CN113514582B - 对硝基-α-乙酰氨基-β-羟基苯丙酮的杂质检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种对硝基‑α‑乙酰氨基‑β‑羟基苯丙酮的杂质检测方法，属于化学分析检测技术领域，本发明的检测方法为HPLC法，其色谱条件为：色谱柱：C18；流动相：流动相A:乙腈‑水＝25:75；流动相B:乙腈，梯度洗脱，检测波长：266nm；采用本发明的方法，可以对对硝基‑α‑乙酰氨基‑β‑羟基苯丙酮的杂质4‑硝基‑(2‑乙酰氨基)苯乙酮进行快速定量检测，确保后续步骤的收率和质量。
Description
技术领域
本发明涉及分析化学技术领域，尤其涉及对硝基-α-乙酰氨基-β-羟基苯丙 酮的杂质检测方法。
背景技术
对硝基-α-乙酰氨基-β-羟基苯丙酮，也称为α-乙酰氨基-β-羟基-4-硝基- 苯丙酮，其结构式如下：
上述的对硝基-α-乙酰氨基-β-羟基苯丙酮是氯霉素合成中的重要中间体； 在合成过程中，其中可能存在的杂质为4-硝基-(2-乙酰氨基)苯乙酮，其结构 如下：
为了确保该中间体即对硝基-α-乙酰氨基-β-羟基苯丙酮的质量，需要对其 进行检测分析以控制质量。
目前，对于该中间体的检测项目为水分、熔点和外观，其纯度是否达标主 要熔点进行判断。但是，该方法存在一定的缺陷：其纯度虽然能通过熔点进行 判断，但其杂质的含量无法通过熔点测定来实现，即对杂质只能定性无法定量， 也就无法得知该中间体的纯度信息，从而无法确保后续步骤的收率和质量，给 工艺控制带来困难，甚至可能造成最终产品纯度不达标，造成严重的经济损失。
发明内容
本发明的目的，就在于提供一种对硝基-α-乙酰氨基-β-羟基苯丙酮的杂质 检测方法，以解决上述问题。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是这样的：一种对硝基-α-乙酰 氨基-β-羟基苯丙酮的杂质检测方法，采用HPLC方法。
作为优选的技术方案，所述HPLC方法的色谱条件为：
色谱柱：C18；
流动相：流动相A:乙腈-水＝25:75；流动相B:乙腈，梯度洗脱，洗脱程 序为：
| 时间 | A | B |
| 0 | 100 | 0 |
| 4 | 100 | 0 |
| 10 | 53 | 47 |
| 15 | 53 | 47 |
| 15.1 | 100 | 0 |
| 23 | 100 | 0 |
检测波长：266nm。
作为优选的技术方案，样品采用水：乙腈＝50:50进行溶解，浓度为 0.5mg/ml。
作为优选的技术方案，样品配置后，30min内完成进样。
本发明的有益效果在于：采用本发明的方法，可以对对硝基-α-乙酰氨基- β-羟基苯丙酮的杂质4-硝基-(2-乙酰氨基)苯乙酮进行快速定量检测，确保后 续步骤的收率和质量。
附图说明
图1为本发明实施例1的样品未精制的HPLC检测图；
图2为本发明实施例2的样品精制后的HPLC检测图；
图3为对比例1的HPLC图；
图4为对比例2的HPLC图；
图5为对比例3的HPLC图；
具体实施方式
下面将结合附图对本发明作进一步说明。
实施例1
一种对硝基-α-乙酰氨基-β-羟基苯丙酮的杂质检测方法，采用HPLC方法， 所述HPLC方法的色谱条件为：
色谱柱：C18，150×4.6mm 5μm；
流动相：流动相A:乙腈-水＝25:75；流动相B:乙腈，梯度洗脱，洗脱程 序为：
| 时间 | A | B |
| 0 | 100 | 0 |
| 4 | 100 | 0 |
| 10 | 53 | 47 |
| 15 | 53 | 47 |
| 15.1 | 100 | 0 |
| 23 | 100 | 0 |
检测波长：266nm；
准确称取未精制的样品25mg，加溶剂(水：乙腈＝50:50，体积比)溶解并 稀释至50ml，其浓度为0.5mg/ml；
样品采用水：乙腈＝50:50进行溶解，浓度为0.5mg/ml，柱温：30℃流 速：1.0ml/min，进样量：4μm，进样时间：23min；结果见图1，对硝基-α- 乙酰氨基-β-羟基苯丙酮的出峰时间为2.9min左右，杂质杂质4-硝基-(2-乙酰 氨基)苯乙酮的出峰时间为3.7min左右，二者分离度3.66，达到要求，杂质4- 硝基-(2-乙酰氨基)苯乙酮的含量为2.9％。
实施例2
本实施例与实施例1相比，区别仅仅是样品经过精制后，按照相同方法进 行检测，结果见图2，杂质4-硝基-(2-乙酰氨基)苯乙酮的含量为1.2％；
通过实施例1与实施例2的对比，说明本发明的方法，可以准确得知杂质 4-硝基-(2-乙酰氨基)苯乙酮的含量为2.9％的含量变化。
方法验证
验证过程：
1.1专属性
1.1.1溶液配制：
空白溶剂：流动相；
