溶液pH5.8；
(5)将步骤(4)制备的异体骨加热干燥，再将异体骨放入马弗炉中煅烧，升温至900℃，维持6h，再次随炉冷却，制成。
实施例6
一种球形晶煅烧骨的制备方法，包括如下步骤：
(1)取异体骨去除软组织、粗切割，煮沸15min，降温至室温；然后在1.0mol/L NaOH溶液中摇床室温清洗25min，纯化水超声清洗15min，重复上述清洗步骤2次；
(2)在1.2％H2O2水溶液清洗25min，然后用纯化水再次清洗20min，重复上述清洗步骤2次；
(3)将步骤(2)制备的异体骨加热干燥，放入马弗炉中煅烧，升温至650℃，维持6h，随炉冷却；
(4)将步骤(3)制备的异体骨放入马弗炉中煅烧，升温至900℃，维持6h，再次随炉冷却，制成。
实验例1：
取实施例1-6球形晶煅烧骨，制成5mmX5mmX4mm的长方体，在万能材料测试机(WD-10型)上分别测试抗压和抗折强度，以200N/s的速度均匀加载，准确读取样品一次性破坏时的压力值，各测3例。测试结果见表1：
表1
Figure BDA0002963779740000081
注：*代表与实施例1比较P<0.05，**代表P<0.05；#代表与实施例6比较P<0.05。
实验例2：
将5g球形晶煅烧骨材料研磨成碎块或粉末状，置入50mL生理盐水中，37℃下浸提24h，用0.22微孔滤器过滤除菌，得到球形晶煅烧骨浸提液，取健康新西兰大白兔2只(雌性，2.5Kg)，每只新西兰大白兔经耳缘静脉抽取兔血10mL，低分子肝素钠抗凝，加入等量生理盐水稀释后备用。试验分8组，实验组：球形晶煅烧骨浸提液5mL，阳性对照组：蒸馏水5mL，阴性对照组：生理盐水5mL，每组3支试管。各试管中分别加入0.2mL稀释兔血。37℃水浴60min，1000rpm离心5min，取上清液用酶标仪在波长540nm处测定各管的吸光度OD值，按下面公式计算溶血率。
溶血率(％)＝(实验组OD-阴性对照OD)/(阳性对照OD-阴性对照OD)X100％
测试结果见表2：
表2
Figure BDA0002963779740000091
注：*代表与实施例1比较P<0.05，**代表P<0.05；；#代表与实施例6比较P<0.05。
实验例3：
利用MC3T3-E1细胞评价球形晶煅烧骨的细胞相容性。取实施例1-6球形晶煅烧骨，研磨成碎块或粉末状，置入50mL含10％胎牛血清的α-MEM培养基中，37℃下浸提24h，用0.22微孔滤器过滤除菌，得到球形晶煅烧骨浸提液。取正常培养MC3T3-E1细胞，调整细胞密度为2×104/ml，接种到96孔培养板中，培养24h，弃去原培养基，每组分别加入对应的浸提液；72h后，弃去原培养基，每孔加入100ul含10％CCK8的培养基，30min后450nm波长下检测吸光度。各组细胞生长状况见图1，细胞的相对增值率见图2。
实验例4：
利用MC3T3-E1细胞评价细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性。取实施例1-6直径为10mm，厚度2mm的球形晶煅烧骨灭菌，每组3个样品材料置于24孔板中浸泡0.5h后，按细胞密度2x104个/孔的密度接种于材料表面，两天换液一次；培养7天后PBS洗细胞两次；每孔加入细胞裂解液150ul裂解细胞5min，吹打收集裂解液；12000g离心5min，收集上清；分别按ALP检测试剂盒说明书和BCA蛋白检测试剂盒说明书检测ALP活性和总蛋白浓度；计算ALP活性。各煅烧骨对MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活力的影响见图3。
实施例1制备的球形晶煅烧骨材料在不同动物的骨缺损中均表现出优良的骨缺损修复能力，在兔股骨髁的模型中，第四周取材观察发现超临界的骨缺损区域完全为新生的骨组织所充满，新骨完全包绕植入材料，超出了金标准的对照材料的性能(图4-5)。实施例1制备的球形晶煅烧骨材料内部形态见图6。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (8)

1.一种球形晶煅烧骨的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取异体骨去除软组织、粗切割，煮沸10-20min，降温至室温；然后在NaOH溶液中摇床室温清洗20-30min，纯化水超声清洗10-20min，重复上述清洗步骤1-3次；
(2)在H2O2水溶液清洗20-35min，然后用纯化水再次清洗15-25min，重复上述清洗步骤1-3次；
(3)将步骤(2)制备的异体骨加热干燥，放入马弗炉中煅烧，升温至600-700℃，维持5-8h，随炉冷却；
(4)将煅烧后的骨条浸入三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，60-80℃的水浴箱中浸泡60-80h；
(5)将步骤(4)制备的异体骨加热干燥，再将异体骨放入马弗炉中煅烧，升温至800-1000℃，维持5-8h，再次随炉冷却，制成。
2.根据权利要求1所述球形晶煅烧骨的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述NaOH溶液的浓度为0.6-1.2mol/L。
3.根据权利要求1所述球形晶煅烧骨的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述H2O2水溶液的体积浓度为0.8-1.5％。
4.根据权利要求1所述球形晶煅烧骨的制备方法，其特征在于，所述三聚磷酸钠和磷酸氢二钙的混合溶液中，三聚磷酸钠的浓度为0.05-0.15mol/L，磷酸氢二钙的浓度为0.15-0.35mol/L，采用稀盐酸调节溶液pH5.2-6.6。
5.根据权利要求1所述球形晶煅烧骨的制备方法，其特征在于，所述异体骨为牛骨。
6.权利要求1所述球形晶煅烧骨在骨移植中的应用。
7.权利要求1所述球形晶煅烧骨在制备仿生骨材料中的应用。
8.根据权利要求7所述球形晶煅烧骨在制备仿生骨材料中的应用，其特征在于，所述仿生骨为权利要求1所述球形晶煅烧骨附着骨形态发生蛋白和/或胶原凝胶。
CN202110245006.5A 2021-03-05 2021-03-05 一种球形晶煅烧骨的制备方法 Pending CN112999421A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110245006.5A CN112999421A (zh) 2021-03-05 2021-03-05 一种球形晶煅烧骨的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110245006.5A CN112999421A (zh) 2021-03-05 2021-03-05 一种球形晶煅烧骨的制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112999421A true CN112999421A (zh) 2021-06-22

