CN113368139A - 一种具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物及其制备方法和应用，所述具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物包括动物双歧杆菌乳亚种和嗜酸乳杆菌。本发明创造性地开发了一种新的预防、缓解或治疗肠易激综合征的策略，该微生物复合物能够显著改善腹泻型肠易激综合征患者的肠道运转功能；显著降低内脏高敏感性；显著降低血清炎症因子：TNF‑ɑ、IL‑6和IL‑17水平，显著提高血清炎症因子IL‑10水平；显著降低血清5‑HT和SP水平；显著提高结肠SERT水平。该微生物组合物在制备预防、治疗、缓解腹泻型肠易激综合征的药物、食品或保健品中，具有很大的应用前景。

Description

一种具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物及其制备方 法和应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，涉及一种具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物及其制备方法和应用，具体涉及一种具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物及其制备方法和在制备预防和/或治疗肠易激综合征的药物、缓解肠易激综合征的保健食品、缓解肠易激综合征的固体饮料中的应用。
背景技术
肠易激综合征(irritable bowel syndrome，IBS)是最常见的功能性胃肠病之一，以腹痛或腹部不适伴排便习惯改变和/或大便性状异常为特征。流行病学研究显示，在世界范围内约15-20％的成人受其影响。IBS一般不会威胁患者的生命安全，但会严重干扰患者的日常生活。目前，随着高通量测序技术的发展，大量研究发现肠道菌失衡，特别是双歧杆菌失衡，在IBS的发生发展中具有重要作用。双歧杆菌能够抵抗肠道病原菌的定植和入侵、增强肠道上皮的屏障作用，其代谢产物还能够增强肠道的防御作用。在IBS患者肠道内，双歧杆菌明显减少，这说明增加肠道双歧杆菌数量在治疗IBS中具有积极作用。
IBS通常分为四类：(1)便秘型IBS(constipation-predominant IBS，IBS-C)；(2)腹泻型IBS(diarrhoea-predominant IBS，IBS-D)；(3)混合型IBS(mixed-type IBS，IBS-M)；(4)未定型IBS(unsubtyped IBS)。IBS的分类没有严格的标准，主要是根据各类病症的严重程度，因此经常出现交替情况，在我国腹泻型较为多见。IBS疾病的发病机制尚不清楚，目前的研究认为IBS疾病是由多种因素综合作用的结果，这些因素包括心理变化、肠道能动性和免疫功能的改变、肠道敏感性的增加、神经递质失衡等。IBS疾病的治疗有饮食干涉、药物治疗等，其中饮食干涉主要针对轻症患者，而药物治疗主要针对严重患者，常用的治疗药物有止泻剂、离子通道阻滞剂和微生态制剂等，其中止泻剂、离子通道阻滞剂具有较大的不良反应。因此，开发更多的能够有效预防或治疗肠易激综合征的策略是很有必要的，使用药物治疗肠易激综合征并不排除用于抗击这种疾病的其他措施的重要性。肠道菌群对于维持肠道消化、营养、免疫、内分泌功能具有重要意义，还影响机体的生长发育、代谢、情绪反应等方面。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物及其制备方法和应用，具体提供一种具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物及其制备方法和在制备预防和/或治疗肠易激综合征的药物、缓解肠易激综合征的保健食品、缓解肠易激综合征的固体饮料中的应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物，所述具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物包括动物双歧杆菌乳亚种和嗜酸乳杆菌。
本发明创造性地开发了一种新的预防、缓解或治疗肠易激综合征的策略，即将动物双歧杆菌乳亚种和嗜酸乳杆菌组成微生物复合物，其中动物双歧杆菌(Bifidobacteriumanimalis)对人体而言，相对健康，且不易产生不良反应；嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)也是益生菌的一种，因此，其对人体而言，健康且无毒副作用。
