CN115607577B - 一种具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN115607577B
CN115607577B CN202211227955.1A CN202211227955A CN115607577B CN 115607577 B CN115607577 B CN 115607577B CN 202211227955 A CN202211227955 A CN 202211227955A CN 115607577 B CN115607577 B CN 115607577B
Authority
CN
China
Prior art keywords
probiotic
strain
probiotics
efficacy
oral inflammation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202211227955.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN115607577A (zh
Inventor
方曙光
蒋大成
陈珂可
冯胜鹏
朱建国
严涛
程文
杨恒飞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
WeCare Probiotics Co Ltd
Original Assignee
WeCare Probiotics Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by WeCare Probiotics Co Ltd filed Critical WeCare Probiotics Co Ltd
Priority to CN202211227955.1A priority Critical patent/CN115607577B/zh
Publication of CN115607577A publication Critical patent/CN115607577A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN115607577B publication Critical patent/CN115607577B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/742—Spore-forming bacteria, e.g. Bacillus coagulans, Bacillus subtilis, clostridium or Lactobacillus sporogenes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A61K36/484—Glycyrrhiza (licorice)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/07—Bacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C12R2001/23—Lactobacillus acidophilus
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂及其制备方法和应用，所述具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂中的益生菌包括保藏编号为CGMCC No.19487的凝结芽孢杆菌BC99菌株、保藏编号为CGMCC No.16922的唾液乳杆菌LS97菌株和保藏编号为CGMCC No.1.12735的嗜酸乳杆菌LA85菌株。该益生菌剂所用的菌株经过筛选驯化均具有优异的抑制病原微生物的效果，在口腔环境下定植周期远长于常规菌株，且各组分相互配合协同增效，与单一菌株或双菌株复配相比，该复合益生菌剂具有更好的抑制病原微生物生长、促进口腔黏膜修复，缓解口腔炎症的功效。

Description

一种具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于益生菌剂技术领域，涉及一种具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂及其制备方法和应用。
背景技术
口腔是一个复杂而完整的微生态系统，定植于口腔的微生物主要包括细菌、真菌、支原体、病毒及原虫等，这些微生物在口腔的不同部位共栖、竞争和拮抗，与口腔固有环境共同构成了口腔微生态系统。研究发现，定植于口腔的微生物主要以细菌为主，目前已发现700余种，是人体最复杂的微生物集群之一。
