CN113387948B - 一种稠环杂芳基衍生物及其药物组合物和治疗方法及用途 - Google Patents

一种稠环杂芳基衍生物及其药物组合物和治疗方法及用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种式(I)所示的稠环杂芳基衍生物或其互变异构体、光学异构体、氮氧化物、溶剂化物、或其药学上可接受的盐或前药，包含上述物质在制备治疗或减轻患者的HIF相关和/或EPO相关的疾病或病症的药物中的用途以及治疗方法。

Description

一种稠环杂芳基衍生物及其药物组合物和治疗方法及用途
技术领域
本发明涉及药物化学技术领域，特别涉及一类作用于脯氨酰羟化酶的稠环杂芳基衍生物及其药物组合物和治疗方法及用途。
背景技术
中国慢性肾脏病(CKD)的患者人数估计约为1.2亿，其中肾性贫血是影响CKD患者生活质量的最常见并发症。全国每年新发肿瘤病例约为312万例，约50％的化疗患者会出现贫血。
在贫血、外伤、组织坏死及缺损等情况下，组织或细胞常处于低氧状态。组织缺氧的一个早期反应是缺氧诱导因子((hypoxia inducible factor，HIF)的诱导。缺氧诱导因子(HIF)是一种碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)PAS(Per/Arnt/Sim)转录激活剂，其调控随细胞氧浓度改变的基因表达而改变，广泛分布于体内各部分，特别是血管内膜、心脏、脑、肾脏、肝脏等。
HIF是一种含有一个氧调节α亚单位(HIF-α)和一个组成性表达β亚单位(HIF-β)的杂二聚体。在氧合(常氧)细胞中，HIF-α亚单位通过涉及视网膜血管瘤(von Hippel-Lindautumor)抑制蛋白(pVHL)E3连接酶复合物泛素化的机制迅速降解。在缺氧条件下，HIF-α不降解，且活性HIF-α/β复合物在细胞核中累积，并激活各种基因的表达，包括糖酵解酶、葡萄糖转运蛋白(GLUT)-1、促红细胞生成素(EPO)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)。
在大多数细胞中，HIFα蛋白的含量随缺氧而提高，且当动物患有贫血或缺氧时，体内诱导出HIF-α。促红细胞生成素(EPO)是随HIF-α而产生的一种自然存在的激素，其刺激运载氧气贯穿全身的红细胞(红血球)的产生。EPO通常由肾分泌，且内源性EPO在氧减少(缺氧)的条件下增加。贫血与肾功能障碍有关，经常透析的大多数肾衰竭患者患有慢性贫血。
脯氨酰羟化酶(prolyl hydroxylase domain，PHD)是调节HIF的关键因子。在常氧状态下，PHD可以羟基化HIF-α的两个关键脯氨酸残基Pro402和Pro564，增加其与pVHL的亲和力，加速其降解的过程。在缺氧及其他病理状态下，PHD催化的HIF反应受阻，蛋白酶降解速度减慢，造成HIFα在细胞内积聚，进而引起细胞对低氧的一系列适应性反应。通过PHD抑制剂抑制PHD，延长HIF的作用，进而增加EPO等的基因的表达，可以有效治疗和预防HIF相关和/或EPO相关的病症，如贫血、局部缺血和缺氧的病症。
尽管现有技术例如WO2004108681A1公开了用于调节HIF和/或EPO的异喹啉类化合物，但是其治疗效果依然不是十分令人满意，这大大限制了其在临床应用中的广泛使用。此外，WO2016123028A1披露了包含4-羟基-1-甲基-N-((5-氧代-4,5-二氢-1H-四氮唑-1-基)甲基)-7-萃氧基异喹啉-3-甲酰胺在内的四氮唑类化合物，但是其并未披露化合物针对HIF的调节作用。
目前，针对PHD的抑制剂的研究主要集中于α-酮戊二酸竞争型抑制剂，并先后十余个PHD小分子抑制剂进入临床研究。临床研究表明，PHD抑制剂能够明显改善慢性肾病患者伴随的贫血并发症以及改善化疗药物导致的贫血，并且不需与铁剂联用，具有极大的临床应用前景。2018年12月18日，国家药品监督管理局(NMPA)通过优先审评审批程序批准了全球首个小分子口服PHD抑制剂Roxadustat(代号：FG-4592；中文名：罗沙司他；商品名：爱瑞卓)作为1类创新药上市，用于治疗正在接受透析治疗的患者因慢性肾脏疾病引起的贫血。
发明内容
本发明一方面提供一种具有如下式(Ⅰ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐：
Figure BDA0003156068350000021
其中：
n的取值为0、1、2、3；
X为S或Se；
R1a、R1b和R2各自独立的选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5；
R4选自氢、氘、C1-8烷基、C3-8环烷基、卤取代C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基；
R5选自氢、氘、C1-8烷基、C3-8环烷基、卤取代C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基；
R6选自氢、氘、C1-8烷基、C3-8环烷基、卤取代C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基；
R7和R8分别独立的选自氢、氘、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基、5-10元杂芳基、-C1-8-S(O)rR4、-C1-8-O-R5、-C1-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C1-8-O-C(O)R6、-C1-8-NR7R8或-C0-8-C(O)NR7R8；
r为0、1、2；
环A为稠环，选自：
Figure BDA0003156068350000031
环B为五元至七元全碳芳环或杂芳环；
其中，L1、L2至少一个选自N原子、O原子或者S原子，L3为C原子或者N原子；
q＝0、1、2，当q为0时代表五元全碳芳环或杂芳环，当q为1时代表六元全碳环或杂芳环，q为2时代表七元全碳芳环或杂芳环；
m＝0、1、2、3；
R3选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5；
其中所述的C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基任选的进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代。
作为进一步优选的方案，所述的式(Ⅰ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐中，所述环A为选自：
Figure BDA0003156068350000041
其中，L1、L2至少一个选自N原子、O原子或者S原子，L3为C原子或者N原子；
Q1、Q2和Q3至少一个选自C原子、N原子、O原子或者S原子；
R1a、R1b、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、L1、L2、L3、m、r如式(Ⅰ)化合物所定义。
作为进一步优选的方案，所述的式(Ⅰ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐中，所述环A为选自：
Figure BDA0003156068350000042
其中，R1a、R1b、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、L1、L2、L3、m、r如式(Ⅰ)化合物所定义。
作为进一步优选的方案，所述的式(Ⅰ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐中，所述环A为选自：
Figure BDA0003156068350000051
R9和R10分别独立的选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5；
其中所述的C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基任选的进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
R1a、R1b、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、m、r如式(Ⅰ)化合物所定义。
作为进一步优选的方案，所述的式(Ⅰ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐中，所述环A为选自：
Figure BDA0003156068350000052
R9和R10分别独立的选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5；
其中所述的C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基任选的进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
R1a、R1b、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、m、r如式(Ⅰ)化合物所定义。
作为进一步优选的方案，所述的式(Ⅰ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐中，所述R2选自：
