CN113358784B

CN113358784B - 一种鱼肉中肟菌酯的检测方法

Info

Publication number: CN113358784B
Application number: CN202110624150.XA
Authority: CN
Inventors: 蒋金花; 王卢燕; 张昌朋; 俞瑞鲜; 赵学平
Original assignee: Zhejiang Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Zhejiang Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2021-06-04
Filing date: 2021-06-04
Publication date: 2023-03-14
Anticipated expiration: 2041-06-04
Also published as: CN113358784A

Abstract

本发明属于物质检测技术领域，提供了一种鱼肉中肟菌酯的检测方法。包括以下步骤：将待测鱼肉和提取剂混合，进行提取，得到提取液；将所述提取液进行净化，得到上机样品；将所述上机样品进行检测，得到所述鱼肉中肟菌酯的含量；所述提取剂包括乙腈和甲酸水溶液；所述净化的方式为固相萃取。本发明采用乙腈、甲酸水溶液为提取剂对鱼肉中的肟菌酯进行提取，能够沉淀鱼肉中的蛋白，减少提取液中的杂质；采用固相萃取的方式对提取液进行净化处理，节省了过柱时间和过柱溶液体积，操作简单；且能吸附鱼肉中大部分脂肪、蛋白质，进而保证了检测结果的重现性、准确度和精密度。

Description

一种鱼肉中肟菌酯的检测方法

技术领域

本发明涉及物质检测技术领域，尤其涉及一种鱼肉中肟菌酯的检测方法。

背景技术

肟菌酯(Trifloxystrobin)属于甲氧基丙烯酸类杀菌剂，为线粒体呼吸抑制剂，主要用于水稻、玉米、稻谷、棉花、大豆、油菜、甜菜等作物。肟菌酯具有高效、广谱等特性，对子囊菌、担子菌、半知菌和卵菌等多个纲的真菌有效，可以有效防治白粉病、霜霉病、锈病、稻瘟病等多种病害。

肟菌酯的化学名称为甲基(E)-甲氧基亚胺基-{(E)-α-[α,α,α-三氟-m-甲苯基)-亚乙基氨基氧基]-邻甲苯基}乙酸甲酯；化学结构式为：

肟菌酯的分子式为C₂₀H₁₉F₃N₂O₄，分子量为408.37。肟菌酯为无味白色至灰色结晶粉末，水中溶解度(20℃)0.61mg/L；有机溶剂中溶解度(20℃)：在丙酮、甲苯、乙酸乙酯中的溶解度为500g/L，在正己烷中溶解度为11g/L，在辛醇中的溶解度为18g/L，在甲醇中的溶解度为76g/L。肟菌酯在20℃水解DT₅₀为40天(pH值为7)，光解DT₅₀为2.7天(pH值为7)。

现有研究表明肟菌酯对哺乳动物、鸟类、蜜蜂和蚯蚓等环境生物相对安全，但其对水生生物具有较高的毒性效应，且具有一定的生物富集效应，其生物富集系数BCF(Bioconcentration Factor)为431。随着该类杀菌剂的广泛应用，其残留对水生生物存在一定的毒性风险。目前，肟菌酯在多种农产品、土壤和水中均有检测方法的研究报道，GB2763-2019中规定了肟菌酯在多种谷物(如糙米、小麦、玉米)、蔬菜(如韭菜、芹菜、马铃薯、黄瓜、番茄)、水果(如柑、橘、草莓、葡萄、苹果)、花生仁和初榨橄榄油中的最大残留限量，谷物的最大残留限量为0.02～0.5mg/kg，蔬菜中的最大残留限量为0.05～15mg/kg，水果的最大残留限量为0.1mg/kg～3mg/kg，油料中的最大残留限量为0.02～1.2mg/kg。但在鱼肉中的检测方法未见报道。同时，现有技术中对谷物、水果和蔬菜中的肟菌酯的前处理方法操作复杂，且导致检测结果准确度不高。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种鱼肉中肟菌酯的检测方法，本发明提供的检测方法中，对待测鱼肉的提取净化操作简单，且最终检测结果重现性好、准确度和精密度高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种鱼肉中肟菌酯的检测方法，包括以下步骤：