复发性口腔溃疡(recurrent oral ulcer，ROU)是口腔黏膜病中的常见病症，多见于唇内侧、舌头、舌腹、颊黏膜、前庭沟、软腭等部位，发病率很高，其发病特点为在局部形成溃疡后可继发感染，造成溃疡局部组织炎症和坏死，属于中医学“口疮、口疡”范畴。目前ROU发病机制不明，复发率高，无明确治疗方法，严重影响着患者的生活质量和身心健康。近年来，溃疡愈合质量逐渐成为评价ROU治疗效果的重要指标。
研究发现，许多口腔疾病的发病起因于口腔微生态的紊乱，同时口腔疾病也会诱发微生物环境发生改变。生理状态下，口腔微生物之间、微生物与宿主之间存在着动态平衡，共同参与机体代谢、免疫、营养及维持口腔的健康。但在物理化学因素、细菌因素、宿主因素等各种外界因素影响下，口腔中的微生态平衡会被打破，条件致病菌转变为致病菌，从而导致相关口腔疾病的发生，如龋齿、牙周病、口臭、口腔念珠菌病和反复性口腔溃疡等，而各种口腔疾病又会加剧菌群的失衡。
在生物医学领域，益生菌目前主要用于治疗胃肠道疾病。益生菌主要通过以下几种机制来预防和改善口腔疾病：
①分泌有机酸、过氧化氢和细菌素等多种抗菌物质，从而抑制致病菌的生长；②与致病菌竞争黏膜表面的结合位点，抑制致病菌对口腔软硬组织的粘附；③通过调节pH和氧化还原电势，改善周围环境；④通过提高非特异性免疫和调节宿主的体液和细胞免疫来发挥益生作用。
目前市场有牙膏和漱口水可清除口腔异味，但都是暂时性的，另部分漱口水还可用于治疗牙龈炎、牙周炎、口腔溃疡等口腔疾病，但治疗性漱口水都含有消炎、杀菌的药物成分，除杀死致病菌外，还会杀死有益菌，长期使用会导致口腔内正常菌群失调，还有可能引起过敏反应，反而不利于口腔健康。
CN107683999A 公开了一种有利于口腔健康的益生菌固体饮料，配方包括如下质量比的成分：柠檬提取物20-30wt%，菊粉10-20wt%，唾液链球菌15-20wt%，唾液乳杆菌15-20wt%，嗜酸乳杆菌15-20wt%。选用的三种益生菌能通过抑制致病菌生长和繁殖、与致病菌竞争口腔黏膜表面的粘附位点等，保护口腔健康，预防口腔疾病，但是其选用的菌群耐受性弱，在口腔定植持续周期短。因此，开发出更多的可用于治疗或缓解牙龈炎、牙周炎、口腔溃疡等口腔疾病的益生菌产品是非常有意义的。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂及其制备方法和应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂，所述具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂中的益生菌包括保藏编号为CGMCC No.19487的凝结芽孢杆菌BC99菌株、保藏编号为CGMCC No.16922的唾液乳杆菌LS97菌株和保藏编号为CGMCC No.1.12735的嗜酸乳杆菌LA85菌株。
其中凝结芽砲杆菌又被称为芽砲乳酸菌，属于革兰氏阳性菌，兼性厌氧型，能够产生乳酸，可产生抑菌活性物质，抑制某些腐败和病原微生物生长，由于其对人体无毒无害，且不改变食品本身的特性，可以应用于食品工业领域，可以在动物肠道中对肠道致病菌有较佳的抑制力，可以应用于医疗保健领域。其中唾液乳杆菌能够起到调理肠胃的作用，从而提高患者胃肠的消化能力，还能够缓解腹胀、腹痛、消化不良，帮助肠道蠕动，辅助治疗肠道功能紊乱等症状。其中嗜酸乳杆菌有调节肠道内菌群平衡、抑制肠道内不良微生物繁殖等功效，能够起到杀灭有害细菌、减轻肝脏解毒负担、减少肠道内毒素生成等作用。
本发明创造性地将凝结芽孢杆菌BC99菌株、唾液乳杆菌LS97菌株和嗜酸乳杆菌LA85菌株进行复配得到一种新的益生菌剂，所用的菌株经过筛选驯化均具有优异的抑制病原微生物的效果，在口腔环境下定植周期远长于常规菌株，且各组分相互配合协同增效，与单一菌株或双菌株复配相比，该复合益生菌剂具有更好的抑制病原微生物生长、促进口腔黏膜修复，缓解口腔炎症的功效。
优选地，所述嗜酸乳杆菌LA85菌株、凝结芽孢杆菌BC99菌株与唾液乳杆菌LS97菌株的活菌数之比为(2-4):(1-3):1。
本发明所涉及的嗜酸乳杆菌LA85菌株、凝结芽孢杆菌BC99菌株与唾液乳杆菌LS97菌株经过上述比例的优化，具有更显著的抑制病原微生物生长、促进口腔黏膜修复，缓解口腔炎症的功效。
所述(2-4)中的具体点值可以选择2、2.2、2.5、2.8、3、3.2、3.4、3.5、3.7、3.8、4等。所述(1-3)中的具体点值可以选择1、1.2、1.5、1.8、2、2.2、2.4、2.5、2.7、2.8、3等。
优选地，所述益生菌在所述具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂中的质量百分含量为1-10%，例如1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%等。
上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂还包括功能助剂。