Figure BDA0003156068350000061
其中Y和Z分别独立的选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5；
优选的，所述Y和Z分别独立的选自氢，卤素，氰基，三氟甲基，氨基，羟基，C1-6烷基，烷氧基，C3-8环烷基；
其中所述的C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基任选的进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
R1a、R1b、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、r如式(Ⅰ)化合物所定义。
作为进一步优选的方案，所述的式(Ⅰ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐中，所述环A为选自：
Figure BDA0003156068350000071
其中R1a、R1b、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、r如式(Ⅰ)化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自式(Ⅱ)化合物：
Figure BDA0003156068350000072
其中R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、r如式(Ⅰ)化合物所定义。
作为进一步优选的方案，所述的式(Ⅱ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐中，所述R9和R10分别独立的选自：
Figure BDA0003156068350000081
其中Y和Z分别独立的选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5；
优选的，所述Y和Z分别独立的选自氢，卤素，氰基，三氟甲基，氨基，羟基，C1-6烷基，烷氧基，C3-8环烷基；
其中所述的C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基任选的进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
R4、R5、R6、R7、R8、r如式(Ⅰ)化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自式(Ⅲ)化合物：
Figure BDA0003156068350000091
其中R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、r如式(Ⅰ)化合物所定义。
作为进一步优选的方案，所述的式(Ⅲ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐中，所述R9和R10分别独立的选自：
Figure BDA0003156068350000092
其中Y和Z分别独立的选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5；
优选的，所述Y和Z分别独立的选自氢，卤素，氰基，三氟甲基，氨基，羟基，C1-6烷基，烷氧基，C3-8环烷基；
其中所述的C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基任选的进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
R1a、R1b、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、r如式(Ⅰ)化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述的式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐，选自式(Ⅳ)化合物：
Figure BDA0003156068350000101
其中R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、r如式(Ⅰ)化合物所定义。
作为进一步优选的方案，所述的式(Ⅳ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐中，所述R9选自：
Figure BDA0003156068350000111
其中Y和Z分别独立的选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5；
优选的，所述Y和Z分别独立的选自氢，卤素，氰基，三氟甲基，氨基，羟基，C1-6烷基，烷氧基，C3-8环烷基；
其中所述的C1-8烷基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、C5-10芳基或5-10元杂芳基任选的进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
R1a、R1b、R3、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、r如式(Ⅰ)化合物所定义。
作为更进一步优选的方案，所述的式(Ⅰ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐中，所述化合物选自：
Figure BDA0003156068350000121
Figure BDA0003156068350000131
Figure BDA0003156068350000141
本发明另一方面提供药物组合物，其包括治疗有效剂量的前述式(I)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐及可药用的载体。
本发明另一方面提供了前述式(Ⅰ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐或前述药物组合物在制备用于治疗由HIF和/或EPO介导相关疾病的药物中的应用。
本发明另一方面提供了前述式(Ⅰ)化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐，或前述药物组合物在制备用于治疗单独或部分地由HIF和/或EPO介导疾病的治疗药物中的应用。
本发明另一方面还提供了一种在患者中抑制PHD的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的如式(Ⅰ)的化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。
发明人在研究过程中发现一类如式1所示稠环杂芳基化合物具有抑制脯氨酰羟化酶的活性，可以用来治疗单独或者部分地由HIF和/或EPO介导疾病，例如贫血、局部缺血和缺氧的病症。实验结果表明，本发明提供的稠环杂芳基化合物对脯氨酰基羟化酶表现出较高的抑制活性。
具体实施方式
详细说明：除非有相反陈述，下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。
“C1-8烷基”指包括1至8个碳原子的直链烷基和含支链烷基，烷基指饱和的脂族烃基团，C0-8是指不含碳原子或者C1-8烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1，1，2-三甲基丙基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2，3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2，3-二甲基戊基、2，4-二甲基戊基、2，2-二甲基戊基、3，3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2，3-二甲基己基、2，4-二甲基己基、2，5-二甲基己基、2，2-二甲基己基、3，3-二甲基己基、4，4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基或其各种支链异构体等。
烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，“C3-8环烷基”指包括3至8个碳原子的环烷基，“5-10元环烷基”指包括5至10个碳原子的环烷基，例如：
“单环环烷基”的非限制性实施例包含环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等。
“多环环烷基”包括螺环、稠环和桥环的环烷基。“螺环烷基”指单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基基或多螺环烷基，螺环烷基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0003156068350000151
“稠环烷基”指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，稠环烷基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0003156068350000161