将待测鱼肉和提取剂混合，进行提取，得到提取液；

将所述提取液进行净化，得到上机样品；

将所述上机样品进行超高效液相色谱串联质谱检测，得到所述鱼肉中肟菌酯的含量；

所述提取剂包括乙腈和甲酸水溶液；

所述净化的方式为固相萃取；所述固相萃取的萃取柱为Oasis PRiME HLB小柱。

优选地，所述甲酸水溶液的体积浓度为0.1％。

优选地，所述待测鱼肉和乙腈的用量比为1g：10mL；所述待测鱼肉与甲酸水溶液的用量比为1g：1mL。

优选地，所述提取在涡旋或超声的条件下进行；所述涡旋的转速为2000～2500rpm，时间为10～20min；所述超声的功率为100～200W，时间为10～20min。

优选地，所述提取后，还包括将所得提取体系和干燥剂混合，进行干燥；所述干燥剂包括无水硫酸钠和无水硫酸镁；所述提取体系和无水硫酸钠的用量比为10～15mL：1g；所述提取体系和无水硫酸镁的用量比为10～15mL：1g。

优选地，所述净化的过程中，所述提取液的上样体积与固相萃取的萃取柱的容积的比值为2：3。

优选地，所述超高效液相色谱串联质谱检测的参数包括超高效液相色谱参数和质谱参数：

所述超高效液相色谱参数包括：

色谱柱：ACQUITY UPLCTM BEH C₁₈色谱柱，2.1mm×100mm×1.7μm；

流动相包括：流动相A为体积浓度为0.1％的甲酸水溶液，流动相B为乙腈；

流速：0.3mL/min；

柱温：40℃；

进样量：1μL；

梯度洗脱程序为：

0min：50％流动相A，50％流动相B；

0.5min：50％流动相A，50％流动相B；

2.0min：25％流动相A，75％流动相B；

5.0min：2％流动相A，98％流动相B；

5.5min：2％流动相A，98％流动相B；

5.6min：50％流动相A，50％流动相B；

7.5min：50％流动相A，50％流动相B。

优选地，所述质谱参数包括：

离子源：ESI⁺；

定量模式：MRM模式；

毛细管电压：5.5kV；

气帘气：35psi；

喷撞气：7psi；

喷雾气：5psi；

辅助加热气：50psi；

离子源温度：550℃；

射入电压：10V；

碰撞室射出电压：16V；

肟菌酯定量离子对：409.10>188.05，定性离子对：409.1>145.00。

优选地，所述检测后，还包括将所得待测鱼肉中肟菌酯的峰面积，代入肟菌酯浓度-峰面积标准曲线中，得到待测鱼肉中肟菌酯的含量。

本发明提供了一种鱼肉中肟菌酯的检测方法，包括以下步骤：将待测鱼肉和提取剂混合，进行提取，得到提取液；将所述提取液进行净化，得到上机样品；将所述上机样品进行超高效液相色谱串联质谱检测，得到所述鱼肉中肟菌酯的含量；所述提取剂包括乙腈和甲酸水溶液；所述净化的方式为固相萃取；所述固相萃取的萃取柱为Oasis PRiME HLB小柱。本发明采用乙腈、甲酸水溶液为提取剂对鱼肉中的肟菌酯进行提取时，能沉淀鱼肉中的蛋白，减少提取液中的杂质；采用的固相萃取的方式对提取液进行净化处理，节省了过柱时间和过柱溶液体积，操作简单；且所述固相萃取的萃取柱为Oasis PRiME HLB小柱时，能吸附鱼肉中的脂肪、蛋白质，进而保证了检测结果的重现性、准确度和精密度。本发明提供的检测方法，为肟菌酯在水生生物中的残留限量和安全风险提供技术支撑。

实施例的数据表明：肟菌酯在0.0001～0.05mg/L浓度范围内呈良好的线性关系；肟菌酯在鱼肉中平均回收率为71.6～99.3％，相对标准偏差为1.4～3.6％，肟菌酯在鱼肉中的最低检测浓度均为0.01mg/kg。本发明的检测操作简便、重复性好、准确可靠，其准确定和精密度可满足农药残留分析的要求，并可用于大量样品的快速检测。

