CN113563248A - 一种半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法 - Google Patents

一种半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法 Download PDF

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CN113563248A CN202110855626.0A CN202110855626A CN113563248A CN 113563248 A CN113563248 A CN 113563248A CN 202110855626 A CN202110855626 A CN 202110855626A CN 113563248 A CN113563248 A CN 113563248A
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Abstract

本发明公开了一种半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法，包括将碘代甲状腺素加入到反应溶剂中；将碱性溶液与碘代甲状腺素的有机悬浮液混合，制备得到碘代甲状腺素的弱碱性溶液；将6‑(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯溶于所述反应溶剂中并与所述碘代甲状腺素的弱碱性溶液反应，合成产品。本发明具有原料价格低廉易得、合成步骤少、操作简单、提取纯化方便、收率高的优点，提出了一种全新的合成半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的解决方案，有利于解决小分子半抗原在制备单克隆抗体中合成人工抗原关键原料以及在开发临床检测甲功项目试剂盒中关键原料的问题。

Description

一种半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备 方法
技术领域
本发明涉及化学合成技术领域，具体涉及的是一种半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法。
背景技术
目前合成半抗原碘代甲状腺素(T4和反T4、T3和反T3以及 T2和反T2)马来酰亚胺活性偶联试剂的方法未见报道。
碘代甲状腺素是分子质量小于1000u，属于仅有反应原性而无免疫原性的半抗原。碘代甲状腺素中有氨基、羧基和酚羟基。设计合成保留原分子结构特征并带有活性基团的半抗原，通过共价键使半抗原与大分子质量蛋白质载体偶联，制备人工免疫原，经动物免疫程序制备针对该半抗原的特异性抗体。
碘代甲状腺素是小分子半抗原，缺乏可作免疫检测夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗夹心法进行测定，只能采用竞争法模式检测，而在现行的主流化学发光免疫检测试剂盒的开发中，需要用到和半抗原碘代甲状腺素结构类似的活性衍生物试剂去和载体蛋白偶联形成抗原标记物，和待检样品中的游离抗原进行竞争反应。
因此开发出低成本、易操作和原料便宜易得的通用工艺合成半抗原碘代甲状腺素活性偶联试剂的方法非常重要。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的以上问题，提供一种半抗原乙酰碘代甲状腺素(包括T4和反T4、T3和反T3以及T2和反 T2)活性偶联试剂的制备方法。
为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：
本发明公开了一种半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法，包括以下步骤：
S1、将碘代甲状腺素加入到反应溶剂中，制备得到碘代甲状腺素的有机悬浮液；
S2、将碱性溶液与碘代甲状腺素的有机悬浮液混合，制备得到碘代甲状腺素的弱碱性溶液；
S3、将6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯溶于所述反应溶剂中并与所述碘代甲状腺素的弱碱性溶液反应，合成所述半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂1；
合成反应式为：
Figure RE-GDA0003251291020000021
所述R1和R2基团为氢或者碘。
作为本发明实施方式的进一步改进，所述反应溶剂为DMF或 DMSO。
作为本发明实施方式的进一步改进，所述碘代甲状腺素的通式如式A和式B所示，所述式B为式A的反式；
式A包括T4、T3或T2；式B包括反T4、反T3和反T2；
具体化学式表示如下：
Figure RE-GDA0003251291020000031
作为本发明实施方式的进一步改进，所述步骤S3具体包括以下步骤：
将6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯溶于DMF中并滴加至所述碘代甲状腺素的弱碱性溶液中，第一预设温度下反应第一预设时间，用稀酸调PH为酸性，用萃取剂萃取多次，洗涤剂清洗萃取液后，过柱提纯并加入干燥剂进行干燥，得到浅黄色固体产品，即为半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂。
作为本发明实施方式的进一步改进，所述第一预设温度为10℃ -60℃；所述第一预设时间为0.5h-12h。
作为本发明实施方式的进一步改进，所述第一预设温度为 25℃；所述第一预设时间为1h。
作为本发明实施方式的进一步改进，所述萃取剂为EA或 DCM，萃取3次。
作为本发明实施方式的进一步改进，所述洗涤剂为饱和NaCl 水，清洗后经200-300目硅胶过柱提纯，洗脱剂为DCM：甲醇＝50： 1。
作为本发明实施方式的进一步改进，所述稀酸为稀盐酸水溶液、稀硫酸水溶液或稀柠檬酸水溶液；所述干燥剂为无水Na2SO4或无水MgSO4。
作为本发明实施方式的进一步改进，所述碱性溶液中的碱为 K2CO3、Na2CO3、NaHCO3中的至少一种或者任意几种的混合物。
本发明的有益效果是:
本发明提供了一种制备半抗原碘代甲状腺素(T4和反T4、T3 和反T3以及T2和反T2)马来酰亚胺活性偶联试剂的通用工艺方法，得到不同的目标产品，步骤简单，处理方便，成本低，生产周期短，操作简单，并且收率高；
本发明制备得到的乙酰碘代甲状腺素活性偶联试剂很容易和载体蛋白质中的氨基发生反应得到人工抗原，且本发明首次提出了合成半抗原马来酰亚胺活性偶联试剂的解决方案，解决了这些小分子半抗原在制备单克隆抗体中合成人工抗原关键原料以及在开发临床检测甲功项目试剂盒中关键原料的问题。
