CN113444821A - 一种同步检测多种生殖道病原体的试剂盒及方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种同步检测多种生殖道病原体的试剂盒及方法。该试剂盒，包括核酸反应液，所述核酸反应液包括淋球菌的引物和探针、解脲脲原体的引物和探针、沙眼衣原体的引物和探针、人型支原体的引物和探针、生殖支原体的引物和探针、及单纯疱疹病毒2型的引物和探针；上述各病原体的正向引物分别包括如SEQ ID NO.1、4、7、10、13和16所示的核苷酸序列，反向引物分别包括如SEQ ID NO.2、5、8、11、14和17所示的核苷酸序列，探针分别包括如SEQ ID NO.3、6、9、12、15和18所示的核苷酸序列。本发明能够快速、准确地同步检测淋球菌、解脲脲原体、沙眼衣原体、人型支原体、生殖支原体和单纯孢疹病毒2型，特异性较强且灵敏度较高。

Description

一种同步检测多种生殖道病原体的试剂盒及方法
技术领域
本发明属于生物试剂盒领域，涉及一种同步检测多种生殖道病原体的试剂盒及方法，尤其是一种基于PCR荧光探针法的同步检测六种生殖道病原体的试剂盒及方法。
背景技术
性病是危害人类最严重、发病最广泛的传染病之一，它不仅危害个人健康，也殃及家庭，遗害后代。性病对人体健康的损害是多方面的，感染性病后如果不能及时发现并彻底治疗，不仅可损害人的生殖器官，导致不育，有些疾病还可损害心脏、脑等人体的重要器官，甚至导致死亡。有些疾病一旦染上是难以治愈的，如尖锐湿疣、生殖器疱疹等。
解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum，UU)是人类泌尿生殖道常见的寄生菌之一，是非淋球菌性尿道炎(NUG)的常见病原体之一。解脲脲原体多寄生在男性尿道、阴茎包皮和女性阴道。若上行感染，可引起男性前列腺炎或附睾炎、女性阴道炎、宫颈炎，并可感染胎儿导致流产、早产及低体重胎儿，也能引起新生儿呼吸道和中枢神经系统的感染。
沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，CT)是一种严格的细胞内寄生的微生物，易引起泌尿生殖系统感染。CT感染已经成为性传播发生率较高的疾病，且发生率呈逐年上升趋势。男性感染CT后临床表现为尿道炎，并可合并附睾炎、前列腺炎、直肠炎等，女性感染可引起尿道炎、宫颈炎、盆腔炎等；输卵管炎是较为严重并发症，亦可致反应性关节炎、Reiter综合征和不孕不育等，该类并发症临床症状治疗困难，危害严重。因此，研制沙眼衣原体的早期快速诊断技术具有重要意义。
生殖支原体(Mycoplasma genitalium，MG)是引起非淋菌性尿道炎的重要病原。20世纪80年代，首次在男性非淋菌性尿道炎患者尿道标本中分离到病原体。随后研究表明，生殖支原体还是前列腺炎、盆腔炎等泌尿生殖道感染重要病原之一。
人型支原体(Mycoplasma hominis)是支原体的一种，寄居于人的泌尿生殖道，是引起泌尿生殖道感染，尤其是女性泌尿生殖道感染的常见病原之一，可引起女性盆腔炎、肾盂肾炎、阴道炎等疾病。人型支原体分离培养营养要求高，需要在培养基中添加胆固醇和核酸前体。相对于其他生殖道常见病原菌，其生长速度较慢，临床样本需要培养48-96h。
单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV)病毒科a病毒亚科，病毒质粒大小约180纳米，单纯疱疹病毒(HSV)为DNA病毒，呈球形，由核衣壳及病毒包膜组成。依据抗原性不同分为1型和2型。1型主要由口唇病灶获得，2型可从生殖器病灶分离到，相对来说，2型往往更难治愈。HSV-2型主要引起生殖器部位或新生儿感染，但两型病毒感染部位并无严格界限。新生儿可在娩出时通过患有生殖器疱疹母亲的产道而受染，病毒亦可由子宫颈上行而感染胎儿。此外，研究证明复发性单纯疱疹患者可有细胞免疫缺陷，一般认为单纯疱疹病毒2型与宫颈癌发生有关。
目前，虽然有专利文献记载采用实时荧光定量PCR同时快速检测多种生殖道感染相关的病原体，但灵敏度较低，而且尚未见报道能够针对上述特定六种病原体(即，淋球菌、解脲脲原体、沙眼衣原体、人型支原体、生殖支原体、单纯孢疹病毒2型)进行同时检测的试剂盒。
发明内容
针对上述技术问题，本发明的目的是提供一种同步检测多种生殖道病原体的试剂盒及方法，其能够快速、准确地同步检测淋球菌、解脲脲原体、沙眼衣原体、人型支原体、生殖支原体和单纯孢疹病毒2型，特异性较强且灵敏度较高。
本发明一方面提供一种同步检测多种生殖道病原体的试剂盒，包括核酸反应液，所述核酸反应液包括淋球菌的引物和探针、解脲脲原体的引物和探针、沙眼衣原体的引物和探针、人型支原体的引物和探针、生殖支原体的引物和探针、及单纯疱疹病毒2型的引物和探针；