本发明所涉及的益生菌剂还可以添加其他功能助剂，用以辅助益生菌，更好地维护口腔黏膜屏障、补充vb、vc、抗急性炎症、抑制表皮粘膜过量急性表达从而更好地达到提升口腔健康的效果。
优选地，所述功能助剂包括马齿苋提取物、冰片或甘草中的任意一种或至少两种的组合。优选马齿苋提取物、冰片和甘草的组合。
其中马齿苋提取物是从马齿苋的茎和叶中获得的生物活性物质，具有广谱抗菌和抗炎、抗过敏作用，并能促进上皮细胞的生理功能恢复。其中冰片由菊科艾纳香茎叶或樟科植物龙脑樟枝叶经水蒸汽蒸馏并重结晶而得，对溃疡性或糜烂性口腔炎止痛作用明显，加速炎症消除，促进口腔粘膜剥脱，糜烂和溃疡的愈合，特别对物理因素所引起的粘膜损害效果良好，而对细菌或其他复杂因素所致的粘膜损害，亦能发挥辅助治疗作用。其中甘草具有清热解毒、缓解口腔溃疡的功效。
本发明优选马齿苋提取物、冰片和甘草的组合作为功能助剂，与益生菌相互配合，相互促进，能够更显著地提升益生菌剂的缓解口腔炎症功效。
优选地，所述马齿苋提取物、冰片和甘草的质量比为(2.5-5.5):(1.5-3.5):1。
所述(2.5-5.5)中的具体点值可以选择2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5等。
所述(1.5-3.5)中的具体点值可以选择1.5、2、2.5、3、3.5等。
优选地，所述功能助剂在所述具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂中的质量百分含量为2.5-8%，例如2.5%、3%、4%、5%、6%、7%、8%等。
上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂还包括载体材料。
优选地，所述载体材料包括菊粉、麦芽糊精、微晶纤维素、硬脂酸镁、糖醇或淀粉中的任意一种或至少两种的组合。优选菊粉和麦芽糊精的组合。
其中菊粉摄入后可以促进肠上皮增生使柱状细胞和杯状细胞更生，杯状细胞黏液増多，维持结肠及全肠道粘膜完整性，使损伤上皮DNA修复。能显著增加双歧杆菌的生长，抑制腐败菌生长，减少有毒产物的生成并且对有毒发酵产物具有吸附螯合作用，清除腐败产物和细菌毒素，从而减轻肝脏负担促进营养合成。菊粉还能够改善产品风味，促进益生菌的增殖，还能吸走产品中的水分，益生菌抗逆性更佳，存活率更高，从而使产品具有更长的保质期。
优选地，所述益生菌剂的剂型包括粉剂、胶囊剂、片剂、溶液剂。
第二方面，本发明提供一种根据第一方面所述的具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂的制备方法，所述制备方法包括：
将凝结芽孢杆菌BC99菌粉、唾液乳杆菌LS97菌粉、嗜酸乳杆菌LA85菌粉按配比进行物理混合即可。
优选地，所述混合还包括与功能助剂混合。
优选地，所述混合还包括与载体材料混合。
优选地，所述凝结芽孢杆菌BC99菌粉、唾液乳杆菌LS97菌粉、嗜酸乳杆菌LA85菌粉的制备方法包括：
（1）将凝结芽孢杆菌BC99菌种、唾液乳杆菌LS97菌种、嗜酸乳杆菌LA85菌种分别接种于MRS液体培养基中进行活化，得到活化液；
（2）将活化液分别接种于MRS液体培养基中培养，得到菌液；
（3）将菌液离心，得到菌体；
（4）将菌体分别用保护剂重悬，得到菌悬液；
（5）将菌悬液分别预培养后冻干，得到所述凝结芽孢杆菌BC99菌粉、唾液乳杆菌LS97菌粉、嗜酸乳杆菌LA85菌粉。
优选地，所述活化是在32-39℃（例如32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃等）下培养12-36 h（例如12 h、14 h、16 h、20 h、24 h、28 h、30 h、36 h等），活化的次数为1-3次（例如1次、2次、3次）。
优选地，所述活化液的接种量为1-5%（例如1%、2%、3%、4%、5%等），接种后在32-39℃（例如32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃等）下培养12-36 h（例如12 h、14 h、16h、20 h、24 h、28 h、30 h、36 h等）。
优选地，所述保护剂包括脱脂乳液。
第三方面，本发明提供一种根据第一方面所述的具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂在制备具有缓解口腔炎症功效的药品中的应用。
本发明所涉及的益生菌剂可以作为原料被进一步地制备具有缓解口腔炎症功效的药品。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明创造性地将凝结芽孢杆菌BC99菌株、唾液乳杆菌LS97菌株和嗜酸乳杆菌LA85菌株进行复配得到一种新的益生菌剂，所用的菌株经过筛选驯化均具有优异的抑制病原微生物的效果，在口腔环境下定植周期远长于常规菌株，且各组分相互配合协同增效，与单一菌株或双菌株复配相比，该复合益生菌剂具有更好的抑制病原微生物生长、促进口腔黏膜修复，缓解口腔炎症的功效。