“桥环烷基”指任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，桥环烷基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0003156068350000162
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实施例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。
“环烷基”可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。“5-10元杂环基”指包含5至10个环原子的环基，“3-8元杂环基”指包含3至8个环原子的环基。
“单环杂环基”的非限制性实施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。
“多环杂环基”包括螺环、稠环和桥环的杂环基。“螺杂环基”指单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，其余环原子为碳。这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基。螺环烷基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0003156068350000171
“稠杂环基”指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，其余环原子为碳。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环烷基，稠杂环基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0003156068350000172
“桥杂环基”指任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，其余环原子为碳。根据组成环的数目可
以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，桥环烷基的非限制性实施例包含：
Figure BDA0003156068350000173
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，非限制性实施例包含：
Figure BDA0003156068350000181
杂环基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代
“芳基”指全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，具有共轭的π电子体系的多环(即其带有相邻对碳原子的环)基团，“C5-10芳基”指含有5-10个碳的全碳芳基，“5-10元芳基”指含有5-10个碳的全碳芳基，例如苯基和萘基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实施例包含：
Figure BDA0003156068350000182
芳基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
“杂芳基”指包含1至4个杂原子的杂芳族体系，所述杂原子包括氮、氧和S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，5-7元杂芳基指含有5-7个环原子的杂芳族体系，5-10元杂芳基指含有5-10个环原子的杂芳族体系，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包含：
Figure BDA0003156068350000191
杂芳基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10
芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
“烯基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上述定义的烷基，C2-8链烯基指含有2-8个碳的直链或含支链烯基。例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-，2-或3-丁烯基等。
烯基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
“炔基”指至少两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的如上所定义的烷基，C2-8链炔基指含有2-8个碳的直链或含支链炔基。例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-，2-或3-丁炔基等。
炔基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。C1-8烷氧基指含1-8个碳的烷基氧基，非限制性实施例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。
烷氧基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基，优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
“环烷氧基”指和-O-(未取代的环烷基)，其中环烷基的定义如上所述。C3-8环烷氧基指含3-8个碳的环烷基氧基，非限制性实施例包含环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。
环烷氧基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C1-8烷基、C2-8链烯基、C2-8链炔基、C3-8环烷基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C5-10芳基、C5-10芳基氧基、C5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-C0-8-S(O)rR4、-C0-8-O-R5、-C0-8-C(O)R6、-C0-8-C(O)OR5、-C0-8-O-C(O)R6、-C0-8-NR7R8、-C0-8-C(O)NR7R8、-N(R7)-C(O)R6或-N(R7)-C(O)OR5的取代基所取代；
“卤取代的C1-8烷基”指烷基上的氢任选的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-8个碳烷基基团，例如二氟甲基、二氯甲基、二溴甲基、三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基等。
“卤取代的C1-8烷氧基”烷基上的氢任选的被氟、氯、溴、碘原子取代的1-8个碳烷氧基基团。例如二氟甲氧基、二氯甲氧基、二溴甲氧基、三氟甲氧基、三氯甲氧基、三溴甲氧基等。
“卤素”指氟、氯、溴或碘。
“C(O)R6”指R6取代的羰基。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
“药学上可接受的载体”可以是固体或液体。其中，固体载体可以是用作赋形剂、稀释剂、甜味剂、增溶剂、润滑剂、粘合剂、片剂崩解剂、稳定剂、防腐剂或包封材料的一种或多种物质。液体载体可以是溶剂或液体分散介质。合适的固体载体包括但不限于例如纤维素、葡萄糖、乳糖、甘露醇、硬脂酸镁、碳酸镁、碳酸钠、糖精钠、蔗糖、糊精、滑石、淀粉、果胶、明胶、黄芪胶、阿拉伯胶、藻酸钠、对羟基苯甲酸酯、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。合适的液体载体包括但不限于水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、甘油酯及其混合物。
下面结合实施例对本发明做进一步详细、完整地说明，但决非限制本发明，本发明也并非仅局限于实施例的内容。
为了进一步说明本发明，下面利用实施例来具体地解释本发明的化合物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物的制造方法。然而，本发明不限于这些实施例。
化合物的结构是通过核磁共振(1HNMR)或质谱(MS)来确定的。1H-NMR位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。1H-NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代甲醇(CD3OD)、氘代氯仿(CDCl3)，六氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，内标为四甲基硅烷(TMS)，化学位移是以10-6(ppm)作为单位给出。
MS的测定用Agilent(ESI)质谱仪，生产商：Agilent，型号：Agilent 6120B；
实施例
实施例1：合成2-{5-(3-氯苯基)-7-羟基[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-硫代甲酰胺基}乙酸(TM-1)