附图说明

图1为肟菌酯的浓度-峰面积标准曲线图；

图2为浓度为0.01mg/L的肟菌酯标准溶液色谱图(母离子)；

图3为浓度为0.01mg/L的肟菌酯标准溶液色谱图(子离子)。

具体实施方式

将待测鱼肉和提取剂混合，进行提取，得到提取液；

将所述提取液进行净化，得到上机样品；

将所述上机样品进行超高效液相色谱串联质谱检测，得到所述鱼肉中肟菌酯的含量。

在本发明中，如无特殊说明，本发明所用原料均优选为市售产品。

本发明将待测鱼肉和提取剂混合，进行提取，得到提取液。

在本发明中，所述待测鱼肉在和提取剂混合前，优选进行绞碎；所述绞碎的转速优选为18000rpm，时间优选为2min；所述绞碎的设备优选为匀浆机。

在本发明中，所述提取剂包括乙腈和甲酸水溶液。在本发明中，所述待测鱼肉与乙腈的用量比优选为1g：10mL。在本发明中，所述甲酸水溶液的体积浓度优选为0.1％；所述待测鱼肉与甲酸水溶液的用量比优选为1g：1mL。

在本发明中，所述待测鱼肉和提取剂混合的方式优选包括：将待测鱼肉、乙腈和甲酸水溶液混合。

在本发明中，所述提取优选在涡旋或超声的条件下进行。在本发明中，所述涡旋的转速优选为2000～2500rpm；时间优选为10～20min，进一步优选为15min。在本发明中，所述超声的功率优选为100～200W，时间优选为10～20min，进一步优选为20min。

所述提取后，本发明优选将所得提取体系进行干燥处理。

在本发明中，所述干燥处理优选包括以下步骤：将所得提取体系和干燥剂混合，进行干燥。

在本发明中，所述干燥剂包括无水硫酸钠和无水硫酸镁；所述提取体系和无水硫酸钠的用量比优选为10～15mL：1g；所述提取体系和无水硫酸镁的用量比优选为10～15mL：1g。在本发明中，所述干燥优选在涡旋的条件下进行，所述涡旋的转速优选为2000～2500rpm，进一步优选为2500rpm；时间优选为10～20min，进一步优选为15min。

所述干燥处理后，本发明优选还包括将所得干燥体系进行固液分离。本发明对所述固液分离的参数不做具体限定，只要能够使沉淀和液体分开即可。

本发明中，采用乙腈和甲酸水溶液对待测鱼肉进行提取，能够沉淀鱼肉中的蛋白，减少提取液中的杂质。

得到提取液后，本发明将所述提取液进行净化，得到上机样品。

在本发明中，所述净化的方式优选为固相萃取。在本发明中，所述固相萃取的萃取柱为Oasis PRiME HLB小柱。在本发明中，所述净化的过程中，提取液的上样体积与固相萃取的萃取柱的容积的比值优选为2：3。

所述净化后，本发明优选还包括将净化所得液体进行过滤，所述过滤的设备优选为0.22μm有机针式滤器。

本发明中，采用固相萃取的方式对提取液进行净化，节省了过柱时间和过柱溶液的体积；且所采用的Oasis PRiME HLB小柱能够吸附大部分待测鱼肉中的脂肪、蛋白质，提高鱼肉中肟菌酯的检测结果准确性。

得到上机样品后，本发明将所述上机样品进行超高效液相色谱串联质谱检测，得到所述鱼肉中肟菌酯的含量。

在本发明中，所述超高效液相色谱串联质谱检测的设备优选为ABSciex液相色谱串联三重四级杆质谱联用仪(Exion LCAD-Triple Quad^TM 5500，美国ABSciex公司)。在本发明中，所述超高效液相色谱串联质谱检测的参数包括超高效液相色谱参数和质谱参数。

