CN113358874A - 一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，属于医学检验技术领域，该检测方法将微球分析技术与流式细胞分析技术相结合，检测步骤具体包括：1)采集样本血清；2)准备羧基化的聚苯乙烯微球，将羧基化聚苯乙烯微球进行激活；3)将捕获抗体偶联在微球上；4)封闭微球；5)微球混合；6)抗原抗体特异性反应；7)免疫荧光反应；8)流式细胞仪检测，与现有常规临床检测方法相比较，该检测方法所需样本量更少且操作时间大大缩短，同时其特异性强及灵敏度高也极高，同时实现了对样本指标的多参数分析，实现了系统性红斑狼疮疾病特异性诊断指标ANA、ENA、dsDNA、AnuA、DNA‑Ab、AHA、aCL、β2‑GPI及抗C1q‑IgG等9种抗体的联合检测。
Description
技术领域
本发明属于医学检验技术领域，具体涉及一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，实现了系统性红斑狼疮疾病特异性诊断指标ANA、ENA、dsDNA、AnuA、DNA-Ab、AHA、aCL、β2-GPI及抗C1q-IgG等9种抗体的联合检测。
背景技术
系统性红斑狼疮是典型的慢性多系统、多脏器损害的自身免疫性疾病，其特点是产生一系列针对核抗原和细胞质抗原的自身抗体，临床表现和严重程度各不相同，严重危害人类健康，自身抗体是一种针对自身组织、器官、细胞和细胞成分的抗体，在正常人体血液中可有较低水平的自身抗体，超过一定水平的自身抗体会对身体产生损害，从而引起疾病，自身抗体作为自身免疫病最重要的特征之一，其自身抗体的检测已成为自身免疫病诊断和鉴别诊断的重要手段。
抗体ANA、ENA、dsDNA、AnuA、DNA-Ab、AHA、aCL、β2-GPI及抗C1q-IgG作为临床上诊断系统性红斑狼疮疾病的特异性诊断指标，目前对于这几种抗体的测定方法大都还是采用化学发光法、酶联免疫吸附法、免疫透射比浊法、免疫印迹法等，其检测方式为采用相应的方法对每个抗体进行一一测定，首先，采用以上方法对这种多抗体指标进行一一测定，费时且麻烦；其次，以上所说的方法都存在一定的不足，如酶联免疫吸附测定方法存在于影响因素较多，而且存在着标准化问题，免疫透射比浊法方法存在于对抗体和增浊剂的质量要求很高，试剂和仪器较贵的问题，免疫印迹法则存在费时较长，而且需要用X射线底片或化学发光成像仪显示结果等问题。
发明内容
本发明的目的在于：针对以上现有技术所述的对系统性红斑狼疮相关特异性诊断指标进行测定的方法中存在的技术问题，本发明提供一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，该检测方法将微球分析技术与流式细胞分析技术相结合，实现对系统性红斑狼疮疾病特异性诊断指标AN A、ENA、dsDNA、AnuA、DNA-Ab、AHA、aCL、β2-GPI、抗C1q-IgG等9项抗体的联合检测，与现有常规临床检测方法相比较，该检测方法所需样本量更少且操作时间大大缩短，同时其特异性强及灵敏度高也极高，同时实现了对样本指标的多参数分析。
本发明采用的技术方案如下：一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，所述检测方法将微球分析技术与流式细胞分析技术相结合，针对系统性红斑狼疮抗体谱ANA、ENA、dsDNA、AnuA、DNA-Ab、AHA、aCL、β2-GPI、抗C1q-IgG等9项抗体进行联合检测，具体步骤如下：
1)采集血清样本：采集受试者的空腹静脉血，于室温静置带凝固后离心分离出血清，检测备用；
2)准备羧基化的聚苯乙烯微球，将羧基化聚苯乙烯微球进行激活；
3)捕获抗体偶联：将不同的捕获抗体分别偶联在不同的已激活的羧基化聚苯乙烯微球上，9种已激活的羧基化聚苯乙烯微球分别偶联9种捕获抗体，1种捕获抗体与1种已激活的羧基化聚苯乙烯微球发生偶联，9种所述捕获抗体与血清样本中待检测的9种标志抗体相对应，对捕获抗体与聚苯乙烯微球进行偶联结合反应后的聚苯乙烯微球分别进行封闭处理，用封闭液封闭微球上未结合捕获抗原的位点；
4)微球混合：将步骤3)中分别进行封闭处理后的微球进行混合，形成偶联有不同捕获抗体的不同微球的混合体系，即形成了9种分别偶联有9种不同捕获抗体的聚苯乙烯微球；