合成路线：
Figure BDA0003156068350000221
步骤1-1：合成中间体SM1-2
Figure BDA0003156068350000222
室温条件下，将SM1-1(10.00g，52.11mmol)、20ml THF混合加入瓶中，氮气置换保护，降温至0℃。将BF3·Et2O(400.00mg，2.82mmol)、10ml THF混合，滴加进瓶中，控温在0～5℃。将SM1-1-1(17.20g，78.72mmol)溶于10ml THF，滴加进瓶中，控温在0～5℃。搅拌3小时。转移至室温环境，搅拌16小时。向反应液中加入35ml饱和NaHCO3水溶液，搅拌1小时。加入200ml EA萃取三次。EA用无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，得棕黄色固体。加入150ml PE打浆半个小时。过滤，滤液旋干，得11.05g棕黄色油状物SM1-2，低温呈黄色固体状。用于下一步。ESI-MS(m/z):247.92[M+H]+。
1H-NMR(CDCl3)δ:1.62(9H,s),7.32(1H,d,J＝5.2Hz),8.30(1H,d,J＝5.2Hz)。
步骤1-2：合成中间体SM1-3
Figure BDA0003156068350000231
室温条件下，将NaH(2.17g，90.42mmol)，40ml无水DMF混合，氮气置换，降温至0℃。将SM1-2(11.05g，44.56mmol)溶于15ml无水DMF中，滴加进反应瓶中，控制温度在0～5℃之间。将苄醇(5.1g，47.31mmol)用10ml无水DMF溶解，滴加进瓶中，控制温度在0～5℃之间。保持温度搅拌2小时。转移至室温，搅拌16小时。将反应液滴加进300ml水中。搅拌2小时。过滤，得湿重产物SM1-3 14.60g。用于下一步反应。ESI-MS(m/z):320.04[M+H]+。
1H-NMR(CDCl3)δ:1.53(9H,s),5.17(2H,s),6.83(1H,d,J＝6.0Hz),7.33-7.41(5H,m),8.22(1H,d,J＝6.0Hz)。
步骤1-3：合成中间体SM1-4
Figure BDA0003156068350000232
在室温条件下，将SM1-3(14.60g，45.76mmol)，水合肼(24.00g，480.08mmol)，溶于100ml二氧六环中。加热至97℃反应，氮气保护。搅拌5小时，转移至室温搅拌16小时。加入200ml EA和150ml饱和NaHCO3，搅拌20分钟，萃取。水相用200ml EA萃取两次。用无水硫酸钠干燥有机相。旋干溶剂，将浓缩物加入进150ml 1mol/L HCl中，打浆3小时。过滤，液相用饱和NaHCO3溶液，调节pH＝8，再用100ml EA萃取两次。滤饼用200ml饱和NaHCO3溶液和250mlEA溶解，搅拌，萃取；水相用200ml EA萃取两次。合并上述所有EA，用无水硫酸钠干燥，旋干溶剂，得产物SM1-4 8.81g。用于下一步反应。ESI-MS(m/z):316.10[M+H]+。
1H-NMR(CDCl3)δ:1.43(9H,s),3.99(2H,br s),5.08(2H,s),6.30(1H,d,J＝5.6Hz),7.27-7.43(5H,m),7.94(1H,br s),8.06(1H,d,J＝5.6Hz)。
步骤1-4：合成中间体SM1-5
Figure BDA0003156068350000241
在室温条件下，将SM1-4(3.20g，10.13mmol)，p-TsOH·H2O(1.00g，5.26mmol)，CH(OMe)3(3.20g，30.19mmol)用10ml THF溶解，加热至57℃，搅拌2小时。浓缩，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z):326.12[M+H]+。
1H-NMR(DMSO-d6)δ:1.47(9H,s),5.34(2H,s),7.22(1H,d,J＝7.6Hz),7.31-7.51(5H,m),8.63(1H,d,J＝7.6Hz),9.14(1H,s)。
步骤1-5：合成中间体SM1-6
Figure BDA0003156068350000242
向上一步反应液浓缩物中，加入13ml吗啉，26ml EA。加热至73℃反应，搅拌4小时。浓缩，正相柱纯化，得SM1-6 1.65g，用于下一步反应。ESI-MS(m/z):326.11[M+H]+。
1H-NMR(CDCl3)δ:1.58(9H,s),5.27(2H,s),6.83(1H,d,J＝7.6Hz),7.31-7.45(5H,m),8.28(1H,s),8.51(1H,d,J＝7.6Hz)。
步骤1-6：合成中间体SM1-7
Figure BDA0003156068350000251
将SM1-6(1.65g，5.05mmol)，I2(1.35g，5.30mmol)用10ml无水THF溶解，氮气保护，降温至-60℃。滴加LiHMDS(1.41g，8.41mmol)。保持温度，搅拌4小时。加入1mol/L HCl淬灭多余LiHMDS。旋干，得粗品2.37g，高压制备反相柱纯化，得1.02g SM1-7，用于下一步。ESI-MS(m/z):451.96[M+H]+。
1H-NMR(DMSO-d6)δ:1.45(9H,s),5.38(2H,s),7.32-7.52(5H,m),7.86(1H,s),8.42(1H,s)。
步骤1-7：合成中间体SM1-8
Figure BDA0003156068350000252
将SM1-7(451.20mg，1.01mmol)，SM1-7-1(182.00mg，1.10mmol)，Pd(dppf)2Cl2(73.20mg，0.10mmol)，碳酸钾(184.00mg，1.25mmol)，THF(20ml),H2O(5ml)混合搅拌，氮气保护，75℃搅拌3小时。垫硅藻土过滤，用THF淋洗，旋干，用50ml H2O溶解，50ml EA萃取两次。正相柱纯化，得427.00mg产物。用于下一步反应。ESI-MS(m/z):436.07[M+H]+。
步骤1-8：合成中间体SM1-9
Figure BDA0003156068350000253
将SM1-8(427.00mg，0.98mmol)，甲基磺酸(198.50mg，2.06mmol)，甲苯(1.5ml)，EA(5ml)，混合搅拌2小时。再加入10ml EA，继续搅拌16小时。过滤，得产物湿重418.50mg。用于下一步。ESI-MS(m/z):380.01[M+H]+。
步骤1-9：合成中间体SM1-10
Figure BDA0003156068350000261
将SM1-9(418.50mg，1.10mmol)，EDCI(527.10mg，2.70mmol)，EDCI(527.10mg，2.70mmol)，HOBT(338.50mg，2.50mmol)，TEA(500.00mg，4.95mmol)，DMSO(10ml)搅拌半小时，加入甘氨酸甲酯(340.00mg，2.69mmol)，升温至35℃，搅拌6小时。反应液用50ml饱和NaHCO3溶液和50ml EA萃取3次，用无水硫酸钠干燥EA，旋干，得粗品488.70mg产物，直接用于下一步。ESI-MS(m/z):451.04[M+H]+。
步骤1-10：合成中间体SM1-11
Figure BDA0003156068350000262
将SM1-10粗品(488.70mg，1.09mmol)，Pd/C(57.00mg，10％wt)，MeOH(3ml)，THF(7ml)混合，氢气置换，氢气氛围，加热至35℃，搅拌5小时。垫硅藻土过滤，THF淋洗，旋干，高压制备纯化得产物387.00mg。ESI-MS(m/z):361.04[M+H]+。
步骤1-11：合成中间体SM1-12
Figure BDA0003156068350000263
将SM1-11(250.00mg，0.69mmol)，劳森试剂(841.70mg，2.08mmol)，二甲苯(20ml)，混合，封管加热至120℃，搅拌5小时。旋干，高压制备纯化得产物20.00mg。ESI-MS(m/z):376.97[M+H]+。
步骤十二：合成产物TM-1
Figure BDA0003156068350000271
将SM1-12(20.00mg，0.05mmol)，NaOH(3.20mg，0.08mmol)，THF(4.5ml)，H2O(0.5ml)混合，室温搅拌1小时。用1mol/L HCl调节pH＝6。旋干，高压制备反相柱纯化，冻干得白色固体终产物3.50mg。HPLC纯度：97.39％(220nm)；ESI-MS(m/z):362.98[M+H]+。
实施例2：合成2-[5-丁基-7-羟基[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-硫代甲酰胺基]乙酸(TM-2)步骤2-1：合成中间体SM2-2
Figure BDA0003156068350000272
室温条件下，将SM1-7(530.00mg，1.18mmol)，正丁基硼酸(214.30mg,2.10mmol)，PdCl2(dppf)·DCM(110.80mg,0.12mmol),氧化银(335.50mg,1.45mmol)，碳酸钾(349.6mg,2.53mmol)混合加入至二氧六环(8ml)中，置换氮气。反应加热100℃。反应5h后，反应液过滤，浓缩，硅胶拌样，中压正相柱纯化(采用乙酸乙酯在石油醚中从0到30分钟浓度由0％升至100％的梯度)，产物峰在45％(EA in PE)被收集。浓缩，得到390mg棕色油状液体(收率：86.75％)。ESI-MS(m/z):382.14[M+H]+。