研究表明，该微生物复合物能够显著改善腹泻型肠易激综合征患者的肠道运转功能；显著降低腹泻型肠易激综合征患者的内脏高敏感性；显著降低腹泻型肠易激综合征患者的血清炎症因子：TNF-ɑ、IL-6和IL-17水平，显著提高腹泻型肠易激综合征患者的血清炎症因子IL-10水平；显著降低腹泻型肠易激综合征患者的血清5-HT和SP水平；显著提高腹泻型肠易激综合征患者的结肠5-羟色胺转运体(serotonin transporter,SERT)水平。因此，该微生物组合物在制备预防、治疗、缓解腹泻型肠易激综合征的药物、食品或保健品中，具有很大的应用前景。
优选地，所述动物双歧杆菌乳亚种或嗜酸乳杆菌在所述微生物复合物中的活菌数均不低于1×106CFU/mL或1×106CFU/g，例如1×106CFU/mL(CFU/g)、2×106CFU/mL(CFU/g)、3×106CFU/mL(CFU/g)、5×106CFU/mL(CFU/g)、7×106CFU/mL(CFU/g)、8×106CFU/mL(CFU/g)、1×107CFU/mL(CFU/g)、5×107CFU/mL(CFU/g)、1×108CFU/mL(CFU/g)等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述动物双歧杆菌乳亚种与嗜酸乳杆菌的活菌数之比为1:(0.5-2)，例如1:0.5、1:0.6、1:0.7、1:0.8、1:1、1:1.2、1:1.4、1:1.5、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述动物双歧杆菌乳亚种命名为动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacteriumanimalis subsp.lactis)BLa80菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2018年3月5日，保藏编号为CGMCC No.15410，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
优选地，所述嗜酸乳杆菌命名为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)LA85菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2020年7月20日，保藏编号为CGMCC No.1.12735，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物的制备方法，所述制备方法包括：
将动物双歧杆菌乳亚种菌株和嗜酸乳杆菌菌株分别接种于培养基中进行培养，得到培养液；将培养液离心，得到菌体；将菌体用冻干保护剂重悬，得到重悬液；将重悬液冻干，得到动物双歧杆菌乳亚种冻干菌剂和嗜酸乳杆菌冻干菌剂；将两种冻干菌剂混合，得到所述具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物。
本发明所涉及的微生物复合物的制备工艺简单，适合工业化大规模生产，具有显著的实用性。
优选地，所述菌株的接种质量为培养基质量的2-4％，例如2％、2.5％、3％、3.5％、4％等，该数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述培养基的配方包括：蛋白胨5-15g/L、牛肉膏5-15g/L、葡萄糖15-25g/L、乙酸钠1-3g/L、酵母粉3-7g/L、柠檬酸氢二铵1-3g/L、K2PO4·3H2O1-4g/L、MgSO4·7H2O0.05-0.15g/L、MnSO4 0.04-0.06g/L、吐温80 0.5-1.5mL/L、半胱氨酸盐酸盐0.4-0.6g/L。
优选地，所述培养在36-38℃(例如36℃、36.5℃、37℃、37.5℃、38℃等)下培养12-24h(例如12h、14h、15h、17h、18h、20h、22h、24h等)，上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述冻干保护剂的配方包括：脱脂奶粉80-120g/L(例如80g/L、90g/L、100g/L、110g/L、120g/L等)、海藻糖80-120g/L(例如80g/L、90g/L、100g/L、110g/L、120g/L等)、L-谷氨酸钠8-12g/L(例如8g/L、9g/L、10g/L、11g/L、12g/L等)，上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述冻干保护剂与菌体的质量比为(1-3):1，例如1:1、1.5:1、2:1、2.5:1、3:1等，上述数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