在本发明中，所述超高效液相色谱参数优选包括：

色谱柱：ACQUITY UPLCTM BEH C₁₈色谱柱，2.1mm×100mm×1.7μm；

流速：0.3mL/min；

柱温：40℃；

进样量：1μL；

梯度洗脱程序如表1所示。

表1梯度洗脱程序

在本发明中，所述质谱参数优选包括：

离子源：ESI⁺；

定量模式：MRM模式；

毛细管电压：5.5kV；

气帘气：35psi；

喷撞气：7psi；

喷雾气：5psi；

辅助加热气：50psi；

离子源温度：550℃；

射入电压：10V；

碰撞室射出电压：16V；

肟菌酯定量离子对：409.10>188.05，定性离子对：409.1>145.00。

所述检测后，本发明优选还包括将所得待测鱼肉中肟菌酯的峰面积，代入肟菌酯浓度-峰面积标准曲线中，得到所述鱼肉中肟菌酯的含量。

本发明对所述肟菌酯浓度-峰面积标准曲线的获取方式不做具体限定，采用本领域技术人员熟知的标准曲线建立方式即可。

下面结合实施例对本发明提供的鱼肉中肟菌酯的检测方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

以下实施例所用仪器和试剂

ABSciex液相色谱串联三重四级杆质谱联用仪(Exion LCAD-Triple Quad^TM 5500，美国ABSciex公司)。

TENLIN-C型匀浆机：(江苏天翎仪器有限公司)。

SPS 402F型电子天平：(梅特勒－托利多(常州)测量技术有限公司)。

KQ5200B型超声清洗器(昆山舒美超声波仪器有限公司)。

IKA T18型分散器(德国IKA实验室)。

TD5A-WS型台式大容量低速离心机(金南仪器制造有限公司)。

HH-4型恒温水浴锅(江苏金坛市江南仪器厂)。

TYZD-ⅡA型振荡器(姜堰市天仪电子仪器有限公司)。

甲醇(分析纯500mL，天津市大茂化学试剂厂)。

乙酸乙酯(分析纯500mL，上海凌峰化学试剂有限公司)。

乙腈(分析纯500mL，上海凌峰化学试剂有限公司)。

无水硫酸钠(分析纯500g，温州市化学用料厂)。

无水硫酸镁(分析纯500g，天津市福晨化学试剂厂)。

乙腈(色谱纯4L，默克股份两合公司)。

甲酸(色谱纯500mL，美国ROE Scientific Inc)。

饮用纯净水(广州屈臣氏食品饮料有限公司)。

Cleanert MAS-Q净化管(2mL，PSA 50mg，C₁₈ 50mg，MgSO₄ 150mg，型号为MS-9PA0203，天津博纳艾杰尔科技有限公司)。

Cleanert MAS-Q净化管(2mL，PSA 50mg，PC 10mg，C₁₈ 50mg，MgSO₄ 150mg，型号为MS-9PA0203，天津博纳艾杰尔科技有限公司)。

Cleanert MAS-Q净化管(2mL，PSA 50mg，C₁₈ 50mg，PC 50mg，MgSO₄ 150mg，型号为MS-9PP0250，天津博纳艾杰尔科技有限公司)。

Cleanert S C₁₈-SPE小柱(500mg/6mL，型号为S185006，天津博纳艾杰尔科技有限公司)。

Oasis PRiME HLB小柱(60mg/3cc，型号为186008056，美国Waters公司)。

有机针式滤器(0.22μm，型号为TQP-61322,天源科技公司)。

注射器(2mL，常州悦康医疗器材有限公司)。

以下实施例的超高效液相色谱串联质谱条件包括：

超高效液相色谱参数包括：

色谱柱：ACQUITY UPLCTM BEH C₁₈色谱柱(2.1mm×100mm×1.7μm)；

流动相：乙腈和体积浓度为0.1％的甲酸水溶液；梯度洗脱程序如表1所示；

流速：0.3mL/min；

柱温：40℃；

进样量：1μL；

质谱参数包括：

离子源：ESI⁺；

定量模式：MRM模式；

毛细管电压5.5kV；

气帘气35psi；

喷撞气7psi；

喷雾气50psi；

辅助加热气50psi；

离子源温度550℃；

射入电压10V；

碰撞室射出电压16V；

肟菌酯定量离子对：409.10>188.05，定性离子对：409.1>145.00。

具体操作过程：

样品提取：取适量待测鱼肉，用在18000rpm的条件下用匀浆机绞2min，得到细腻均匀的肉糜后，称取1.00g鱼肉肉糜(精确至0.01g)置于50mL离心管中，加入1mL体积浓度为0.1％甲酸水溶液和10mL分析纯乙腈，于2500rpm下涡旋15min；在所得提取体系中加入1g无水硫酸钠和1g无水硫酸镁，于2500rpm涡旋15min后，在4000rpm条件下离心(TD5A-WS型台式大容量低速离心机)5min，得到提取液。