5)抗原抗体特异性反应：将步骤1)中制备得到的备用血清加入到含有步骤4)制备得到的偶联有不同捕获抗体的聚苯乙烯微球的反应体系中进行温育反应，如果血清样本中含有与微球上偶联的捕获抗体相对应的标志抗体，不同的标志抗体会与对应微球上的捕获抗体发生抗原抗体特异性免疫反应，血清标本中的标志抗体与微球结合之后，聚苯乙烯微球上就形成了待测标志抗体与捕获抗体相结合的抗原抗体复合物；
6)免疫荧光反应：将步骤5)温育反应完成后的不反应的血清蛋白清洗掉，加入FITC标记的羊抗鼠IgG与完成抗原抗体特异性免疫反应的微球室温避光免疫反应一定时间，加入的所述FITC标记的羊抗鼠IgG抗体会与步骤6)中已固定在微球表面的标志抗体相结合；
7)步骤6)反应完成，洗涤后，通过流式细胞仪进行检测，通过分析微球不同颜色(不同发光波长)对血清中的标志抗体进行定性分析，通过检测不同微球中FITC荧光素强度，根据同步进行的9种待检抗体标准品的稀释系列实验制作标准曲线，对血清中标志抗体进行定量分析。
步骤2)中所述羧基化的聚苯乙烯微球是一种表面含有羧基并包埋了有机荧光分子的聚苯乙烯微球，其粒径均一，大小为1～10μm，可从相关的生物制品公司直接购买，所述羧基化的聚苯乙烯微球，每份约1.25×107个/mL，每一种微球的荧光颜色不一样。
步骤2)中所述对羧基化聚苯乙烯微球的激活方法具体为：a、取一定量的羧基化微球原液加入离心管，离心去上清；b、向去上清的离心管中加入一定量的微球洗涤缓冲液，进行漩涡振荡、超声清洗，离心去上清；c、将洗涤后的微球重悬于微球激活缓冲液中，进行漩涡振荡；d、在步骤c激活后的微球管内分别加入一定量的EDC及Sulfo-NHS，室温避光震摇；e、在步骤d后的激活微球管为加入一定量的1×PBS，高速漩涡振荡，离心，弃上清，再将微球重悬于1×PBS，漩涡震荡，即制得激活的微球。所述EDC为1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基，所述Sulfo-NHS为硫化N-羟基琥珀酰亚胺，所述EDC和Sulfo-NHS均用微球激活缓冲液进行配置浓度均为50mg/mL；所述微球洗涤缓冲液由95％pH值7.4的1×PBS和5％Tween-20混合配制而成；所述微球激活缓冲液为PH值6.2的0.1mol/L的NaH2PO4。
步骤3)中偶联的捕获抗体分别为与血清样本中待检测的标志抗体ANA、ENA、dsDNA、AnuA、DNA-Ab、AHA、aCL、β2-GPI、抗C1q-IgG相对应，所述捕获抗体可直接从相关的生物制品公司购买，购买的初始浓度为0.2mg/mL。
具体地，步骤3)中所述捕获抗体分别为鼠抗人ANA单克隆抗体、鼠抗人ENA单克隆抗体、鼠抗人dsDNA单克隆抗体、鼠抗人AnuA单克隆抗体、鼠抗人DNA-Ab单克隆抗体、鼠抗人AHA单克隆抗体、鼠抗人aCL单克隆抗体、鼠抗人β2-GPI单克隆抗体、鼠抗人C1q-IgG单克隆抗体。
步骤3)中封闭所用的封闭液配制方法为：向pH值7.4的1×PBS中加入牛血清白蛋白和叠氮化钠，混匀即可，所述加入牛血清白蛋白、叠氮化钠的混合料液比分别为10g/l、0.5g/l。
步骤4)中所述混合体系中，包含有9种微球，每一种微球上偶联有与检测标志抗体ANA、ENA、dsDNA、AnuA、DNA-Ab、AHA、aCL、β2-GPI、抗C1q-IgG相对应的一种捕获抗体，所以在混合体系中，包含有9种与检测标志抗体ANA、ENA、dsDNA、AnuA、DNA-Ab、AHA、aCL、β2-GPI、抗C1q-IgG相对应的捕获抗体，用于与血清样本中的标志抗体进行抗原抗体特异性免疫反应，以检测相应的标志抗体。
以上所述方法中洗涤所用到的液体均为：由95％pH值7.4的1×PBS和5％Tween-20混合配制而成的缓冲液。
以上所述方法中缓冲所用到的液体均为：1×PBS缓冲液。