取本品约5mg置于10ml容量瓶中，用稀释液溶解并稀释成刻度，摇匀即 可。
1.1.1操作步骤：
进空白≥1针，确定基线，空白溶剂出峰对样品无干扰。
供试品溶液一针，计算杂质分离度。
结果计算：
表3专属性检测结果
1.2检测限
1.2.1溶液配制：准确称取约为2.5mg样品，于100ml容量瓶中，用稀释液 逐级稀释至S/N在2-5范围内，将溶液作为检测限溶液。
1.2.2测定方法：精密量取检测限溶液连续进样3次，记录色谱图。
表4检测限检测结果
1.3精密度
1.3.1重复性
1.3.1.1溶液配制：
供试品溶液制备：连续取6份本品约5mg置于10ml容量瓶中，用稀释液 溶解并稀释成刻度，摇匀即可。
1.3.1.2操作步骤：
空白1份；样品6份
1.3.2中间精密度
1.3.2.1溶液配制：
供试品溶液制备：连续取6份本品约5mg置于10ml容量瓶中，用稀释液 溶解并稀释成刻度，摇匀即可。
1.3.2.2操作步骤：
空白1份；样品6份
结果：
表5重复性检测结果
表6精密度结果
1.4准确度
1.4.1：80％限度溶液的配制：精密称取供试品约4mg，置3个不同的10ml 量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
1.4.2：100％限度溶液的配制：精密称取供试品约5mg，置3个不同的10ml 量瓶中加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
1.4.3：120％限度溶液的配制：精密称取供试品6mg，置3个不同的10ml 量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
表7准确度结果
2线性
2.1.1线性-140％限度溶液的配制：精密称取供试品约2mg，置10ml量瓶中， 加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
2.1.2线性-260％限度溶液的配制：精密称取供试品约3mg，置10ml量瓶中加 溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
2.1.3线性-380％限度溶液的配制：精密称取供试品4mg，置10ml量瓶中，加 溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
2.1.4线性-4100％限度溶液的配制：精密称取供试品5mg，置10ml量瓶中，加 溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
2.1.5线性-5120％限度溶液的配制：精密称取供试品6mg，置10ml量瓶中，加 溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀即得。
表8线性结果
对比例1
本对比例与实施例1相比，流动相A用纯水，流动相B乙腈，仍然采用相 同的梯度洗脱程序，结果见图3，主峰和乙酰化杂质峰未分开。
对比例2
本对比例与实施例1相比，仅采用等度洗脱，其余条件均相同，结果见图4， 对硝基-α-乙酰氨基-β-羟基苯丙酮出峰时间1.4分钟，出峰时间过早，主峰和 乙酰化杂质峰未分开。
对比例3
本对比例与实施例1相比，仅将色谱柱替换为CHIRALPAK IG 250×4.6mm 5μmm，其余条件均相同，结果见图5，可见对硝基-α-乙酰氨基- β-羟基苯丙酮峰分为了两个峰，说明此柱子不适合缩合物乙酰化杂质的检测。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发 明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明 的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种对硝基-α-乙酰氨基-β-羟基苯丙酮的杂质检测方法，其特征在于，所述杂质为4-硝基-(2-乙酰氨基)苯乙酮，所述检测方法为HPLC法，所述HPLC法的色谱条件为：
色谱柱：C18；
流动相：流动相A:乙腈-水＝25:75；流动相B:乙腈，梯度洗脱，
洗脱程序为：
检测波长：266nm。
2.根据权利要求1所述的对硝基-α-乙酰氨基-β-羟基苯丙酮的杂质检测方法，其特征在于，样品采用水：乙腈＝50:50进行溶解，浓度为0.5mg/ml。
3.根据权利要求2所述的对硝基-α-乙酰氨基-β-羟基苯丙酮的杂质检测方法，其特征在于，样品配置后，30min内完成进样。
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