需要说明的是，本发明中用到的试剂缩写表示如下：
T4：四碘甲状腺原氨酸
T3：三碘甲状腺原氨酸
T2：二碘甲状腺原氨酸
DMF：N,N-二甲基甲酰胺
EA:乙酸乙酯
DCM:二氯甲烷
HCl：氯化氢
Na2SO4：硫酸钠
MgSO4：硫酸镁。
具体实施方式
下面将结合实施例，来详细说明本发明。
本发明公开了一种半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法，包括以下步骤：
本发明公开了一种半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法，包括以下步骤：
S1、将碘代甲状腺素加入到反应溶剂中，制备得到碘代甲状腺素的有机悬浮液；
S2、将碱性溶液与碘代甲状腺素的有机悬浮液混合，制备得到碘代甲状腺素的弱碱性溶液；
S3、将6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯溶于所述反应溶剂中并与所述碘代甲状腺素的弱碱性溶液反应，合成所述半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂1；
合成反应式为：
Figure RE-GDA0003251291020000051
其中，R1和R2基团为氢或者碘。
反应溶剂优选为DMF，也可以选择DMSO。
其中，碘代甲状腺素的通式如式A和式B所示，所述式B为式A的反式；
式A包括T4、T3或T2；式B包括反T4、反T3和反T2；
具体化学式表示如下：
Figure RE-GDA0003251291020000061
进一步地，步骤S3具体包括以下步骤：
将6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯溶于DMF中并滴加至所述碘代甲状腺素的弱碱性溶液中，第一预设温度下反应第一预设时间，用稀酸调PH为酸性，用萃取剂萃取多次，洗涤剂清洗萃取液后，过柱提纯并加入干燥剂进行干燥，得到浅黄色固体产品，即为半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂。
其中，第一预设温度为10℃-60℃；第一预设时间为0.5h-12h。优选为，第一预设温度为25℃；第一预设时间为1h。
萃取剂为EA或DCM，萃取3次。
优选地，洗涤剂为饱和NaCl水，清洗后经200-300目硅胶过柱提纯，洗脱剂为DCM：甲醇＝50：1。
稀酸为稀盐酸水溶液，也可以选择稀硫酸水溶液或稀柠檬酸水溶液；干燥剂为无水Na2SO4，也可以选择无水MgSO4。
在本发明实施例中，碱性溶液中的碱为K2CO3，也可也可以选择Na2CO3、NaHCO3中的至少一种或者任意几种的混合物。
具体例1
Figure RE-GDA0003251291020000071
具体合成过程及合成条件如下：把T4(1g，1eq)加入到DMF (15ml)中，把碳酸钾(0.3g，1.5eq)溶于水(15ml)，然后和T4 的DMF悬浮液混合溶解，再把6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯(0.4g，1eq)溶于DMF(5ml)中，滴加到T4的弱碱性溶液中， 25℃反应1小时，用稀盐酸调PH为酸性，EA萃取3次，饱和NaCl水溶液洗2次，过柱提纯，洗脱剂为DCM：甲醇＝50：1过柱提纯，得到1.04g浅黄色固体产品1，收率84％，HPLC纯度98.45％，1H NMR(DMSO-d6)12.76(s，1H)，9.27(s,1H)，8.13(d，1H)，7.80 (s，2H)，7.05(s，2H)，6.99(s，2H)，4.44(m，1H)，3.38(m， 2H)，3.08(dd，1H)，2.81(dd，1H)，2.03(t，2H),1.44(m， 4H),1.14(m，2H)。
具体例2
Figure RE-GDA0003251291020000072
具体合成过程及合成条件如下：把T3(1g，1eq)加入到DMF (15ml)中，把碳酸钾(0.31g，1.5eq)溶于水(15ml)，然后和T3 的DMF悬浮液混合溶解，再把6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯(0.46g，1eq)溶于DMF(5ml)中，滴加到T3的弱碱性溶液中， 25℃反应1小时，用稀盐酸调PH为酸性，EA萃取3次，饱和NaCl水溶液洗2次，过柱提纯，洗脱剂为DCM：甲醇＝50：1过柱提纯，得到1.09g浅黄色固体产品，收率81％，HPLC纯度98.12％，1H NMR(DMSO-d6) 12.77(s，1H)，9.99(s,1H)，8.15(d，1H)，7.78(s，2H)，7.00 (s，2H)，6.94(s，1H)，6.77(d，1H)，6.56(d，1H)，4.43(m， 1H)，3.37(m，2H)，3.04(dd，1H)，2.77(dd，1H)，2.06(t， 2H),1.44(m，4H),1.14(m，2H)。
具体例3
Figure RE-GDA0003251291020000081
具体合成过程及合成条件如下：把T2(1g，1eq)加入到DMF (15ml)中，把碳酸钾(0.4g，1.5eq)溶于水(15ml)，然后和T2 的DMF悬浮液混合溶解，再把6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯(0.58g，1eq)溶于DMF(5ml)中，滴加到T2的弱碱性溶液中， 25℃反应1小时，用稀盐酸调PH为酸性，EA萃取3次，饱和NaCl水溶液洗2次，过柱提纯，洗脱剂为DCM：甲醇＝50：1过柱提纯，得到1.12g浅黄色固体产品1，
收率82％，HPLC纯度98.51％，1H NMR(DMSO-d6)12.75(s，1H)， 9.08(s,1H)，8.13(d，1H)，7.77(s，2H)，7.00(s，2H)，6.66(d，2H)，6.50(d，2H)，4.42(m，1H)，3.36(m，2H)，3.06(dd， 1H)，2.81(dd，1H)，2.05(t，2H),1.44(m，4H),1.14(m，2H)。
本发明的有益效果是:
本发明提供了一种制备半抗原碘代甲状腺素(T4和反T4、T3 和反T3以及T2和反T2)马来酰亚胺活性偶联试剂的通用工艺方法，得到不同的目标产品，步骤简单，处理方便，成本低，生产周期短，操作简单，并且收率高；
本发明制备得到的马来酰亚胺活性偶联试剂很容易和载体蛋白质中的氨基发生反应得到人工抗原，且本发明首次提出了合成半抗原马来酰亚胺活性偶联试剂的解决方案，解决了这些小分子半抗原在制备单克隆抗体中合成人工抗原关键原料以及在开发临床检测甲功项目试剂盒中关键原料的问题。