一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法的检测原理为：所购买的羧基化聚苯乙烯微球由于通过不同的荧光染料染色而具有不同的颜色，不同颜色的荧光微球具有不同发光波长，通过不同颜色的微球偶联不同的捕获抗体，不同种的捕获抗体与本检测方法中检测的9种抗体相对应，也就说一种颜色的微球偶联一种捕获抗体，一种捕获抗体对应血清样本中的一种待检测标志抗体，不同种颜色的微球对应不同的编码，将偶联有不同捕获抗体的不同种微球进行混合，供一份待测血清检测使用，如果待测血清中含有与微球上偶联的捕获抗体相对应的待检标志抗体，不同的待检标志抗体会与对应微球上的捕获抗体发生抗原抗体特异性免疫反应，血清标本中的标志抗体与微球结合之后，聚苯乙烯微球上就形成了待检标志抗体与捕获抗体相结合的抗原抗体复合物，将未参与反应的血清蛋白洗掉，再先后向反应体系中加入异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗鼠IgG，在流式细胞仪的检测中，一个微球相当于于一个细胞，通过对微球自身携带的不同种荧光染料便可对待测血清中的标志抗体进行定性分析，通过检测不同微球的FITC荧光素强度，制作标准曲线，便可对血清中的标志抗体进行定量分析。
相较于现有技术，本发明的有益效果是：
(1)本发明提供了一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，该检测方法将微球分析技术与流式细胞分析技术相结合，实现了对系统性红斑狼疮疾病特异性诊断指标AN A、ENA、dsDNA、AnuA、DNA-Ab、AHA、aCL、β2-GPI、抗C1q-IgG等9项抗体的联合检测，与现有常规临床检测方法相比较，该检测方法所需样本量更少且操作时间大大缩短，同时其特异性强及灵敏度高也极高，实现了对样本指标的多参数分析；
(2)本发明提供的一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，其可以实现联合检测的抗体包括AN A、ENA、dsDNA、AnuA、DNA-Ab、AHA、aCL、β2-GPI、抗C1q-IgG等9项，且该9项抗体也是目前临床上诊断系统性红斑狼疮疾病的特异性诊断指标，所以该检测方法具有深远的意义；
(3)目前对于这9项抗体的测定方法大都还是采用化学发光法、酶联免疫吸附法、免疫透射比浊法、免疫印迹法等，其检测方式为采用相应的方法对每个抗体进行一一测定，采用以上方法对这种多抗体指标进行一一测定，费时且麻烦，而在该检测方法中，由于许多种不同型号的聚苯乙烯微球可以放在同一个反应体系内，所以一次可同时检测多种生理病理指标，这与传统逐个检测的方式效率有很大的不同；
(4)在本发明提供的检测方法中，每个聚苯乙烯微球上都以共价结合的方式偶联捕获抗体分子，因其检测是在微球表面进行，且针对一种标志物检测约1500个微球，产生的信号就强，而且在流式微球联合检测分析法中加入异硫氰酸荧光素(FITC)提高了检测的敏感性，其灵敏度明显比现有临床常规使用的酶学显色的方法更高。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明，即所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，该检测方法将微球分析技术与流式细胞分析技术相结合，针对系统性红斑狼疮抗体谱ANA、ENA、dsDNA、AnuA、DNA-Ab、AHA、aCL、β2-GPI、抗C1q-IgG等9项抗体进行联合检测。
本实施例提供一份样品血清检测的具体实施方式，具体步骤如下：
1)采集样本血清：采集受试者的空腹静脉血，于室温静置带凝固后离心分离出血清，检测备用，离心的条件采用常规的血清分离条件即可；
2)准备羧基化的聚苯乙烯微球，将羧基化聚苯乙烯微球进行激活；所使用的羧基化聚苯乙烯微球直接从相关的生物制品公司购买，是一种表面含有羧基并包埋了有机荧光分子的聚苯乙烯微球，其粒径均一，大小为1～10μm，羧基化的聚苯乙烯微球，每份约1.25×107个/mL，每一种微球的荧光颜色不一样，对于羧基化聚苯乙烯微球激活的具体方法如下：a、取羧基化微球原液1000μL加入离心管，14500r/min，离心4min，弃上清；b、向弃上清的离心管中加入1000μL的微球洗涤缓冲液，漩涡振荡10秒，超声清洗10秒，14500r/min，离心4min，弃上清，所使用的的微球洗涤缓冲液由95％pH值7.4的1×PBS和5％Tween-20混合配制而成；c、将洗涤后的微球重悬于800μL微球激活缓冲液，漩涡振荡30秒，超声清洗30秒，所使用的微球激活缓冲液为PH值6.2的0.1mol/L的NaH2PO4；d、在步骤c激活后的微球管内分别加入100μL