1H-NMR(DMSO-d6)δ:0.92(t,3H,J＝7.7Hz),1.27-1.38(m,2H),1.49(s,9H),1.72-1.83(m,2H),3.10(t,2H,J＝7.7Hz),5.39(s,2H),7.24(s,1H),7.33-7.52(m,5H),8.38(s,1H)。
步骤2-2：合成中间体SM2-3
Figure BDA0003156068350000281
室温条件下，将SM2-2(339.50mg，0.89mmol)溶于甲苯(2.6ml)与EA(0.90ml)的混合溶剂中，向其中滴加甲磺酸(0.22ml)与EA(0.22ml)的混合溶液。搅拌3h后，过滤，取滤饼。将固体溶于DMF(2ml)中，向其中滴加H2O(3ml)。将反应放入-20℃冰箱中过夜。过滤，取固体，减压旋干。得到粗品350.00mg白色固体，直接用于下一步反应。
1H-NMR(DMSO-d6)δ:0.92(t,3H,J＝7.7Hz),1.28-1.41(m,2H),1.72-1.81(m,2H),2.33(s,1.5H),3.13(t,2H,J＝7.7Hz),5.48(s,2H),7.33-7.46(m,4H),7.49-7.54(m,2H),8.74(s,1H)。
步骤2-3：合成中间体SM2-4
Figure BDA0003156068350000282
室温条件下，将SM2-3(350.00mg,1.08mmol),HOBt(368.30mg,2.73mmol),EDCI(516.30mg,2.69mmol),TEA(1.1ml)溶于DMSO(7ml)中。反应10分钟后，加入甘氨酸甲酯盐酸盐(332.8mg,2.64mmol)。向反应液中加入H2O(40ml)和EA(50ml)，萃取分层，取有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到300mg淡黄色油状液体。粗品进行中压正相制备纯化(采用乙酸乙酯在石油醚中从0到30分钟浓度由0％升至100％的梯度)，产物峰在70％(EA in PE)被收集。浓缩后得到168.00mg棕色油状液体。ESI-MS(m/z):397.10[M+H]+。
步骤2-4：合成中间体SM2-5
Figure BDA0003156068350000291
室温条件下，将SM2-4(167.60mg,0.42mmol)溶于MeOH/THF(8ml,1:3)混合溶液中。加入钯碳(62.00mg)，置换氢气。1.5h后，停止反应。过滤，取滤液，浓缩，得到108.70mg棕色油状液体(收率：84.58％)。ESI-MS(m/z):307.11[M+H]+。
步骤2-5：合成中间体SM2-6
Figure BDA0003156068350000292
室温条件下，将SM2-5(108.70mg,0.36mmol)，劳森试剂(464.60mg,1.15mmol)和二甲苯(8ml)充分混合于10ml封管中，加热120℃。反应4h后，反应液减压旋蒸，将二甲苯充分旋干。残留物溶于DMF(6ml)中，过滤后，高压反相制备纯化(采用乙腈在0.1％TFA的水中从10到40分钟浓度由60％升至95％的梯度)，产物峰在87％(ACN in H2O)被收集，浓缩，得到40.00mg白色固体(收率：34.51％)。ESI-MS(m/z):323.06[M+H]+。
步骤2-6：合成产物TM-2
Figure BDA0003156068350000293
室温条件下将SM2-6(40.00mg，0.12mmol)溶于THF(6ml)中，之后加入NaOH(20.00mg,0.50mmol)在H2O(0.5ml)的溶液。反应3h后，反应液浓缩，溶于DMF(5ml)并加入5滴TFA中和。过滤后，采用高压反相制备纯化(采用乙腈在0.1％TFA的水中从10到30分钟浓度由50％升至70％的梯度)，产物峰在65％(ACN in H2O)被收集，浓缩，得到5.90mg白色固体(收率：15.96％)。HPLC纯度:92.58％(254nm)；97.92％(220nm)；ESI-MS(m/z):309.05[M+H]+
实施例3：合成2-{5-(2-苯乙基)-7-羟基[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-硫代甲酰胺基}乙酸(TM-3)
步骤3-1：合成中间体SM3-2
Figure BDA0003156068350000301
室温条件下，将SM1-7(360.00mg，0.80mmol)，苯乙炔(0.20ml,1.82mmol)，PdCl2(PPh3)(62.60mg,0.09mmol),碘化亚铜(20.60mg,0.11mmol)，三乙胺(0.4ml)混合加入至甲苯(3ml)中，置换氮气。常温反应2h后，反应液中加入EA(100ml)，用5％(w/w)的氨水(30ml)洗涤两次，饱和氯化铵溶液(30ml)洗一次，饱和食盐水(30ml)洗一次。有机相干燥，浓缩，硅胶拌样，中压正相柱纯化(采用乙酸乙酯在石油醚中从0到30分钟浓度由0％升至100％的梯度)，产物峰在30％(EA in PE)被收集。浓缩，得到225.00mg棕色油状液体(收率：66.18％)。ESI-MS(m/z):426.10[M+H]+。
1H-NMR(DMSO-d6)δ:1.47(9H,s),5.40(2H,s),7.36(1H,tt,J＝7.1,1.8Hz),7.41-7.45(2H,m),7.47(2H,dt,J＝7.0,1.9Hz),7.50-7.58(3H,m),7.73(2H,dd,J＝7.7,1.6Hz),7.75(1H,s),8.51(1H,s)。
步骤3-2：合成中间体SM3-3
Figure BDA0003156068350000302
室温条件下，将SM3-2(225.00mg，0.53mmol)溶于甲苯(1.7ml)与EA(0.56ml)的混合溶剂中，向其中滴加甲磺酸(0.14ml)与EA(0.14ml)的混合溶液。搅拌3h后，过滤，取滤饼。0℃下，将固体溶于DMF(2ml)中，向其中滴加H2O(3ml)。将反应放入4℃冰箱中过夜。过滤，取固体，减压旋干。得到粗品133.20mg白色固体，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z):370.09[M+H]+。
1H-NMR(DMSO-d6)δ:5.44(2H,s),7.36(1H,tt,J＝7.4,2.1Hz),7.44(2H,t,J＝7.3Hz),7.48(2H,d,J＝7.5Hz),7.52-7.61(3H,m),7.71(2H,dd,J＝6.7,1.9Hz),7.77(1H,s),8.52(1H,s),13.61(1H,s)。
步骤3-3：合成中间体SM3-4
Figure BDA0003156068350000311
室温条件下，将SM3-3(133.20mg,0.36mmol),HOBt(123.30mg,0.91mmol),EDCI(185.50mg,0.97mmol),TEA(0.25ml)溶于DMSO(5ml)中。反应30分钟后，加入甘氨酸甲酯盐酸盐(123.40mg,0.98mmol)。反应液加入EA(50ml)，用5％(w/w)碳酸氢钠溶液(10ml)和水(10ml)洗涤，饱和食盐水(20ml)洗涤，分层。有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗品。粗品进行中压反相制备纯化(采用甲醇在含有0.1％TFA的水中从0到40分钟浓度梯度由0％升至100％)，产物峰在90％(MeOH in H2O)被收集。浓缩后得到131.90mg棕色油状液体。ESI-MS(m/z):441.13[M+H]+。
步骤3-4：合成中间体SM3-5
Figure BDA0003156068350000312
在室温条件下将SM3-4(40.00mg,0.09mmol)溶于THF/MeOH(1:1，3ml)溶液中，加入钯碳(30.00mg)，置换H2。室温下反应2h。反应液过滤，浓缩，得到36.00mg白色固体。ESI-MS(m/z):355.07[M+H]+。
步骤3-5：合成中间体SM3-6
Figure BDA0003156068350000321
在室温条件下将SM3-5(20.00mg,0.06mmol)溶于二甲苯(2ml)溶液中，加入劳森试剂(46.00mg，0.11mmol)。120℃下反应2h。反应液浓缩，溶于DMF(1.5ml)，反相柱纯化后得到3.60mg白色固体。ESI-MS(m/z):371.01[M+H]+。
步骤3-6：合成产物TM-3
Figure BDA0003156068350000322
在室温条件下将SM3-6(3.00mg,0.01mmol)溶于THF(2ml)溶液中，滴加NaOH(8.00mg,0.20mmol)水溶液，室温下反应2h。反应液浓缩，溶于DMF(1.5ml)，反相柱纯化后得到2.04mg白色固体。HPLC纯度:100％(254nm)；96.33％(220nm)；ESI-MS(m/z):357.07[M+H]+；
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.87(s,1H),12.68(s,1H),8.65(s,1H),7.50–7.11(m,6H),6.86(s,1H),4.57(s,2H),3.14(m,2H),1.37–1.09(m,2H).