Family

ID=76406716

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110245006.5A Pending CN112999421A (zh) 2021-03-05 2021-03-05 一种球形晶煅烧骨的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112999421A (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114177354A (zh) * 2021-12-22 2022-03-15 天新福（北京）医疗器材股份有限公司 一种天然陶瓷化骨的制备方法
CN114848920A (zh) * 2022-04-13 2022-08-05 南京航空航天大学 一种多孔块状异种骨修复材料的极短流程免煅烧制备方法
CN115414531A (zh) * 2022-09-20 2022-12-02 上海亚朋生物技术有限公司 一种同种异体骨的脂肪及内毒素去除方法
CN115645620A (zh) * 2022-11-13 2023-01-31 江西斯凯复医疗科技有限公司 一种煅烧骨的制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107158465A (zh) * 2017-06-29 2017-09-15 西北民族大学 一种骨支架复合材料的制备方法
CN108066817A (zh) * 2017-12-06 2018-05-25 常州琨瑶纺织品有限公司 一种纳米骨修复材料及其制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107158465A (zh) * 2017-06-29 2017-09-15 西北民族大学 一种骨支架复合材料的制备方法
CN108066817A (zh) * 2017-12-06 2018-05-25 常州琨瑶纺织品有限公司 一种纳米骨修复材料及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
周建业等: "成年牛及胎牛β-磷酸三钙煅烧骨骨块的制备、表征和细胞相容性研究", 《口腔医学研究》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114177354A (zh) * 2021-12-22 2022-03-15 天新福（北京）医疗器材股份有限公司 一种天然陶瓷化骨的制备方法
CN114177354B (zh) * 2021-12-22 2022-06-17 天新福（北京）医疗器材股份有限公司 一种天然陶瓷化骨的制备方法
CN114848920A (zh) * 2022-04-13 2022-08-05 南京航空航天大学 一种多孔块状异种骨修复材料的极短流程免煅烧制备方法
CN115414531A (zh) * 2022-09-20 2022-12-02 上海亚朋生物技术有限公司 一种同种异体骨的脂肪及内毒素去除方法
CN115414531B (zh) * 2022-09-20 2024-06-04 上海亚朋生物技术有限公司 一种同种异体骨的脂肪及内毒素去除方法
CN115645620A (zh) * 2022-11-13 2023-01-31 江西斯凯复医疗科技有限公司 一种煅烧骨的制备方法
CN115645620B (zh) * 2022-11-13 2023-10-24 江西斯凯复医疗科技有限公司 一种煅烧骨的制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN112999421A (zh) 一种球形晶煅烧骨的制备方法
KR100978562B1 (ko) 스폰지형 골 이식재 및 이를 제조하는 방법
EP0773033A1 (en) A raw membranous material for medical materials and manufacturing methods thereof
CN1214821C (zh) 异种骨胶原基质制备的新方法
CN101773687B (zh) 一种复合软组织补片的制备方法
CN112807490B (zh) 一种利用生物骨制备口腔用胶原蛋白基质材料的方法
KR101163594B1 (ko) 치아 골 이식재 제조방법 및 그로 인해 제조된 골 이식재
CN106913907B (zh) 一种具有结构记忆特性的细胞生长支架的制备方法
CN114848893B (zh) 一种结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶及制备方法与应用
CN106620847A (zh) 一种胶原生物膜及其制备方法
CN106730037A (zh) 一种复合胶原生物膜及其制备方法
CN113694254A (zh) 骨修复材料及骨修复材料的制备方法、应用
CN108144124A (zh) 一种脱细胞异体真皮基质及在口腔疾病中的应用
CN115645620B (zh) 一种煅烧骨的制备方法
KR101697324B1 (ko) 생체적합성 콜라겐 및 이의 제조방법
CN114796615B (zh) 一种软骨脱细胞基质及其制备方法
WO2018090341A1 (zh) 人工复合膜、制备方法及其应用
CN1067282C (zh) 新型块形脱脂去抗原异种骨移植材料及其制备方法
CN111359020B (zh) 软组织修复材料及其制备方法和应用
CN112717205A (zh) 一种利用动物源生物膜制备的口腔修复膜及其制备方法
CN103705976A (zh) 一种复合骨修复材料及其制备方法
US20190374676A1 (en) A cross-linked structure for tissue regeneration and engineering and the method for synthesising same
CN106890362B (zh) 一种心包胶原复合材料及其制备方法和用途
CN117752858A (zh) 一种引导骨生长蚕丝蛋白骨修复材料的制备方法
CN113975450B (zh) 一种丝素蛋白复合材料倒刺缝合线及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20210622