本发明优选马齿苋提取物、冰片和甘草的组合作为功能助剂，与益生菌相互配合，相互促进，能够更显著地提升益生菌剂的缓解口腔炎症功效。
实施方式
为更进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合本发明的优选实施例来进一步说明本发明的技术方案，但本发明并非局限在实施例范围内。
下述涉及的凝结芽孢杆菌BC99为凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）BC99菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.19487，保藏日期为2020年3月18日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
下述涉及的唾液乳杆菌LS97为唾液乳杆菌（Lactobacillus salivarius）LS97菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为保藏编号为CGMCC No.16922，保藏日期为2018年12月10日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
下述涉及的嗜酸乳杆菌LA85为嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）LA85菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.1.12735，保藏日期为2020年7月20日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
下述涉及的MRS固体培养基：称取蛋白胨10 g、牛肉膏10 g、葡萄糖20 g、乳糖10g、酵母浸膏5 g、柠檬酸氢二铵2 g、K2PO4·3H2O 2 g、MgSO4·7H2O 0.6 g、MnSO40.01 g、琼脂20 g和L-半胱氨酸1 g，使用去离子水溶解，再加入1 mL吐温80，定容至1 L，灭菌冷却后，倒入灭菌后的培养皿中备用。
下述涉及的MRS液体培养基：称取蛋白胨10 g、牛肉膏10 g、葡萄糖20 g、乳糖10g、酵母浸膏5 g、柠檬酸氢二铵2 g、K2PO4·3H2O 2 g、MgSO4·7H2O 0.6 g、MnSO40.01 g和L-半胱氨酸1 g，使用去离子水溶解，再加入1 mL吐温80，定容至1 L，灭菌冷却后，倒入灭菌后的培养皿中备用。
制备例1
本制备例提供一种凝结芽孢杆菌BC99菌粉，通过以下方法进行制备：
将凝结芽孢杆菌BC99菌种接种于MRS液体培养基中，37℃下培养24 h进行活化，连续活化2次，得到活化液；将活化液按2%（v/v）的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃下培养24 h，得到菌液；将菌液在8000 g下离心10 min，得到凝结芽孢杆菌BC99菌体；
将菌体用质量浓度为10%的脱脂奶粉水溶液重悬至浓度为1×1010 CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在37℃下预培养1 h后冻干，得到所述凝结芽孢杆菌BC99菌粉。
制备例2
本制备例提供一种唾液乳杆菌LS97菌粉，通过以下方法进行制备：
将唾液乳杆菌LS97菌种接种于MRS液体培养基中，37℃下培养24 h进行活化，连续活化2次，得到活化液；将活化液按2%（v/v）的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃下培养24 h，得到菌液；将菌液在8000 g下离心10 min，得到唾液乳杆菌LS97菌体；
将菌体用质量浓度为10%的脱脂奶粉水溶液重悬至浓度为1×1010 CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在37℃下预培养1 h后冻干，得到所述唾液乳杆菌LS97菌粉。
制备例3
本制备例提供一种嗜酸乳杆菌LA85菌粉，通过以下方法进行制备：
将嗜酸乳杆菌LA85菌种接种于MRS液体培养基中，37℃下培养24 h进行活化，连续活化2次，得到活化液；将活化液按2%（v/v）的接种量接种于MRS液体培养基中，37℃下培养24 h，得到菌液；将菌液在8000 g下离心10 min，得到嗜酸乳杆菌LA85菌体；
将菌体用质量浓度为10%的脱脂奶粉水溶液重悬至浓度为1×1010 CFU/mL，得到菌悬液；将菌悬液在37℃下预培养1 h后冻干，得到所述嗜酸乳杆菌LA85菌粉。
下述实施例所使用的的马齿苋提取物为购自于厂家陕西嘉禾生物科技股份有限公司的型号为10:1的产品；冰片为购自于西安晋湘药用辅料有限公司的型号为医药级的产品；甘草为购自于南京药石科技股份有限公司的型号为PB95527的产品；菊粉为购自于维乐夫的型号为p90（来源于菊苣）的产品；麦芽糊精为购自于罗盖特（中国）营养食品有限公司的型号为GLUCIDEX*6的产品。