将乙腈分别替换为甲醇和乙酸乙酯进行提取，得到提取液。

通过在待测鱼肉中添加0.1mg/kg的肟菌酯标准品，利用公式1计算三个提取液的回收率：

提取率＝提取液实际浓度/理论添加浓度×100％公式1。

结果为：甲醇提取肟菌酯的提取率为78.5％；乙酸乙酯提取肟菌酯的提取率为88.9％；乙腈提取肟菌酯的提取率为83.9％。综合考虑溶剂挥发性、提取率、提取时间的因素，乙腈提取为最优提取条件。因此，确定乙腈提取作为肟菌酯在鱼肉中的提取试剂。

净化：准确移取经乙腈提取后得到的上清液1mL加入Cleanert MAS-Q净化管中，涡旋1min，在4000rpm离心5min后，取上清液过0.22μm有机针式滤器(型号为TQP-61322)，得到上机样品。

准确移取经乙腈提取后得到的上清液2mL直接过Oasis PRiME HLB小柱，洗脱液过0.22μm有机针式滤器(型号为TQP-61322)，得到上机样品。

5mL乙腈、5mL水活化C₁₈-SPE小柱，取5mL经乙腈提取后得到的上清液上柱后，5mL水淋洗小柱，用5mL乙腈洗脱，收集洗脱液，过0.22μm有机针式滤器(型号为TQP-61322)，得到上清液。

在选定净化液时，对比Cleanert MAS-Q净化管(2mL，PSA 50mg，C₁₈ 50mg，MgSO₄150mg)、Cleanert MAS-Q净化管(2mL，PSA 50mg，PC 10mg，C₁₈ 50mg，MgSO₄ 150mg)、Cleanert MAS-Q净化管(2mL，PSA 50mg，C₁₈ 50mg，PC 50mg，MgSO₄ 150mg)、C₁₈-SPE小柱、Oasis PRiME HLB小柱5种净化条件对鱼肉中肟菌酯净化效果的影响。

通过在待测鱼肉中添加0.1mg/kg的肟菌酯标准品，利用公式1计算5个净化液的回收率。结果表明：经过MS-9PA0203型Cleanert MAS-Q净化管(2mL，PSA 50mg，C₁₈ 50mg，MgSO₄150mg)净化后，肟菌酯的回收率为49.6％，回收率达不到要求。经过MS-9PP0265型CleanertMAS-Q净化管(2mL，PSA 50mg，C₁₈ 50mg，PC 8mg，MgSO₄ 150mg)净化后，肟菌酯的回收率为39.3％，回收率达不到要求。经过MS-9PP0250型Cleanert MAS-Q净化管(2mL，PSA 50mg，C₁₈50mg，PC 50mg，MgSO₄ 150mg)净化后，肟菌酯的回收率为48.3％，回收率达不到要求。经过C₁₈-SPE小柱净化后，肟菌酯的回收率为42.7％，回收率达不到要求。经过Oasis PRiME HLB小柱净化后，肟菌酯的回收率为84.5％，回收率能够达到要求；而且净化后基质干扰小，去除杂质的效果很好。

综合考虑回收率、去除杂质效果和操作过程等因素，Oasis PRiME HLB小柱固相萃取为最优净化条件。因此，确定Oasis PRiME HLB小柱作为肟菌酯在鱼肉中的净化材料。

用空白基质(不含肟菌酯的待测鱼肉经乙腈提取、HLB小柱净化后得到的净化液)配制0.0001、0.0005、0.001、0.005、0.01、0.05mg/L的肟菌酯标准溶液，分别进样1μL，获得超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)的响应值，以浓度-峰面积绘制肟菌酯标准溶液曲线，见图1，其回归方程为y＝96,612,211x+24,728。

图2为浓度为0.01mg/L的肟菌酯标准溶液色谱图(母离子)；图3为浓度为0.01mg/L的肟菌酯标准溶液色谱图(子离子)。从图2和图3可以看出：肟菌酯峰形好，响应高，出峰位置没有干扰峰。

