CN111471610B - 一种用于缓解咽炎的唾液乳杆菌 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种用于缓解咽炎的唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)AR809菌株，该唾液乳杆菌AR809菌株已在2019年1月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.17206。本发明的唾液乳杆菌AR809菌株能够有效缓解或减轻咽炎症状，调节口腔菌群结构，改善口腔卫生状况，具有广泛的应用前景。

Description

一种用于缓解咽炎的唾液乳杆菌
技术领域
本发明属于微生物领域，具体涉及一种用于缓解咽炎的唾液乳杆菌。
背景技术
咽炎是全世界最常见的疾病之一。估计每年全球有超过6.16亿例细菌性咽炎病例发生。咽炎发生在各个年龄段，发病率逐年增加。喉咙痛，发烧，头痛，干痒、恶心、欲吐等咽部不适症状都与咽炎有关。但人们普遍认为咽炎的主要原因是多种微生物制剂，如A型β-溶血性链球菌，非A型β-溶血性链球菌(B，C，F和G组)，金黄色葡萄球菌，肺炎克雷伯菌、副流感嗜血杆菌。作为临床多发病，咽炎病程长，反复发作，已严重影响和危害人体健康，同时给大众生活带来极大的不便。
益生菌是非致病微生物，摄入足够的量对宿主产生积极的健康益处。研究表明，益生菌可预防或治疗口腔疾病，如龋齿和牙周病。已经为口腔设计了几种益生菌。益生菌在口咽部的使用特别有希望。金黄色葡萄球菌，A型链球菌，牙龈卟啉单胞菌或其他口腔病原体经常导致微生物生态失调并导致口咽功能障碍。因此，筛选出本身具抑制咽炎致病菌金黄色葡萄球菌和粘附性能的乳酸菌，为未来开发能调节咽喉菌群的微生态制剂对咽炎进行靶点治疗，指导临床对咽炎疾病进行菌群调节及针对性的治疗提供了一定的依据，具有非常重要的经济效益和社会效益。
发明内容
本发明是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种用于缓解咽炎的唾液乳杆菌。
本发明提供了一种用于缓解咽炎的唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)AR809菌株，具有这样的特征：该唾液乳杆菌AR809菌株已在2019年1月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.17206。
本发明还提供了利用唾液乳杆菌AR809菌株制备用于缓解或减轻咽炎症状的制品中的应用。
发明的作用与效果
根据本发明所涉及的用于缓解咽炎的唾液乳杆菌，能够有效缓解或减轻咽炎症状的功能，同时，还具有可以长期食用的安全性。此外，唾液乳杆菌在缓解炎症的同时，能够抑制口腔有害微生物繁殖，调整口腔及眼部微生物菌群，提高食用者的口腔卫生状况，所以该唾液乳杆菌AR809菌株可以用来制备用于缓解或减轻咽炎的药品、保健品或食品饮品。
附图说明
图1是本发明的实施例1中的大鼠咽部组织染色图；
图2(a)是本发明的实施例1中的唾液乳杆菌AR809菌株对大鼠咽部组织状态影响的评分示意图；
图2(b)是本发明的实施例1中的唾液乳杆菌AR809菌株对大鼠咽部组织状态影响后的髓过氧化物酶MPO活力示意图；
图3(a)是本发明的实施例2中的唾液乳杆菌AR809菌株对炎症因子的影响后的大鼠咽部组织NO含量示意图；
图3(b)是本发明的实施例2中的唾液乳杆菌AR809菌株对炎症因子的影响后的大鼠咽部组织TNF-α含量示意图；
图3(c)是本发明的实施例2中的唾液乳杆菌AR809菌株对炎症因子的影响后的大鼠咽部组织IL-1β含量示意图；
图3(d)是本发明的实施例2中的唾液乳杆菌AR809菌株对炎症因子的影响后的大鼠咽部组织IL-10含量示意图；
图4(a)是本发明的实施例3中的唾液乳杆菌AR809菌株对咽部微生物群落结构影响后的不同实验组大鼠肠道菌群主成分分析示意图；