第三方面，本发明提供一种如第一方面所述的具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物在制备预防和/或治疗肠易激综合征的药物中的应用。
优选地，所述药物的剂型包括混悬剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、片剂、乳剂、溶液剂、滴丸剂、注射剂、栓剂、灌肠剂、气雾剂、贴剂或滴剂中的任意一种。
优选地，所述药物还包括药学上可接受的辅料；所述辅料包括载体、稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、pH调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。
所述至少两种的组合例如稀释剂和赋形剂的组合、粘合剂和润湿剂的组合、乳化剂和助溶剂的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
第四方面，本发明提供一种如第一方面所述的具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物在制备缓解肠易激综合征的保健食品中的应用。
第五方面，本发明提供一种如第一方面所述的具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物在制备缓解肠易激综合征的固体饮料中的应用。
第六方面，本发明提供一种治疗肠易激综合征的方法，所述方法包括：给予肠易激综合征患者治疗剂量的由第一方面所述具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物制得的预防和/或治疗肠易激综合征的药物。
第七方面，本发明提供一种如第一方面所述具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物在制备以非诊断和/或治疗疾病为目的的降低血清炎症因子TNF-ɑ、IL-6或IL-17的水平的药物中的应用。
第八方面，本发明提供一种如第一方面所述具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物在制备以非诊断和/或治疗疾病为目的的提高血清炎症因子IL-10的水平的药物中的应用。
第九方面，本发明提供一种如第一方面所述具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物在制备以非诊断和/或治疗疾病为目的的降低血清5-HT和SP水平的药物中的应用。
第十方面，本发明提供一种如第一方面所述具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物在制备以非诊断和/或治疗疾病为目的的提高结肠SERT水平的药物中的应用。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明创造性地开发了一种新的预防、缓解或治疗肠易激综合征的策略，即将动物双歧杆菌乳亚种和嗜酸乳杆菌组成微生物复合物，研究表明，该微生物复合物能够显著改善腹泻型肠易激综合征患者的肠道运转功能；显著降低腹泻型肠易激综合征患者的内脏高敏感性；显著降低腹泻型肠易激综合征患者的血清炎症因子：TNF-ɑ、IL-6和IL-17水平，显著提高腹泻型肠易激综合征患者的血清炎症因子IL-10水平；显著降低腹泻型肠易激综合征患者的血清5-HT和SP水平；显著提高腹泻型肠易激综合征患者的结肠SERT水平。因此，该微生物组合物在制备预防、治疗、缓解腹泻型肠易激综合征的药物、食品或保健品中，具有很大的应用前景。
附图说明
图1是各组大鼠血清TNF-α水平的统计图；
图2是各组大鼠血清IL-6水平的统计图；
图3是各组大鼠血清IL-10水平的统计图；
图4是各组大鼠血清IL-17水平的统计图；
图5是各组大鼠血清中SP水平的统计图；
图6是各组大鼠血清中5-HT水平的统计图；
图7是不同组大鼠结肠粘膜组织5-羟色胺转运体的表达组织染色结果图(A为正常对照组、B为模型组、C为干预组)；
图8是不同组大鼠肠黏膜SERT表达组织染色的光密度值的结果统计图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
下述内容中涉及的蛋白胨、牛肉膏、葡萄糖、乙酸钠、酵母粉、柠檬酸氢二铵、K2PO4·3H2O、MgSO4·7H2O、MnSO4、吐温80和半胱氨酸氨酸盐购自国药集团化学试剂有限公司；SPF级雄性3周龄SD大鼠购自上海斯莱克公司；番泻叶溶剂购自安国市昌达中药材饮片有限公司；测定血清SP和血清5-HT水平检测用ELISA试剂盒购自武汉云克隆科技股份有限公司；测定TNF-α、IL-6、IL-17和IL-10检测用ELISA试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司。