实施例
本实施例提供一种益生菌剂，其制备方法如下：
将凝结芽孢杆菌BC99菌粉1.5份、唾液乳杆菌LS97菌粉1份、嗜酸乳杆菌LA85菌粉2.5份、马齿苋提取物4份、冰片3份、甘草1份、菊粉37份、麦芽糊精50份混合均匀。
实施例
本实施例提供一种益生菌剂，其制备方法如下：
将唾液乳杆菌LS97菌粉1.5份、嗜酸乳杆菌LA85菌粉3.5份、马齿苋提取物4份、冰片3份、甘草1份、菊粉37份、麦芽糊精50份混合均匀。
实施例
本实施例提供一种益生菌剂，其制备方法如下：
将凝结芽孢杆菌BC99菌粉1.8份、嗜酸乳杆菌LA85菌粉3.2份、马齿苋提取物4份、冰片3份、甘草1份、菊粉37份、麦芽糊精50份混合均匀。
实施例
本实施例提供一种益生菌剂，其制备方法如下：
将凝结芽孢杆菌BC99菌粉3份、唾液乳杆菌LS97菌粉2份、马齿苋提取物4份、冰片3份、甘草1份、菊粉37份、麦芽糊精50份混合均匀。
实施例
本实施例提供一种益生菌剂，其制备方法如下：
将凝结芽孢杆菌BC99菌粉1.5份、唾液乳杆菌LS97菌粉1份、嗜酸乳杆菌LA85菌粉2.5份、冰片6份、甘草2份、菊粉37份、麦芽糊精50份混合均匀。
实施例
本实施例提供一种益生菌剂，其制备方法如下：
将凝结芽孢杆菌BC99菌粉1.5份、唾液乳杆菌LS97菌粉1份、嗜酸乳杆菌LA85菌粉2.5份、马齿苋提取物6.4份、甘草1.6份、菊粉37份、麦芽糊精50份混合均匀。
实施例
本实施例提供一种益生菌剂，其制备方法如下：
将凝结芽孢杆菌BC99菌粉1.5份、唾液乳杆菌LS97菌粉1份、嗜酸乳杆菌LA85菌粉2.5份、马齿苋提取物4.5份、冰片3.5份、菊粉37份、麦芽糊精50份混合均匀。
实施例
本实施例提供一种益生菌剂，其制备方法如下：
将凝结芽孢杆菌BC99菌粉1.5份、唾液乳杆菌LS97菌粉1份、嗜酸乳杆菌LA85菌粉2.5份、菊粉37份、麦芽糊精50份混合均匀。
实施例
本实施例提供一种制剂，其制备方法如下：
将马齿苋提取物4份、冰片3份、甘草1份、菊粉37份、麦芽糊精50份混合均匀。
试验动物：ICR大鼠96只，180-220 g。
试验过程：将96只大鼠随机分为12组，每组8只，分别作为空白组、模型组、实施例1-9组、阳性对照组。实施例1-9组分别采用实施例1-9制得的制剂产品作为功能性食品；阳性对照组采用治疗口腔炎症的常规性药物西瓜霜作为功能性食品。空白组直接采用不作处理的健康大鼠。
模型组、实施例1-9组、阳性对照组大鼠先进行炎症模型处理，处理方法如下：将大鼠用10%水合氯醛（3mL/kg）麻醉，于大鼠口腔左侧颊部黏膜下注射10%醋酸，0.1 mL/只，对照组注射等量的生理盐水，24h后观察大鼠溃疡面的黏膜呈凹陷性缺损，大致呈圆形，表面为黄白色，周围充血水肿，说明口腔炎症模型制备成功。
造模后第2天开始对各组大鼠进行对比治疗。实施例1-9组和阳性对照组每天分别灌胃溶于20mL蒸馏水中的5g功能性食品，模型组和空白对照组分别同法用等量生理盐水处理。自造模成功当天开始按组别、剂量给药，连续10天。
（1）大鼠口腔中环境菌总数变化率以及IgA浓度变化率比较：
口腔中环境菌指口腔中病原微生物总数，而IgA抗体是口腔内的第一道抗菌防线，由B淋巴球分泌，释放于唾液中可以有效中和并消灭多种病原菌。实验初始及结束以NGS唾液收集管收集样本唾液1mL，放入含50%甘油离心管中，以离心管收集，以作为测量大鼠口腔中环境菌菌体量变化以及唾液中IGA浓度使用。唾液中环境菌总数与免疫球蛋白A(IgA)数值的变化，将初始环境菌与IgA浓度做为基础值，再根据后续所测得之环境菌体量与IgA浓度，以百分比方式呈现其浓度变化。结果如表1所示：
表1
由表1结果可知：空白组及模型组的总环境细菌数随着时间而显著增加。而服用功能性食品显著减少了口腔中的细菌总数。值得注意的是，实施例1组经过调配显示出强大的抑菌活性，这表示益生菌可以与口腔的病原菌彼此竞争口腔内养分，抑制其生长并可以加强黏膜的分泌与屏蔽，可有效降低病原菌的附着性并且改善口腔内的微生物菌落，经过优化的益生菌配方亦可分泌抑菌物质如抗菌肽及短链脂肪酸达到降低致病菌的存活度，以及降低因致病菌感染所导致的发炎现象。
而唾液中的免疫球蛋白A(IgA)的浓度也随着服用含功能性食品显著的升高。其中各实施例组都能有效提高IgA的分泌，实施例1组整体疗效更高。实验结果也显示本发明所涉及的益生菌制剂可以有效诱导唾液中免疫球蛋白A的增加，达到抑制口腔病原菌或中和病原菌所产生毒素的效果。
（2）大鼠口腔中炎症细胞因子比较：
TNF-α是炎症性疾病中重要的损伤性细胞因子之一，可诱导包括自身在内的多种细胞因子（白细胞介素1β、白细胞介素6等）以及一些炎症介质的产生，损伤组织，继而加重炎症反应。IL-2一般指白细胞介素-2。白细胞介素-2是趋化因子家族的一种细胞因子，对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用，能刺激已被特异性抗原或致丝裂因数启动的T细胞增殖。