图4(b)本发明的实施例3中的唾液乳杆菌AR809菌株对咽部微生物群落结构影响后的不同实验组大鼠肠道菌群属水平组成分析示意图。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段与功效易于明白了解，以下结合实施例及附图对本发明作具体阐述。
本发明的一种用于缓解咽炎的唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)AR809菌株，已在2019年1月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.17206。
利用唾液乳杆菌AR809菌株制备用于缓解或减轻咽炎症状的制品中的应用。
本发明中的制品可以是药品、保健品或食品饮品。较佳的食品饮品可为在发酵蔬菜、植物酵素、发酵乳、奶酪、乳饮料或奶粉中加入有效量的唾液乳杆菌AR809而制成的产品。
本发明采用SD大鼠，咽部黏膜注射致病菌诱导大鼠发生咽炎症状，同时，喷雾高活性唾液乳杆菌AR809菌悬液，活菌数达到1×108CFU/mL，检测SD大鼠咽部炎症状况、炎症因子含量以及咽部微生物群落变化，以此来判断该菌株是否具有缓解或是减轻咽炎症状的功效。
样品：唾液乳杆菌AR809菌悬液，其中活菌数达到1×108CFU/mL，制备好后放置4℃备用。
实验动物：选用上海杰思捷实验动物有限公司繁殖的180-220g SPF级SD大鼠健康雄性大鼠(批准号为SCXK20180004)24只，随机分为4组，每组6只。
主要仪器与试剂：天平，离心机，Illumina MiSeq测序仪，酶标仪，MPO试剂盒，NO试剂盒，真空采血管，RT-qPCR测定仪，RNA提取试剂盒，清喉利咽颗粒。
实验方法：在实验环境下大鼠随机分成4组，分别设定能够正常组CG、模型组MG、药物对照组PCG、唾液乳杆菌干预组PG。正常组：正常大鼠咽部喷洒无菌生理盐水，每天两次，共计31天；咽炎造模：大鼠咽部喷洒生理盐水，每天两次，共计31天；其中在第15-17天进行造模，即往咽部黏膜处注射致病菌金黄色葡萄球菌(1×108CFU/mL)，一天两次，连续3天；益生菌干预组：往大鼠咽部喷入1×108CFU/mL唾液乳杆菌，一天两次，连续31天，在干预的期间的第15-17天进行造模。药物对照组：健康大鼠喷洒生理盐水，每天两次，共计14天。第15-17天时，大鼠进行造模；第18-31天时，用清胃利咽颗粒(每天1mg/kg体重，桂龙制药有限公司)对金黄色葡萄球菌诱导的咽炎大鼠进行灌胃治疗。
饲养条件：大鼠在温度为18-22℃、相对湿度为40-70％的IVC系统中饲养，实验动物使用许可证号SCXK20180004，大鼠辐照无菌饲料自江苏协同医药生物工程有限公司。
实验方法：实验前后分别称取体重，并观察体征表观现象。根据中华中医药学会中药实验药理专业委员会推荐的咽炎动物模型制备规范，大鼠咽炎临床体征为：(a)体重，(b)咳嗽，(c)咽喉红肿情况，(d)运动能力，(e)皮毛色泽。每组的统计学评分由临床表现的严重程度确定，其分为无症状(评分0)，轻度(评分1)，中度(评分2)或严重(评分3)。实验结束后取咽部组织进行HE染色和炎症介质分析，心脏取血后取血清测定相关炎症因子，用咽拭子取咽部微生物样品送上海美吉生物医药科技有限公司进行测序。
数据分析：采用SPSS 22.0软件对各实验原始数据进行统计学分析，利用ANOVA程序对数据显著性进行检验。
实施例1：唾液乳杆菌对咽部组织状态影响
图1是本发明的实施例1中的大鼠咽部组织染色图，图1(a)是CG组的大鼠咽部组织染色图，图1(b)是MG组大鼠咽部组织染色图，图1(c)是PG组的大鼠咽部组织染色图，图1(d)是PCG组的大鼠咽部组织染色图。
图2(a)是本发明的实施例1中的唾液乳杆菌AR809菌株对大鼠咽部组织状态影响的评分示意图，图2(b)是本发明的实施例1中的唾液乳杆菌AR809菌株对大鼠咽部组织状态影响后的髓过氧化物酶MPO活力示意图。
