CN113552246A - 一种赤红颗粒的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药制剂的质量检测技术领域，且公开了一种赤红颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：(1)赤红颗粒的薄层色谱鉴别；(2)高效液相色谱含量测定。该赤红颗粒的质量控制方法，根据国家对“中药新药研究的技术要求”，采用了专属性强、灵敏度高的高效液相色谱法测定赤红颗粒中赤芍有效成分的含量，建立的样品处理方法简单易行，可操作性强，重现性好；采用的流动相对芍药苷与其他组分的分离度、重现性、精密度、加样回收率都较好；采用薄层色谱法定性鉴别颗粒剂中的有关药材，进一步保证了检测方法的准确性。
Description
技术领域
本发明涉及中药制剂的质量检测技术领域，具体为一种赤红颗粒的质量控制方法。
背景技术
中药制剂是任何药物供临床使用之前都必须制成适合于医疗或预防应用的形式，称为剂型，例如片剂、注射剂、气雾剂、丸剂、散剂和膏剂等，赤红原处方是中药制剂中的一种。
目前对赤红原处方进行了工艺提升，将原有的水煎剂制成了颗粒剂，并考察多年临床应用该方患者100例，对患者使用后丙氨酸氨基转移酶，天门冬氨酸氨基转移酶、总胆红素(TBIL)、间接胆红素(IBIL)、γ谷氨酰胺转氨酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素(UREA)和肌酐(CREA)等肝肾功能的相关指标进行了评价，证实组方有显著的治疗作用，并且对患者肝肾功能无影响，新颗粒剂无质量标准控制方法，故对赤红颗粒进行了质量控制方法的研究，有效控制了该制剂的内在质量，保证其临床用药安全有效。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种操作简便、分离效果好、专属性强、重复性好，可有效控制该赤红颗粒质量的控制方法。
(二)技术方案
本发明提供如下技术方案：一种赤红颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：
(1)赤红颗粒的薄层色谱鉴别：
1)称取本品粉末1g，加甲醇10ml，超声15min，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取独活对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述供试品10μl、对照药材10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；
2)称取本品粉末2g，加0.5ml 1％酸水润湿，加入20ml石油醚(60-90℃)超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加1ml三氯甲烷溶解作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述供试品10μl、对照药材10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(6:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(302nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。
(2)高效液相色谱含量测定：
A、色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；1％冰乙酸：甲醇(80:20)为流动相。检测波长为243nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000；
B、对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加20％乙醇制成每1ml含50μg的对照品溶液，即得；
C、供试品溶液的制备：取本品细粉3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入1gNaCl，精密加入20％乙醇溶液50ml，称定重量，超声30分钟，取出，再称定重量，用20％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过微孔滤膜，即得；
D、含量测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
(三)有益效果
与现有技术相比，本发明提供了一种赤红颗粒的质量控制方法，具备以下有益效果：
1、该赤红颗粒的质量控制方法，根据国家对“中药新药研究的技术要求”，采用了专属性强、灵敏度高的高效液相色谱法测定赤红颗粒中赤芍有效成分的含量，建立的样品处理方法简单易行，可操作性强，重现性好；采用的流动相对芍药苷与其他组分的分离度、重现性、精密度、加样回收率都较好；采用薄层色谱法定性鉴别颗粒剂中的有关药材，进一步保证了检测方法的准确性。
2、该赤红颗粒的质量控制方法，在赤红颗粒含量测定中，供试品溶液处理采用直接20％乙醇超声提取的方法，减少了系列操作误差和能耗；在赤红颗粒薄层色谱鉴定方法中，供试品的提取及展开剂均尽量采用无毒试剂，绿色环保。建立的质量控制方法能有效控制该制剂的内在质量，保证用药安全，从而确保其临床疗效。
附图说明
图1为赤红颗粒独活TLC图，其中1是独活阴性样品，2是赤红颗粒样品，3是独活对照药材；
图2为赤红颗粒川芎TLC图，其中1是赤红颗粒样品，2是川芎阴性样品，3是川芎对照药材；
图3为赤红颗粒HPLC图谱，其中A是芍药苷对照品，B是赤红颗粒样品，C是赤红颗粒阴性样品。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下通过试验例和实施例来进一步说明本发明方法的有益效果。
试验例：
【制法】以上14味，加水煎煮两次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.2(60℃)的清膏，加预胶化淀粉，混匀，制成颗粒，干燥，制成1000g，即得。
【用法用量】外用，一次1袋，一日1次，用开水溶化，泡洗或热敷。