实施例4：合成2-{5-[2-(4-氟苯基)乙基]-7-羟基[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-硫代甲酰胺基}乙酸(TM-4)
步骤4-1：合成中间体SM4-2
Figure BDA0003156068350000323
室温条件下，将SM1-7(202.30mg，0.45mmol)，对氟苯乙炔(134.40mg,1.12mmol)，PdCl2(PPh3)(32.60mg,0.05mmol),碘化亚铜(21.80mg,0.11mmol)，三乙胺(267.00mg,2.6mmol)混合加入至甲苯(4ml)中，置换氮气。常温反应5.5h后，反应液中加入EA(100ml)，用5％(w/w)的氨水(30ml)洗涤两次，饱和氯化铵溶液(30ml)洗一次，饱和食盐水(30ml)洗一次。有机相干燥，浓缩，硅胶拌样，中压正相柱纯化(采用乙酸乙酯在石油醚中从0到30min浓度由0％升至100％的梯度)，产物峰在70％(EA in PE)被收集。浓缩，得到195.10mg棕色油状液体(收率：98.07％)。ESI-MS(m/z):444.11[M+H]+。
步骤4-2：合成中间体SM4-3
Figure BDA0003156068350000331
室温条件下，将SM4-2(195.10mg，0.44mmol)溶于甲苯(1.5ml)与EA(0.50ml)的混合溶剂中，向其中滴加甲磺酸(0.12ml)与EA(0.12ml)的混合溶液。搅拌1h后，将反应放入4℃冰箱中过夜。过滤，取滤饼。0℃下，将固体溶于DMF(1.7ml)中，向其中滴加H2O(2.6ml)。搅拌3h后，过滤，取固体，减压旋干。得到粗品120.30mg白色固体，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z):388.05[M+H]+。
步骤4-3：合成中间体SM4-4
Figure BDA0003156068350000332
室温条件下，将SM4-3(120.20mg,0.31mmol),HOBt(106.60mg,0.79mmol),EDCI(149.20mg,0.78mmol),TEA(0.3ml)溶于DMSO(5ml)中。反应20分钟后，加入甘氨酸甲酯盐酸盐(107.60mg,0.85mmol)。反应液浓缩，得到粗品。粗品进行中压反相制备纯化(采用乙腈在水中从0到40min浓度由0％升至100％的梯度)，产物峰在40％(ACN in H2O)被收集。浓缩后得到50.60mg棕色油状液体。ESI-MS(m/z):459.10[M+H]+。
步骤4-4：合成中间体SM4-5
Figure BDA0003156068350000341
室温条件下，将SM4-4(43.60mg,0.10mmol)溶于MeOH/THF(8ml,1:3)混合溶液中。加入钯碳(24.00mg)，置换氢气。1h后，停止反应。过滤，取滤液，浓缩，得到40.60mg棕色油状液体粗品。ESI-MS(m/z):373.05[M+H]+。
步骤4-5：合成中间体SM4-6
Figure BDA0003156068350000342
室温条件下，将SM4-5(21.40mg,0.06mmol)，劳森试剂(56.60mg,0.14mmol)和二甲苯(1.2ml)充分混合于10ml封管中，加热120℃。反应4h后，反应液减压旋蒸，将二甲苯充分旋干。残留物溶于DMSO(5ml)中，过滤后，高压反相制备纯化(采用乙腈在0.1％TFA的水中从10到40分钟浓度由65％升至95％的梯度)，产物峰在82％(ACN in H2O)被收集，浓缩，得到14.30mg白色固体(收率：64.17％)。ESI-MS(m/z):389.01[M+H]+。
步骤4-6：合成产物TM-4
Figure BDA0003156068350000343
室温条件下将SM6(11.00mg，0.03mmol)溶于THF(3ml)中，之后加入NaOH(5.00mg,0.11mmol)在H2O(0.5ml)的溶液。反应20min后，反应液浓缩，溶于DMF(5ml)并加入3滴TFA中和。过滤后，采用高压反相制备纯化(采用乙腈在0.1％TFA的水中从10到30min浓度由70％升至80％的梯度)，产物峰在75％(ACN in H2O)被收集，浓缩，得到1.20mg白色固体(收率：11.27％)。HPLC纯度:96.09％(254nm)；96.53％(220nm)；ESI-MS(m/z):375.06[M+H]+
实施例5：合成2-{5-(4-吡啶基)-7-羟基[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶-8-硫代甲酰胺基}乙酸(TM-5)
步骤5-1：合成中间体SM5-2
Figure BDA0003156068350000351
将SM1-7(451.20mg，1.01mmol)，SM5-1-1(135.50mg，1.10mmol)，Pd(OAc)2(33.60mg，0.15mmol)，dppf(55.10mg，0.11mmol)，碘化亚铜(195.00mg，1.01mmol)，碳酸铯(1.30g，3.99mmol)，DMF(25ml),H2O(1ml)混合搅拌，氮气保护，100℃搅拌4小时。垫硅藻土过滤，用THF淋洗，旋干，用50ml H2O溶解，50ml EA萃取两次。高压制备反相柱纯化，得226.00mg产物。ESI-MS(m/z):403.12[M+H]+。
步骤5-2：合成中间体SM5-3
Figure BDA0003156068350000352
将SM5-2(226.00mg，0.56mmol)，甲基磺酸(108.80mg，1.13mmol)，甲苯(1.5ml)，EA(5ml)，混合搅拌2小时。再加入10ml EA，继续搅拌16小时。过滤，得产物湿重167.50mg。ESI-MS(m/z):347.06[M+H]+。
步骤5-3：合成中间体SM5-4
Figure BDA0003156068350000361
将SM5-3(167.50mg，0.48mmol)，EDCI(253.30mg，1.29mmol)，HOBt(162.10mg，1.20mmol)，TEA(243.00mg，2.40mmol)，DMSO(10ml)搅拌半个小时，加入甘氨酸甲酯(163.90mg，1.30mmol)，升温至35℃，搅拌6小时。反应液用50ml饱和NaHCO3溶液和50ml EA萃取3次，用无水硫酸钠干燥EA，旋干，得粗品333.30mg产物。ESI-MS(m/z):418.03[M+H]+。
步骤5-4：合成中间体SM5-5
Figure BDA0003156068350000362
将SM5-4粗品(333.30mg，0.80mmol)，Pd/C(32.50mg，10％wt)，MeOH(3ml)，THF(7ml)混合，氢气置换，氢气氛围，室温搅拌5小时。垫硅藻土过滤，THF淋洗，旋干，高压制备纯化得产物212.00mg。用于下一步。ESI-MS(m/z):328.07[M+H]+。
步骤5-5：合成中间体SM5-6
Figure BDA0003156068350000363
将SM5-5(212.00mg，0.65mmol)，劳森试剂(785.70mg，1.94mmol)，二甲苯(20ml)，混合，封管加热至120℃，搅拌5小时。旋干，高压制备纯化得产物10.90mg。ESI-MS(m/z):344.04[M+H]+。
步骤5-6：合成产物TM-5
Figure BDA0003156068350000371