EDC(1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)和100μL Sulfo-NHS(硫化N-羟基琥珀酰亚胺)，室温避光震摇20分钟，所加入的EDC和Sulfo-NHS均用微球激活缓冲液进行配置，浓度均为50mg/mL；e、在步骤d后的激活微球管为加入1500μL 1×PBS，高速漩涡振荡10秒，14500转/分，离心4分钟，弃上清，重悬微球于1000μL 1×PBS，漩涡震荡30秒，超声清洗15秒，即制得激活的微球通过以上激活步骤，最终制得1000μL的激活的羧基化聚苯乙烯微球；
3)捕获抗体偶联：取100μL步骤2)中制备得到激活的羧基化聚苯乙烯微球，再取捕获抗体原液50μL加入100μL的激活的羧基化聚苯乙烯微球中，用1×PBS调节最终体积至500μL，室温避光摇震反应2.5小时，15000转/分，离心3分钟，去上清，此处可根据需要重复洗涤步骤，以上为其中一种微球偶联捕获抗体的具体方法，其余8种捕获抗体偶联的方法同上，所使用的9种捕获抗体分别为：鼠抗人ANA单克隆抗体、鼠抗人ENA单克隆抗体、鼠抗人dsDNA单克隆抗体、鼠抗人AnuA单克隆抗体、鼠抗人DNA-Ab单克隆抗体、鼠抗人AHA单克隆抗体、鼠抗人aCL单克隆抗体、鼠抗人β2-GPI单克隆抗体、鼠抗人C1q-IgG单克隆抗体，本次购买的所偶联的9种捕获抗体的原始浓度为0.2mg/mL。以上步骤是分别将9种不同的捕获抗体偶联在不同的已激活的羧基化聚苯乙烯微球上，9种已激活的羧基化聚苯乙烯微球分别偶联9种捕获抗体，对应的捕获抗体与对应的微球进行抗原抗体结合反应，捕获抗体与微球结合反应之后形成了偶联上捕获抗体的聚苯乙烯微球；对捕获抗体与聚苯乙烯微球进行偶联结合反应后的聚苯乙烯微球分别进行封闭处理，用封闭液封闭微球上未结合抗原的位点；微球封闭处理具体步骤为：将步骤3)中洗涤完成的微球重悬于250μL微球封闭缓冲液中，漩涡振荡30秒，室温避光摇震25min，15000转/分，离心3分钟，弃上清，向去上清后的微球中加入500μL微球储存缓冲液，15000转/分，离心5分钟，去上清，后再将微球重悬于200μL微球储存缓冲液，所得到的200μL微球储存缓冲液即为：封闭后的偶联有捕获抗体的聚苯乙烯微球，以上为其中一种对偶联有捕获抗体的微球进行封闭的具体步骤，其余8种捕获抗体偶联后封闭的方法同上，以上所使用的封闭液的配制方法具体为：向pH值7.4的1×PBS中加入牛血清白蛋白和叠氮化钠，混匀即可，所述加入牛血清白蛋白、叠氮化钠的混合料液比分别为10g/l、0.5g/l；
4)微球混合：将步骤3)中进行封闭处理后的9种微球进行混合，形成偶联有9种捕获抗体的9种微球的混合体系；具体操作为：分别取100μL步骤3)中制备得到的9种微球储存缓冲液进行混合，即得到900μL偶联有9种不同捕获抗体的不同微球的混合体系；
5)抗原抗体特异性反应：取100μL步骤1)中制备得到的血清样本加入到步骤4)制备得到的900μL偶联有9种不同捕获抗体的9种微球的混合体系进行温育反应1h，如果血清中含有与微球上偶联的捕获抗体相对应的标志抗体，不同的标志抗体会与对应微球上的捕获抗体发生抗原抗体特异性免疫反应；
6)免疫荧光反应：将步骤5)温育反应完成后的不反应的血清蛋白清洗掉，加入过量的FITC标记的羊抗鼠IgG至反应中，与完成抗原抗体特异性免疫反应的微球室温避光免疫反应1h，加入的所述FITC标记的羊抗鼠IgG抗体会与步骤5)中已固定在微球表面的标志抗体相结合，免疫反应完成后进行洗涤，离心力200*g左右，离心5分钟，去上清，向反应管中加入500μL 1×PBS，所用到的洗涤液的配制方法为：由95％pH值7.4的1×PBS和5％Tween-20混合配制而成的缓冲液；
7)通过流式细胞仪对结果进行检测，通过分析微球不同颜色(不同发光波长)对血清中的标志抗体进行定性分析，通过检测不同微球中FITC荧光素强度，根据与血清抗体同步进行的9种待检抗体标准品的稀释系列实验制作标准曲线，系列稀释的混合标准品包括ANA标准品、ENA标准品、dsDNA标准品、AnuA标准品、DNA-Ab标准品、AHA标准品、aCL标准品、β2-GPI标准品、抗C1q-IgG抗体标准品，均可从相关的生物制品公司直接进行购买，根据制作的标准品的标准曲线，对血清样品中的检测标志抗体进行定量分析。