【性状】本品为颗粒剂，内容物为棕色颗粒；味辛。
鉴别：
1)称取本品粉末1g，加甲醇10ml，超声15min，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取独活对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2020年版四部0502)试验，吸取上述供试品10μl、对照药材10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；
2)称取本品粉末2g，加0.5ml 1％酸水润湿，加入20ml石油醚(60-90℃)超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加1ml三氯甲烷溶解作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2020年版四部0502)试验，吸取上述供试品10μl、对照药材10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(6:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(302nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。
检查：应符合颗粒剂项下有关的各项规定(中国药典2020年版四部0104)。
含量测定：照高效液相色谱法(中国药典2020年版四部0512)测定。
(1)仪器与试剂
岛津LC-10AT型输液泵、岛津SPD-10A型紫外检测器、WML-2006C-4型威玛龙色谱数据工作站、HT-230A色谱柱恒温箱，分析天平：LIBROR AEL-160型万分之一电子分析天平，TG332A型十万分之一分析天平，HS10260D(功率260w，频率40KHz)型超声清洗仪；芍药苷对照品(批号：110736-200424)。对照品购于中国食品药品检定研究院，甲醇为色谱纯，其它试剂均为国产分析纯，供试品由贵州医科大学附属医院提供。
(2)系统适应性试验
色谱柱为依利特Hypersil BDS C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，1％冰乙酸－甲醇(80:20)为流动相；检测波长为243nm，柱温为30℃，流速为0.9ml/min，理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。
(3)控制波长选择
取芍药苷对照品溶液进行UV扫描，在243nm处有最大吸收波长，故选择243nm作为控制波长。
(4)色谱条件的筛选
①流动相的选择：
表1赤红颗粒含量测定的流动相选择
通过以上对比试验结果分析，方法2具有保留时间适当，样品分离度高，阴性无干扰等特点，因此作为正文收载，同时根据试验分析总结，当芍药苷理论塔板数达到3000时，分离度均大于1.5，故选择颗粒剂中测定芍药苷的流动相为甲醇－1％冰乙酸＝20：80，以5芍药苷峰计算理论塔板数应不低于3000。
②供试品溶液制备方法筛选
a、溶剂的选择
根据芍药苷的理化特性，我们分别采用不同的乙醇浓度，以芍药苷的含量作为测定指标(芍药苷对照品浓度为83.5ug/ml)，结果见表2：
表2赤红颗粒乙醇浓度筛选
通过不同浓度乙醇溶液对赤红颗粒进行提取，结论：赤红颗粒的芍药苷含量在乙醇浓度为20％、70％时最高，而20％的分离度比70％的高，故选择20％乙醇作为提取溶剂。
b、超声时间的选择
超声时间试验结果见表3：
表3赤红颗粒超声时间筛选
结论：表3表明，赤红颗粒的芍药苷含量在超声时间为10分钟最高，从20min～50min之间呈递减趋势，故赤红颗粒的超声时间为10分钟。
因此，供试品的制备方法为：精密称取赤红颗粒粉末3g，置于100mL锥形瓶中，加入10％乙醇50ml，另加入氯化钠1g，称定重量，超声10分钟，取出，称重，补足减失的重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
③专属性试验
赤红颗粒阴性样品、供试品溶液的制备：取缺赤芍药材样品、赤红颗粒各3g置于100mL锥形瓶中，加入10％乙醇50ml，另加入氯化钠1g，称定重量，超声10分钟，取出，称重，补足减失的重量，滤过，取续滤液制得阴性样品和供试品溶液，另取芍药苷对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，结果见图2，试验结果表明，阴性对照溶液在与对照品、供试品色谱峰相应的位置上无干扰，方法可行。
④方法学考察
a、线性关系考察
精密量取芍药苷对照品溶液，稀释成5.22μg/mL、10.44μg/mL、20.88μg/mL、41.76μg/mL、83.5μg/mL、167.00μg/mL的芍药苷对照品溶液，分别取10μL注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，芍药苷的进样浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程得A芍药苷＝7144.7C芍药苷—1100.9，相关系数r＝0.999。结果表明芍药苷在5.22～167μg·mL-1，范围具有良好线性关系，结果见表4。
表4芍药苷线性测定结果
b、精密度试验
精密量取芍药苷对照品溶液(83.5μg·mL-1)10μL，注入高效液相色谱仪，重复进样6次，测定峰面积，结果见表5，以芍药苷的峰面积计算，RSD＝1.14％，结果表明仪器精密度良好。
表5赤红颗粒精密度实验
c、稳定性试验：精密吸取同一批号(20210301)供试品溶液，标记为样品1，分别在0、1、2、3、4、5、6h进样10μL，测定峰面积，结果见表6，供试品在6h内，芍药苷峰面积积分值前后无明显变化，RSD＝1.45％，表明供试品溶液在6小时内具有良好的稳定性。
表6赤红颗粒稳定性实验
e、加样回收率试验取本品粉末15mg，9份，分成3组，精密称定，于100mL容量瓶内，每组按取样量的75％、100％、125％分别加入芍药苷对照品，照供试品处理方法及含量测定方法，进行芍药苷含量测定，结果列于表8，结果显示赤红颗粒中芍药苷平均回收率为100.91％，RSD＝1.74％，表明本方法可用于赤红颗粒的含量测定。