将SM5-6(10.90mg，0.03mmol)，NaOH(3.20mg，0.08mmol)，THF(4.5ml)，H2O(0.5ml)混合，室温搅拌1小时。用1mol/L HCl调节pH＝6。旋干，高压制备反相柱纯化两次，旋干得棕色固体终产物1.00mg。HPLC纯度:100％(254nm)；98.12％(220nm)；ESI-MS(m/z):330.03[M+H]+。
接着，解释本发明化合物或其药学上可接受的盐或其溶剂化物的人PHD抑制活性的评价方法。
实施例6：人PHD抑制活性的测量
i)人PHD2的表达和提纯
人PHD2是在昆虫细胞(Sf9细胞)中表达的。将FLAG标记插入至人PHD2注册序列(NM_022051)的翻译区域中的N-末端，然后该序列被引入pVL1393载体中，并且该序列得到证实。该载体和杆状病毒共同转染到Sf9中，然后从Sf9中分离人PHD2表达杆状病毒。使用该病毒，制备人PHD2表达细胞。将细胞于27℃下培养72小时之后，添加含有各种蛋白酶抑制剂的细胞裂解溶液，将细胞通过超声波处理来破碎。将细胞裂解液流入填充有ANTI-FLAG M2Affinity Gel Freezer Safe(SIGMA)的柱中，洗涤，对添加了N-末端FLAG标记的人PHD2进行洗脱和收集。提纯产品通过使用anti-FLAG抗体和anti-PHD2抗体由Western-Blotting证实是人PHD2酶。
ii)人PHD抑制活性的测量
对于人PHD2酶活性，由TR-FRET(时间分辨荧光能量共振转移)方法来测量在作为底物的以HIF-1α的序列为基础的部分肽的19个残基中所含的脯氨酸残基的羟基化。
该酶和底物各自用含有50μM硫酸铁、120mM NaCl、0.1％BSA、0.1mM抗坏血酸、10μM2-酮戊二酸、0.2mM CHAPS的50mM tris-盐酸盐缓冲剂(pH 7.5)稀释，并且试验化合物用二甲亚砜(DMSO)稀释。
将试验化合物和底物溶液添加到96孔板中。通过将人PHD2酶溶液(最终浓度1nM)添加到反应体系中来开始反应。在25℃下孵育30分钟后，添加含有EDTA的终止液(stopsolution)，然后添加含有铕(Eu)和Xlent的VBC复合物溶液，然后由时间分辨荧光光谱法定量分析羟基化脯氨酸残基的量。测量在各孔中的时间分辨荧光，然后以酶非添加孔(non-addition well)和试验化合物非添加孔的值为基础计算试验化合物的人PHD抑制活性(％)。各化合物的人PHD抑制活性通过IC50(nM)显示于下表1中。
表1化合物对PHD2抑制活性(IC50)
Figure BDA0003156068350000381
Figure BDA0003156068350000391
Figure BDA0003156068350000401
实施例7：化合物对细胞色素P450氧化酶(CYP450)的抑制
药物的体内代谢过程可分为I相反应(分解代谢)及II相反应(合成代谢)。I相反应包括氧化、还原和水解反应，主要由细胞色素P450(CYP450)酶催化。CYP450酶主要分布在肝脏，故又称作肝药酶。CYP450酶的诱导和抑制具有重要的临床意义，可导致临床上的药物相互作用。抑制或诱导CYP酶将有可能产生各种严重的副作用，因此，CYP抑制、诱导试验是新药研究必不可少的一环。因此，对CYP450的抑制实验常作为评价药物成药性的安全性指标。
将含有细胞色素P450的人肝微粒体(0.253mg/mL蛋白)与测试化合物(0.05-50μM)、CYPs底物(10μM对乙酰氨基酚、5μM双氯芬酸、30μM美芬妥因、5μM氢溴酸右美沙芬、2μM米达唑仑)、1.0mM NADP在37℃孵育10分钟。将萘黄酮、磺胺苯吡唑、N-3-苄基尼凡、奎尼定、酮康唑作作为参比抑制剂。结果如表2所示。
表2化合物的细胞色素P450 CYP同工酶抑制活性(IC50)
Figure BDA0003156068350000402
Figure BDA0003156068350000411
由表2的结果可知，本发明制备的大多数化合物对细胞色素P450氧化酶的抑制IC50值均大于10μM。因此，此类化合物有望在体内不产生CYP抑制引起的各种毒性。
实施例8：hERG抑制实验
在心肌细胞中，hERG基因编码叫钾通道蛋白(Kv 11.1)，该蛋白介导一种延迟整流钾电流(IKr)。抑制hERG会诱发获得性QT间期延长综合征(LQTS)，导致炎症的心律失常。目前，检测化合物对hERG钾通道的作用已经临床前评价化合物心脏安全性的关键步骤，也是美国FDA和欧洲EMEA等管理机构要求的新药批报必备资料，以此规避心脏毒性风险。将一定浓度的待测化合物暴露于稳定表达hERG的HEK 293细胞，通过测定化合物对细胞在一定电压下的电流影响来确定化合物对hERG的抑制作用。
实验过程：
a.细胞培养：稳定表达hERG的HEK293细胞用DMEM培养基(10％FBS,0.1mM NEAA,25mM HEPES,100U/mL Penicillin-Streptomycin,5μg/mL Blasticidin and 400μg/mLGeneticin)培养。试验前，将细胞安5×105/皿接种到6cm细胞培养皿中，并用含有μg/mL f脱氧土霉素的培养基培养48小时。
b.药物配置：将化合物用DMSO溶解到10mM的溶液，在用DMSO按1:3的比例稀释成10、3.33、1.11、0.37mM，测试前buffer稀释到30,10、3.33、1.11、0.37μM成为工作液。阳性化合物为Dofetilide，工作液中的浓度为150、50、16.67、5.56、1.85nM。
c.测试：将培养皿放于显微镜的载物台上，在x10物镜下选择合适的细胞，并将电极对准细胞，转换到x40物镜后利用机械手的精细控制将电极靠近细胞表面。通过电极座的侧孔施加温和的吸力，形成一个千兆欧姆的密封。使用Cfast去除与阶跃电压相一致的电容电流，施加重复、短暂、强力的吸力，直到膜片破裂，获得完整的单个细胞的结构。此时将膜电位设置为-60mV，以确保不打开hERG通道。然后应该使用放大器上的Cslow来消除电容电流的峰值。设置保持电压为-90mv，持续500ms；记录在20khz和过滤器在10khz的电流，测试在-80mV,500ms的泄漏电流。在+30mv处去极化4.8s，然后将电压恢复到-50mv，持续5.2s，消除失活，观察失活尾流。用最大尾流大小确定hERG电流幅值。记录120s的电流以评估电流稳定性，只有记录参数高于阈值的稳定细胞才能继续给药。对细胞进行载体控制，建立基线。一旦发现hERG电流稳定了5分钟，就使用工作溶液，在测试化合物存在下记录大约5分钟的hERG电流以达到稳定状态，然后捕获5次扫描，在剂量反应试验中，从低浓度到高浓度，将5个剂量的试验化合物累积应用于细胞。为了保证培养细胞的良好性能和操作性，阳性对照组Dofetilide用5个剂量对同一批细胞进行检测。
d.数据分析：
电流抑制率的计算公式如下:
Figure BDA0003156068350000421
用Graphpad Prism 8.0绘制以％为抑制率的测试化合物的剂量响应曲线，并将数据拟合成具有可变斜率的s型剂量响应曲线。上述实验得到结果如表3所示。
表3化合物的hERG抑制活性(IC50)
Figure BDA0003156068350000422
Figure BDA0003156068350000431
由表2的结果可知，本发明制备的大多数化合物对hERG抑制IC50值均大于30μM，无明显抑制活性，心脏毒性风险低。
实施例9：血浆蛋白结合率实验
正常情况下，药物以一定的比率与血浆蛋白结合，在血浆中常同时存在结合型与游离型。而只有游离型药物才具有药物活性。高结合限制了组织中游离药物的浓度，降低了药物从体内的清除，延长了药物的半衰期。低结合的药物组织中游离药物的浓度高，药物从体内的清除快，作用时间短，药效波动性大。通过将一定浓度的待测化合物与不同种属动物的血浆蛋白孵育，测试孵育前后游离的化合物，确定化合物的血浆蛋白结合率。