淋球菌的正向引物包括如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，反向引物包括如SEQID NO.2所示的核苷酸序列，探针包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；
解脲脲原体的正向引物包括如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列，反向引物包括如SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列，探针包括如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列；
沙眼衣原体的正向引物包括如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列，反向引物包括如SEQ ID NO.8所示的核苷酸序列，探针包括如SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列；
人型支原体的正向引物包括如SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列，反向引物包括如SEQ ID NO.11所示的核苷酸序列，探针包括如SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列；
生殖支原体的正向引物包括如SEQ ID NO.13所示的核苷酸序列，反向引物包括如SEQ ID NO.14所示的核苷酸序列，探针包括如SEQ ID NO.15所示的核苷酸序列；
单纯疱疹病毒2型的正向引物包括如SEQ ID NO.16所示的核苷酸序列，反向引物包括如SEQ ID NO.17所示的核苷酸序列，探针包括如SEQ ID NO.18所示的核苷酸序列。
根据一个优选的方面，所述核酸反应液包括第一核酸反应液和第二核酸反应液，所述第一核酸反应液包括所述淋球菌、所述解脲脲原体、所述沙眼衣原体的所述正向引物、所述反向引物及所述探针；所述第二核酸反应液包括所述人型支原体、所述生殖支原体及所述单纯孢疹病毒2型的所述正向引物、所述反向引物及所述探针。
根据一个优选的方面，各所述探针物的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。
根据一个具体且优选的方面，所述淋球菌的探针的5’端标记有CY5荧光报告基团，3’端标记有BHQ-2荧光淬灭基团；
所述解脲脲原体的探针的5’端标记有FAM荧光报告基团，3’端标记有BHQ-1荧光淬灭基团；
所述沙眼衣原体的探针的5’端标记有VIC荧光报告基团，3’端标记有BHQ-1荧光淬灭基团。
根据一个具体且优选的方面，所述人型支原体的探针的5’端标记有FAM荧光报告基团，3’端标记有BHQ-1荧光淬灭基团；
所述生殖支原体的探针的5’端标记有VIC荧光报告基团，3’端标记有BHQ-1荧光淬灭基团；
所述单纯孢疹病毒2型的探针的5’端标记有CY5荧光报告基团，3’端标记有BHQ2荧光淬灭基团。
根据一个优选的方面，所述核酸反应液还包括内参基因的引物和探针，所述内参基因的正向引物包括如SEQ ID NO.19所示的核苷酸序列，反向引物包括如SEQ ID NO.20所示的核苷酸序列，探针包括如SEQ ID NO.21所示的核苷酸序列。进一步地，该内参基因为人DNA完整性的对照内参，确保在检验过程中对样品质量的判断，避免假阴性。
更优选地，内参基因的探针的5’端标记有荧光基团，3’端标记有荧光淬灭基团。
根据一个优选的方面，所述试剂盒还包括快速荧光定量PCR预混试剂。
本发明另一个方面提供一种同步检测多种生殖道病原体的方法，包括如下步骤：
A、提供待测样本的核酸；
B、采用如上所述的试剂盒，将所述核酸和所述试剂盒中的核酸反应液混合；
C、按照扩增反应程序进行扩增；
D、收集荧光，根据荧光曲线判断是否感染淋球菌、解脲脲原体、沙眼衣原体、人型支原体、生殖支原体、单纯孢疹病毒2型。
根据一个优选的方面，步骤B中，取两份核酸分别加入至第一核酸反应液和第二核酸反应液中；步骤C中，第一核酸反应液和第二核酸反应液同步进行扩增。
根据一个优选的方面，步骤D中，判断标准为：扩增后的反应液中Ct≤36且荧光曲线呈“S”形，则依据荧光通道判断对应的病原体为阳性。
本发明采用以上方案，相比现有技术具有如下优点：
本发明的检测试剂盒及方法，引入了针对淋球菌、解脲脲原体、沙眼衣原体、人型支原体、生殖支原体、单纯疱疹病毒2型所设计的特异性扩增引物，可以同时针对这六种生殖道病原体进行检测，总时长不超过80分钟，既节约了生产成本和检测成本，又提高了检测效率，缩短了检测时间，其检测灵敏度较好、特异性较强，提供了一种灵敏、准确、快速且低成本的检测方案。