以上为血清检测样品为一份的具体检测步骤，可具体根据血清样本的数量参照上述进行具体实施
效果实施例
为了进一步验证本发明所提供的针对系统性红斑狼疮疾病特异性诊断指标ANA、ENA、dsDNA、AnuA、DNA-Ab、AHA、aCL、β2-GPI及抗C1q-IgG等9种抗体的联合检测方法的有效性和可行性，依照实施例1的实施步骤对9种抗体进行联合检测的结果与目前临床上常规使用的ELISA法试剂盒测定的结果进行对比，该对比例采用了20个血清样品进行比较，以
(pg/mL)表示，结果如下表所示：
表1方法对比实验结果表
根据以上结果表明，本发明提供的针对系统性红斑狼疮疾病特异性诊断指标的9项抗体进行联合检测的方法与临床常规使用的ELISA法试剂盒测定法所得到的检测结果无显著差异，表明本发明提供的联合检测方法具备可行性及有效性。
以上所述实施例仅表达了本申请的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本申请保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请技术方案构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。
Claims (10)
1.一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，其特征在于，所述检测方法将微球分析技术与流式细胞分析技术相结合，所述检测方法针对系统性红斑狼疮抗体谱ANA、ENA、dsDNA、AnuA、DNA-Ab、AHA、aCL、β2-GPI、抗C1q-IgG等9项抗体进行联合检测。
2.根据权利要求1所述的一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，其特征在于，所述检测方法具体步骤如下：
1)采集样本血清：采集受试者的空腹静脉血，于室温静置带凝固后离心分离出血清，检测备用；
2)准备羧基化的聚苯乙烯微球，将羧基化聚苯乙烯微球进行激活；
3)捕获抗体偶联：将捕获抗体偶联在已激活的羧基化聚苯乙烯微球上；具体为：分别取9种已用不同发光波长的荧光素标记的羧基化聚苯乙烯微球，向微球中分别加入ANA、ENA、dsDNA、AnuA、DNA-Ab、AHA、aCL、β2-GPI、抗C1q-IgG等9项抗体的鼠抗人单克隆抗体，经过室温避光摇震，PBS缓冲液离心洗涤，封闭液封闭等步骤进行偶联处理；
4)微球混合：将步骤3)中进行封闭处理后的微球进行混合，形成偶联有不同捕获抗体的不同微球的混合体系；
5)抗原抗体特异性反应：将步骤1)中制备得到的备用血清加入到含有步骤4)制备得到的偶联有不同捕获抗体的聚苯乙烯微球的反应体系中进行温育反应，最终形成了9种分别偶联有9种不同抗原抗体复合物的聚苯乙烯微球，为了后续进行定量分析，需与血清样本同步进行9种待检抗体标准品的稀释系列。
6)免疫荧光反应：将步骤5)温育反应完成后的不反应的血清蛋白清洗掉，加入过量的异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗鼠IgG，与微球室温避光免疫反应一定时间，加入的FITC标记的羊抗鼠IgG与步骤5)中已固定在微球表面的标志抗体相结合，反应完成；
7)流式细胞仪检测：步骤6)反应完成，洗涤后，流式细胞仪进行检测，通过分析微球不同颜色(不同发光波长)对血清中的标志抗体进行定性分析，通过检测不同微球中FITC荧光素强度，根据同步进行的9种待检抗体标准品的稀释系列实验制作标准曲线，对血清中标志抗体进行定量分析。
3.根据权利要求2所述的一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，其特征在于，步骤2)中所述羧基化的聚苯乙烯微球是一种表面含有羧基并包埋了有机荧光分子的聚苯乙烯微球，其粒径均一，大小为1～10μm，所述羧基化的聚苯乙烯微球，每份约1.25×107个/mL，每一种微球的荧光颜色不一样。