试验结束后采用无菌手术剪取大鼠口腔中造模部位皮肤，并迅速将该组织固定在4%多聚甲醛液浸内，检测各实验组皮损处皮肤组织中IL-2和TNF-α的表现水平。结果如表2所示：
表2
由表2结果可知：实施例各组都对10%醋酸使得大鼠口腔炎症伤口中IL-2、TNF-α的降低有明显的效果，与实施例2-4相比，实施例1组效果更优，说明三种益生菌相互配合，具有协同增效关系；与实施例5-7相比，实施例1组效果更优，说明三种功能助剂相互配合，具有协同增效关系；与实施例8-9相比，实施例1组效果更优，说明功能助剂能够更好地辅助益生菌，获得更优的技术效果。
（3）各实验组大鼠肝损伤程度比较：
由眼球后静脉丛取血测血清ALT，同时拉脱颈椎处死大鼠取肝脏，制备肝匀浆，取上清测肝脏TG，比较各组大鼠ALT和TG值变化，验证益生菌功能性食品对大鼠的肝脏影响。结果如表3所示：
表3
由表3结果可知：与正常对照组大鼠相比，功能性食品组的ALT和TG值无显著性差异，证明本发明所涉及的益生菌剂对肝脏无明显损伤，可用于口腔炎症的辅助治疗。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂及其制备方法和应用。但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims (14)

1.一种具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂，其特征在于，所述具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂中的益生菌由保藏编号为CGMCC No.19487的凝结芽孢杆菌BC99菌株、保藏编号为CGMCC No.16922的唾液乳杆菌LS97菌株和保藏编号为CGMCC No.1.12735的嗜酸乳杆菌LA85菌株组成；所述益生菌在所述具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂中的质量百分含量为1-10%；
所述嗜酸乳杆菌LA85菌株、凝结芽孢杆菌BC99菌株与唾液乳杆菌LS97菌株的活菌数之比为(2-4):(1-3):1；
所述具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂还包括功能助剂；所述功能助剂为质量比为(2.5-5.5):(1.5-3.5):1的马齿苋提取物、冰片和甘草的组合。
2.根据权利要求1所述的具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂，其特征在于，所述功能助剂在所述具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂中的质量百分含量为2.5-8%。
3.根据权利要求1所述的具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂，其特征在于，所述具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂还包括载体材料。
4.根据权利要求3所述的具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂，其特征在于，所述载体材料包括菊粉、麦芽糊精、微晶纤维素、硬脂酸镁、糖醇或淀粉中的任意一种或至少两种的组合。
5.根据权利要求4所述的具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂，其特征在于，所述载体材料为菊粉和麦芽糊精的组合。
6.根据权利要求1所述的具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂，其特征在于，所述益生菌剂的剂型包括粉剂、胶囊剂、片剂、溶液剂。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
将凝结芽孢杆菌BC99菌粉、唾液乳杆菌LS97菌粉、嗜酸乳杆菌LA85菌粉按配比进行物理混合即可。
8.根据权利要求7所述的具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂的制备方法，其特征在于，所述混合还包括与功能助剂混合。
9.根据权利要求7所述的具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂的制备方法，其特征在于，所述混合还包括与载体材料混合。
10.根据权利要求7所述的具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂的制备方法，其特征在于，所述凝结芽孢杆菌BC99菌粉、唾液乳杆菌LS97菌粉、嗜酸乳杆菌LA85菌粉的制备方法包括：