附图说明
为了更清楚地说明本发明的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例试剂盒的反应体系A的四重体系检测结果曲线图；
图2是本发明实施例试剂盒的反应体系A中淋球菌的灵敏度实验结果图；
图3是本发明实施例试剂盒的反应体系A中沙眼衣原体的灵敏度实验结果图；
图4是本发明实施例试剂盒的反应体系A中解脲脲原体的灵敏度实验结果图；
图5是本发明实施例试剂盒的反应体系B的四重体系检测结果曲线图；
图6是本发明实施例试剂盒的反应体系B中人型支原体灵敏度实验结果图；
图7是本发明实施例试剂盒的反应体系B中生殖支原体灵敏度实验结果图；
图8是本发明实施例试剂盒的反应体系B中单纯孢疹病毒2型灵敏度实验结果图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域的技术人员理解。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。
如本说明书和权利要求书中所示，术语“包括”与“包含”仅提示包括已明确标识的步骤和元素，而这些步骤和元素不构成一个排它性的罗列，方法或者设备也可能包含其他的步骤或元素。
实施例1：试剂盒
试剂盒包括两种核酸反应液，即核酸反应液A和核酸反应液B。
核酸反应液A为淋球菌/解脲脲原体/沙眼衣原体/人源内参四重核酸反应液，具体包括以下组分：
(1)由一对检测淋球菌的引物和一条检测淋球菌的探针组成，探针5’端标记有CY5荧光报告基团，3’端标记有BHQ-2荧光淬灭基团；
(2)由一对检测解脲脲原体的引物和一条检测解脲脲原体的探针组成，探针5’端标记有FAM荧光报告基团，3’端标记有BHQ-1荧光淬灭基团；
(3)由一对检测沙眼衣原体的引物和一条检测沙眼衣原体的探针组成，探针5’端标记有VIC荧光报告基团，3’端标记有BHQ-1荧光淬灭基团；
(4)由一对检测内参基因GAPDH的引物和一条检测内参基因GAPDH的探针组成，探针5’端标记有ROX荧光报告基团，3’端标记有BHQ-2荧光淬灭基团。
核酸反应液B为人型支原体/生殖支原体/单纯孢疹病毒2型/人源内参四重核酸反应液，具体包括以下组分：
(5)由一对检测人型支原体的引物和一条检测人型支原体的探针组成，探针5’端标记有FAM荧光报告基团，3’端标记有BHQ-1荧光淬灭基团；
(6)由一对检测生殖道支原体的引物和一条检测生殖道支原体的探针组成，探针5’端标记有VIC荧光报告基团，3’端标记有BHQ-1荧光淬灭基团；
(7)由一对检测单纯孢疹病毒2型的引物和一条检测单纯孢疹病毒2型的探针组成，探针5’端标记有CY5荧光报告基团，3’端标记有BHQ-2荧光淬灭基团；
(8)由一对检测内参基因GAPDH的引物和一条检测内参基因GAPDH的探针组成，探针5’端标记有ROX荧光报告基团，3’端标记有BHQ-2荧光淬灭基团。
核酸反应液A和核酸反应液B中的引物和探针的序列参见表1。
表1
Figure BDA0003143550490000061
试剂盒还包括快速荧光定量PCR预混试剂，其提供核酸扩增用的酶、缓冲液等。
本实施例中，引物、探针和合成基因均由通用生物(系统)有限公司合成，快速荧光定量PCR预混试剂为购自北京天根生物科技有限公司的2×FastFire qPCR PreMix。
实施例2：病原体的检测
(1)提取采集到的样本的核酸
临床收集到的样本(如阴道拭子样本)通过北京天根生物科技有限公司购买的核酸提取试剂盒，提取样本的基因组DNA。
(2)采用实施例1的试剂盒，将提取的核酸和试剂盒中的核酸反应液A及快速荧光定量PCR预混试剂按照表2组成反应体系A，将提取的核酸和试剂盒中的核酸反应液B及快速荧光定量PCR预混试剂按照表2组成反应体系B。
表2
反应体系A 反应体系B 体系中物质终浓度
2×FastFire qPCR PreMix 2×FastFire qPCR PreMix 1×
淋球菌探针 人型支原体探针 0.1μM
淋球菌正向引物 人型支原体正向引物 0.15μM
淋球菌反向引物 人型支原体反向引物 0.15μM
解脲脲原体探针 生殖支原体探针 0.1μM
解脲脲原体正向引物 生殖支原体正向引物 0.15μM
解脲脲原体反向引物 生殖支原体反向引物 0.15μM
沙眼衣原体探针 单纯疱疹病毒2型探针 0.1μM
沙眼衣原体正向引物 单纯疱疹病毒2型正向引物 0.15μM
沙眼衣原体反向引物 单纯疱疹病毒2型反向引物 0.15μM
内参探针 内参探针 0.1μM
内参正向引物 内参正向引物 0.15μM