4.根据权利要求2所述的一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，其特征在于，步骤2)中所述对羧基化聚苯乙烯微球的激活方法具体为：a、取一定量的羧基化微球原液加入离心管，离心去上清；b、向去上清的离心管中加入一定量的微球洗涤缓冲液，进行漩涡振荡、超声清洗，离心去上清；c、将洗涤后的微球重悬于微球激活缓冲液中，进行漩涡振荡；d、在步骤c激活后的微球管内分别加入一定量的EDC及Sulfo-NHS，室温避光震摇；e、在步骤d后的激活微球管为加入一定量的1×PBS，高速漩涡振荡，离心，弃上清，再将微球重悬于1×PBS，漩涡震荡，即制得激活的微球，所述EDC为1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基，所述Sulfo-NHS为硫化N-羟基琥珀酰亚胺。
5.根据权利要求4所述的一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，其特征在于，所述微球洗涤缓冲液由95％pH值7.4的1×PBS和5％Tween-20混合配制而成。
6.根据权利要求4所述的一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，其特征在于，所述微球激活缓冲液为PH值6.2的0.1mol/L的NaH2PO4。
7.根据权利要求4所述的一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，其特征在于，所述EDC和Sulfo-NHS均用微球激活缓冲液进行配置，浓度均为50mg/mL。
8.根据权利要求2所述的一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，其特征在于，步骤3)中所述捕获抗体分别为与检测标志抗体ANA、ENA、dsDNA、AnuA、DNA-Ab、AHA、aCL、β2-GPI、抗C1q-IgG相对应，一种微球偶联一种捕获抗体。
9.根据权利要求2所述的一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，其特征在于，步骤3)中所述封闭所用的封闭液配制方法为：向pH值7.4的1×PBS中加入牛血清白蛋白和叠氮化钠，混匀即可，所述加入牛血清白蛋白、叠氮化钠的混合料液比分别为10g/l、0.5g/l。
10.根据权利要求2所述的一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法，其特征在于，步骤4)所述的混合体系中，包含有9种微球，每一种微球上偶联有与检测标志抗体ANA、ENA、dsDNA、AnuA、DNA-Ab、AHA、aCL、β2-GPI、抗C1q-IgG相对应的一种捕获抗体，在所述混合体系中，包含有9种与检测标志抗体ANA、ENA、dsDNA、AnuA、DNA-Ab、AHA、aCL、β2-GPI、抗C1q-IgG相对应的捕获抗体，用于与备用血清中标志抗体进行抗原抗体特异性免疫反应，以检测相应的抗体。
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| CN202110432948.4A CN113358874A (zh) | 2021-04-21 | 2021-04-21 | 一种用于系统性红斑狼疮自身抗体的检测方法 |
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113917136A (zh) * | 2021-10-18 | 2022-01-11 | 北京和杰创新生物医学科技有限公司 | 抗双链脱氧核糖核酸抗体免疫球蛋白g的检测方法 |
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2021
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|---|---|---|---|---|
| CN113917136A (zh) * | 2021-10-18 | 2022-01-11 | 北京和杰创新生物医学科技有限公司 | 抗双链脱氧核糖核酸抗体免疫球蛋白g的检测方法 |
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