（1）将凝结芽孢杆菌BC99菌种、唾液乳杆菌LS97菌种、嗜酸乳杆菌LA85菌种分别接种于MRS液体培养基中进行活化，得到活化液；
（2）将活化液分别接种于MRS液体培养基中培养，得到菌液；
（3）将菌液离心，得到菌体；
（4）将菌体分别用保护剂重悬，得到菌悬液；
（5）将菌悬液分别预培养后冻干，得到所述凝结芽孢杆菌BC99菌粉、唾液乳杆菌LS97菌粉、嗜酸乳杆菌LA85菌粉。
11.根据权利要求10所述的具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂的制备方法，其特征在于，所述活化是在32-39℃下培养12-36 h，活化的次数为1-3次。
12.根据权利要求10所述的具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂的制备方法，其特征在于，所述活化液的接种量为1-5%，接种后在32-39℃下培养12-36 h。
13.根据权利要求10所述的具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂的制备方法，其特征在于，所述保护剂包括脱脂乳液。
14.根据权利要求1-6中任一项所述的具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂在制备具有缓解口腔炎症功效的药品中的应用。
CN202211227955.1A 2022-10-09 2022-10-09 一种具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂及其制备方法和应用 Active CN115607577B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211227955.1A CN115607577B (zh) 2022-10-09 2022-10-09 一种具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211227955.1A CN115607577B (zh) 2022-10-09 2022-10-09 一种具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN115607577A CN115607577A (zh) 2023-01-17
CN115607577B true CN115607577B (zh) 2024-01-30

Family

ID=84861278

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211227955.1A Active CN115607577B (zh) 2022-10-09 2022-10-09 一种具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115607577B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117264806B (zh) * 2023-07-21 2024-05-14 无锡爱科派生物科技有限公司 一株凝结魏茨曼氏菌及其在抑制口腔致病菌中的应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3479701A1 (en) * 2017-11-03 2019-05-08 Kyorin Industry (Shenzhen) Co., Ltd Pet chew toy with oral care properties and preparation method thereof
CN111713625A (zh) * 2020-06-12 2020-09-29 江苏微康生物科技有限公司 一种具有缓解湿疹功效的凝结芽孢杆菌固体饮料及其制备方法
CN113368139A (zh) * 2021-07-02 2021-09-10 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一种具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物及其制备方法和应用
CN113633666A (zh) * 2021-09-06 2021-11-12 富益元（东莞）生物科技有限公司 一种用于口腔口臭和炎症治疗的益生菌微生态制剂及其制备方法和应用
CN114149939A (zh) * 2021-09-27 2022-03-08 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一种能够缓解龋齿的益生菌组合物及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3479701A1 (en) * 2017-11-03 2019-05-08 Kyorin Industry (Shenzhen) Co., Ltd Pet chew toy with oral care properties and preparation method thereof