Claims (10)

1.一种半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将碘代甲状腺素加入到反应溶剂中，制备得到碘代甲状腺素的有机悬浮液；
S2、将碱性溶液与碘代甲状腺素的有机悬浮液混合，制备得到碘代甲状腺素的弱碱性溶液；
S3、将6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯溶于所述反应溶剂中并与所述碘代甲状腺素的弱碱性溶液反应，合成所述半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂；
合成反应式为：
Figure FDA0003183842670000011
所述R1和R2基团为氢或者碘。
2.根据权利要求1所述的半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法，其特征在于，所述反应溶剂为DMF或DMSO。
3.根据权利要求1所述的半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法，其特征在于，所述碘代甲状腺素的通式如式A和式B所示，所述式B为式A的反式；
其中式A包括T4、T3或T2；式B包括反T4、反T3和反T2；
具体化学式表示如下：
Figure FDA0003183842670000021
4.根据权利要求1所述的半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S3具体包括以下步骤：
将6-(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯溶于DMF中并滴加至所述碘代甲状腺素的弱碱性溶液中，第一预设温度下反应第一预设时间，用稀酸调PH为酸性，用萃取剂萃取多次，洗涤剂清洗萃取液后，过柱提纯并加入干燥剂进行干燥，得到浅黄色固体产品，即为半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂。
5.根据权利要求4所述的半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法，其特征在于，所述第一预设温度为10℃-60℃；所述第一预设时间为0.5h-12h。
6.根据权利要求5所述的半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法，其特征在于，所述第一预设温度为25℃；所述第一预设时间为1h。
7.根据权利要求4所述的半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法，其特征在于，所述萃取剂为EA或DCM，萃取3次。
8.根据权利要求4所述的半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法，其特征在于，所述洗涤剂为饱和NaCl水，清洗后经200-300目硅胶过柱提纯，洗脱剂为DCM：甲醇＝50：1。
9.根据权利要求4所述的半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法，其特征在于，所述稀酸为稀盐酸水溶液、稀硫酸水溶液或稀柠檬酸水溶液；所述干燥剂为无水Na2SO4或无水MgSO4。
10.根据权利要求1所述的半抗原碘代甲状腺素马来酰亚胺活性偶联试剂的制备方法，其特征在于，所述碱性溶液中的碱为K2CO3、Na2CO3、NaHCO3中的至少一种或者任意几种的混合物。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4423227A (en) * 1980-10-07 1983-12-27 Boehringer Mannheim Gmbh Process for the preparation of reactive, couplable derivatives of the thyroid hormones

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
M. J. NAVAKOUSKI等: "The Biotin-Thyroxin Conjugate as a Bifunctional Ligand of Binding Proteins", 《RUSSIAN JOURNAL OF BIOORGANIC CHEMISTRY》 *

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