下述实施例中涉及的培养基配方如下：
MRS培养基(g/L)：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O0.1g/L、MnSO4 0.05g/L、吐温801mL/L、半胱氨酸氨酸盐0.5g/L。
下述内容所涉及的动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalissubsp.lactis)BLa80菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2018年3月5日，保藏编号为CGMCC No.15410，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
下述内容所涉及的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)LA85菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2020年7月20日，保藏编号为CGMCC No.1.12735，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
下述内容所涉及的冻干保护剂配方为：脱脂奶粉100g/L、海藻糖100g/L、L-谷氨酸钠10g/L，溶剂为无菌水。
制备例1
(1)BLa80冻干粉的制备：
将BLa80菌株按照占培养基总质量3％的接种量接种到培养基中，于37℃下培养18h，得到培养液；将培养液离心，得到菌体；将菌体用冻干保护剂重悬(冻干保护剂与菌体的质量比为2:1)，得到重悬液；将重悬液采用真空冷冻法进行冻干，得到BLa80冻干粉。
(2)LA85冻干粉的制备：
将LA85菌株按照占培养基总质量3％的接种量接种到培养基中，于37℃下培养18h，得到培养液；将培养液离心，得到菌体；将菌体用冻干保护剂重悬(冻干保护剂与菌体的质量比为2:1)，得到重悬液；将重悬液采用真空冷冻法进行冻干，得到LA85冻干粉。
(3)BLa80和LA85冻干粉混合物Ⅰ的制备：
取相同活菌数的BLa80冻干粉和LA85冻干粉混合均匀，用水复溶后配制成BLa80和LA85冻干粉混合物菌液。
(4)BLa80和LA85冻干粉混合物Ⅱ的制备：
取活菌数为1:2的BLa80冻干粉和LA85冻干粉混合均匀，用水复溶后配制成BLa80和LA85冻干粉混合物菌液。
(5)BLa80和LA85冻干粉混合物Ⅲ的制备：
取活菌数为2:1的BLa80冻干粉和LA85冻干粉混合均匀，用水复溶后配制成BLa80和LA85冻干粉混合物菌液。
实施例1
微生物复合物对肠易激综合征大鼠结肠运转功能的影响：
(1)分组情况：
50只雄性SD大鼠(6周龄，体重在170g-190g之间)，每笼3-4只，饲养温度严格控制在22±2℃，光/暗循环12h，大鼠自由进食和饮水。适应性喂养2周后，将大鼠随机分成5组，每组10只，分别为正常对照组、模型组、益生菌干预Ⅰ组、益生菌干预Ⅱ组、益生菌干预Ⅲ组。
(2)建立肠易激综合征大鼠模型：
采用番泻叶灌胃结合束缚应激法建立D-IBS大鼠模型，第3周，所有大鼠禁食不禁水12h，除正常组其余组大鼠于每日上午进行束缚，将大鼠仰面置于木架上，以胶带对其上、下肢进行固定，全部束缚结束后给予相应浓度的番泻叶溶剂灌胃(0.3g/mL番泻叶制备剂)，造模过程持续14天。
(3)实验过程：
实验共6周：第1-2周为大鼠适应期；第3-4周为造模期；第5-6周开始灌胃(1次/天)直至实验结束。干预组分别灌胃总活菌数相同的冻干粉混合物Ⅰ、冻干粉混合物Ⅱ、冻干粉混合物Ⅲ，以0.2mL菌液(单次灌胃活菌总量为1*109CFU)/只/次的剂量进行灌胃；正常对照组和模型组予以生理盐水灌胃；所有分组均为自由饮水和摄食。
(4)结肠转运功能测定：
予大鼠30％水合氯醛(3mL/kg)腹腔注射麻醉，取直径为3mm的玻璃小球沿肛门放入距肛门3cm的直肠内。大鼠苏醒后迅速移至笼内喂食饮水，笼内垫清洁滤纸。观察大鼠直肠内玻璃小球排出时间并进行比较。
结果由表1所示，可知，IBS模型组大鼠结肠转运功能增强，较正常组排便量明显增多，直肠内玻璃小球排出时间明显缩短，差异具有统计学意义(p＜0.05)。用微生物复合物干预后，大鼠结肠转运功能较模型组显著降低(p＜0.05)。
表1
组别 玻璃小球排出时间(min)
正常对照组 23±1.5
模型组 16±3.5
益生菌干预Ⅰ组 19±2.7
益生菌干预Ⅱ组 19±2.9
益生菌干预Ⅲ组 20±3.2
实施例2
微生物复合物对肠易激综合征大鼠内脏敏感性的影响：