内参反向引物 内参反向引物 0.15μM
水 水 补足至15μL
模板 模板 5μL
(3)将反应体系A和B置于PCR仪中，按照表3的反应程序进行扩增。
表3
Figure BDA0003143550490000071
(4)扩增反应后：根据扩增曲线判断是否感染淋球菌(NG)、解脲脲原体(UU)、沙眼衣原体(CT)、人型支原体(MH)、生殖支原体(MG)、单纯孢疹病毒2型(HSV2)。
结果判读
反应体系A的判读标准如下：
在FAM通道内荧光曲线呈“S”型，且Ct≤36，判断为解脲脲原体(UU)阳性，无典型“S”扩增或Ct>36，ROX荧光通道Ct≤36，判断为解脲脲原体(UU)阴性；
在VIC通道内荧光曲线呈“S”型，且Ct≤36，判断为沙眼衣原体(CT)阳性，无典型“S”扩增或Ct>36，ROX荧光通道Ct≤36，判断为沙眼衣原体(CT)阴性；
在CY5通道内荧光曲线呈“S”型，且Ct≤36，判断为淋球菌(NG)阳性，无典型“S”扩增或Ct>36，ROX荧光通道Ct≤36，判断为淋球菌(NG)阴性。
反应体系B的判读标准如下：
在FAM通道内荧光曲线呈“S”型，且Ct≤36，判断为人型支原体(MH)阳性，无典型“S”扩增或Ct>36，ROX荧光通道Ct≤36，判断为人型支原体(MH)阴性；
在VIC通道内荧光曲线呈“S”型，且Ct≤36，判断为生殖支原体(MG)阳性，无典型“S”扩增或Ct>36，ROX荧光通道Ct≤36，判断为沙生殖支原体(MG)阴性；
在CY5通道内荧光曲线呈“S”型，且Ct≤36，判断为单纯孢疹病毒2型(HSV2)阳性，无典型“S”扩增或Ct>36，ROX荧光通道Ct≤36，判断为单纯孢疹病毒2型(HSV2)阴性。
图1示出了四重反应体系A的检测结果，图5示出了四重反应体系B的检测结果。从图1和图5可知，六种病原体均有扩增曲线。
实施例3：灵敏度实验
核酸反应液A的阳性参考品为淋球菌(NG)、解脲脲原体(UU)、沙眼衣原体(CT)的DNA和购买的细胞系的DNA。核酸反应液B的阳性参考品为人型支原体(MH)、生殖支原体(MG)、单纯孢疹病毒2型(HSV2)的NDA和购买的细胞系的DNA。采用实施例1的试剂盒按照实施例2的检测方法对试剂盒的灵敏度进行了检测。
检测结果参见图2至图4及图6至图8，结果表明：本试剂盒具有良好的灵敏度，核酸反应液A中，淋球菌(NG)可以实现300copies/mL的参考品浓度检测，解脲脲原体(UU)和沙眼衣原体(CT)可以实现100copies/mL的参考品浓度检测。核酸反应液B中人型支原体(MH)、生殖支原体(MG)、单纯孢疹病毒2型(HSV2)都可以实现100copies/mL的参考品浓度检测。
实施例3：特异性实验
检测10个临床样本的DNA验证试剂盒的特异性。10例临床样本信息见表4。
表4
样本名称 是否感染 感染病原体
1 是 NG
2 是 UU/MH
3 是 CT
4 是 NG
5 否 /
6 是 UU
7 是 NG/MG
8 是 UU/CT
9 是 UU/CT/MH
10 是 HSV2
采用实施例1的试剂盒，每例样本分别进行两个核酸反应液(A和B)的检测，每个核酸反应液的上样体积为5μL。反应程序同上表3。
检测结果见表5。
表5
Figure BDA0003143550490000091
Figure BDA0003143550490000101
对照实施例2提供的判读标准对表5的检测数据进行如下判读：
样本1中，淋球菌(NG)为阳性，其他五种病原体未检出；
样本2中，解脲脲原体(UU)、人型支原体(MH)为阳性，其他四种病原体未检出；
样本3中，沙眼衣原体(CT)为阳性，其他五种病原体未检出；
样本4中，淋球菌(NG)为阳性，其他五种病原体未检出；
样本5中，未检出病原体；
样本6中，解脲脲原体(UU)为阳性，其他五种病原体未检出；
样本7中，淋球菌(NG)、生殖支原体(MG)为阳性，其他四种病原体未检出；
样本8中，解脲脲原体(UU)、沙眼衣原体(CT)为阳性，其他四种病原体未检出；
样本9中，解脲脲原体(UU)、沙眼衣原体(CT)、人型支原体(MH)为阳性，其他三种病原体未检出；
样本10中，单纯孢疹病毒2型(HSV2)为阳性，其他五种病原体未检出。
该试剂盒和检测方法具有较好的特异性。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，是一种优选的实施例，其目的在于熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限定本发明的保护范围。凡根据本发明的原理所作的等效变换或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 江苏汇先医药技术有限公司