根据肟菌酯在超高效液相色谱串联质谱仪(UPLC-MS/MS)上的响应情况，肟菌酯在不含肟菌酯的待测鱼肉样品中设定了3档添加浓度(0.01、0.1和10mg/kg)，每档添加浓度设5个重复。

按上述乙腈提取、Oasis PRiME HLB净化及超高效液相色谱串联质谱检测步骤，进行添加回收率试验。得到待测鱼肉样品中肟菌酯的添加回收率和相对标准偏差(RSDs)，见表2。

表2回收率试验结果

由表2可知：肟菌酯在鱼肉中添加浓度为0.01、0.1和10.0mg/kg时，平均回收率分别为99.3％、82.6％和71.6％，相对标准偏差分别为3.6％、3.0％和1.4％。超高效液相色谱串联质谱仪(UPLC-MS/MS)对肟菌酯的最小检出量均为1×10^-13g。

根据肟菌酯在超高效液相色谱串联质谱仪上的响应情况，以及鱼肉中肟菌酯最低添加浓度0.01mg/kg的样品在仪器上响应值均大于仪器的3倍信号噪音比，得出：肟菌酯在鱼肉中的最低检测浓度为0.01mg/kg。

本发明中，肟菌酯在0.0001～0.05mg/L浓度范围内呈良好的线性关系；肟菌酯在鱼肉中平均回收率为71.6～99.3％，相对标准偏差为1.4～3.6％，肟菌酯在鱼肉中的最低检测浓度均为0.01mg/kg。本发明的检测操作简便、重复性好、准确可靠，其准确定和精密度可满足农药残留分析的要求，并可用于大量样品的快速检测。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种鱼肉中肟菌酯的检测方法，包括以下步骤：

将待测鱼肉和提取剂混合，进行提取，得到提取液；

将所述提取液进行净化，得到上机样品；

所述提取剂包括乙腈和甲酸水溶液；

所述净化的方式为固相萃取；所述固相萃取的萃取柱为Oasis PRiME HLB小柱；

所述超高效液相色谱串联质谱检测的参数包括超高效液相色谱参数和质谱参数：

所述超高效液相色谱参数包括：

色谱柱：ACQUITYUPLCTM BEH C18色谱柱，2.1mm×100mm×1.7μm；

流速：0.3mL/min；

柱温：40℃；

进样量：1μL；

梯度洗脱程序为：

0min：50％流动相A，50％流动相B；

0.5min：50％流动相A，50％流动相B；

2.0min：25％流动相A，75％流动相B；

5.0min：2％流动相A，98％流动相B；

5.5min：2％流动相A，98％流动相B；

5.6min：50％流动相A，50％流动相B；

7.5min：50％流动相A，50％流动相B；

所述质谱参数包括：

离子源：ESI⁺；

定量模式：MRM模式；

毛细管电压：5.5kV；

气帘气：35psi；

喷撞气：7psi；

喷雾气：5psi；

辅助加热气：50psi；

离子源温度：550℃；

射入电压：10V；

碰撞室射出电压：16V；

肟菌酯定量离子对：409.10>188.05，定性离子对：409.1>145.00。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述甲酸水溶液的体积浓度为0.1％。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述待测鱼肉和乙腈的用量比为1g：

10mL；所述待测鱼肉与甲酸水溶液的用量比为1g：1mL。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述提取在涡旋或超声的条件下进行；所述涡旋的转速为2000～2500rpm，时间为10～20min；所述超声的功率为100～200W，时间为10～20min。

5.根据权利要求1或4所述的检测方法，其特征在于，所述提取后，还包括将所得提取体系和干燥剂混合，进行干燥；所述干燥剂包括无水硫酸钠和无水硫酸镁；所述提取体系和无水硫酸钠的用量比为10～15mL：1g；所述提取体系和无水硫酸镁的用量比为10～15mL：1g。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述净化的过程中，所述提取液的上样体积与固相萃取的萃取柱的容积的比值为2：3。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测后，还包括将所得待测鱼肉中肟菌酯的峰面积，代入肟菌酯浓度-峰面积标准曲线中，得到待测鱼肉中肟菌酯的含量。