分组情况、建立肠易激综合征大鼠模型和实验过程与实施例1一致。
评估球囊结直肠扩张引起腹部收缩反射(abdominal withdrawal reflex，AWR)的最小容量阈值以反映其内脏敏感性。大鼠水合氯醛麻醉下，将石蜡油润滑后的导尿管经肛门插入，球囊末端距离肛门1厘米，用胶布把导管和大鼠尾巴根部缠在一起，固定气囊。大鼠苏醒后，放在特制的透明塑料笼中，大鼠在笼中只能前后运动。30分钟适应期后经导尿管外口向球囊内注入26℃生理盐水扩张肠道，记录引起大鼠腹部收缩反射的最小注水量，即最小容量阈值。
结果如表2所示，可知，模型组大鼠球囊结直肠扩张引起腹部收缩反射的最小容量阈值较正常对照组明显降低，差异有显著性(p<0.01)，用微生物复合物干预后，引起腹部收缩反射的最小容量阈值均较模型组显著升高(p<0.05)，说明治疗组肠道高敏感性显著降低。
表2
组别 引起大鼠腹部收缩反射的最小注水量(mL)
正常对照组 0.68±0.05
模型组 0.3±0.04
益生菌干预Ⅰ组 0.5±0.06
益生菌干预Ⅱ组 0.5±0.03
益生菌干预Ⅲ组 0.55±0.06
实施例3
微生物复合物对肠易激综合征大鼠血清炎症因子指标的影响：
分组情况、建立肠易激综合征大鼠模型和实验过程与实施例1一致。
血清中相关细胞因子的检测：实验结束后，各组大鼠心脏取血，10min内分离血浆，TNF-α、IL-6、IL-10和IL-17含量的测定采用ELISA试剂盒，方法参照说明书。
由图1可知，与正常对照组(CTL)比较，模型组(IBS-D)大鼠血清TNF-α水平明显升高，差异有统计学意义(p＜0.05)。与模型组比较，干预Ⅰ组(BLa80+LA85)大鼠血清TNF-α水平降低，差异具有统计学意义(p＜0.05)。
由图2可知，与正常对照组(CTL)比较，模型组(IBS-D)大鼠血清IL-6水平明显升高，差异有统计学意义(p＜0.05)。与模型组比较，干预Ⅰ组(BLa80+LA85)大鼠血清IL-6水平降低，差异具有统计学意义(p＜0.05)。
由图3可知，与正常对照组(CTL)比较，模型组(IBS-D)大鼠血清IL-10水平明显降低，差异有统计学意义(p＜0.05)。与模型组比较，干预Ⅰ组(BLa80+LA85)大鼠血清IL-10水平升高，差异具有统计学意义(p＜0.05)。
由图4可知，与正常对照组(CTL)比较，模型组(IBS-D)大鼠血清IL-17水平明显升高，差异有统计学意义(p＜0.05)。与模型组比较，干预Ⅰ组(BLa80+LA85)大鼠血清IL-17水平降低，差异具有统计学意义(p＜0.05)。
实施例4
微生物复合物对肠易激综合征大鼠神经递质的影响：
分组情况、建立肠易激综合征大鼠模型和实验过程与实施例1一致。
给药结束后第2天，各组大鼠10％水合氯醛腹腔麻醉后取静脉血5mL，分离血清，置-20℃保存待检。SP及5-HT均采用ELISA试剂盒测定，方法参照说明书。
由图5可知，与正常对照组(CTL)比较，模型组(IBS-D)大鼠血清SP水平明显升高，差异有统计学意义(p＜0.05)。与模型组比较，干预Ⅰ组(BLa80+LA85)大鼠血清SP水平降低，差异具有统计学意义(p＜0.05)。
由图6可知，与正常对照组(CTL)比较，模型组(IBS-D)大鼠血清5-HT水平明显升高，差异有统计学意义(p＜0.05)。与模型组比较，干预Ⅰ组(BLa80+LA85)大鼠血清5-HT水平降低，差异具有统计学意义(p＜0.05)。
实施例5
微生物复合物对肠易激综合征大鼠神经递质的影响：
分组情况、建立肠易激综合征大鼠模型和实验过程与实施例1一致。
免疫组织化学染色：实验结束后分别从每组大鼠中取结肠组织，进行固定、脱水、石蜡包埋，石蜡切片在脱蜡、抗原恢复、内源性过氧化物酶抑制和非特异性抗原封闭后，用一抗(兔多克隆抗SERT抗体，美国Affinity Biosciences)在4℃条件下过夜。切片用磷酸盐缓冲生理盐水清洗后，用抗大鼠次级抗体(中山金桥)与辣根过氧化物酶在室温下孵育1h，然后用二氨基联苯胺观察。最后用苏木精染色，光镜下观察染色阳性表达的平均光密度(OD值)，并进行半定量分析。
由图7可知，通过组织染色发现，与正常对照组(CTL)相比，模型组(IBS-D)大鼠结肠组织SERT水平降低。与IBS-D比较，干预Ⅰ组(BLa80+LA85)大鼠结肠组织SERT水平升高。
进一步的，由图8可知，通过比较光密度值可以发现，模型组(IBS-D)大鼠具有肠黏膜SERT的低表达，显著低于正常对照组大鼠；IBS-D大鼠经干预Ⅰ组(BLa80+LA85)干预治疗后，肠黏膜SERT表达有显著改善(p<0.001)。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims (10)