<120> 一种同步检测多种生殖道病原体的试剂盒及方法
<160> 21
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ataatccgtc cttcaacatc agtg 24
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
agaaggtttt ttgggggctg 20
<210> 3
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
aaccgaataa ggagccgaaa atgaa 25
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gtgagttggg ttcaaaccgt c 21
<210> 5
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
cctctcgtac taggaacagc tctt 24
<210> 6
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
ttggtcccta tctgtcatgc ccgt 24
<210> 7
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
agtcttctgc ttacaatgct ctt 23
<210> 8
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
ccacatactt tccctatcac atc 23
<210> 9
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
taaacctccc caaccaaact ctacaa 26
<210> 10
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
aattttatca ggcgcttcat gta 23
<210> 11
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
tgagtgaact gttgtcataa atcctt 26
<210> 12
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
aactgtttag ctcctattgc caacgtatt 29
<210> 21
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
tttaccaacc aaattgatga gagc 24
<210> 14
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
tatctaacag ttctctcaat tcaatcct 28
<210> 15
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
aagcacttgc gattgtggtg gatg 24
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
acatccccct gttctggttc 20
<210> 17
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
agacaaacga acgccgct 18
<210> 18
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
atcctcttta tcatcagcac caccat 26
<210> 19
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
ccatcacgcc acagtttcc 19
<210> 20
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
actttggtat cgtggaagga ctca 24
<210> 21
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
tgccatcact gccacccaga aga 23

Claims (10)

1.一种同步检测多种生殖道病原体的试剂盒，包括核酸反应液，其特征在于，所述核酸反应液包括淋球菌的引物和探针、解脲脲原体的引物和探针、沙眼衣原体的引物和探针、人型支原体的引物和探针、生殖支原体的引物和探针、及单纯疱疹病毒2型的引物和探针；