表8芍药苷的加样回收率实验结果
试验结果表明，芍药苷加样平均回收率为100.91％，RSD为1.748％，达到标准要求，方法可行。
一种赤红颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：
实施例1：赤红颗粒独活薄层色谱鉴别
称取本品粉末1g，加甲醇10ml，超声15min，滤过，取滤液作为供试品溶液，另取独活对照药材1g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法(中国药典2020年版四部0502)试验，吸取上述供试品10μl、对照药材10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点，如图1所示
实施例2：赤红颗粒川芎薄层色谱鉴别
称取本品粉末2g，加0.5ml 1％酸水润湿，加入20ml石油醚(60-90℃)超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加1ml三氯甲烷溶解作为供试品溶液，另取川芎对照药材(批号120918-200406)0.1g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法(中国药典2020年版四部0502)试验，吸取上述供试品10μl、对照药材10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(6:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(302nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点，如图2所示。
实施例3：赤红颗粒的含量测定
照高效液相色谱法测定：
对照品溶液制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加20％乙醇制成每1mL含50μg的对照品溶液，即得。
供试品溶液制备：精密称取赤红颗粒粉末3g，置于100mL锥形瓶中，加入10％乙醇50ml，另加入氯化钠1g，称定重量，超声10分钟，取出，称重，补足减失的重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算样品中芍药苷含量；结果见表9
表9赤红颗粒三批样品芍药苷的测定结果
实施例4：赤红颗粒的限量确定
15批赤芍药材含量测定
取15批赤红颗粒按《中国药典》2020版赤芍项下方法制备供试品溶液，精密吸取10μL注入高效液相色谱仪测定，测定样品中芍药苷含量，测定结果见表10。
表10 15批赤芍药材含量测定结果
15批小试赤红颗粒含量测定
取15批赤红颗粒按赤红颗粒标准项下方法制备供试品溶液，精密吸取10μL注入高效液相色谱仪测定，测定样品中芍药苷含量，测定结果见表11。
赤红颗粒中芍药苷含量限度(mg/g)＝芍药投料量(g)×15批赤芍药材中芍药苷最低含量×平均收率(％)÷成品量(g)＝150g×18.6mg/g×7.29％÷1000g＝0.2034mg/g，即2mg/袋,据计算，本品每袋含赤芍以芍药苷(C23H28O11)计不得少于2mg/袋。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (1)
1.一种赤红颗粒的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)赤红颗粒的薄层色谱鉴别：
1)称取本品粉末1g，加甲醇10ml，超声15min，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取独活对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述供试品10μl、对照药材10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(7:3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；
2)称取本品粉末2g，加0.5ml 1％酸水润湿，加入20ml石油醚(60-90℃)超声处理30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加1ml三氯甲烷溶解作为供试品溶液；另取川芎对照药材0.1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述供试品10μl、对照药材10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(6:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(302nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。
(2)高效液相色谱含量测定：
A、色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；1％冰乙酸：甲醇(80:20)为流动相。检测波长为243nm，理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000；
B、对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，精密称定，加20％乙醇制成每1ml含50μg的对照品溶液，即得；
C、供试品溶液的制备：取本品细粉3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入1gNaCl，精密加入20％乙醇溶液50ml，称定重量，超声30分钟，取出，再称定重量，用20％乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过微孔滤膜，即得；
D、含量测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
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