1.一种具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物，其特征在于，所述具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物包括动物双歧杆菌乳亚种和嗜酸乳杆菌。
2.如权利要求1所述的具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物，其特征在于，所述动物双歧杆菌乳亚种或嗜酸乳杆菌在所述微生物复合物中的活菌数均不低于1×106CFU/mL或1×106CFU/g；
优选地，所述动物双歧杆菌乳亚种与嗜酸乳杆菌的活菌数之比为1:(0.5-2)。
3.如权利要求1或2所述的具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物，其特征在于，所述动物双歧杆菌乳亚种命名为动物双歧杆菌乳亚种(Bifidobacterium animalissubsp.lactis)BLa80菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2018年3月5日，保藏编号为CGMCC No.15410，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
4.如权利要求1-3任一项所述的具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物，其特征在于，所述嗜酸乳杆菌命名为嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)LA85菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2020年7月20日，保藏编号为CGMCC No.1.12735，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
5.如权利要求1-4任一项所述的具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
将动物双歧杆菌乳亚种菌株和嗜酸乳杆菌菌株分别接种于培养基中进行培养，得到培养液；将培养液离心，得到菌体；将菌体用冻干保护剂重悬，得到重悬液；将重悬液冻干，得到动物双歧杆菌乳亚种冻干菌剂和嗜酸乳杆菌冻干菌剂；将两种冻干菌剂混合，得到所述具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物。
6.如权利要求5所述的具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物的制备方法，其特征在于，所述菌株的接种质量为培养基质量的2-4％；
优选地，所述培养基的配方包括：蛋白胨5-15g/L、牛肉膏5-15g/L、葡萄糖15-25g/L、乙酸钠1-3g/L、酵母粉3-7g/L、柠檬酸氢二铵1-3g/L、K2PO4·3H2O 1-4g/L、MgSO4·7H2O 0.05-0.15g/L、MnSO4 0.04-0.06g/L、吐温80 0.5-1.5mL/L、半胱氨酸盐酸盐0.4-0.6g/L；
优选地，所述培养在36-38℃下培养12-24h。
7.如权利要求1-4任一项所述的具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物在制备预防和/或治疗肠易激综合征的药物中的应用。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型包括混悬剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、片剂、乳剂、溶液剂、滴丸剂、注射剂、栓剂、灌肠剂、气雾剂、贴剂或滴剂中的任意一种；
优选地，所述药物还包括药学上可接受的辅料；所述辅料包括载体、稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、乳化剂、助溶剂、增溶剂、渗透压调节剂、表面活性剂、包衣材料、着色剂、pH调节剂、抗氧剂、抑菌剂或缓冲剂中的任意一种或至少两种的组合。
9.如权利要求1-4任一项所述的具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物在制备缓解肠易激综合征的保健食品中的应用。
10.如权利要求1-4任一项所述的具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物在制备缓解肠易激综合征的固体饮料中的应用。
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