淋球菌的正向引物包括如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，反向引物包括如SEQ IDNO.2所示的核苷酸序列，探针包括如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；
解脲脲原体的正向引物包括如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列，反向引物包括如SEQID NO.5所示的核苷酸序列，探针包括如SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列；
沙眼衣原体的正向引物包括如SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列，反向引物包括如SEQID NO.8所示的核苷酸序列，探针包括如SEQ ID NO.9所示的核苷酸序列；
人型支原体的正向引物包括如SEQ ID NO.10所示的核苷酸序列，反向引物包括如SEQID NO.11所示的核苷酸序列，探针包括如SEQ ID NO.12所示的核苷酸序列；
生殖支原体的正向引物包括如SEQ ID NO.13所示的核苷酸序列，反向引物包括如SEQID NO.14所示的核苷酸序列，探针包括如SEQ ID NO.15所示的核苷酸序列；
单纯疱疹病毒2型的正向引物包括如SEQ ID NO.16所示的核苷酸序列，反向引物包括如SEQ ID NO.17所示的核苷酸序列，探针包括如SEQ ID NO.18所示的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸反应液包括第一核酸反应液和第二核酸反应液，所述第一核酸反应液包括所述淋球菌、所述解脲脲原体、所述沙眼衣原体的所述正向引物、所述反向引物及所述探针；所述第二核酸反应液包括所述人型支原体、所述生殖支原体及所述单纯孢疹病毒2型的所述正向引物、所述反向引物及所述探针。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，各所述探针物的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述淋球菌的探针的5’端标记有CY5荧光报告基团，3’端标记有BHQ-2荧光淬灭基团；
所述解脲脲原体的探针的5’端标记有FAM荧光报告基团，3’端标记有BHQ-1荧光淬灭基团；
所述沙眼衣原体的探针的5’端标记有VIC荧光报告基团，3’端标记有BHQ-1荧光淬灭基团。
5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述人型支原体的探针的5’端标记有FAM荧光报告基团，3’端标记有BHQ-1荧光淬灭基团；
所述生殖支原体的探针的5’端标记有VIC荧光报告基团，3’端标记有BHQ-1荧光淬灭基团；
所述单纯孢疹病毒2型的探针的5’端标记有CY5荧光报告基团，3’端标记有BHQ2荧光淬灭基团。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述核酸反应液还包括内参基因的引物和探针，所述内参基因的正向引物包括如SEQ ID NO.19所示的核苷酸序列，反向引物包括如SEQ ID NO.20所示的核苷酸序列，探针包括如SEQ ID NO.21所示的核苷酸序列。
7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括快速荧光定量PCR预混试剂。
8.一种同步检测多种生殖道病原体的方法，其特征在于，包括如下步骤：
A、提供待测样本的核酸；
B、采用如权利要求1至7任一项所述的试剂盒，将所述核酸和所述试剂盒中的核酸反应液混合；
C、按照扩增反应程序进行扩增；
D、收集荧光，根据荧光曲线判断是否感染淋球菌、解脲脲原体、沙眼衣原体、人型支原体、生殖支原体、单纯孢疹病毒2型。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤B中，取两份核酸分别加入至第一核酸反应液和第二核酸反应液中；步骤C中，第一核酸反应液和第二核酸反应液同步进行扩增。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤D中，判断标准为：扩增后的反应液中Ct≤36且荧光曲线呈“S”形，则依据荧光通道判断对应的病原体为阳性。
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