与空白对照组相比，模型组中大鼠出现体重减轻，咽喉红肿，嘴角脱毛，运动减少等现象。如图1、图2(a)和图2(b)所示，病理切片显示咽喉黏膜出现炎性区域，炎性细胞增多，在乳酸菌和药物干预后，体重减轻，咽喉红肿，嘴角脱毛，运动减少等现象得到改善，炎性区域消失，炎性细胞浸润缓解。MPO是中性粒细胞的功能和激活标志,含量的增高可反映中性粒细胞在某一组织中的增高，间接反应局部组织炎症。在乳酸菌和药物干预后，大鼠血清的MPO含量由MG组的56.21U/L降低至34.76U/L，提示唾液乳杆菌AR809对大鼠咽部组织炎症状态有较好改善作用。
实施例2：唾液乳杆菌对炎症因子的影响
图3(a)是本发明的实施例2中的唾液乳杆菌AR809菌株对炎症因子的影响后的大鼠咽部组织NO含量示意图，图3(b)是本发明的实施例2中的唾液乳杆菌AR809菌株对炎症因子的影响后的大鼠咽部组织TNF-α含量示意图，图3(c)是本发明的实施例2中的唾液乳杆菌AR809菌株对炎症因子的影响后的大鼠咽部组织IL-1β含量示意图，图3(d)是本发明的实施例2中的唾液乳杆菌AR809菌株对炎症因子的影响后的大鼠咽部组织IL-10含量示意图。
咽炎的特征在于释放炎性细胞因子和炎性介质，例如TNF-α，IL-1β，NO。这些炎性细胞因子引发炎性级联反应，从而诱导炎性细胞浸润并加速病理变化。如图3(a)-图3(d)所示，与MG相比，PG中唾液乳杆菌AR809可显著降低组织中NO炎症介质的水平，其中炎症细胞因子TNF-α，IL-1β的水平分别降至为2.84、0.725，IL-10抗炎细胞因子水平明显增加到4.22，说明唾液乳杆菌AR809可以显着改善大鼠咽部炎症因子水平。
实施例3：唾液乳杆菌对咽部微生物群落结构影响
图4(a)是本发明的实施例3中的唾液乳杆菌AR809菌株对咽部微生物群落结构影响后的不同实验组大鼠肠道菌群主成分分析示意图，图4(b)本发明的实施例3中的唾液乳杆菌AR809菌株对咽部微生物群落结构影响后的不同实验组大鼠肠道菌群属水平组成分析示意图。
如图4(a)和4(b)所示，唾液乳杆菌AR809的干预对金黄色葡萄球菌诱导的咽炎大鼠的微生物群破坏作用具有改善性影响。PCoA证明MG和GC是两种明显不同的咽部微生物群，而PG和CG之间的距离小于MG和CG之间的距离。MG中病原体如葡萄球菌，链球菌，大肠埃希菌-志贺氏菌，棒状杆菌和肠球菌的相对丰度明显更高。与MG相比，唾液乳杆菌AR809干预后，PG中的乳酸杆菌，Jeotgalicoccus和其他属的相对丰度显着增加，而上述致病菌如葡萄球菌，大肠埃希氏菌和肠球菌等的相对丰度显着降低。结果表明，唾液乳杆菌AR809可以调节金黄色葡萄球菌诱导的咽炎大鼠模型中咽部微生物群的组成，较好的恢复咽炎大鼠的微生物群落结构。
实施例的作用与效果
本发明的上述实施例中，分别通过唾液乳杆菌AR809菌株对咽部组织、炎症因子以及咽部微生物群落结构的影响，得到唾液乳杆菌AR809菌株对大鼠咽部组织炎症状态有较好改善作用，还可以显着改善大鼠咽部炎症因子水平，能够调节金黄色葡萄球菌诱导的咽炎大鼠模型中咽部微生物群的组成，从而较好的恢复咽炎大鼠的微生物群落结构。
此外，本发明实施例的唾液乳杆菌AR809菌株是从健康人群口腔中筛选出来的益生菌，能够有效缓解或减轻咽炎症状的功能，同时，还具有可以长期食用的安全性。此外，唾液乳杆菌在缓解炎症的同时，能够抑制口腔有害微生物繁殖，调整口腔及眼部微生物菌群，提高食用者的口腔卫生状况，所以该唾液乳杆菌AR809菌株可以用来制备用于缓解或减轻咽炎的药品、保健品或食品饮品。
上述实施方式为本发明的优选案例，并不用来限制本发明的保护范围。

Claims (2)

1.一种用于缓解咽炎的唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)AR809菌株，其特征在于：所述唾液乳杆菌AR809菌株已在2019年1月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.17206。
2.利用权利要求1所述的唾液乳杆菌AR809菌株制备用于缓解或减轻咽炎症状的药品中的应用。
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