实验过程
a.工作血清配置：将化合物(阳性对照:Warfarin)用DMSO溶解为10mM的浓度，再用DMSO稀释到400μM，用血清再稀释200倍。
b.样品检测：将50μL工作血清加入到样品收集板中，以缓冲液为空白对照，立即加入等体积的透析液。在试验化合物和对照化合物的T0样品中加入停止溶液。将平板密封并以800转/分的速度摇晃10分钟。然后将这些T0样品与其他透析后样品一起储存在2-8℃，等待进一步处理。将150μL工作血清加入到透析槽的供体侧，并将150μL透析缓冲液装载到透析槽的受者侧，然后，在37±1℃、含5％二氧化碳的加湿培养箱中，以大约100rpm的转速旋转培养板4小时。第二天。在透析结束时，从透析装置的缓冲侧和血浆侧取50μL的样品等分到新的96孔板(样品收集板)中。在每个样品中加入等量的相对空白基质(缓冲液或血浆)，以达到100μL的最终体积，每孔中血浆与透析缓冲液的体积比为1:1(v:v)。所有样品均经蛋白质沉淀处理后进行LC/MS/MS分析。研究记录中详细描述了样品的处理方法。
c.数据处理：
％Unbound＝100×F/T，
％Bound＝100-％Unbound，
％Recovery＝100×(F+T)/T0
其中，F为透析膜接收测的化合物浓度，T为透析膜供体侧化合物浓度。T0为零时的测试化合物浓度。
实验结果如表4所示。
表4化合物的血浆蛋白结合率
Figure BDA0003156068350000441
由表4的结果可知，本发明制备的大多数化合物的血浆蛋白结合率在不同种属中均大于70％。
实施例10：血浆稳定性实验
血浆中含有多种水解酶，具有某些官能团的化合物可以在血液中分解。不稳定化合物常具有较高的清除率和较短的半衰期，导致体内药代动力学(PK)差，药理学性能令人失望。通过将一定浓度的待测化合物与不同种属动物的血浆孵育，测试孵育前后血浆中化合物的量，计算化合物的剩余百分比，确定化合物的稳定性。
实验过程
a.孵育：用DMSO将化合及阳性对照(Propantheline bromide)稀释到1mM浓度，再用MeOH/H2O稀释到100μM，取2μl加入到98μl血清中，并与37℃水浴，于0、10、30、60、120分钟取样检测。
b.检测：向100μl孵育的样品加入400μl的终止液(200ng/mL tolbutamide and200ng/mL Labetalol in 50％ACN/MeOH)，混合均匀后，4,000rpm离心10分钟。取50μl上清与100μl超纯水混合后800rpm离心10分，然后用LC-MS/MS检测化合物含量。
c.数据数据处理：按照下面公式计算化合物的剩余百分比：
％Remaining＝100x(PAR at appointed incubation time/PAR at T0 time)
其中，PAR为检测样品的峰面积。
上述实验得到结果如表5所示。
表5化合物的血浆稳定性
Figure BDA0003156068350000451
Figure BDA0003156068350000461
由表5的结果可知，本发明制备的化合物的血浆稳定性在不同种属中均表现良好，具有较好的成药潜力。
以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种具有式Ⅰ结构的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003543381740000011
其中：
n的取值为0、1、2、3；
X为S；
R1a为COOH，R1b为H；
R2为C5-10芳基、5-10元杂芳基、C1-8烷基，其中所述的C5-10芳基、5-10元杂芳基、C1-8烷基任选的进一步被一个或多个选自C5-10芳基、C3-8环烷基、卤素、羟基、氰基、三氟甲基的取代基所取代；当C1-8烷基被C5-10芳基取代时，C5-10芳基上为取代的或者未取代的，当被取代时，取代基团可任选的为一个或多个卤素、C3-8环烷基、氰基、三氟甲基。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，其中，所述R2选自：
-H、
Figure FDA0003543381740000012
Figure FDA0003543381740000013
其中Y和Z分别独立的选自氢、卤素、羟基、氰基、C1-8烷基、C3-8环烷基；
R1a、R1b、n如权利要求1所定义。
3.根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物选自：
Figure FDA0003543381740000021
Figure FDA0003543381740000031
Figure FDA0003543381740000041
4.一种药物组合物，其包含如权利要求1中要求保护的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体。
5.一种药物组合物，其包含如权利要求1中要求保护的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的佐剂、稀释剂或载体以及任选一种或多种其它治疗剂。
6.根据权利要求1-3任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求4-5任一项所述的药物组合物在制备用于治疗与HIF介导或相关疾病的药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其中所述疾病包括贫血、缺血、局部缺血、缺氧、代谢障碍、伤口愈合。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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US20200017492A1 (en) * 2009-07-17 2020-01-16 Japan Tobacco Inc. Triazolopyridine compound, and action thereof as prolyl hydroxylase inhibitor or erythropoietin production-inducing agent
ME01858B (me) * 2009-07-17 2014-12-20 Japan Tobacco Inc Jedinjenje triazolopiridina i njegovo dejstvo kao inhibitora prolil hidroksilaze i induktora proizvodnje eritropoetina
KR20210048589A (ko) * 2009-07-17 2021-05-03 니뽄 다바코 산교 가부시키가이샤 트리아졸로피리딘 화합물, 그리고 그 프롤릴 수산화효소 저해제 및 에리트로포이에틴 생성 유도제로서의 작용
JP2018039733A (ja) * 2014-12-22 2018-03-15 株式会社富士薬品 新規複素環誘導体
JP2018035112A (ja) * 2016-09-01 2018-03-08 公立大学法人大阪市立大学 抗癌剤の抗腫瘍効果の増強剤、癌治療剤、及び癌治療用医薬組成物。
RU2752384C2 (ru) * 2016-11-25 2021-07-26 Джапан Тобакко Инк. Способ получения триазолопиридинового соединения

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