CN111713625A (zh) * 2020-06-12 2020-09-29 江苏微康生物科技有限公司 一种具有缓解湿疹功效的凝结芽孢杆菌固体饮料及其制备方法
CN113368139A (zh) * 2021-07-02 2021-09-10 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一种具有缓解肠易激综合征功效的微生物复合物及其制备方法和应用
CN113633666A (zh) * 2021-09-06 2021-11-12 富益元（东莞）生物科技有限公司 一种用于口腔口臭和炎症治疗的益生菌微生态制剂及其制备方法和应用
CN114149939A (zh) * 2021-09-27 2022-03-08 微康益生菌(苏州)股份有限公司 一种能够缓解龋齿的益生菌组合物及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Lactobacillus acidophilus LA85 ameliorates cyclophosphamide-induced immunosuppression by modulating Notch and TLR4/NF-κB signal pathways and remodeling the gut microbiota..《 Food Funct.》.2022,8107-8118. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN115607577A (zh) 2023-01-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113577218A (zh) 一种抑制幽门螺旋杆菌的灭活益生菌中药组合物及其制备方法和应用
CN110791452A (zh) 一株改善口腔健康的唾液乳杆菌jyls-372及产品和制备方法
CN111956671A (zh) 一种用于治疗幽门螺旋杆菌感染的复合益生菌
WO2021135798A1 (zh) 桑皮苷a及其衍生物在制备保护肠道屏障的药物中的应用
CN115607577B (zh) 一种具有缓解口腔炎症功效的益生菌剂及其制备方法和应用
CN103157095B (zh) 芸豆植物凝集素在制备人用药物中的应用及其药物组合物
CN109985069B (zh) 益生菌组合物及其用途
CN114390897A (zh) 一种益生元和益生菌的组合物及其应用
CN114149939B (zh) 一种能够缓解龋齿的益生菌组合物及其应用
US20130309212A1 (en) Lactobacillus salivarius and method for preparing metabolite thereof, composition of lactobacillus salivarius and metabolite thereof and use of the composition
CN108402371A (zh) 一种适合中老年便秘人群服用的益生元组合物
CN114588253A (zh) 用于修复和预防阴道粘膜衰老的药物组合物及其制剂
CN111713625A (zh) 一种具有缓解湿疹功效的凝结芽孢杆菌固体饮料及其制备方法
CN115216423B (zh) 一种动物双歧杆菌sf及其在医药和食品中的应用
CN114836349B (zh) 拮抗幽门螺旋杆菌的嗜酸乳杆菌la16及其应用
CN113969253B (zh) 一株具有便秘治疗效果的乳双歧杆菌jybr-390及其应用和产品
CN115119940A (zh) 嗜酸乳杆菌LA85和乳双歧杆菌BLa80在抑制幽门螺旋杆菌上的应用
CN107050106A (zh) 一种用于预防和治疗慢性咽炎的含片
CN109646546B (zh) 一种用于防治牲畜腹泻的中药组合物及其制备方法
CN108309969B (zh) 鸢尾黄素在治疗鸡坏死性肠炎中的医用用途
CN111471610B (zh) 一种用于缓解咽炎的唾液乳杆菌
CN116726077B (zh) 一种妇科外用洗液及其制备方法
CN115137758B (zh) 一种有利于女性生殖道健康的益生菌的制备及其应用
CN115607614B (zh) 一种治疗畜禽大肠杆菌病的中药组合物及其制备方法
CN116790402B (zh) 一株具有抗炎特性的单形拟杆菌菌株、培养方法及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant